Method Article

Uyanık Sıçanlarda Intra-Oral tat yoğunluğu arttırıcı madde İdaresi Sırasında Hızlı Tarama Dönüşümlü Voltametri Rapid Dopamin Dynamics incelenmesi

DOI:

10.3791/52468

⸱

August 12th, 2015

 ,  ,  , 
1Interdepartmental Neuroscience Program, Yale University, 2Department of Biotechnical and Clinical Laboratory Sciences, School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo, 3Department of Psychiatry, Yale School of Medicine, 4Department of Cellular and Molecular Physiology, Yale School of Medicine

In This Article

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. Read More ...

Erratum

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: Examination of Rapid Dopamine Dynamics with Fast Scan Cyclic Voltammetry During Intra-oral Tastant Administration in Awake Rats
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.

null

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre dışı dopamindeki (DA) hızlı dalgalanmalar, memelilerde hem ödül işlemeye hem de motive edilmiş davranışa aracılık eder. Bu el yazması, tastantların uyanık, serbestçe hareket eden sıçanlarda hızlı dopamin salınımını nasıl değiştirdiğini belirlemek için hızlı taramalı döngüsel voltametri (FSCV) ve ağız içi tatır uygulamasının birlikte kullanımını açıklamaktadır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Memeli beynindeki hızlı, fazik dopamin (DA) salınımı, ödül işleme, pekiştirmeli öğrenme ve motivasyonel kontrolde kritik bir rol oynar. Hızlı taramalı döngüsel voltametri (FSCV), çeşitli preparat türlerinde fazik DA salınımını incelemek için kullanılan, yüksek uzamsal ve zamansal (saniyenin altında) çözünürlüğe sahip bir elektrokimyasal tekniktir. Tek hücreli ve beyin dilimlerinde in vitro deneyler ve anestezi uygulanmış kemirgenlerde in vivo deneyler, normal koşullar altında ve hastalık modellerinde dopamin salınımına ve alımına aracılık eden mekanizmaları tanımlamak için kullanılmıştır. Son 20 yılda, uyanık, serbestçe hareket eden kemirgenlerde yapılan in vivo FSCV deneyleri, ödül işleme ve ödül öğrenmede dopaminerjik mekanizmalar hakkında da bilgi sağlamıştır. Uyanık, serbestçe hareket eden hazırlığın en büyük avantajlarından biri, belirli davranışsal olaylara veya ödül veya işaret sunumuna zaman kilitli hızlı DA dalgalanmalarını inceleme yeteneğidir. Bununla birlikte, birleşik davranış ve voltametri deneylerinin bir sınırlaması, birincil ödüllendirici veya caydırıcı uyaranlara özgü DA etkilerini, ödüle yönelik veya diğer motor davranışlara aracılık eden birlikte meydana gelen DA dalgalanmalarından ayırmanın zorluğudur. Burada, oral tatantlara DA yanıtlarını doğrudan araştırmak için uyanık bir sıçanda in vivo FSCV ve intra-oral infüzyon kullanan kombine bir yöntemi tarif ediyoruz. Bu deneylerde, oral tatlar doğrudan farenin damağına infüze edilir - ödüle yönelik davranış ve gönüllü içme davranışı atlanarak - tastant uyaranlara DA yanıtlarının doğrudan incelenmesine izin verir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fazik DA salınımı, ödüle yönelik davranışa aracılık etmede önemli bir rol oynar [1-3]. Bununla birlikte, birincil bir ödülün fazik DA salınımını nasıl değiştirdiğini izole etmek ve incelemek, genellikle fazik DA salınımını da değiştirebilen birlikte ortaya çıkan davranışsal veya bilişsel süreçler tarafından karmaşıklaştırılır - örneğin ödülü elde etmek için karar verme süreçleri veya ödüle yönelik motor davranış gibi. Mevcut çalışmada, intraoral kanüller yoluyla tastant iletimi ile birlikte in vivo hızlı taramalı döngüsel voltametri (FSCV) kullanarak tatlara fazik DA yanıtlarını izole ediyoruz. Bu teknik, seçim ve eylemi atlar ve bir tastın bir sıç....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm deneyler Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Sağlık (NIH) Rehberi National Institutes göre yapılmıştır ve Yale Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.

1) ameliyat öncesi Hazırlık

  1. Oral Çözelti Hazırlanması
    1. % 10 sakroz ve deiyonize su içinde% 0.005 L-mentol (pH 7.4) çözüm oluşturur. Oda sıcaklığında, kapalı kaplarda bu çözümleri saklayın ve bozulmasını önlemek için, her 2 haftada bir yeniden.
  2. Elektrot kalibrasyon çözümleri
    1. Kalibrasyon öncesinde herhangi bir zamanda Tris tamponu (pH 7.4) sağlayın. Çözelti 12.0 mM Tris-HCI, 140 mM NaCI,....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Intraoral kateter implantasyonu ile birlikte FSCV nasıl sakaroz, İştah açıcı tat yoğunluğu arttırıcı incelemek için kullanılan, NAC çekirdek fazik DA salınımını düzenler. Tat yoğunluğu arttırıcı madde infüzyon, elektriksel stimülasyon öncesinde., VTA (150 uA, 60 Hz, 24 bakliyat, kırmızı çubuk ile gösterilir) Şekil 1 NAC (Şekil 1) fazik DA sürümde sağlam artışlar üreten potansiyeli olan bir renk grafiğini göstermektedir z ekseni y-ekseni, x-ekseni üzerinde zaman ve geçerli (yanlış renk o.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

FSCV ile birlikte intraoral tat yoğunluğu arttırıcı madde teslim sözlü çeşni verici maddeler için "gerçek zamanlı" DA yanıtları analiz edilmesini sağlar. Başarılı DA ölçümleri için gerekli olan protokolde üç kritik adımlar vardır. İlk olarak, diş kateterin uygun bir implantasyon çeşni verici maddeler verilmesi için kritik önem taşır. Kateter birinci molar arkasında takılı ve yerine sıkışmış sağlamak açıklığı kaybetme kateter önler ve hayvan tarafından yanlışlıkla kaldırılmasını önler. Iyileşme sonrası ilk birk.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yayında bildirilen araştırma, NSF Lisansüstü Araştırma Bursu (RJW) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Ulusal Uyuşturucu Bağımlılığı Enstitüsü ve FDA Tütün Ürünleri Merkezi (CTP) tarafından P50DA036151 Numaralı Ödül (EJN ve NAA) tarafından desteklenmiştir. İçerik yalnızca yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin resmi görüşünü temsil etmek zorunda değildir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Uyarıcı elektrotPlasticsOneMS303/2-A/SPCsipariş verirken, kaidenin altında 22 mm'lik bir kesim talep edin
Elektrot için kanülBiyoanalitik SistemlerMD-2251
Cam kılcalA-M sistemleri624503
Karbon fiberThornelT650
Elektrot çektirmesiNarishige UluslararasıPE-22
Nörolog uyaran izolatörüfigure-materials-1 Digitimer Ltd.DS4
Isıyla daralan3MFP-301
Elektrotlar için yalıtımlı tellerSquires elektronikÖzelL 3.000 x 1.000s x 1.000s UL1423 30/1 BLU
MikromanipülatörUniv. Illinois at Chicago, Mühendislik Makine Atölyesi
EpoksiITW Devcon14250"5 dakika epoksi"
Perfloro-3,6-dioksa-4-metil-7okten-sülfonik asit ve tetrafloroetilenİyon Gücükopolimeri LQ-1105yani, < / em> Nafion
Gümüş boyaGC Elektronik22-023
Güç kaynağıBK Hassas9110
Boru Ağız içi kateterlerIntramedic427426PE 100, İç Çap = 0.86 mm; OD = 1.52 mm
Ağız içi infüzyon için boruFischer Scientific02-587-1AKIMLIK 1/32"; OD 3/32 "
Akış hücresi için şırınga pompasıPompa Sistemleri A.Ş.NE 1000
Cerrahi çimentoDentsply Kalafat675571 ve 675572
Hava aktüatörüVICIA606 konumlu dijital
valf arayüzü Dijital valf arayüzüVICIDVI230 VAC
Dörtlü sahneN. Carolina Üniversitesi, Elektronik Tesisi
UEI güç kaynağıN. Carolina Üniversitesi, Elektronik Tesis
UEI koparma kutusuN. Carolina Üniversitesi, Elektronik Tesis
Tastant şırınga pompası için güç kaynağıMed AssociatesSG-504
Tastant şırınga pompasıMed AssociatesPHM-107
Tungsten mikroelektrotMicroProbesWE30030.5A3
ile gümüş tel referansı MetrikE255A
SükrozSigma80497
Magnezyum klorürSigmaM8266
Sodyum chlroideSigma S7653
Perklorik asitSigma244252
Hidroklorik asit (4 M)Sigma54435
Soidum hidroksitSigma306576
Hidrojen peroksitSigmaH1009
Dopamin hidroklorürSigmaH8502
TarHeel HDCV YazılımıKuzey Carolina Üniversitesi-Chapel HillYazılım talep edilmelidir: yazılım talep sayfasına bağlantı için buraya tıklayın
AgCl InVivo

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Roitman, M. F., et al. Dopamine operates as a subsecond modulator of food seeking. J Neurosci. 24 (6), 1265-1271 (2004).
  2. Aragona, B. J., et al. Regional specificity in the real-....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Fast Scan Cyclic VoltammetryDopamine DynamicsIntra oral Tastant AdministrationAwake RatsNucleus AccumbensCarbon Fiber ElectrodesOral Catheter ImplantationPrinciple Component AnalysisSub second Dopamine ReleaseReward Processing

Related Articles