Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Dik Görüntüleme

7.7K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52636

⸱

13 Mart 2015

 , 
1Department of Biological Sciences, University of Maryland Baltimore County

Bu makalede

Özet

Bu protokolde açıklanan dik görüntüleme yöntemi, gelişmekte olan bir Drosophila melanogaster yumurtasının kutuplarının ayrıntılı olarak görüntülenmesine olanak sağlar. Bu uçtan bakış, foliküler epitelde çoklu hücre tiplerinin düzenlemelerine ve morfolojilerine yeni bir bakış açısı sağlar.

Özet

Drosophila melanogaster oogenezi, yumurtalığın mimaride nispeten basit olması, iyi karakterize edilmesi ve genetik analize uygun olması nedeniyle çeşitli gelişimsel süreçleri incelemek için ideal bir bağlam sağlar. Her yumurta odası, somatik folikül hücrelerinin tek bir epitel tabakası ile çevrili germ hattı hücrelerinden oluşur. Folikül hücrelerinin alt kümeleri, birkaç farklı hücre tipi haline gelmek için belirli aşamalarda farklılaşmaya uğrar. Standart teknikler öncelikle yumurta odalarının yanal bir görünümüne ve dolayısıyla folikül hücre organizasyonu ve kimliğinin sınırlı bir görünümüne izin verir. Dik görüntüleme protokolü, standart bir konfokal mikroskop ile yumurta odalarının yeni, dikey bir görüntüsünü sağlayan bir montaj tekniğini tanımlar. Numuneler önce bir cam mikroskop lamı üzerinde yanal (yatay) konumda iki gliserin jöle tabakası arasına monte edilir. Kaplanmış yumurta odalarına sahip jöle daha sonra bloklar halinde kesilir, bir lamel üzerine aktarılır ve yumurta odalarını dik konuma getirmek için çevrilir. Monte edilmiş yumurta odaları, dik veya ters konfokal mikroskopta görüntülenebilir. Bu teknik, folikül hücresi spesifikasyonu, organizasyonu, moleküler belirteçler ve yumurta gelişiminin yeni ayrıntılarla ve yeni bir bakış açısıyla incelenmesini sağlar.

Giriş

Drosophila melanogaster Çalışma olayların geniş bir genetik yönetmelik seyircilerden büyük anlayışlar sağladı. Oogenez doku desen, hücre polarite değişiklikleri, hücre döngüsü anahtarlama ve translasyonel yönetmelik 1,2,3,4 dahil olmak üzere birçok farklı gelişim süreçleri, araştırmak için bir uysal bir yol sağlar, çünkü özellikle, yumurta gelişimi üzerine kapsamlı bir araştırma olmuştur. Oogenez sırasında önemli bir morfojenik olay (5 gözden) sınır hücreleri denilen hücreler bir dizi özellikleri, motilite edinimi ve göç. Hücre göçü beri hayvan morfojenezinin önemli bir özelliğidir ve bu sürecin genetik düzenleme iyi korunduğu için, sinekler belirlenen mekanizmaları diğer bağlamlarda önemli olması muhtemeldir. Böylece, biz sınır hücre migrasyonu moleküler kontrolü araştırıyor. Bizim çalışmalar için, biz yumurta geliştirme ön direkleri gözlemlemek için yeni bir yöntem geliştirdik,Sınır hücreleri ortaya yerlerde, detaylı olarak nasıl geliştiğini incelemek için.

Yumurtalık içinde, çeşitli gelişim aşamalarında yumurta odaları ince kılıf (Şekil 1A) 'de muhafaza edilir ovarioles adı zincirleri boyunca mevcuttur. Her yumurta bir yumurta odası oluşturmak için devam edecektir. Oogenesiz sırasında, çok sayıda, farklı hücre tipleri, bir koordine bir şekilde geliştirilmesi gerekmektedir. D. melanogaster yumurta bölmesi tek katmanlı foliküler epitel 6 ile çevrili bir oosit, aşağıdakileri içeren 16 germ hat hücrelerine oluşur. Kutup hücreleri denilen özelleşmiş hücrelerin az sayıda, epitel anterior ve posterior kutuplarda ortaya çıkar. 6-8 sınır hücreleri kutup hücreleri 5,7 ile uyarılan yumurta odasının ön epiteli, köken. Orta-oogenez (evre 9), sınır hücreleri komşularından ayırmak ve yumurta odasının 5,7 olan posterior oosit ulaşmak için hemşire hücreleri arasındaki göç. Bu hareket yerine getirmesi gerekirSınır hücreleri bu kolektif hücre göçü bir tür yapma, olmayan iki hareketli kutup hücreleri çevreleyen bir kümede kalırken. Sınır hücre kümesinin Başarılı göç döllenme için gerekli olan yumurta kabuğu micropyle, düzgün gelişimini sağlar.

ön kutup hücreleri sinyal iletim dizinini aktive ederek hücre sınır kaderi talimat. Polar hücreler oosit gelişimi 8,9 aşamasında 8 sırasında folikül hücreleri komşu, bir transmembran reseptörü, Kubbesiz (DOME) bağlanan bir sitokin, eşleşmemiş (UPD), salgılarlar. UPD bağlanması Janus tirozin kinaz (JAK) transkripsiyon (STAT) 8,10,11 arasında sinyal ileticisi ve Activator fosforile olur. STAT sonra transkripsiyonu aktive etmek çekirdeğine geçer. Yavaş Sınır Hücreler (SLBO) STAT doğrudan bir transkripsiyonel hedef ve sınır hücre göçü 12 için gerekli olan bir transkripsiyon faktörüdür. Yumurta odaları Yanal manzarası t gösterirşapka STAT etkinliği ön epiteli 8,11,13 boyunca bir degrade düzenlenmiştir. Kutup hücrelere yakın folikül hücreler bu nedenle sınır hücreleri haline ve komşu germ-line doku istila, aktif STAT en yüksek seviyeleri var.

Sınır hücreleri içinde belirtilen ve epitel ayırmak nasıl anlamak için, biz doku nasıl düzenlendiğini gözlemlemek gerekir. Biz bir ön-perspektif yumurta odaları görmek, biz kutup hücreleri çevreleyen folikül hücreleri STAT aktivitesinin radyal simetri beklenebilir. Bir son bakış da daha doğru önce ve farklı odak düzlemlerinde hücreleri karşılaştırma daha Ayırma sırasında zar proteinleri ve hücre-hücre arayüzleri farklılıklar gösterir. Yumurta odaları dikdörtgen ve sap hücreleri birbirine bağlı olduğundan, onlar zor ön mimarisi gözlemlemek için yapım, yanal slaytlar üzerine yerleşmek. Böylece, yumurta odasının kutuplarda hücreler hakkında çok bilgi vardırLateral manzaralı olayla edilmiştir. Bazı bilgiler Photobleaching optik bölümlerde, ışık saçılması, algoritmik 3-D rekonstrüksiyon ve Z-ekseninde çözünürlük yoksul limitler aracılığıyla elde edilebilmesine rağmen süper çözünürlüklü mikroskopi 14 gibi pahalı tekniklerin yokluğunda bu bilgilerin daha az detaylı ve güvenilir hale . Bölüm-tabanlı görüntüleme diğer şekillerde (örneğin, elektron mikroskobu veya mikrotom kesit) eserler için olasılığını artırarak, dehidrasyon dahil dokuların, geniş manipülasyon gerektirir. Böylece, biz görüntü D. yeni bir yöntem geliştirdi dik iken melanogaster yumurta odaları. Bu yöntem zaten (inceleme altında Temsilcisi sonuçları ve Manning ve arkadaşları, bakınız) hareketli hücreler kaderde nasıl durulaştırmada yararlı kanıtlanmış ve daha geniş değerli oogenezisin diğer yönleri çalışmalarda olması muhtemeldir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Ovarioles 1. Diseksiyon

  1. Ilave aktif kuru maya ile taze sinek gıda flakon yaklaşık onbeş 2-4 gün eski erkek sineklerin ve birkaç erkek aktarın. Şişelerde için fiş olarak pamuk kullanın, ve yüksek nem tutmak için pamuk su birkaç damla ekleyin.
  2. 14-16 saat için 25 ° C inkübatör yerleştirin flakon aşaması 8-10 yumurta odaları sayısını en üst düzeye çıkarmak için.
    Not: Kuluçka süresi sıcaklığa ve istenilen aşamasına bağlı olarak değişmektedir.
  3. Bir sonraki gün için gerektiği gibi diseksiyon medya hazırlayın, 0.1M KPO 4 ve NP40 çözümleri (Malzeme).
  4. CO 2 kullanarak sinek anestezisi ve bir diseksiyon mikroskop altında yerleştirin. Pipetleyin cam depresyon slayt her boşluğuna diseksiyon medya birkaç damla.
  5. Bir kadın sinek aşağı kanatları ile masa üstü ve yönlendirmek için yaklaşık 30 ° açıyla her el forseps tutun. Senin baskın olmayan el ile, a onu kavrayarak, forseps kullanarak kadın pick upToraks yakın karın, bir nterior ve depresyon slayt (Şekil 1A içerlek) diseksiyon ortama onu daldırın.
  6. Forseps diğer çift, karın ventral posterior Exoskeleton kavramak ve delip. Posterior sonunda yumurtalıkları tut, sonra karın çekip çıkarın ve depresyon slayt diğer tarafında taze ortama yerleştirin. (Şekil 1A ek). Gut ayrı çekerek kaçının. Karkas atın.
  7. Tüm yumurtalıkların disseke kadar diğer kadın sinekler tekrarlayın. Erkek atın.
  8. Forseps bir çift, (büyük yumurta odaları yakınında) arka ucunda bir yumurtalık tutun ve diğer elinizle en ön yumurta odaları (germarium) birini çimdik forseps bir çift kullanın. (Şekil 1A).
  9. Yavaş ve istikrarlı, yumurtalık kılıfın dışında bir ovaryol zinciri çekin. İstenen tüm yumurta odaları r kadar tek tek ovarioles teşrih devamemoved.
  10. Tekrar tüm disseke yumurtalıklar için 1,7-1,8 adımları.
  11. Tamamlandığında, plastik transfer pipet kullanarak 0.6ml tüp ovarioles aktarın.
  12. Ovarioles, tüpün dibine çöker sonra sabitleme ve boyama adımlara devam edelim.

Ovarioles 2. Immunofluorescent (IF) Boyama

  1. Dikkatle bir pipet ile ovarioles gelen diseksiyon ortamı çıkarın. Herhangi bir ovarioles veya yumurta odaları kaldırmak için emin olun. Ovarioles ve diseksiyon medya yaklaşık 50 ul bırakın.
  2. Bir tüp içinde 0.1 M KPO 4 Tampon 150 ul% 16 paraformaldehit 50 ul ekle ve bunları çözmek için yumurta odalarına solüsyonunu ilave edin. 10 dakika süre ile sallanan kuluçkalayın. DİKKAT: paraformaldehit toksiktir.
  3. Fiksatif çıkarın ve 0.5 ml NP40 yıkama tamponu ile iki kez yıkayın.
  4. 15 dakika oda sıcaklığında her biri için iki kez yıkanır.
  5. Sonraki adımlar için standart IF protokol 15 bakın.
    1. Kısaca, tespit sonrasında, eklemekUygun seyreltmede primer antikorlar ile 4 ° C'de O / N inkübe edin. (: 200 seyreltmeler 1) sonra ikincil antikorlar ekleyin, NP-40 birkaç kez yıkayın.
    2. NP40 birkaç kez yıkayın, sonra DAPI (1: 1000) ekleyin, 10 dakika boyunca, daha sonra yıkama tekrarlayın. Protokol tamsa sonra, yumurta odalarına PBS içinde% 50 gliserol, 200 ul ve 2 saat boyunca oda sıcaklığında bekletin.
    3. , Çözüm çıkarın PBS içinde% 70 gliserol ile değiştirin, ve folyo ile kaplayın. Montaj için hazır olana kadar 4 ᵒC de örnek yerleştirin. Bu arada, adım 3 ile devam edin.

Gliserin Jelly Slaytlar 3. Ön Hazırlıklar

  1. Jöle gliserin, bir spatula ile en az 4 ml ölçün ve yarım işareti cam hücre kültürü tüp doldurun. 30 dakika boyunca 55 ° C'de bir su banyosu içinde gliserin jöle eritin.
  2. İki mikroskop slaytlar üzerine stok çözeltisinden gliserol küçük bir damla, yaklaşık 300 ul, dökün. Bir dokuyu kullanarak, ince la gliserol yayıldıyer'de slaytlar her karşısında. Bu temel sağlar ve adım 5.6 de gliserin jöle kolay çıkarılması için izin verir.
  3. Filtrelenmiş 1.000 ul pipet kapalı ucu kesin. Kullanım kesme pipet yavaş yavaş her mikroskop lamı sıcak gliserin jöle 1000-1500 ul aktarmak için. Kabarcıklarını önlemek için özen gösterin.
  4. Gliserin jöle slaytlar ayarlamak için oda sıcaklığında 5 dakika bekletin.
  5. 60 mm x 15 mm petri her gliserin jöle slayt yerleştirin ve plastik wrap ile kaplayın. 4 ° CO / N Place. İsteğe bağlı olarak, mağaza 4 ° C'de en fazla 5 gün jöle slaytlar gliserin.

4. Yumurta Chambers Montaj

  1. Adım 2.5, bir gliserin jöle slayt genelinde% 70 gliserol yumurta odaları pipet birkaç 3 ul damla örnekler kullanma. Tüm yumurta odaları bu slaytta kadar pipetlenmesi 3 ul damla devam edin. Her damla, en az on yumurta odaları içerdiğinden emin olun. Bu arada, 55 ° C su banyosu içinde gliserin jöle kültür tüpü ısı.
  2. Bir diseksiyon mikroskop altında yumurta odaları ile gliserin jöle slayt yerleştirin. Yumurta bölmelerin tek bir damla görüş alanı (Şekil 1B) olacak şekilde büyütme ayarlayın.
  3. İstenilen sahne yumurta odasını pick up, bir kaşık gibi 30 iğne kullanma. Ne zaman bir bıçak gibi iğne kullanılarak bir ovaryol zinciri gerekli, ayrı istenen yumurta odaları.
  4. Görüntüleme engel olabilir enkaz önlemek için, sol (Şekil 1E -1) bakan anterior, ikinci gliserin jöle slayt yumurta odasına aktarın. En az yedi yumurta oda, bir sütun (Şekil 1C) dizilmiş kalmayana kadar yineleyin.
  5. İstenen tüm yumurta odaları ikinci gliserin jöle slayt transfer kadar yedi yeni sütunlar oluşturur.
  6. Doku ve büküm küçük bir parça koparın. Hafifçe her birine dokunarak yumurta odalarından fazla PBS-Gliserol emmek için bunu kullanın. Yumurta odalarına kaldırmak değil dikkat edin.
  7. Ayırmakfiltrelenmiş 200 ul pipet ucu. Yumurta odalarının tüm sütunları kapsayacak şekilde jöle gliserin 150 ul aktarmak için bunu kullanın.
    NOT: sütunları karşılamak için gerekli gliserin jöle miktarı yumurta odası aşamaları ve sütun sayısına bağlıdır. Miktarı ayarlanabilir.
  8. Gliserin jöle üst tabakası tamamen (Şekil 1D) katılaşmış kadar monte yumurta odaları oda sıcaklığında 5 dakika bekletin.
  9. Place 60 mm x 15 mm petri monte yumurta odaları slayt ve plastik wrap ile kaplayın. 4 ° CO / N Mağaza (photobleaching hakkında endişe varsa karanlıkta yer) gliserin jöle katmanları bir araya katılaşmaya izin.

Görüntüleme Yumurta Odaları 5. hazırlanması

  1. Bir diseksiyon mikroskobu altında monte yumurta odaları slayt yerleştirin. Yumurta bölmelerin sadece bir sütun görüş alanında olacak şekilde büyütme ayarlayın.
  2. 45 ° açı minyatür neşter kullanarak, bir straig kesti(yumurta odaları arka tarafına yakın) yumurta odaları ilk sütunun sağ tarafı boyunca ht hattı. (Şekil 1D-e)
  3. Sonraki, sütundaki son yumurta odasının üstündeki ilk yumurta odasının üstünde ve altında kesti. Bu noktada, yumurta bölmelerin kolon üç tarafı kesilmelidir.
  4. Yumurta odalarına (Şekil 1E -3) ön tarafına mümkün olduğunca yakın bir microknife, sütunun sol tarafındaki dilim, kullanma.
  5. Kesim sütun üzerinde soğuk 1X PBT 100 ul pipet.
  6. Slaytta kalanı bırakarak, yumurta odaları ve atın kesme sütunu üç tarafı etrafında aşırı gliserin jöle kaldırmak için bir yuvarlak kenarlı spatula kullanın.
  7. Yumurta odalarının ön tarafında yapılan kesim spatula yerleştirin ve birincil gliserin jöle bloğundan sütun ayrı.
  8. Örnekleri için ya ters (5.8.1) veya dik (5.8.2) mikroskopi hazırlayın.
    1. Ters Mikroskop için: Devir tYumurta odalarının ön tarafı aşağı bakacak şekilde bir lamel yumurta odalarından o sütun. Gliserin jöle tüm sütunlar kaldırıldı ve monte edilene kadar tekrarlayın 5,2-5,8 adımları. Kurumasını önlemek için yumurta odaların her blok üzerine,% 50 PBS-Gliserin birkaç damla ekleyin. Doğrudan lamel Görüntü yumurta odaları.
    2. Dik Mikroskop için: ön tarafı yukarı bakacak şekilde bir mikroskop lamı yumurta odalarının sütun aktarın. Gliserin jöle tüm sütunlar kaldırıldı ve mikroskop slaytlar üzerine monte edilene kadar tekrarlayın 5,2-5,9 adımları. # 1 ½ lamel ile yumurta odaları ve kapak blok, her blok üzerine% 50 PBS-Gliserin birkaç damla ekleyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

dik görüntüleme yöntemi bize aşamada 8. anterior foliküler epitel hücrelerinin doğrudan organizasyonu görmek için izin bir folikül hücre kaderi için genel işaretleyici, Gözler Yok (EYA) proteini, yanı sıra nükleer DNA işaretleyici DAPI, hatta ifade gösterdi hücrelerin bu alan boyunca ve tüm hücreler içindeki boyama yoğunlukları (Şekil 2B ") ile görülebilir gösterdi. Sitokin UPD yanıt olarak ayarlanır proteinler Bununla birlikte, değişken şekilleri ve sentezleme seviyeleri göstermiştir. Polar hücrel...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada bir son perspektif yumurta odaları gelişmekte, montaj için bir yöntem tarif ve görüntü küçük. Görüntüleme yumurta odaları için ortak teknikler yanal görünümler için optimize edilmiş ve floresan antikorlar ile boyanmış zaman öncelikle iç-dış folikül hücreleri hassas görselleştirme izin vardır. Birden fazla odak düzlemleri görüntüleme Z-yığınlarının veya 3-D rekonstrüksiyonlar yardımcıları kullanımı, ama yine de eliptik yumurta odaları (Şekil 2B) kutuplarının alt hücresel çözünürlük için yetersiz. ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların birbiriyle rekabet eden hiçbir mali çıkarı yoktur.

Teşekkürler

Sinek topluluğu üyelerinin, özellikle Dr. Denise Montell, Dr. Lynn Cooley ve Dr. Pernille Rorth'un reaktifler için yardımını takdir ediyoruz. Flybase, Bloomington Drosophila Stok Merkezi ve Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma Bankası'na sırasıyla bilgi ve sinek stokları ve antikorları sağladıkları için teşekkür ederiz. LM, Eğitim Bakanlığı Hibesi, Ulusal İhtiyaç Alanlarında Lisansüstü Yardım (GAANN) eğitim bursu (P200A120017) ve Öğrenci Gelişimini En Üst Düzeye Çıkarma Hibesi için bir NIGMS Girişimi (2 R25-GM55036) tarafından desteklenmektedir. Mikroskopi çalışmasının bir kısmı NSF MRI hibesi DBI-0722569 ve Keith R. Porter Çekirdek Görüntüleme Tesisi tarafından desteklenmiştir. Araştırma kısmen, her ikisi de MSG'ye verilen bir NSF KARİYER Ödülü (1054422) ve March of Dimes'tan bir Basil O'Connor Başlangıç Akademik Ödülü ile desteklendi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0.1 M Potasyum fosfat Tamponu (KPO4< / sub> Tamponu)3.1 g NaH 2< / sub>PO4< / sub> ekleyin ve boğa; H2O ve 10.9 g Na2HPO4 (susuz) 1 L'lik bir hacim elde etmek için damıtılmış H2O'ya. Nihai çözeltinin pH'ı 7.4 olacaktır. Bu tampon 4 ° C'de 1 aya kadar saklanabilir.
% 16 Paraformaldehit sulu çözelti, EM sınıfıElektron Mikroskobu BilimleriGFP floresansını korumak için15710
30G x 1/2 inç iğne ve nbsp;VWRBD305106Düzenli eğim
Aktif Kuru MayaGenesee Scientific62-103Dişi sinekleri şişmanlatmak için
Sığır Serumu AlbüminPAA-hücre kültürü şirketiA15-701NP40 Yıkama Tamponunda Kullanılan
Dumont #5 ForsepsGüzel Bilim Araçları11295-10Dumostar alaşımı, biyoloji ucu; Ovariole diseksiyonu
için keskin uçlar gereklidirDAPI (4&asal;,6-Diamidino-2-fenilindol dihidroklorür)Sigma AldrichD95425 mg/ml stok çözeltisi   
Fetal Sığır Serumu (FBS)Life Technologies16140-071Ek diseksiyon ortamına eklendi (%10) 
Cam kültür tüpüVWR47729-57614 ml
Cam Çöküntü SlaytlarıVWR470019-0201,2 mm Kalınlığında, Çift Boşluklu
Gliserin Jölesi Elektron Mikroskopi Bilimleri17998-10Montaj ortamı
GliserolIBI BilimselIB15760PBS'de %70
IGEPAL CA-630Sigma AldrichI3021-500ML(Nonidet P-40 için değiştirilebilir)  NP40 Yıkama Tamponunda kullanılır 
Leica Floresan Stereoskop Leica Microsystems
Leica SP5 Konfokal MikroskopLeica Microsystems40x/0.55NA kuru objektif 
Mikro spatula VWR82027-518Paslanmaz çelik
Mikroskop SlaytıVWR16004-36875x25x1 mm
NP40 Yıkama Tamponu50 mM TRIS-HCl, 150 mM NaCl, %0.5 Ipegal, 1 mg/ml BSA ve %0.02 sodyum azid
Penisilin-Streptomisin-GlutaminLife Technologies10378-016Ek diseksiyon ortamına eklendi (0.6X)
Petridish- Polisterin, sterilVWR82050-54860 W x 15 H mm
Fosfat Tampon TuzluSigma AldrichP3813-10PAK10 paket Toz
Potasyum fosfat dibazikSigma AldrichP3786-500G0.1 M KPO4 Tamponda kullanılır 
Potasyum fosfat monobazikSigma AldrichP9791-500G0.1 M KPO4< / sub> Tamponda Kullanılır 
[header]
Schneider' s Böcek OrtaÖmürlü Teknolojiler
11720018		L-glutamin ve sodyum bikarbonat ile
Sodyum azidSigma AldrichS2002-25GFloresan antikor boyamada kullanılır
Sodyum klorürSigma AldrichS3014-500GNP40 Yıkama Tamponunda Kullanılır
TRIS-HClIBI BilimselIB701441 M TRIS-HCl, pH 7.4
Uçuculuk 3D Görüntü Analiz YazılımıPerkinElmerKonfokal Z-yığınlarını işlemek için
metanol içermez

Kaynaklar

  1. Hudson, A. M., Cooley, L. Methods for studying oogenesis. Methods. 68 (1), 207-217 (2014).
  2. Bastock, R., St Johnston, D. Drosophila oogenesis. Curr Biol. 18 (23), R1082-R1087 (2008).
  3. Wu, X., Tanwar, P. S., Raftery, L. A. Drosophila follicle cells: morphogenesis in an eggshell. Semin Cell Dev Biol. 19 (3), 271-282 (2008).
  4. Bilder, D., Haigo, S. L. Expanding the morphogenetic repertoire: perspectives from the Drosophila egg. Dev Cell. 22 (1), 12-23 (2012).
  5. Montell, D. J., Yoon, W. H., Starz-Gaiano, M. Group choreography: mechanisms orchestrating the collective movement of border cells. Nat Rev Mol Cell Biol. 13 (10), 631-645 (2012).
  6. Spradling, A. C., Bate, M., Marinez-Arias, A. Developmental genetics of oogenesis. The Development of Drosophila melanogaster. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-70 (1993).
  7. Montell, D. J. Border-cell migration: the race is on. Nat Rev Mol Cell Biol. 4 (1), 13-24 (2003).
  8. Silver, D., Geisbrecht, E., Montell, D. Requirement for JAK/STAT signaling throughout border cell migration in Drosophila. Development. 132 (15), 3483-3492 (2005).
  9. Ghiglione, C., et al. The Drosophila cytokine receptor Domeless controls border cell migration and epithelial polarization during oogenesis. Development. 129 (23), 5437-5447 (2002).
  10. Denef, N., Schüpbach, T. Patterning: JAK-STAT signalling in the Drosophila follicular epithelium. Curr Biol. 13 (10), R388-R390 (2003).
  11. Beccari, S., Teixeira, L., Rørth, P. The JAK/STAT pathway is required for border cell migration during Drosophila oogenesis. Mech Dev. 111 (1-2), 115-123 (2002).
  12. Montell, D., Rorth, P., Spradling, A. slow border cells, a locus required for a developmentally regulated cell migration during oogenesis, encodes Drosophila C/EBP. Cell. 71 (1), 51-62 (1992).
  13. Xi, R., McGregor, J., Harrison, D. A gradient of JAK pathway activity patterns the anterior-posterior axis of the follicular epithelium. Dev Cell. 4 (2), 167-177 (2003).
  14. Toomre, D., Bewersdorf, J. A new wave of cellular imaging. Annu Rev Cell Dev Biol. 26, 285-314 (2010).
  15. McDonald, J., Pinheiro, E., Kadlec, L., Schupbach, T., Montell, D. Multiple EGFR ligands participate in guiding migrating border cells. Dev Biol. 296 (1), 94-103 (2006).
  16. Van de Bor, V., Zimniak, G., Cérézo, D., Schaub, S., Noselli, S. Asymmetric localisation of cytokine mRNA is essential for JAK/STAT activation during cell invasiveness. Development. 138 (7), 1383-1393 (2011).
  17. Hayashi, Y., et al. Glypicans regulate JAK/STAT signaling and distribution of the Unpaired morphogen. Development. 139 (22), 4162-4171 (2012).
  18. Airoldi, S. J., McLean, P. F., Shimada, Y., Cooley, L. Intercellular protein movement in syncytial Drosophila follicle cells. J Cell Sci. 124 (Pt 23), 4077-4086 (2011).
  19. Rørth, P., et al. Systematic gain-of-function genetics in Drosophila). Development. 125 (6), 1049-1057 (1998).
  20. Lee, T., Lee, A., Luo, L. Development of the Drosophila mushroom bodies: sequential generation of three distinct types of neurons from a neuroblast. Development. 126 (18), 4065-4076 (1999).
  21. Shimada, Y., Burn, K. M., Niwa, R., Cooley, L. Reversible response of protein localization and microtubule organization to nutrient stress during Drosophila early oogenesis. Dev Biol. 355 (2), 250-262 (2011).
  22. Quiñones-Coello, A. T., et al. Exploring strategies for protein trapping in Drosophila. Genetics. 175 (3), 1089-1104 (2007).
  23. Buszczak, M., et al. The carnegie protein trap library: a versatile tool for Drosophila developmental studies. Genetics. 175 (3), 1505-1531 (2007).
  24. Belu, M., et al. Upright imaging of Drosophila embryos. J Vis Exp. (43), (2010).
  25. Witzberger, M. M., Fitzpatrick, J. A., Crowley, J. C., Minden, J. S. End-on imaging: a new perspective on dorsoventral development in Drosophila embryos. Dev Dyn. 237 (11), 3252-3259 (2008).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Konfokal MikroskopiFolik l H cre OrganizasyonuGliserin J lesi ile MontajYumurta Odas Diseksiyonumm nofloresan Boyaman Folik l EpitelyumuS n r H cresi D zenlemesiYumurta Odas Kutuplar
Dik Görüntüleme
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.