Yöntem makalesi

Omurilik Sıkıştırma Yaralanma Kalibre Forseps Modeli

21K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52318

⸱

24 Nisan 2015

 ,  ,  , 
1Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of California, Davis, 2Institute for Pediatric Regenerative Medicine, Shriners Hospitals for Children (Northern California)

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Omurilik yaralanması modelleri yüksek oranda tekrarlanabilir olmalıdır. Omurilik yaralanmasının kalibre edilmiş forseps kompresyon modelinin, murin omuriliğinde tekrarlanabilir yaralanmalar oluşturmak için kullanımı kolay bir cerrahi yöntem olduğunu gösterdik.

Özet

Kemirgen omurilik yaralanmaları Sıkıştırma omurilik yaralanması (SKY) ve spinal rejeneratif tedavinin çalışma için değerli hayvan modelleri vardır. sıkıştırma yaralanma kalibre forseps modeli SCI için uygun, düşük maliyetli ve çok tekrarlanabilir hayvan modeli. Bu Plemel ve arkadaşları tarafından yayınlanmış yönteme uygun olarak tadil edilmiş bir çift forseps kullanılır. (2008) yanal olarak 0.35 mm'lik bir mesafeye omurilik sıkıştırmak. Bu videoda, biz modifiye forseps ile omurilik bası ardından omuriliği, maruz dorsal laminektomi gösterecektir. Videoda, biz de felçli laboratuvar hayvanlarının bakımı ile ilgili konuları ele alacak. Bu yaralanma modeli hissi bozukluğu, yanı sıra engelli bacak hareket fonksiyonunu sergileyen fareler üretiyor. Imünohistokimyasal yöntemlerle belirlenebilir Bundan başka, yaralanma, bu yöntem olup, omurilik yaralanması patolojisinde tutarlı sapmaları üretir. Bu vid izledikten sonraeo, izleyiciler yaralanma sonrası bozukluğunu azaltmak için tasarlanmış SCI ve / veya tedaviler üzerinde çalışmalar için fare çeşitli ağırlıktaki SCI üretmek için gerekli malzemeleri ve yöntemleri belirlemek gerekir.

Giriş

SCI hayvan modelleri omurilik travma sonucunda hasar azaltmak için tasarlanmış tedavi paradigmalar etkinliğini değerlendirmek için değerli araçlardır. Deneysel zorunluluk dışında, bu modeller, lokomotor ve duyusal davranışları tekrarlanabilir açıklarını sağlamak şiddetini farklı yaralanmaları üretmek için ayarlanabilir ve bu yaralanma şiddeti nörolojik hasar derecesi ile ilişkilidir göstermek zorundadır. Transeksiyon, kontüzyon, ve sıkıştırma 1: farklı yaralanma özellikleri ile SCI üç ana tipi vardır. Kısaca, bir transeksiyon yaralanması, omurilik bir yırtık olan bir Kontüzyon yaralanmasının sırt omurilik uygulanan kısa bir odak kuvvet ortaya çıkar, ve kompresyon hasarı zedelenmesi, omurilik kuvvet tatbik edildiği zaman meydana gelir ve aynı zamanda olabilir ezilme yaralanması 2 olarak anılacaktır.

Tam transeksiyonu yaralanmaları kontüzyon bir süre, insanlarda 3 klinik olarak nadirdird sıkıştırma yaralanmalar daha sık görülür. sıkıştırma yaralanma örneğin, tümör sıkıştırma ya da diğer zararlı basınç kuvvetleri için, neden insan SCI bulunan ne benzer bir sonuç üretir ve araçları basit bir dizi kullanılarak yapılabilir. Kontüzyon ve sıkıştırma yaralanmalar bir sıkıştırma kuvveti olan ve her ikisi de bu sitoarkitektonik düzensizlik benzer patolojik özelliklere sahip olması ile benzerdir ve yaralanma 1,4 benzer endojen yanıtı ortaya. çürük hasarı içeren model, genellikle, omuriliğin 2,5,6 bir çarpma kaynaklanan SCI insan durumlarda benzer bir şekilde, özel bir aparat kullanılarak sırt omuriliğe bu kuvvet uygular. Bunun tersine, basınç yaralanmaları dorsal ya da yanal kuvvet uygulanarak çeşitli yöntemler ile üretilebilir. Bir sıkıştırma yaralanma Yöntemleri forseps 7, anevrizma klipleri 2 kalibre, veya omurilik 8 üzerine doğrudan bir ağırlık yerleştirerek içerir. Bir avantajıAnevrizma klipleri onlar kuvvet 9 farklı miktarlarda sağlamak mümkün olmasıdır. omurilik doğrudan 8 dorsal yüzeyine ağırlıkları ekleme yöntemi büyük ölçüde nedeniyle solunumu nedeniyle ağırlık ve hareket yerleştirme ameliyat süresini artırarak ve tutarsızlıklar sonuçlanan, 10 dakika boyunca yerde olması ağırlık gerektirir hayvan. Bu gibi kontüzyon yaralanmalarının için Kırıcılar olarak farelerde kullanılmak üzere tasarlanmış özel tertibatlarda hayvanlar yerleştirilmesi farelerin küçük boyutu, zor olabilir veya tutarsız yaralanma 7 neden olur. Ancak, fareler SCI araştırma için yararlı olan bu tür sıçan veya tavşan gibi daha büyük hayvanlarda farklı olarak, transjenik soyların geniş bir yelpazesi mevcuttur.

Omuriliği sıkıştırmak için kalibre forseps kullanarak Plemel yöntemi yaralanma şiddeti ve nörolojik defisit 7 arasındaki korelasyon yüksek derecede bir tekrarlanabilir SCI oluşturur. Bu cerrahi SCI modeliya da metal epoksi ya da tamamen kapanmasını önlemek için başka bir engel nedeniyle belirli bir mesafe ile birbirinden uzağa yapılacak modifiye No 5 Dumont forseps bir çift ile oluşturulan. Bu mühendislik boşluk sağlar ki olacak her zaman birden fazla ameliyatlarda belirli bir genişliğe yakın ve farklı kullanıcılar tarafından forseps. Plemel yöntemin avantajı kalibre forseps üretmek için malzemeler kolaylıkla satın alınır ve özel ekipman gerek kalmadan laboratuarda monte edilebilir olmasıdır. Bu forseps otoklav ve sterilizasyon birden tur dayanabilir, ve ayrı, hantal cihazın eksikliği ameliyatları düzenler.

Bu videoda bir sıkıştırma yaralanma oluşturmak için fare omurilik kalibre forseps bir çift cerrahi kullanımını göstermektedir. Biz de post-operatif yaşam kalitesini artırmak ve mortaliteyi azaltmak için omurilik yaralı laboratuvar hayvanlarının bakımı ile ilgili benzersiz endişeleri gidermek.

Protokol

Tüm hayvan prosedürleri ve hayvan bakım yöntemleri kurumun Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış olması gerekmektedir.

1. Cerrahi Hazırlık

  1. Forseps, vana makas, roungeurs, toplayıcı, neşter, makas, dikiş, cilt zımba, Q-tips, steril tuzlu su, cerrahi süngerler ve izofluran: gerekli tüm cerrahi aletler ve reaktifler birleştirin. Hazırlayın ve ameliyat öncesinde cerrahi araçları tam bir paketi otoklav. Birden fazla fare cerrahisine ise, hazırlamak ve hayvan başına araçlarından biri paket otoklav, ya da cerrahi aletlerin bir paket otoklav ve ameliyatlar arasında bir aracı sterilizatörlü sterilize. Bir cam boncuk aracı terilizer arada ameliyatlar (5 sonra hayvanlar araç tekrar temizlenmesi gerekir ve kullanımdan önce sterilize edilmiş) araçları temizlenmesi için kullanıldığında, genellikle, steril araç bir paket 5 fareye kadar kullanılabilir. Instituti için yerel IACUC yönetici ile kontrol edinBelirli kurallar üzerinde.
  2. % 70 izopropil alkol mendil ile cerrahi alan sterilize. Steril bir alan ameliyat sırasında korunmasını sağlamak için cerrahi örtüler ayarlayın.
  3. Ameliyat öncesinde her fare tartılır. Deri altından, buprenorfin, 0.05 mg / kg vücut ağırlığı arasında bir dozunun tatbik edilmesi.
  4. Izofluran makinenin endüksiyon bölmesi içinde% 4 arasında bir dozda tatbik izofluran hayvansal anestezisi.
  5. Hayvan anestezi sonra, dehidratasyonu önlemek 37 ° C'de ısıtma yastığı hayvan ayarlamak ve farenin kafası düzgün anestezi koni yer sağlamak için gözlere merhem uygulayın. (Not: termal yanıklara neden olmayacak bir ısıtma kaynağı kullanın; yani, bir sirkülasyon su battaniye, sıcak su şişesi veya eşdeğeri..) Bu noktada hayvana% 2 izofluran bir dozunu.
  6. , Fare amaçlanan kesi konum etrafında yaklaşık 1 cm dorsal yüzeyini Tıraş.
  7. Kesi s dezenfekteBir iyot çözeltisi (% 10 Povidon-iyot,% 1 elde edilebilir iyot) ile, daha sonra% 70 izopropil alkol mendil ile yıkanarak ite. 3 kez tekrarlayın.

2. Dorsal Laminektomi

  1. Bir kesi yapmadan önce, hayvan düzgün ayak veya kuyruk tutam yöntemi kullanılarak refleksleri denetleyerek anestezi emin olun.
  2. Neşter ve bıçak ile dorsal omurga boyunca bir kesi yapmak ve daha sonra tekrar refleksleri kontrol edin. Düzgün yardım gibi omurları arasındaki sınırları gibi yerler, görselleştirmek için kamburunu.
  3. Deri yoluyla kesin. Geri omurilikten cilt ve fasya tutmak için retraktör yerleştirin. Omurgayı kapsayan kasları ortaya çıkarmak için omurilik iki tarafında doku temizleyin.
    NOT: Cerrah anatomik noktalara aşina olmalıdır. Örneğin, skapula alt açı T7 ile gelir. Farenin spinal doğal eğrisinin üst T12 ve referans noktası olarak kullanılabilir.
  4. Proper aydınlatma, omurlar arasındaki boşluğu belirler. T10 arka ucunu bulun ve intervertebral disk alanı dik kasları ve fasya kesti. T10 spinöz proses ve posterior lamina maruz yeterli kesin.
  5. İnce uçlu Dumont # 5 forseps bir çift kullanarak, omurilik küçük bir şerit maruz lamina ve spinöz süreçten doku bazı kaldırın. Gerektiğinde, omurga stabilize etmek doku forseps kullanabilir.
  6. Vertebra dorsolateral kenarı boyunca ve sadece lamina altında küçük vana bir makasla bir tarafını sokarak laminektomi gerçekleştirin.
    1. Küçük, dikkatli snips vertebra lamina yan tarafına kesmek için emin olun. Herhangi bir baskı omuriliğe uygulanan emin olun.
    2. Diğer tarafta tekrarlayın.
    3. Omuriliğe baskı uygulamak değildir özen, bir Q-ucu veya cerrahi sünger ile gerekli kanama durdurmak için hafif bir baskı uygulayın.
      NOT: jel köpük hazırlamakkanama ihtiyaçları kontrol edilmesi halinde, steril tuzlu su içinde ıslatılmış.
    4. Kesiler yapıldıktan sonra, vertebra dorsal yönünü kaldırın ve yavaşça herhangi bir doku eklerini temizleyin. Gerekirse kanama kontrolü için uygun araçları kullanın.

3. Omurilik Sıkıştırma

  1. Roungeurs veya laminektomi forseps kullanılarak, sıkıştırma yaralanma için kalibre forseps omuriliğin iki tarafında yerleştirmek, böylece omurilik yan yüzler, vertebral kemik serbest olduğundan emin olun. forseps kolları vertebra kanalın yere ulaşmak gerekir bitişik omurilik kenarlarında ve forseps ipuçları epidural içinde yer gerekir.
    1. Omuriliğin o görünürlük iyi olduğundan emin olun.
  2. Omurilik maruz parçasının ortasında 5 forseps yaklaşık kalibre Dumont # yerleştirin. Hatırlayın kuvvet kollarıps bitişik tarafta epidural içinde yerleştirilmelidir ve ipuçları tekrarlanabilir yaralanmaları oluşturmak için omur kanalının değmelidir.
  3. Aralama bağlamak kadar dikkatlice omuriliği sıkıştırmak. 15 saniye yerinde tutun.
  4. Yavaşça basınç kuvveti serbest bırakmak ve omurilikten kalibre forseps çıkarın. Steril tuzlu su, yara kapanmadan önce homeostazı yeniden elde etmek için kullanılmalıdır.

4. Yara Kapanış

  1. Dikkatle bozabilir veya omuriliğe baskı uygulamak değildir özen, omurilik üzerinde kas tabakası sütür.
  2. Yara üzerindeki deriyi kapatmak için sütür veya zımba kullanın.
  3. Gaz anestezi kullanıyorsanız, / konik anestezik kapatmak başlar.
  4. Ameliyat sırasında, hayvan uyuşuk ve yaralanma sonrası iyileşme olduğu ameliyat sonrası su kaybı açıklanması için 10 g vücut ağırlığı başına laktatlı Ringer 0.1 ml uygulayın. Çözelti warme olmalıdırEnjeksiyon öncesinde vücut ısısı d.
  5. Bir yatak-serbest kafeste fare yerleştirin. Diğer yarım RT sayacı üzerinde iken kafes vermek üzere, kafes alanının yarısından pedi olması için izin veren bir şekilde (1.1.5 tarif edildiği gibi), bir ısıtma yastığı üst kısmına olmalıdır Fare iklim seçenekleri, ayaktan bir kez. "Kurtarma kafesi" sessiz bir ortamda yer almaktadır sağlamak için özen gösterin. Fare yatak ile düzenli bir kafese transfer edilebilir hangi zaman bilinci, kavuşana kadar yakından hayvan izlemek.

5. Post-operatif Bakım

  1. Ağrı belirtileri yönetmek için gerektiği gibi Ameliyattan sonra, daha sonra ameliyat sonrası ilk 3 gün için buprenorfın subkutan her 12 saat / kg vücut ağırlığı 0.05 mg dozunu ve.
  2. Ameliyat sonrası 5 gün - ilk 3 laktatlı Ringer (10 g vücut ağırlığı deri altından 0.1 mi) içindeki bir dozunun tatbik edilmesi. Bu doz ver olduğunda bir eğer /proksimal bu başlangıç ​​süresi dışında dehidrasyon belirtileri gösterirler başlar.
  3. Elle günde iki kez Crede manevra kullanarak hayvanların mesane ifade eder. Yavaşça mesaneyi bulmak için hayvanın karın palpe ve mesane boş olana kadar nazik aşağı yönlü baskı uygulayın.
    1. Mesane boş değil veya idrar kanlı veya bulanık ise, 10 gün süreyle interperitonal enjeksiyon yoluyla hayvana Baytril vücut ağırlığına göre 50 mg / kg yönetmek.
  4. Otofaji, dehidrasyon ve aşırı kilo kaybı (vücut ağırlığının% 20'den fazla) işaretleri için hayvanların izleyin. Bir hayvan, bu belirtilerden herhangi yaşarsa tedavi seçenekleri açısından derhal bir veteriner danışın veya IACUC yönergeleri izleyerek bir insani şekilde hayvan euthanize lütfen.
    1. Hareketlilik sağ ameliyattan sonra sınırlı olabileceği göz önüne alındığında, emin hayvanlar yiyecek ve suya erişimi sağlamak için gerekli adımları atın. Yanı sıra bir ıslak gıda Ön paketlenmişs hidrojel, bu gibi durumlarda hayvanlara uygun hale getirilebilir.

6. Sıkıştırma Sakatlık Kaynaklanan Doku Hasar değerlendirin

  1. Adım 1.4 ve 1.5 de tarif edildiği gibi hayvan anestezisi. Ayak tutam ve izleme kornea göz kırpma refleksleri ile anestezi derinliğini kontrol edin. Hayvan uyaranlara duyarsız olduğunda, 6.2 adıma geçin.
  2. Bir Intracardial perfüzyon 10 gerçekleştirin.
    1. Göğüs boşluğunu Açığa ve sol ventrikül içine bir iğne takın. Buz soğukluğunda% 4 paraformaldehit (PFA), 25 ml - 15, ardından 30 ml buz gibi soğuk fosfat tamponlu salin (PBS) - 20 mevcut sıvıları çalkalayın.
  3. Omuriliği çıkarın.
    1. Omuriliğe cilt dorsal kesin ve omurganın uzunluğunu çevreleyen herhangi bir aşırı doku kaldırmak.
    2. Vergi omurga ve kalan doku kesip. laminektomi ve i gerçek seviyesinjury kaburga sayılarak doğrulanabilir.
    3. Bir kuyruk-to-Rostral yönde omurganın küçük bölümler yerini almaya vanna makas ve forseps kullanın. Kord güvenli kaldırma yetecek kadar maruz kadar kesmeye devam. Kesim konumu ve işlemin Görselleştirme Stereoskop kullanılmasıyla kolaylaştırılabilir.
  4. % 4 PFA omurilik dokusu yerleştirin. 4 ° C'de 24 saat boyunca bu çözelti içinde sonrası düzeltme için doku izin verir.
  5. 4 ° C'de 24 saat boyunca% 30 sukroz içinde inkübe edilerek cryoprotect dokusudur.
  6. OCT doku gömün. Kısaca,% 30 sakaroz inkübasyon doku almak ve herhangi bir aşırı çözüm kaldırmak. Ekim ile dolu bir cryomold halinde doku yerleştirin ve 4 ° C 'de 1 saat süre ile inkübe edilir.
    1. 4 ° C kalıp çıkarın, doku yönlü yönünü teyit (kuru buz üzerinde 1 saat süre ile önceden soğutulmuş) 2-metilbütan basit bir çanak içinde kalıp gelecek ve Ekim tamamen katılaşmasını sağlar. Hemen veya sto kullanıyorsanız kuru buz üzerinde tutun-80 ° C'de yeniden.
  7. Bir sirostat kullanılarak 20 mikron sagital bölüme doku kesin. Slaytlar doğrudan Dağı doku. Kullanılıncaya kadar -20 ° C'de saklayın.
  8. Hematoksilen ve eozin (H & E) leke gerçekleştirin.
    1. Kısaca, bir doku (5 dakika, 2 kez), Hematoksilin (2.5 dakika) ile leke rehidrate, ve su (1 dakika, 2 kez) ile yıkanır.
    2. % 50 doku inkübe ve daha sonra% 70 etanol (3 dk), Eozin (45 sn), leke ve% 90 (5 saniye), 95 (% 5 saniye) içinde inkübe edilerek, dihidrat,% 100 etanol (2 dakika) ve izopropanol (2 dakika).
    3. Ksilen (5 dakika, 3 kez) ile açık.
      NOT: H & E boyama spesifik doku kalınlığı ve şartlara göre değişir. Bu nedenle, standardizasyon deneysel doku numuneleri ile devam etmeden önce gereklidir.
  9. Ince Permount şerit (~ 100 mikron) ve lamel ile doku örtün. Sıvının düzgün dağılımını sağlamak için lamel her tarafta aşağı doğru bastırın. Slaytlar O / N kurumasını bekleyin.
  10. VisEkteki yazılım kullanarak bir dijital mikroskop ve yakalama görüntüleri kullanarak doku bölümleri ualize.

Sonuçlar

0.25 mm (n = 4), 0.35 mm (n = 4) ve 0.55 mm omurilik sıkıştırma ve ardından yukarıda tarif edildiği gibi - (30 gram 25), (n = 4) 12 fareler üzerinde laminektomi gerçekleştirilmiştir. Biz üç hayvanların kurban (n = 6) ve yedi (n = 6) intrakardiyak perfüzyon ile gün sonrası yaralanma. omurilik omurilikten uzaklaştırılmış ve doku hazırlanmış ve yukarıda anlatıldığı gibi işlenmiştir. Bütün omurilik görüntüleri Leica EZ4 dijital mikroskop ve beraberindeki yazılım ile alınmıştır. Spinal kord bölümlerinin görüntüleri Olympus dijital mikroskop kullanılarak ve yazılım eşlik 2X büyütme alındı.

Biz omurilik sıkıştırma sıkıştırma (Şekil 1) yerinde merkez üssü olan bir yaralanma üretir bulundu. Yaralanma etkileri rostral ve kaudal yönde birkaç milimetre uzatmak. aralama arasındaki mesafe azaldıkça yaralanma şiddeti arttı (0.25 mm> 0.35 mm>0.55 mm, Şekil 2). Üç gün sonra sıkıştırma yaralanma merkez üssü kan ve yaralanma sonrası 7 gün sunmak değildi çevreleyen bölgeler vardı. 0.25 mm, 0.35 mm bir boşluk sıkıştırma değil, 0.55 mm'lik bir model üretilir. 7 gün sonra, dorsal ve ventral beyaz cevher büyük ölçüde gri cevher örgütü son derece tahrif edilmiş, merkez üssünde boyutu azalmış, ve kavitasyon kalıcı oldu. Bu cytoarchitectonical değişiklikler motor ve hayvan davranışları duyusal değişiklikler çevrilmiştir önceki yayınlarda 8 gösterildiği gibi Lokomotor Fonksiyon Basso Fare Ölçeği ve duyusal fonksiyon için Frey saç ve etil klorür testleri gibi uygun testler kullanılarak değerlendirildi.

figure-results-1
Sağlam omurilik Şekil 1. Temsilcisi görüntüleri öncesi ve af hemter yaralanması. (A) Bozulmamış omurilik. (B) 0.35 mm sıkıştırma sonra Omurilik. Oklar yaralanma sınırını gösterir. Asterisk yaralanma üssü eder.Birinci. D = Sırt, L = Yanal. Ölçek çubuğu:. 0.50 mm , bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

figure-results-2
Önce ve değişen sıkıştırma genişlikleri sıkıştırma yaralanma sonrası fare omurilik 2. Temsilcisi görüntüleri Şekil. (A) Kontrol omuriliğin Sagital bölümü. (B) 0.35 mm SCI 7 gün sonrası sıkıştırma yaralanma (dpi) merkez üssü koronal kesit. (C, E, G) 3 dpi 0.25 genişliğinde omurilik Sagital bölümler , 0.35 veya 0.55 mm arasındadır. (D, F, H), H & E sagital kesitler lekeli omuriliks 7 0.25, 0.35 veya 0.55 mm genişliğinde dpi. Asterisk yaralanma üssü eder.Birinci. Bütün bölümler, H & E ile boyandı. D = Sırt, L = Yanal. Ölçek çubuğu:. 1.25 mm , bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Tartışma

Bir SCI modelinin seçimi SCI insan vakalarının tedavilerinin etkinliğini belirlemek için deney tasarlama önemlidir. Bu tür deneyler sonuçsuz verileri neden olabilir değişkenliği sınırlamak için yüksek tekrarlanabilir bir hayvan modeli gerektirir. Onlar da doğru onlar modelleme insan durumunu değerlendirmek için klinik önemi olmalıdır. Bu amaçla, bir transeksiyonu üzerinde bir sıkıştırma ya da çürük hasarı seçme daha klinik 3 ile ilgilidir. Bununla birlikte, kontüzyon yaralanmalarının için Kırıcılar ve ağırlık damla cihazları pahalı ve karmaşık makinelerin kullanımını gerektirir. Buna karşılık, SCI kalibre forseps model ortak laboratuar malzemelerinden montajı kolay olan forseps modifiye faydalanan ve cerrahi omuriliği ortaya çıkarmak için bir standart dorsal laminektomi sonrası yalnızca bir ek adım gerektirir. Ancak, bu yöntemi kullanarak bir dezavantajı basınç kuvveti her zaman olduğu gibi, yanal yerine dorsal daha uygulanır olmasıdırEn sık yöntem kontüzyon modelleri 1,2 den dokusunun büyük bir rostral-kaudal ölçüde etkileyecek kullanılarak oluşturulan SCI 9 ve basınç yaralanmaların insan klinik durumlarda görülür. Bu model, teknik düzenleyicileri tarafından ortaya konmuştur, ve bize, yeniden üretilebilir SCI 7,11 oluşturmak için, ve farelerde boyutu için de çok uygundur. Hayvanlar hayvanların bir kohort aynı yaralanma şiddetini paylaşan doğrulamak için böyle Locomotion için Basso Fare Ölçeği ve Frey saç testi gibi davranış testleri, çok sayıda kullanılarak ameliyat ve tedavi tedavilerden sonra değerlendirilecek için Ayrıca, bu yaralanma modeli veriyor ve nörolojik defisit 7,11-13. Bu teknikleri, aynı zamanda omurilik yaralanması 2,7 tedavilerin değerlendirmek için kullanılan hayvan modelleri için genel kriterleri karşılayan, araştırma çalışmalarında hayvanlara tatbik tedavilerin etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.

kalibre forcep üretmek için bir yöntemYaralanma modeli için basit ve farklı çeşitli yöntemler ile gerçekleştirilebilir. Biz Plemel 7 tarafından yayınlanan, boşluk yöntemi 11 kullandık, ve aynı zamanda sıkıştırma aygıtı oluşturmak için kolay bir yöntem sağlar sadece küçük bir vida kullanarak forseps değiştirilmiş, ancak aynı zamanda, son sıkıştırma genişliğini ayarlayarak çok yönlülük sağlar karşılaştırmalı çalışmalar için fayda. forseps yaratma seçenekleri yelpazesi çok uzun boşluk (ler) her zaman aynı mesafeye forseps kapanış istikrarlı yolunu sağlamak ve otoklav ve sterilizasyonu dayanabilir neredeyse sınırsızdır. Bu videoda anlatılan cerrahi yöntemler ancak laminektomi performans ve omurilik artırabilir herhangi bir ek sıkıştırma kuvvetleri zarar vermez, böylece işlem yapıldıktan sonra hayvan dikilmesi sırasında dikkat edilmesi gereklidir, kullanıcılar arasında oldukça tekrarlanabilir yaralanma şiddeti ve gelecek deneyler bulandırabilir.

Uygun eğitim ve uygulama ile, sıkıştırma yaralanma kalibre forseps modeli insanlarda 2,3,7 gözlenen klinik vakalar taklit farelerde omurilik gerçekleştirmek için uygundur. Nedeniyle yaralanma şiddeti, farklı derecelerde fareler, forseps oluşturma üretme kolaylığı kolayca yapılabilir. Bu transgenik farelerde şiddeti farklı derecelerde SCI genetik etkilerin gözlenmesine ve farelerde kök hücre nakli etkinliğini değerlendirmek için büyük bir fayda sağlayacaktır. literatürdeki çalışmaların çoğunluğu nedeniyle genellikle gerçekleştirmek için ameliyatlar kolaylaştırır boylarına için fareler üzerinde yapılmıştır. Ancak bu video Plemel ark. 7 tarafından yayınlanan ve bizim tarafımızdan açıklanan yöntem büyük kolaylık ve tekrarlanabilirlik ile fareler üzerinde gerçekleştirilecek SCI imkan vermelidir.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışmanın finansmanı Shriners Hastaneleri ve CIRM bursları tarafından AMC ve'ye sağlandı. Ayrıca Plemel ve ark.7 İlk olarak kalibre edilmiş forseps modelini tasarlamak ve yayınlamak için.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
İzofluran makinesiSmiths Medical PM, IncVCT302
İzofluranPhoenix İlaçNDC: 66794-013-25
Diseksiyon KapsamıSeiler Hassas MikroskoplarSSI 202/402
Germinator-500 (alet sterilizatörü)Thomas Scientific3885A20
Puralube (göz merhemi)DechraNDC 17033-211-38
Neşter sapı (#Bilim Araçları10003-12
Neşter bıçağı (# 11)Fisher Scientific  08-914B
Ekartör (Colibri)Güzel Bilim Araçları17000-03
Friedman Pearson roungeurGüzel Bilim Araçları16021-14
Vanna (Castroviejo) makasRobozRS-5658
Doku forsepsGüzel Bilim Araçları11029-14
Laminektomi forseps (Dumont #2)Güzel Bilim Araçları11223-20
Dumont #5 forsepsGüzel Bilim Araçları11252-20
ZımbaGüzel Bilim Araçları12031-07
Zımbalar (yara klipsleri)Reflex7203-1000
SütürlerHenry Schein101-2636
İğneler (30 G x ½)BD Biyomedikal305106
Şırınga (1 ml)BD Biyomedikal309659
Baytril (enrofloksasin)BayerNADA 140-913
Buprenex (buprenorfin)Kardinal SağlıkNDC 12496-0757-1
0) Güzel

Kaynaklar

  1. McDonough, A., Martinez-Cerdeno, V. Endogenous proliferation after SCI in animal models. Stem Cells Int. 2012, 387513(2012).
  2. Onifer, S. M., Rabchevsky, A. G., Scheff, S. W. Rat models of traumatic SCI to assess motor recovery. ILAR J. 48 (4), 385-395 (2007).
  3. Bunge, R. P., Puckett, W. R., Becerra, J. L., Marcillo, A., Quencer, R. M. Observations on the pathology of human SCI. A review and classification of 22 new cases with details from a case of chronic cord compression with extensive focal demyelination. Adv Neurol. 59, 75-89 (1993).
  4. Beattie, M. S., et al. Endogenous repair after spinal cord contusion injuries in the rat. Exp Neurol. 148 (2), 453-463 (1997).
  5. Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. Graded histological and locomotor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection. Experimental Neurology. 139 (2), 244-256 (1996).
  6. Krishna, V., et al. A contusion model of severe SCI in rats. J Vis Exp. 78, (2013).
  7. Plemel, J. R., et al. A graded forceps crush SCI model in mice. J Neurotrauma. 25 (4), 350-370 (2008).
  8. Wu, D., Shibuya, S., Miyamoto, O., Itano, T., Yamamoto, T. Increase of NG2-positive cells associated with radial glia following traumatic SCI in adult rats. J Neurocytol. 34 (6), 459-469 (2005).
  9. Namiki, J., Tator, C. H. Cell proliferation and nestin expression in the ependyma of the adult rat spinal cord after injury. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 58 (5), 489-498 (1999).
  10. Teletin, M., et al. Histopathology in Mouse Metabolic Investigations. Current Protocols in Molecular Biology. 29, (2007).
  11. McDonough, A., Hoang, A. N., Monterrubio, A. M., Greenhalgh, S., Martinez-Cerdeno, V. Compression injury in the mouse spinal cord elicits a specific proliferative response and distinct cell fate acquisition along rostro-caudal and dorso-ventral axes. Neuroscience. 254, 1-17 (2013).
  12. Basso, D. M., et al. Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after SCI in five common mouse strains. J Neurotrauma. 23 (5), 635-659 (2006).
  13. Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J Neurosci Methods. 53 (1), 55-63 (1994).

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Dorsal LaminektomiMurine OmurilikHistokimyasal TekniklerBasso Fare l e iVon Frey TestiEtil Klor r Testintrakardiyak Perf zyonParaplejik Hayvan Bak m
Omurilik Sıkıştırma Yaralanma Kalibre Forseps Modeli
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.