Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Çok değişkenli Kronik Non-anestezi Kayıtlar için Yakın dönem Fetal Koyun enstrümantasyon

8.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52581

⸱

25 Ekim 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Département de sciences cliniques, CHUV, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, 2Département d'obstetriques et de gynécologie, CHU Ste-Justine Research Centre, Université de Montréal, 3Département de neurosciences, CHU Ste-Justine Centre de recherche, Université de Montréal, 4Centre de recherche en reproduction animale (CRRA), Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC

Bu makalede

Özet

Cerrahi yerleştirme ve kateter ve elektrotlar, tekrarlayan kan örneklemesi, madde enjeksiyonu, biyoelektrik aktivitesinin kaydedilmesi bakım ve in vivo görüntüleme izni nedeniyle kronik instrumented olmayan anestezi fetal koyun modeli, sağlık ve hastalık insan fetal gelişimini incelemek için kullanılır. Biz bu modeli kurmak için gerekli prosedürler açıklanmaktadır.

Özet

Kronik aletli gebe koyunlar, insan fetal gelişimi ve endotoksinler, bakteriler, göbek kordonu tıkanıklıkları, hipoksi ve çeşitli farmakolojik tedaviler gibi patofizyolojik uyaranlara yanıtların bir modeli olarak kullanılmıştır. Prematüre doğum riski taşıyan fetüslerde glukokortikoid tedavisi ve terapötik hipotermi ile ilgili hayat kurtarıcı klinik uygulamalar bu modelde geliştirilmiştir. Bunun nedeni, anestezi uygulanmamış fetal koyunların kateterlerin ve elektrotların cerrahi olarak yerleştirilmesi ve bakımına, tekrarlayan kan örneklemesine, madde enjeksiyonuna, biyoelektrik aktivitenin kaydedilmesine, elektrik stimülasyonunun uygulanmasına ve in vivo organ görüntülemesine izin veren benzersiz uygunluğudur. Burada, kan gazı, metabolik ve inflamasyon açısından ameliyat sonrası iyileşmenin karakterizasyonu da dahil olmak üzere, stabil, kronik olarak enstrümantasyonlu, anestezizleştirilmemiş bir fetal koyun modeli elde etmek için gereken cerrahi enstrümantasyon prosedürünü açıklıyoruz.

Giriş

Hayvan modellerinde çeşitli laboratuar kemirgenler, insan olmayan primatlar ve yerli geviş getirenler da dahil olmak üzere normal ve tehlikeye gebeliklerin hem de çalışma için mevcuttur. 1,2,3,4,5 Kronik olarak gebe koyunun 50 yıl olarak için yaygın olarak kullanılmaktadır lipopolisakkaritler gibi patofizyolojik uyaranlar (LPS) insan fetal gelişim ve yanıtları bir modeldir. 6-10 LPS maruziyeti aşağıdaki lezyonlar nedeniyle her iki türün de benzer bir olgunlaşma profiline olan periventriküler lökomalazi ile erken doğan bebeklerde görülen tam olarak ne taklit. 11, 12

Diğer gebelik komplikasyonları ayrıca doğum öncesi glukokortikoidler akciğer gelişimini 13-15 ve fetus 16,17 üzerinde intrauterin büyüme geriliği (IUGR) etkisinin anlaşılması teşvik olduğunu keşif gibi büyük detaylı incelenmiştir.

Fetal koyun modelinde geniş kullanımı uniq nedeniyletekrarlayan kan örneklemesi, biyoelektrik aktivitesinin kaydedilmesi, elektrik stimülasyonu ve in vivo beyin görüntüleme uygulaması sağlayan cerrahi yerleştirme ve kateter ve elektrotların bakımı olmayan anestezi fetal koyun vi amenability. daha az sıklıkla kullanılan rağmen 18 Telemetri de mümkündür henüz daha sofistike nedeniyle ilk ve bakım maliyeti yanı sıra kurmak. 19

Enstrümantasyon birçok varyasyonu ilgi önlemlere bağlı olarak mümkün olduğu Dahası, fetal koyun modeli çok yönlüdür. Örneğin, hafta gün içinde kaydetmek mümkündür böyle fetal solunum hareketlerinin, elektriksel beyin aktivitesi, kardiyovasküler tepkiler, elektrokardiyogram, organların bir dizi bölgesel kan akımı akış sondaları veya mikroküreler, vb Teşekkür kullanarak gerçek zamanlı olarak çok değişkenli sinyaller Bu çok yönlülük, çalışmaların geniş bir yelpazede Cardi geliştirilmesi dahil olmak üzere yapılmıştırovascular sistemi 20,21, hipotalamus-hipofiz-adrenal (HPA) eksen 22, özellikle de 24 yılında beyin gelişimi 23 ve uyku durumları geliştirme, hipoksi etkisi / asfiksi 25, terapötik hipotermi 26, inflamasyon 6-11, hem 27 kombinasyonu, glukokortikoidler 28,29 anti-depresanlar 30, bronko-pulmoner displazi (BPD) 31,32, önceki ve doğum sırasında adı ancak fetal programlama 33,34,35,36,37,38,39 veya yeni fetal izleme yöntemlerinin geliştirilmesi Soruşturmanın birkaç alanları. 40,41,42,43

Sunulan yöntemin genel amacı bu çok yönlü modelin temel uygulanmasını göstermektir. Bu hücresel bütünleştirici, organ ve moleküler düzeylerde fetal fizyolojisi ve patofizyolojisi okuyan akut ve kronik deneysel protokollerin geniş bir yelpazede kurulması sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Hayvan bakım Hayvan Bakımı Kanada Konseyi ve Hayvan Bakım Université de Montréal Konseyi (protokol # 10 Rech-1560) tarafından onay kuralları izledi. Maddeler ve kullanılan yöntemler ile ilgili detaylı bilgiler, Tablo 1 'de verilmektedir.

1. Anestezi

  1. Bir şah damarına bir tek lümen kateter yerleştirin.
  2. Oturaklı dişi kullanılarak asepromazin (Atravet 10 mg / ml), 2 mg intravenöz yaklaşık 30 dakika da kortizol seviyelerini azaltır prosedürü ile ilişkili stres azaltmak için anestezi verilmeden önce.
  3. Diazepam yönetme (diazepam 5 mg / mL), 20 mg, ketamin (Ketalar 100 mg / ml) 4-5 mg / kg propofol (propofol 10 mg / ml) 0,5 ila 1 mg / kg iv, genel anestezi sağlamak.
  4. Wisconsin tipi bıçak ile bir laringoskop kullanılarak trakea içine bir havayolu değişim kateteri takın entübasyon ile yardım etmek (Ekstra uzun 350 mm Bıçak Sol-El). Havayolu değişim kateter kapalı ve trakea içine silikon endotrakeal tüpün (9 ila 12 mm İç Çap) kaydırın. Bu teknik entübasyon işlemini kolaylaştırır. Trakea basıncı kaynaklı ülserasyon önlemek ve koyunların başına tüp sabitleşmek dikkatle endotrakeal tüpün şişirin.
  5. Anestezi makinesinin solunum devresine endotrakeal tüp bağlayın ve hemen mekanik ventilasyon başlar. 35 ila 45 mmHg normal sınırlar içinde bir P CO 2 korumak için ventilatör ayarlarını yapın.
  6. (; In 1.16 için [0.9 x 25 mm] [1.1 x 30 mm] 1 ile 22 G 20) ve doğrudan arteriyel kan basıncını izlemek için uyumlu olmayan boru bağlamak aurikular artere bir kateter yerleştirin.
  7. Elektrokardiyogram, direkt arter kan basıncı, oksijen doygunluğunu (SpO2), kapnografi kaydetmek için bir çok parametre fizyolojik monitörü kullanın (P ET CO 2) ve sıcaklık her 5 dk. Tüm ph aktarınmerkezi fizyolojik veri toplama bilgisayara bir seri kablo aracılığıyla ysiologic verileri. Bir dolaşan su battaniye kullanarak normal vücut ısısını korumak.
  8. Genel anestezinin ilk bir saat için 10 mL / kg'lık bir dengeli bir poli-iyonik çözelti yönetme ve daha sonra 5 ml / kg / saat azaltır.
  9. Hemen önce antibiyotik profilaksisi gibi cilt kesi ewe için trimetoprim-sulfadoksin 5 mg / kg IV yönetin.
  10. Koyun ve fetüsün tüm cerrahi manipülasyonlar standart aseptik teknikler kullanın.
  11. Bariyer hemşire her zaman koyunların. Bu aynı zamanda cerrahi olmayan personeli kapsar. Bu. Örneğin, Coxiella burnetii için enzootic potansiyelini en aza indirmek her zaman eldiven ve maske (N-95 tipi) kullanın olacak.

Cerrahi Usul 2. Genel Bakış

  1. Karın kas hasarı en aza indirmek için linea alba yoluyla memeye hemen kranial alt karın duvarından bir 20 cm orta hat kesi olun.
    1. Rcranially büyük omentum etract ve rahim boynuzları elle palpe edilir. Fetus ve kendi büyüklüğü sayısını fark boynuz ucu rahim gövdesi her boynuz palpe. Birden fazla fetus varsa, elle baş boyutu ve yörüngeleri arasında genişliği değerlendirerek büyük fetus seçin.
    2. Sıkıca kısmen batın rahim içinden seçilen fetusun baş tutun. Metzenbaum makas ile büyük eğrilik üzerinde 10 cm'lik histerotomi gerçekleştirin. Başının üzerine hemen bir el sanki steril tuzlu su ile doldurulmuş bir lateks olmayan steril cerrahi eldiven koyun. Alternatif olarak, nemli fetal kafa tutmak için nemlendirilmiş 4x4s kullanın. Karın duvarına rahim sabitleyin.
      1. Sağ ve sol göğüs uzuvları exteriorize ve xiphoid sürecine rahim kadar dışarı yavaşça cenini çekin.
    3. Standart bir cut-down tekniği kullanılarak polivinil sağ ve sol brakiyal ven içine kateter ve arterleri yerleştirin. Anoth eklemefetusun sternum onun 'ucu fikse Amniyotik boşluğuna er polivinil kateter.
      1. Steril kateterleri kullanınız. Biz standart tesiste gaz sterilizasyonu tavsiye ediyoruz. Daha sonra kan örneklemesi veya basınç izleme sağlamak için bir çift vana bir iğne her kateter ve iğne takın.
    4. Manubrium, kılıç şeklinde bir süreç ve elektrokardiyogram izlemek için omuz (EKG) her noktasına, paslanmaz çelik elektrodlar dikin.
    5. Rahme fetus dönün. Soldan küçük bir kesi yoluyla tüm kateterler ve elektrotlar çıkın.
    6. Üç katmanlı kapatma kullanarak laparotomi insizyon kapatın. Basit sürekli bir şekilde emilebilir sentetik bir ameliyat dikiş ipliği monofilaman USP 2 karın duvarı dikin. Basit sürekli bir şekilde emilebilir sentetik bir ameliyat dikiş ipliğinin saç örgü USP 0 subkutan alan kapatın. Cilt insizyonu kapatmak için cerrahi paslanmaz çelik zımba kullanın.
  2. cerrahi ayrıntılı açıklaması
    1. % 4 klorheksidin glukonat ve 3 dakika boyunca yumuşak bir fırça ile iyice ardından bıçak # 40 Temiz ile her tarafta kanadın kat meme bezinin ve birlikte ventral karın xiphoid süreci tıraş yün çıkarın.
      1. Klorheksidin glukonat% 4 karın merkezinden itibaren ve 3 dakika boyunca santrifüj tarzda ilerleyen bir standart, steril bir kese gerçekleştirin. Dezenfektan sabun kaldırmak için karın steril tuzlu dökün. Cerrahi hazırlık son adım için, Klorheksidin glukonat çözeltisi 2% ve izopropil alkol% 70, üç alternatif pasajlar gerçekleştirin.
    2. Anestezi derinliği insizyon öncesi yeterli olduğundan emin olun. Karın kas hasarı en aza indirmek için linea alba yoluyla memeye sadece kafatası umbilikustan standart bir laparotomi kesi yapmak.
    3. Sol karın duvarı yukarı boyunca karın uzun sünger forseps yerleştirinparacostal bölgede kateter için planlanan çıkış sitesine.
      1. Onu bulmak ve uygun siteyi teyit edebiliriz asistan kadar duvara forseps ipuçları itin. Biraz (1 cm) açın forseps çene ve yardımcısı, 2 cm tam kat bıçak kesisi yapalım.
      2. , Kesiden forseps ipuçları exteriorize tekrar açın ve yavaşça nihayet ventral karın kesiden karın dışına çekilir forseps ile kateterler kavramak. Unutmayın ki, bazı gruplar kateter implantasyonu ve sonra onları exteriorize. Bu intrasurgical fetal EKG izleme mümkün değildir gibi bir sakıncası vardır.
    4. Fetal pozisyon ve numaralarını belirlemek için rahim palpe. Arası işitsel mesafeyi kullanarak büyük fetus belirleyin. Kotiledonlar kaçınarak, başının sırtında üzerinden büyük eğrilik üzerinde rahim duvarına İnsizyon.
      1. Bir am elde etmek plasental zarlar yoluyla künt uçlu kanül takınkanama ücretsiz niotic sıvısı örneği. Makas kullanarak plasental membranlar İnsizyon.
    5. Bu kesiden fetusun beyin yarısını exteriorize. Normotermi korumaya yardımcı olmak için fetus başının üzerinde 37 ° C'de steril tuzlu su ile doldurulmuş, steril olmayan bir lateks cerrahi eldiven yerleştirin.
      1. Rahim Fetal üst vücut çıkarılması sırasında, asistan amniyotik sıvı kaybını önlemek için Babcock doldu tutun var. Ardından, tekrar Babcock forseps kullanarak, amniyon sıvısı ile karın kirlenmesini önlemek için cilde fetal membranlar ve rahim duvarına tutturun.
      2. Enstrümante ve rahim içinde kalan parçaları tutmak ya sırasıyla, (37 ° C) nemli ve sıcak steril bezler kapsamına gereken fetal vücudun sadece bölümlerini Açığa.
    6. Brakiyal arterin maruziyeti kolaylaştırmak ve ikili damar hem göğüs bacaklarda kaçırmaya. Antebrachium ve bakımı hem medial boyunca İnsizyonTamamen brakiyal arter ve ven çevresinde teşrih.
    7. Sağ ve sol brakiyal arter ve standart cut-down tekniği kullanılarak damar sol brakiyal içine polivinil kateterler yerleştirin.
      1. Gemi Free 1 cm'nin üzerinde komşu dokudan kateterize edilecek. Örgülü sentetik emilebilir USP 2-0 sütür ile damarın distal kısmını Arter. Geminin proksimal yönü bir bitişik harfleri Preplace ama çözdü tutun.
        1. Castroviejo makas kullanarak, çapı yaklaşık% 30 enine gemi kesti. Kısmen proksimal sütür çekerek kan akışını durdurun. Vücuda yakın bir yönde sonda yerleştirin.
      2. 8 cm proksimale veya direnç tespit ve sonra hafifçe geri çekin kadar polivinil kateter kadar yerleştirin. Geçici olarak bir damar kelepçe kullanarak kateterin proksimal yönü sabitleyin. Proksimal ve kateterin distal yönü hem etrafında başka dikiş yerleştirin. Bir asistan sürekli aspirating ve kateterin açıklığı sağlamak için kateter yıkama.
      3. Sürekli dikiş deseni ile, USP 2-0 örgülü sentetik emilebilir sütür kullanarak fetal cilt kapatın.
    8. Sağ ve sol omuz, manubrium ve xiphoid süreci, fetal EKG izlenmesini kolaylaştırmak için yalıtılmış paslanmaz çelik elektrot sabitleşmek.
    9. Sternum amniyotik basıncı ve örnekleme kateteri dikin. Bu kateter onun ucunda fenestre edilir.
    10. USP 2-0 örgülü sentetik emilebilir sütür materyali kullanılarak fetusun sırtında tüm kateterler sabitleyin.
    11. Geri rahim içine fetusun değiştirilmesi önce hipotansiyon önlemek ve rahim rahatlama sağlamak için yavaş yavaş 15 dakika boyunca Clenbuterol 30 ug IV yönetmek.
    12. Sürekli desenli USP 4-0 örgülü sentetik emilebilir sütür materyali kullanarak fetal membranlar sütür. Pa içine bir seferde sadece tek bir kateter ya da elektrot birleştirinure sıkı kapanmasını sağlamak. USP 0 örgülü sentetik emilebilir sütür materyali kullanarak rahim kas tabakası kapatmak için Halsted ilkelerine saygı bir çift katmanlı Cushing deseni kullanın. Dikkatle cerrahi knot Bury.
    13. Onlar sol paracostal kesi çıkmak gibi bir purse-string sütür desen kullanarak, tüm kateterler ve EKG kabloları sabitleyin.
    14. USP 2 monofilament sentetik emilebilir sütür materyali kullanarak sürekli bir deseni ile linea alba sabitleyin. USP 2-0 sürekli bir deseni ile sentetik emilebilir sütür materyali örgülü kullanarak deri altı dokuları kapatın. Cerrahi zımba ile cilt tabakasını sabitleyin.
    15. Amniyon boşluğuna amniyotik kateter yoluyla intravenöz tekrar ampisilin 250 mg yönetin. Ilık serum fizyolojik ile kayıp amniyotik sıvı değiştirin.
    16. Kısırlık korumak için bir yer torbaya tüm batın kateterler ve EKG elektrotları yerleştirin. Tüm kateterler güvenli koyunların bir gövde etrafında bir stockinette yerleştirinKoyun gövdesi d elektrotlar.
    17. Genel anestezi durdurun ve laringeal refleksler normale döndü bir kez koyunum ekstübe.
    18. O genel anestezi aşağıdaki istikrarlı bir kez metabolik kafes koyunum dönün. Dişi deney süresince metabolik kafeste bulunacağı. Koyun, standı aşağı yalan ve anne sakinleştirici olmadan olmayan anestezi fetus izlerken libitum reklam yemek gerekir.
    19. Aşağıdaki üç gün boyunca profilaktik ewe (Trimetoprim sulfadoksin 5 mg / kg) ve fetüsün (amniyotik kateter yoluyla intravenöz tekrar ampisilin 250 mg) antibiyotik yönetmek.
    20. Koyun ve fetüs hem gaz analizleri kanını kullanarak metabolik durumunu değerlendirir.
    21. Olası heparinli serum fizyolojik asgari hacmi ile tüm kateterler yıkayın. Dikkat - fetusa izin heparin ve sıvıların günlük dozu aşmayınız. Sıvı fetus aşırı mümkündür. Gömme yavaş yavaş kezantibiyotik profilaksisi sonra satır başına günde ~ 5 ml NaCl.
  3. Veri kayıt ve analiz
    1. Ameliyat sırasında, isteğe bağlı olarak maternal ve fetal EKG ve kalp hızı yanısıra anne arteriyel kan basıncı ve hava yolu basıncı (Paw) sürekli olarak (Şekil 1) kaydeder. EKG dışındaki tüm anne veri elde etmek Hayat Penceresi Monitor kullanın. Fetal ve maternal EKG sinyalleri ile birlikte analog-dijital dönüştürücü bu verileri Yem; 1901 öncesi amplifikatör ilk maternal ve fetal EKG geçmektedir. Tutanak üreticinin yazılım tüm verileri görüntülemek ve.
    2. (Hemen ilk arteriyel kateter taktıktan sonra) ve rahim kapattıktan sonra fetal cerrahi başlayacak arteriyel kan gazı analizi, laktat, glukoz için koyun ve fetus aynı anda 1 ml arteriyel örneği alın ve (plazmada) aşırı belirlenmesini temel .
    3. Ameliyat sonrası iyileşme sırasında, IL-6 ve TNF-α Inflamm ölçmek için 3 ml fetal kan örneği almakatory profilleri. Santrifüj 4 ° C 'de, plazma (4 dakika, 4000 x g), süzün ve daha sonra ELISA testleri için -80 ° C' de plazma saklayın.
      Not: bildirilen temsili sonuçlar amacıyla, altı gün sonra, hayvanlar 20 cerrahi mL sodyum pentobarbital intravenöz enjeksiyonu ile kurban edilmiştir. Fetal büyüme beden, beyin, karaciğer ve anne ağırlıkları ile değerlendirildi. Deney süresinin uzunluğu besbelli belirli bir araştırma sorusu için seçilen tasarıma bağlı olarak değişir ve ~ 6 hafta ulaşabilirsiniz.
  4. Sitokin analizleri (opsiyonel adım)
    1. Bir koyun özgü sandviç ELISA kullanılarak plazma sitokin konsantrasyonları (IL-6, TNF-α) belirler. Bir konsantrasyonda ön-kaplama fare anti-koyun monoklonal antikorları (yakalama antikoru, IL-6) ya da fare anti-sığır monoklonal antikor (TNF-α) O / N 4 ° C'de ELISA levhası üzerine 4 ug / ml, 3 kez sonra Yıkama tamponu (PBS içerisinde% 0.05 Tween 20, PBST) ile yıkayın.
    2. PBST içinde% 1 BSA ile 1 saat boyunca levhalar bloke eder. Yıkama tamponu ile 3 kez plakaları yıkayın.
    3. Bir seri seyreltileri, standart 7 31,25 pg / ml standart 1 2000 ng / ml arasında değişir hazırlamak ELISA standart olarak rekombinant koyun proteinleri (IL-6, TNF-α) kullanın.
    4. Yük 50 seri seyreltilmiş Protein standartlarının ve oyuk başına örneklerin ul, oda sıcaklığında 2 saat süreyle inkübe plakaları 3 kez yıkayın. Nüsha olarak tüm standartları ve örnekleri çalıştırın.
    5. 1 bir seyreltmede tavşan anti-koyun poliklonal antikorlarının 50 ul (tespit antikoru, IL-6) ya da tavşan anti-sığır poliklonal antikoru (TNF-α) uygulayın: kuyularda 250 ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edilir. Yıkama tamponu ile 5 kez yıkayın plakaları.
    6. 30 dakika boyunca IgG-HRP ile konjüge edilmiş keçi anti-tavşan (5000 sulandırma 1) 50 ul ekle.
    7. Oyuk başına TMB substrat çözeltisi 50 ul kuluçkalayın.
    8. 2 N sülfürik asit 25 ul istenilen zamanda Renk geliştirme reaksiyonunu durdurun.
    9. Pl OkuBir 570 nm dalga boyu düzeltmesi ile 450 nm'de ELISA plaka okuyucusu üzerinde Ateş.
      Not: deneylerimizde, IL-6, ELISA hassasiyeti 16 pg / ml arasında, ve duyarlılığı TNF-a ELISA, sırasıyla 13.9 pg / ml idi. Tüm deneyler için, varyans içi deneyi ve inter-analiz katsayıları sırasıyla <5 ve% <% 10 idi.
  5. İstatistiksel analizler
    Not: Tam istatistiksel yöntemler araştırma sorusu bağlıdır. Burada Tablo 2'de kan gazları herhangi bir anlamlı farklılık test etmek için kullanılan yöntem sunulmaktadır.
    1. Uygun şekilde çoklu karşılaştırmalar için ayarlı parametrik veya non-parametrik testlerden ardından Kolmogorov-Smirnov testi kullanılarak normal veri dağılımı, test edin.
    2. Kullanım ilgili pO 2 ve O 2 Sat değerlerini kendiliğinden hipoksik olduğu kohort fetusların belirlemek ve tespit etmek küme analizi K-ortalamaları (pO 2 <20 mmHg düşünün veya beyaz peynir olarak O 2 Sat <% 55l hipoksi). 44-48
    3. Analizler için SPSS gibi istatistik yazılımı kullanın.
    4. Anlamlı kabul p <0.05 istatistiksel farklılıklar ortalama ± SD olarak mevcut veriler.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

38 gebe zaman tarihli koyunların gebelik 128 ± 2 günde Enstrümante edildi (DGA ~ 0.88 gebelik, terim 145 dGA) arteriyel, venöz ve amniyotik kateter ve elektrokardiyogram (EKG), steril genel anestezi altında tekniği (ewe hem de fetus elektrotlar ile ). Ikiz gebelik durumunda fetus büyük palpe ve dönemlerarası çapı tahmin dayalı seçildi; alternatif Araçlı edilecek fetus herhangi bir potansiyel önyargı önlemek için rastgele seçilmiş olabilir veya her iki fetusun instrumented olabilir. Prosedürün toplam süresi 124 ± 27 daki...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Kronik aletli olmayan anestezi fetal koyun: anestezi ve cerrahi girişimler, fetal fizyolojisi ve patofizyolojisi çalışmak için bir hayvan modeli kurulması için gerekli olduğunu sunulmuştur.

Protokolü içinde dört kritik adımlar vurgulanmalıdır. Birincisi, anne kanadını yoluyla kateterler ve elektrotlar geçen: Bu herhangi bir iç organ yaralanmaları önlemek için bir defada yapılır önemlidir. İkincisi, fetüsü exteriorizing önce uterotomy işletim sitesini güvence: Bunu önlemek veya amniyon sıvısı...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir açıklama yapılmadı.

Teşekkürler

yazarlar, Molly Towell Perinatal Araştırma Vakfı, Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri (CIHR) ve Fonds de Recherche du Québec – Santé (FRQS) (MGF'ye) ve CIHR-Quebec Perinatal Araştırma Eğitim Ağı'ndan (QTNPR) (LDD'ye) sağlanan fon desteğini minnetle kabul eder.

Yazarlar teknik yardım için Esther Simard, Marco Bosa, Carl Bernard ve Carmen Movila'ya teşekkür etmek istiyor.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
ACE Işık kaynağıSchott-FostecA20500
Diseksiyon makasıGüzel Bilim Araçları14060 - 11
Açılı diseksiyon makasıGüzel Bilim Aletleri15006 - 09
Neşter sapıGüzel Bilim Aletleri10003 - 12alternatif diseksiyon aleti
Kavisli neşter bıçakları #12Güzel Bilim Araçları10012 - 00alternatif diseksiyon aleti
Kemik makasıGüzel Bilim Aletleri16044 - 10
S & T sütür bağlama forsepsGüzel Bilim Aletleri00272 - 13
Dumont SS forseps - açılıGüzel Bilim Aletleri11203 - 25 
Örgülü ipek sütür boyutu 6-0Teleflex Medical07 - 30  - 10
Tıbbi Banttranspore3M
Ketamin hidroklorür 100 mg / mlHospiraNDC 0409 - 2051 - 05Final Does 80 mg / kg
Tranqui Ved Enjeksiyonu (ksilazin 100 mg / ml)VecdoNDC 50989 - 234 - 11Final Does 10 mg / kg
Reaktif turuncu 14Sigma - AldrichR - 8254
Ringers Çözelti Bileşenleri Çözelti%95 O2 ve %5 Co2 ile gaz dengelenmiştir, nihai pH 7.4
Sodyum klorürSigma - AldrichS7653Nihai Konsantrasyon: 118 mM
Potasyum klorürFisher ScientificP217 - 3Nihai Konsantrasyon: 4.7 mM
Kalsiyum klorür dihidratFisher ScientificC79 - 500Nihai Konsantrasyon: 2,5 mM
Potasyum fosfat monobazikFisher ScientificP -285Nihai Konsantrasyon: 1,2 mM
Magnezyum sülfatJT BakerJan-00Nihai Konsantrasyon: 0,57 mM
4- (2-Hidroksietil) piperazin-1-etansülfonik asit (HEPES)Fisher ScientificBP 310 - 500Son Konsantrasyon: 5,95 g/L
GlikozSigma - AldrichG8270Nihai Konsantrasyon: 5.5 mM
LifeWindowDigicare Biyomedikal Teknoloji
CED biyoamplifikatör ve ADC birimleriCambridge Electronic Design Limited,
Unit 4, Science Park,
Milton Road,
Cambridge CB4 0FE
İNGİLTERE.		Biyoamp: 1902; ADC: mikro1401; Veri toplama yazılımı: Spike 2, V7.13
Neurolog analog sinyal biyoamplifikatörüDigitimer Ltd
37 Hydeway
Welwyn Garden City
Hertfordshire, AL7 3BE, İngiltere		NL108A
ABL800FlexRadiometer Kanada; 200 Aberdeen Dr, Londra, N5V 4N2
ON Eppendorf 5804REppendorf Kanada; 2810 Arjantin Yolu, #2
Mississauga, Ontario, L5N 8L2
Arrow Juguler Kateterizasyon SetiArrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 ABD
Atravet10 mg / ml
Diazepam5 mg / ml
KetaminKetalar100 mg / ml
Propofol10 mg / ml
SurgiVeTEndotrakeal Tüpler; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, ABD
RAPI-FIT Adaptörlü Cook Havayolu Değişim KateteriCook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 ABD
Dispomed VentilatörDispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6
BD Insyte-WBecton Dickinson, İnfüzyon Terapi Sistemleri A.Ş., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 ABD22 ila 20 g; 1 inç [0,9 x 25 mm] ila 1,16 inç [1,1 x 30 mm]
Edwards Lifesciences Ref: PX272 TruWave Tek Kullanımlık Basınçlı
LifeWindow LW6000Digicare Biyomedikal Teknoloji 107 Ticaret Yolu, Boynton Plajı, FL 33426-9365 ABD
Gaymar
Babcock
Polivinil kateterlerSCI (Bilimsel Ürünler A.Ş.)2 metre
2-0 Vicryl
Castroviejo makas
elektrokardiyogram (EKG)LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, Berlin, Almanyatek kılıfta dört bakır elektrot, 2 metre
2-O Vicryl
3-0 Vicryl
PDS II USP
Trimetoprim sülfadoksin
Ampisilin
MuslukArgon Medikal, Cat  041220001AErkek luer kilitli Çift 4 Musluk
İğnelerTyco Healthcare 8881202389Monoject alüminyum göbek künt iğneler, 22Gx, 0.7mmx 38.1mm: fetal arteriyel ve venöz kateterler için
İğnelerTyco Sağlık 8881202322Monoject alüminyum göbek künt iğneler, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: amniyotik kateterler için
ile basınç izleme kiti

Kaynaklar

  1. Barry, J. S., Anthony, R. V. The pregnant sheep as a model for human pregnancy. Theriogenology. 69, 55-67 (2008).
  2. Morrison, J. L. Sheep models of intrauterine growth restriction: fetal adaptations and consequences. Clin Exp Pharmacol Physiol. 35, 730-743 (2008).
  3. Rees, S., Inder, T. Fetal and neonatal origins of altered brain development. Early Hum Dev. 81, 753-761 (2005).
  4. Rees, S., Harding, R., Walker, D. The biological basis of injury and neuroprotection in the fetal and neonatal brain. Int J Dev Neurosci. 29, 551-563 (2011).
  5. Moisiadis, V. G., Matthews, S. G. Glucocorticoids and fetal programming part 1: Outcomes. Nat rev Endocrinol. 10, 391-402 (2014).
  6. Wang, X., Rousset, C. I., Hagberg, H., Mallard, C. Lipopolysaccharide-induced inflammation and perinatal brain injury. Semin Fetal Neonatal Med. 11, 343-353 (2006).
  7. Gotsch, F., et al. The fetal inflammatory response syndrome. Clin Exp Obstet Gynecol. 50, 652-683 (2007).
  8. Svedin, P., Kjellmer, I., Welin, A. K., Blad, S., Mallard, C. Maturational effects of lipopolysaccharide on white-matter injury in fetal sheep. J child neurol. 20, 960-964 (2005).
  9. Nitsos, I., et al. Chronic exposure to intra-amniotic lipopolysaccharide affects the ovine fetal brain. J Soc Gynecol Investig. 13, 239-247 (2006).
  10. Yan, E., Castillo-Melendez, M., Nicholls, T., Hirst, J., Walker, D. Cerebrovascular responses in the fetal sheep brain to low-dose endotoxin. Pedia res. 55, 855-863 (2004).
  11. Dean, J. M., et al. Delayed cortical impairment following lipopolysaccharide exposure in preterm fetal sheep. Ann Neurol. 70, 846-856 (2011).
  12. Dobbing, J., Sands, J. Comparative aspects of the brain growth spurt. Early Hum Dev. 3 (1), 79-83 (1979).
  13. Liggins, G. C. Premature parturition after infusion of corticotrophin or cortisol into foetal lambs. J Endocrinol. 42, 323-329 (1968).
  14. Liggins, G. C. Premature delivery of foetal lambs infused with glucocorticoids. J Endocrinol. 45, 515-523 (1969).
  15. Liggins, G. C., Fairclough, R. J., Grieves, S. A., Kendall, J. Z., Knox, B. S. The mechanism of initiation of parturition in the ewe. Recent Prog Horm Res. 29, 111-159 (1973).
  16. Morrison, J. L. Sheep models of intrauterine growth restriction: fetal adaptations and consequences. Clin Exp Pharmacol Physiol. 35, 730-743 (2008).
  17. Robinson, J. S., Hart, I. C., Kingston, E. J., Jones, C. T., Thorburn, G. D. Studies on the growth of the fetal sheep. The effects of reduction of placental size on hormone concentration in fetal plasma. J Dev Physiol. 2, 239-248 (1980).
  18. Carmel, E., et al. Fetal brain MRI - experiences in the ovine model of cerebral inflammatory response. Repro sci. 19 (3), 347A-348A (2012).
  19. Samson, N., Dumont, S., Specq, M. L., Praud, J. P. Radio telemetry devices to monitor breathing in non-sedated animals. Respir Physiol Neurobiol. 179, 111-118 (2011).
  20. Thakor, A. S., Giussani, D. A. Effects of acute acidemia on the fetal cardiovascular defense to acute hypoxemia. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 296, R90-R99 (2009).
  21. Green, L. R., Kawagoe, Y., Homan, J., White, S. E., Richardson, B. S. Adaptation of cardiovascular responses to repetitive umbilical cord occlusion in the late gestation ovine fetus. J Physiol. 535, 879-888 (2001).
  22. Unno, N., et al. Changes in adrenocorticotropin and cortisol responsiveness after repeated partial umbilical cord occlusions in the late gestation ovine fetus. Endocrinology. 138, 259-263 (1997).
  23. Muller, T., et al. Developmental changes in cerebral autoregulatory capacity in the fetal sheep parietal cortex. J Physiol. 539, 957-967 (2002).
  24. Keen, A. E., Frasch, M. G., Sheehan, M. A., Matushewski, B., Richardson, B. S. Maturational changes and effects of chronic hypoxemia on electrocortical activity in the ovine fetus. Brain Res. 1402, 38-45 (2011).
  25. Ross, M. G., et al. Correlation of arterial fetal base deficit and lactate changes with severity of variable heart rate decelerations in the near-term ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 208, e281-e286 (2013).
  26. Gunn, A. J., Gunn, T. R., de Haan, H. H., Williams, C. E., Gluckman, P. D. Dramatic neuronal rescue with prolonged selective head cooling after ischemia in fetal lambs. J Clin Invest. 99, 248-256 (1997).
  27. Xu, A., Piorkowska, K., Matushewski, B., Hammond, R., Richardson, B. S. Adaptive Brain Shut-Down Counteracts Neuroinflammation in the Near-Term Ovine Fetus. 60th Meeting of the Society for Gynecologic Investigation, 20 (3), Reproductive Sci. 222A(2013).
  28. Derks, J. B., et al. A comparative study of cardiovascular, endocrine and behavioural effects of betamethasone and dexamethasone administration to fetal sheep. J Physiol Lond. 499, 217-226 (1997).
  29. Lohle, M., et al. Betamethasone effects on fetal sheep cerebral blood flow are not dependent on maturation of cerebrovascular system and pituitary-adrenal axis. J Physiol. 564, 575-588 (2005).
  30. Morrison, J. L., et al. Maternal fluoxetine infusion does not alter fetal endocrine and biophysical circadian rhythms in pregnant sheep. J Soc Gynecol Investig. 12, 356-364 (2005).
  31. Allison, B. J., et al. Ventilation of the very immature lung in utero induces injury and BPD-like changes in lung structure in fetal sheep. Pediatr Res. 64, 387-392 (2008).
  32. Rozance, P. J., et al. Intrauterine growth restriction decreases pulmonary alveolar and vessel growth and causes pulmonary artery endothelial cell dysfunction in vitro in fetal sheep. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 301, L860-L871 (2011).
  33. Fowden, A. L., Giussani, D. A., Forhead, A. J. Endocrine and metabolic programming during intrauterine development. Early hum dev. 81, 723-734 (2005).
  34. Nathanielsz, P. W., Hanson, M. A. The fetal dilemma: spare the brain and spoil the liver. J Physiol. 548, 333(2003).
  35. Manikkam, M., et al. Fetal programming: prenatal testosterone excess leads to fetal growth retardation and postnatal catch-up growth in sheep. Endocrinology. 145, 790-798 (2004).
  36. Savabieasfahani, M., et al. Fetal programming: testosterone exposure of the female sheep during midgestation disrupts the dynamics of its adult gonadotropin secretion during the periovulatory period. Biol Reprod. 72, 221-229 (2005).
  37. Bergen, N. H., et al. Fetal programming alters reactive oxygen species production in sheep cardiac mitochondria. Clin Sci (Lond). 116, 659-668 (2009).
  38. Cox, L. A., et al. A genome resource to address mechanisms of developmental programming: determination of the fetal sheep heart transcriptome. J Physiol. 590, 2873-2884 (2012).
  39. Mahoney, M. M., Padmanabhan, V. Developmental programming: impact of fetal exposure to endocrine-disrupting chemicals on gonadotropin-releasing hormone and estrogen receptor mRNA in sheep hypothalamus. Toxicol Appl Pharmacol. 247, 98-104 (2010).
  40. Blad, S., Welin, A. K., Kjellmer, I., Rosen, K. G., Mallard, C. ECG and Heart Rate Variability Changes in Preterm and Near-Term Fetal Lamb Following LPS Exposure. Reprod Sci. 15, 572-583 (2008).
  41. Frasch, M. G., et al. Heart rate variability analysis allows early asphyxia detection in ovine fetus. Reprod Sci. 16, 509-517 (2009).
  42. Frasch, M. G., Keen, A. E., Gagnon, R., Ross, M. G., Richardson, B. S. Monitoring fetal electrocortical activity during labour for predicting worsening acidemia: a prospective study in the ovine fetus near term. PLoS One. 6, e22100(2011).
  43. Durosier, L. D., et al. Sampling rate of heart rate variability impacts the ability to detect acidemia in ovine fetuses near-term. Front pedia. 2, 38(2014).
  44. Danielson, L., McMillen, I. C., Dyer, J. L., Morrison, J. L. Restriction of placental growth results in greater hypotensive response to alpha-adrenergic blockade in fetal sheep during late gestation. J Physiol. 563, 611-620 (2005).
  45. Edwards, L. J., Simonetta, G., Owens, J. A., Robinson, J. S., McMillen, I. C. Restriction of placental and fetal growth in sheep alters fetal blood pressure responses to angiotensin II and captopril. J Physiol. 515 (Pt 3), 897-904 (1999).
  46. Xu, A., et al. Adaptive brain shut-down counteracts neuroinflammation in the near-term ovine fetus. Front neurol. 5, 110(2014).
  47. Xu, A., et al. The Ovine Fetal and Placental Inflammatory Response to Umbilical Cord Occlusions With Worsening Acidosis. Reprod Sci. 22 (11), (2015).
  48. Wang, X., Durosier, L. D., Ross, M. G., Richardson, B. S., Frasch, M. G. Online detection of fetal acidemia during labour by testing synchronization of EEG and heart rate: a prospective study in fetal sheep. PLoS One. 9, e108119(2014).
  49. Reid, A., Malone, J. Q fever in Ireland A seroprevalence study of exposure to Coxiella burnettii among Department of Agriculture workers. Occ med. 54, 544-547 (2004).
  50. Roest, H. I., Bossers, A., van Zijderveld, F. G., Rebel, J. M. Clinical microbiology of Coxiella burnetii and relevant aspects for the diagnosis and control of the zoonotic disease Q fever. Vet quart. 33, 148-160 (2013).
  51. Neill, T. J., Sargeant, J. M., Poljak, Z. The effectiveness of Coxiella burnetii vaccines in occupationally exposed populations: a systematic review and meta-analysis. Zoonoses and public health. 61, 81-96 (2014).
  52. Roest, H. I., Bossers, A., Rebel, J. M. Q fever diagnosis and control in domestic ruminants. Dev biol. 135, 183-189 (2013).
  53. Frasch, M. G., et al. Fetal body weight and the development of the control of the cardiovascular system in fetal sheep. J physilo. 579, 893-907 (2007).
  54. Rurak, D., Bessette, N. W. Changes in fetal lamb arterial blood gas and acid-base status with advancing gestation. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 304, R908-R916 (2013).
  55. Frasch, M. G., et al. Fetal body weight and the development of the control of the cardiovascular system in fetal sheep. J physiol. 579, 893-907 (2007).
  56. Frasch, M. G., et al. Measures of acidosis with repetitive umbilical cord occlusions leading to fetal asphyxia in the near-term ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 200, 200.e1-207.e1 (2009).
  57. The ESHRE Capri Workshop Group. Multiple gestation pregnancy. Hum reprod. 15, 1856-1864 (2000).
  58. Frasch, M. G. Re The perinatal development of arterial pressure in sheep: effects of low birth weight due to twinning. Reproductive sciences (Thousand Oaks, Calif.). 15, 863-865 (2008).
  59. Hancock, S. N., Oliver, M. H., McLean, C., Jaquiery, A. L., Bloomfield, F. H. Size at birth and adult fat mass in twin sheep are determined in early gestation. J Physiol. 590, 1273-1285 (2012).
  60. Wassink, G., Bennet, L., Davidson, J. O., Westgate, J. A., Gunn, A. J. Pre-existing hypoxia is associated with greater EEG suppression and early onset of evolving seizure activity during brief repeated asphyxia in near-term fetal sheep. PLoS One. 8, e73895(2013).
  61. Mathai, S., et al. Acute on chronic exposure to endotoxin in preterm fetal sheep. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 304, R189-R197 (2013).
  62. Heuij, L. G., et al. Synergistic white matter protection with acute-on-chronic endotoxin and subsequent asphyxia in preterm fetal sheep. J neuroinflam. 11, 89(2014).
  63. Gagnon, R., Challis, J., Johnston, L., Fraher, L. Fetal endocrine responses to chronic placental embolization in the late-gestation ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 170, 929-938 (1994).
  64. Miller, S. L., Supramaniam, V. G., Jenkin, G., Walker, D. W., Wallace, E. M. Cardiovascular responses to maternal betamethasone administration in the intrauterine growth-restricted ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 201, 613.e1-613.e8 (2009).
  65. Regnault, T. R., et al. The relationship between transplacental O2 diffusion and placental expression of PlGF, VEGF and their receptors in a placental insufficiency model of fetal growth restriction. J Physiol. 550, 641-656 (2003).
  66. Wallace, J. M., Aitken, R. P., Cheyne, M. A. Nutrient partitioning and fetal growth in rapidly growing adolescent ewes. J reprod and fertil. 107, 183-190 (1996).
  67. Rakers, F., et al. Effects of early- and late-gestational maternal stress and synthetic glucocorticoid on development of the fetal hypothalamus-pituitary-adrenal axis in sheep. Stress. 16, 122-129 (2013).
  68. Jiang, Y., et al. The sheep genome illuminates biology of the rumen and lipid metabolism. Science. 344, 1168-1173 (2014).
  69. Begum, G., et al. Epigenetic changes in fetal hypothalamic energy regulating pathways are associated with maternal undernutrition and twinning. FASEB J. 26, 1694-1703 (2012).
  70. Byrne, K., et al. Genomic architecture of histone 3 lysine 27 trimethylation during late ovine skeletal muscle development. Anim Genet. 45, 427-438 (2014).
  71. Lie, S., et al. Impact of embryo number and maternal undernutrition around the time of conception on insulin signaling and gluconeogenic factors and microRNAs in the liver of fetal sheep. Am J physiol Endocrinol. 306, E1013-E1024 (2014).
  72. Nicholas, L. M., et al. Differential effects of maternal obesity and weight loss in the periconceptional period on the epigenetic regulation of hepatic insulin-signaling pathways in the offspring. FASEB J. 27, 3786-3796 (2013).
  73. Wang, K. C., et al. Low birth weight activates the renin-angiotensin system, but limits cardiac angiogenesis in early postnatal life. Physiol rep. 3, (2015).
  74. Zhang, S., et al. Periconceptional undernutrition in normal and overweight ewes leads to increased adrenal growth and epigenetic changes in adrenal IGF2/H19 gene in offspring. FASEB J. 24, 2772-2782 (2010).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Fetal Koyun EnstrümantasyonuVasküler Kateter YerleştirmeElektrokardiyografik Kablo İmplantasyonuAmniyotik Sıvı ÖrneklemesiMaternal Fetal İzlemeCerrahi Uterin KapatmaPostoperatif İyileşme DeğerlendirmesiFizyolojik Pertürbasyon YanıtıKan Gazı Analizi
Çok değişkenli Kronik Non-anestezi Kayıtlar için Yakın dönem Fetal Koyun enstrümantasyon
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.