Bu protokolün amacı, bir sıçanda glomerüler filtrasyon hızını, idrar akış hızını ve sodyum ve potasyum atılımını ölçmek ve hesaplamak için ilke ve teknikleri göstermektir. Bu gösteri, öğrencilere böbrek fonksiyonunun nasıl ölçüleceğine dair genel bir kavramsal anlayış sağlamak için kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fizyoloji Laboratuvarı Gösteri: Bir Sıçan Glomerüler Filtrasyon Hızı
Bu makalede
Özet
Özet
Glomerüler filtrasyon hızı (GFR) ölçümleri ve sodyum (Na) ve potasyumun (K) fraksiyonel atılımı sağlık ve hastalıkta böbrek fonksiyonunu değerlendirmede kritik öneme sahiptir. GFR, glomerulusta süzülen, ancak nefron boyunca salgılanmayan veya yeniden emilmeyen inülinin kararlı durum renal klerensi olarak ölçülür. Na ve K'nin fraksiyonel atılımı, plazma ve idrardaki Na ve K konsantrasyonundan belirlenebilir. İnülinin renal klerensi, femoral arter, femoral ven ve mesanede kateterleri olan anestezi uygulanmış bir hayvanda gösterilebilir. Bu prosedür için kullanılan ekipman ve malzemeler, bir araştırma merkezinde yaygın olarak bulunanlardır ve bu nedenle bu prosedürü böbrek fonksiyonunu ölçmek için pratik bir araç haline getirir. Bu videonun amacı, bir idrar söktürücü ilaçtan önce ve sonra böbrek fonksiyonunun değerlendirildiği bir laboratuvar gösterimi gerçekleştirmek için gerekli prosedürleri göstermektir. Sunulan teknik, böbrek hastalığının sıçan modellerinde böbrek fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılabilir.
Giriş
Böbreğin en önemli işlevi hücre dışı su ve elektrolit içeriğinin homeostatik olarak düzenlenmesidir. Böbrekler, normal fizyolojik seviyeleri korumak için hücre dışı su, sodyum (Na) ve potasyumu (K) yakından düzenler. Böbrek fonksiyonlarındaki bozukluklar ölümcül olabilen ciddi metabolik bozukluklara neden olabilir. Temel böbrek süreci nefron içinde meydana gelir ve glomerulusta plazmanın süzülmesiyle başlar ve idrarın atılmasıyla sona erer. İdrardaki son su, Na ve K konsantrasyonunu belirleyen diğer süreçler, nefron içinde salgılanma ve yeniden emilimdir. Glomerüler filtrasyon hızı (GFR) ve Na ve K'nin fraksiyonel atılımı ölçümleri, sağlık ve hastalıkta böbrek fonksiy....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Önceden herhangi bir hayvan prosedürüne kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (IACUC) protokolünü onaylaması gerekir. Bu protokol Michigan State Üniversitesi IACUC tarafından onaylanmıştır.
FITC inulin Çözüm 1. Ön-lab Hazırlık
- Tüm inülin çözünene kadar yavaş yavaş ısınmaya 20 ila 70 ° C ml tuzlu su ve FITC inulin (5 mg / ml FITC-inülin) 100 mg ilave edin.
- Soğuk, oda sıcaklığına kadar çözeltisi ve sığır serum albümini 800 mg ekleyin (40 mg / ml BSA, liyofilize toz, esas olarak, agaroz jel elektroforezi ile arındırılmış, endotoksin, ≥98% saflığa globulin).
- Filtre kağıdı (grade 1) ile inulin-BSA ç....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
laboratuvar gösteride kullanılan diüretik çok hızlı ilaç uygulama birkaç dakika içinde artmış Na, K sonuçlanan böbrek ve su atılımı tarafından filtre Na ve K emilimini inhibe furosemid oldu. Birincil mekanizma ile, furosemid GFH ve Na ve K filtrelenmiş yük üzerinde minimal etkisi olmalı, ama Na ve K idrar akışını ve fraksiyonel atılımını artacak
Bir anestezi uygulanmış sıçanlarda, GFR ilaç öncesi değerlerin ortalaması / dakika, Na atılımı 0.58 umol / dakika (süzüldü yükün% 0.1) 3.2 ml oldu v.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Dört kriterleri karşılaması gerekir GFH ölçümünde uygun bir işaretleyici: glomerülden serbestçe süzülür edilmesi, plazma proteinlerine bağlanmamış olması ve ne emilir ne nefron salgılandığı. İnülin bu ölçütlerini karşılayan bir fruktoz polimerdir. Sonuç olarak, inulin renal klirensi GFH 7 ölçmek için altın standart olarak kabul edilir. gösterdi tekniği inulin 8,9 sabit bir infüzyon sırasında Zamanlı idrar koleksiyonları kullanılarak inulin renal klerensini belirlenmesi geleneksel yaklaşımı temsil e.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim. görüş veya burada yer alan iddiaların yazarın özel görünümleri vardır ve resmi ya da Ordu Bölümü veya Savunma Bakanlığı görüşlerini yansıtan şeklinde olması değildir.
Teşekkürler
laboratuvar gösteri için fon kaynağı NIGMS hibe oldu: GM077119. Biz Bütünleştirici ve Organ Sistemleri Farmakoloji Kısa Couse onların desteği için Dr. Joseph R. Haywood ve Dr. Peter Cobbett teşekkür ederim. Biz de laboratuvar gösteri onu teknik destek için Sayın Hannah Garver teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 5-0 Örgülü İpek Cerrahi Sütür | Cerrahi Uzmanlık Alanları Corp | SP1033 | |
| Test Plakası, 96 Kuyulu | Costar | 3922 | |
| Sığır Serumu Albümin | Sigma Chemical Co | A2934-25G | |
| Santrifüj | Beckman Coulter | MicroFuge 18, 357160 | |
| Konik Örnek Tüpleri | Dot Scientific Inc. | #711-FTG | |
| Pamuk Uçlu Aplikatörler | Solon Manufacturing Co | 56200 | |
| Veri Toplama Yazılımı | ADI Cihazları | LabChart Pro 7.0 | |
| Dijital Tartı | Denver Enstrümanı | APX-4001 | |
| FITC-Inülin | Sigma Kimyasal Co | F3272-1G | |
| Gazlı Bez Süngerler | Covidien | 2146 | |
| Isıtmalı Cerrahi Yatak | EZ-Anestezi | EZ-212 | |
| Heparin | Sagnet | NDC 25021-402-10 | |
| HEPES | Sigma Kimyasal Co | H3375 | |
| İzofluran | Abbott Hayvan Sağlığı | IsoFlo, 5260-04-05 | |
| İzofluran Buharlaştırıcı | EZ-Anestezi | EZ-190F | |
| Mikro Diseksiyon Forseps | Biyomedikal Araştırma Aletleri A.Ş. | 70-1020 | |
| Mikroplaka Okuyucu - Fluoroskan | ThermoScientific | Ascent FL, 5210460 | |
| NOVA 5+ Sodyum/Potasyum Analizörü | NOVA BioMedical | 14156 | |
| Olsen-Hegar Makaslı İğne Tutucular | Güzel Bilim Araçları | 12002-12 | |
| PE-190 (mesane kateteri için) | BD Medical | 427435 | |
| Basınç Dönüştürücü ve nbsp; | Pyrex | ||
| Ekipmanları | Corning Inc. | 99445-12 | |
| Sıçan Femoral Konik Arter Kateteri | Stratejik Uygulamalar A.Ş. | RFA-01 | |
| Salix Furosemid% 5 | Intervet | # 34-478 | |
| Şaşılık Makas | Güzel Bilim Araçları | 14075-11 | |
| Öğrenci Cerrahi Makas | Güzel Bilim Araçları | 91402-12 | |
| Cerrahi Eldivenler | Kimberly-Clark | Sterling Nitril Eldiven | |
| Şırınga pompası | Razel Scientific | R99-E | |
| Doku Forseps | Güzel Bilim Araçları | 91121-12 | |
| Doku Makası | George Tiemann Co | 105-420 | |
5-0 Örgülü İpek Cerrahi Sütür Cerrahi Uzmanlık Alanları Corp SP1033 Test Plakası, 96 Kuyulu Costar 3922 Sığır Serumu Albümin Sigma Chemical Co A2934-25G Santrifüj Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Konik Numune Tüpleri Dot Scientific Inc. #711-FTG Pamuk Uçlu Aplikatörler Solon Manufacturing Co 56200 Veri Toplama Yazılımı ADInstruments LabChart Pro 7.0 Dijital Ölçek Denver Enstrüman APX-4001 FITC-Inulin Sigma Chemical Co F3272-1G Gazlı Bez Süngerler Covidien 2146 Isıtmalı Cerrahi Yatak EZ-Anestezi EZ-212 Heparin Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isofluran Abbott Hayvan Sağlığı IsoFlo, 5260-04-05 İzofluran Buharlaştırıcı EZ-Anestezi EZ-190F Mikro Diseksiyon Forseps Biyomedikal Araştırma Aletleri A.Ş. 70-1020 Mikroplaka Okuyucu - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Sodyum/Potasyum Analizörü NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Makaslı İğne Tutucular Güzel Bilim Araçları 12002-12 PE-190 (mesane kateteri için) BD Medical 427435 Basınç Dönüştürücü Pyrex Kültür Tüpleri MLT1199 Cihazlar Corning Inc. 99445-12 Sıçan Femoral Konik Arter Kateteri Stratejik Uygulamalar A.Ş. RFA-01 Salix Furosemid %5 Intervet #34-478 Şaşılık Makası Güzel Bilim Araçları 14075-11 Öğrenci Cerrahi Makas Güzel Bilim Araçları 91402-12 Cerrahi Eldivenler Kimberly-Clark Sterling Nitril Eldiven Şırınga pompası Razel Scientific R99-E Doku Forseps Güzel Bilim Araçları 91121-12 Doku Makası George Tiemann Co 105-420 |
Kaynaklar
- Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. , Pearson. (2012).
- Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 303-344 (2011).
- Levey, A. S.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
