Method Article

Fareler Soğuk Hassasiyeti ve Uyum belirlenmesi için Basit ve ucuz Yöntem

DOI:

10.3791/52640

⸱

March 17th, 2015

 ,  ,  , 
1MSTP, Neuroscience Program, Washington University in St. Louis, 2Washington University Pain Center, Department of Anesthesiology, Washington University in St. Louis

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Soğuk Plantar Testi (CPA), 30 °C ile 5 °C arasındaki soğuğa tepkiyi ölçer ve ayrıca soğuk adaptasyonunu da ölçebilir. Bu protokol, farelerde soğuk aşırı duyarlılığı, analjezi ve adaptasyonu ölçmek için CPA'nın nasıl kullanılacağını açıklar.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Soğuk algınlığına aşırı duyarlılık, geniş bir hasta alt grubunu etkileyen ve yaşam kalitesinde önemli düşüşlere neden olan ciddi bir klinik sorundur. Soğuk plantar testi, farelerde soğuk duyarlılığının objektif ve ucuz bir şekilde değerlendirilmesine izin verir ve hem analjezi hem de aşırı duyarlılığı ölçebilir. Fareler bir cam plaka üzerinde alıştırılır ve sıkıştırılmış bir kuru buz peleti, arka pençenin altındaki cam yüzeye karşı tutulur. Soğutma camından çekilme gecikmesi, soğuk hassasiyetin bir ölçüsü olarak kullanılır.

Soğuk hissi, mevsimsel sıcaklık değişimlerinin olduğu bölgelerde hayatta kalmak için de önemlidir ve duyarlılığı korumak için hayvanların termal tepki eşiklerini ortam sıcaklığına uyacak şekilde ayarlayabilmeleri gerekir. Soğuk Plantar Testi (CPA) ayrıca, 30 °C ila 5 °C arasında değişen sıcaklıklarda farelerin soğuk hassasiyetini test ederek ortam sıcaklığındaki değişikliklere adaptasyonun incelenmesine de izin verir. Fareler yukarıda tarif edildiği gibi alıştırılır, ancak cam plaka, sıcak su, ıslak buz veya kuru buzla doldurulmuş alüminyum kutular (veya alüminyum folyo paketleri) kullanılarak istenen başlangıç sıcaklığına soğutulur. Plakanın sıcaklığı, bir filament T tipi termokupl probu kullanılarak merkezde ölçülür. Plaka istenen başlangıç sıcaklığına ulaştığında, hayvanlar yukarıda açıklandığı gibi test edilir.

Bu tahlil, farelerin zararsızdan zararlıya kadar değişen sıcaklıklarda test edilmesine izin verir. CPA, yaralanmamış farelerde açık ve tutarlı davranışsal yanıtlar verir ve hem aşırı duyarlılığı hem de analjeziyi ölçmek için kullanılabilir. Bu protokol, farelerde soğuk aşırı duyarlılığı, analjezi ve adaptasyonu ölçmek için CPA'nın nasıl kullanılacağını açıklar.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kemirgenlerde soğuk cevabın ölçülmesi normal ve patolojik koşullar altında, insanlarda soğuk duyarlılık potansiyel mekanizmaları anlaşılmasına yönelik olarak önemlidir. Soğuk Plantar Test (CPA), başlangıçta önce 1 birkaç yıl oda sıcaklığında teslim soğuk uyarana tekrar üretilebilir, açık sıçangil davranışsal tepkileri üretmek için tasarlanan geliştirmiştir. Bu deneyde, bir daha yeni geliştirmeler sıcaklıkta 2 geniş bir soğuk duyarlılık tekrarlanabilir ölçümünü mümkün kılmıştır. Her iki versiyon, nispeten yüksek verimli, ve kullanımı ucuz olması için tasarlanmıştır.

Ilerleme bir hayli diğer davranışsal yöntemler kullanılarak soğuk hassasiyeti mekanizmalarını anlamada yapılmıştır. Bir yöntem dabbing veya fare pençe üzerinde aseton püskürtme ve fare pençe 3,4 Flicking harcadığı süreyi ölçen içerir aseton buharlaşma testidir. Ne yazık ki,aseton buharlaşma tepkiler ıslak duyu ve aseton kokusu tarafından eleştirilmiştir edilir. Ayrıca, aseton buharlaştırma testte uygulanan soğuk uyarıcı uygulanmış aseton miktarına bağlı olarak ve ölçmek zordur değişebilir. Son olarak, zarar görmemiş farelerde, başlangıçta aseton minimum bir yanıt sahip imkansız bu yöntemle aşırı duyarlılık yokluğunda analjezi ölçmek için adrestir.

Soğuk yanıtlar için başka klasik tahlili Kuyruk soğuk su 5,6 batırılır sonra geri çekilmesi için gecikme ölçülür Kuyruk titremesi tahlili vardır. Bu deneyde davranışsal tepkileri kesin ve deney, belirli bir sıcaklığa yanıtları ölçen birlikte, hayvanlar iyi tarif edilen stres kaynaklı analjezik mekanizmaları 7 boyunca soğuk yanıt değiştirebilir ki, test sırasında tespit edilmelidir.

Başka yaygın kullanılan bir araçtır davranışsal ölçen soğuk plaka testi, birfarelerin tepkileri bir Peltier soğutulmuş plaka 8-10 yerleştirilirler. Bu araç, belirli sıcaklıklarda hayvan yanıtları hakkında bilgi sağlarken, aynı zamanda tutarsız kullanılmıştır; farklı gruplar atlar 8,11 sayısı, ilk tepki 8,11- 13 gecikme dahil yanıtların farklı ölçüldü ve pençe sayısı çok farklı sonuçlar 11,13,14 kaldırır. Soğuk plaka deneyi de bir seferde test edilebilir tek bir hayvan gibi nispeten düşük kapasiteli olduğunu ve pahalı ve kırılgan Peltier cihazı gerektirir.

2-plaka sıcaklığı tercih testi hayvanlar farklı sıcaklıklarda 9,15- 17 2 bağlantılı plakalar üzerinde harcama zaman göreceli miktarını ölçen soğuk plaka testi yaygın olarak kullanılan bir türevidir. Bir başka benzer yaygın olarak kullanılan tahlil termal gradyan tahlil, fareler, farklı sıcaklık bölgelerinde geçirmek zaman miktarıdıruzun bir metal plaka ile, 5 ° C ile 45 ° C arasında değişen 16 ölçülür. Bu deneyler sıcaklık karşılaştırılmasına olanak iken, davranış sıcaklığı kaçınma veya sıcaklık tercihine temsil belirsizdir.

Son olarak, dinamik soğuk plaka tahlil fareler ortam sıcaklıkları 18 değişen nasıl tepki ölçmek için kullanılır olmuştur. Bu yöntem, bir RT Peltier cihazda fareler yerleştirerek ve fareler atlamak veya farklı plaka sıcaklıklarda pençeleri yalamak ne kadar ölçüm yaparken 1 ° C aşağı rampa içerir. Bu fareler, bir soğutma ortamına uyum nasıl test ederken, bu fareler bir soğutucu ortam sıcaklığının ortamda soğuk bir uyarana cevap nasıl test etmek için bir yol sağlamaz. Ayrıca, bunu gerçekleştirmek için pahalı ekipman gerektirir ve soğuk hassasiyeti ölçmeden önce test ekipmanları fareler gelmesini için bir yol sağlamaz.

Bu analizleri tamamlamak için, EBM acclima testleriSıcaklık aralıkları çeşitli de iyi tanımlanmış bir soğuk uyarıcıya Ted tepkileri ya da soğuk ortam sıcaklıklarında adapte işlemi esnasında uygulanabilir. Bu ucuz yüksek verimli testi için ölçeklendirilebilir potansiyeline sahip, bizim şimdiki aparatı ile bir seferde 14 farelere kadar test edebilirsiniz.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm fare protokolleri Sağlık kurallar National Institutes uygun ve Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvan Çalışmaları Komitesi (St. Louis, MO) tarafından onaylanmıştır.

1. Test Plakası ve Kutuları hazırlanması

  1. Cam yüzeyini temizleyin.
  2. Laboratuvar bant ile cam tabak ortasında yüzeyine T-tipi lif termokupl probu sabitleyin.
  3. Plaka ortasında boyunca tek bir satır cam plaka üzerine hayvan muhafazaları yerleştirin.
  4. Merkez hayvan muhafaza ile termokupl probu Konu ve veri kaydedici takın. Otomatik kapanma özelliği devreden ise veri logger açın ve sağlanan kablo ile bilgisayara veri logger takın.
    1. Deney sırasında plaka sıcaklığı kayıt varsa, plaka sıcaklıkları kaydetmeye başlamak için veri kaydedici yazılımı açın.
    2. Gerekirse, yeniden yazılım ayarlayınkord plaka sıcaklığı kez her saniye.
    3. Termal data logger ile paketlenmiş yazılımı kullanarak sıcaklıkları kayıt başlayın.
  5. Fareler arasındaki görsel etkileşimi önlemek için siyah ekler ile muhafaza ayırın.
  6. Pozisyon muhafazaları alt rahat bir oturma konumundan görünür, öyle ki, cam altında yansıtır.

2. Isıtma / Cam Tabak Soğutma

  1. Isıtılmış su, ıslak buz ya da kuru buz alüminyum kutular doldurun ve cam plaka üzerine uygun bir şekilde konumlandırmak (kuru buz dolu alüminyum folyo paketler aynı zamanda cam soğutmak için de kullanılabilir; Şekil 1) 2.
    1. 30 ° C'de test için, uzak hayvan muhafazaları (Şekil 2B) 2 'yaklaşık 0.25 alüminyum kutuları yerleştirin.
      1. Cam levhasının her iki tarafında bir ısıtılmış su sirkülatör ayarlayın. 45 sirkülatörü ayarlayın - 60 ° C, ve bizeSıcak su (Şekil 1C) 2 sabit bir akım ile alüminyum kutuları doldurmak için e.
      2. Sirkülatör yerleştirin alüminyum kutuları sıcak su doğrudan geri her iki tarafında (Şekil 1C) üzerindeki sirkülatörün rezervuar içine drene olduğu 2.
    2. Oda sıcaklığında test için, kutuları boş (Şekil 2) 2 bırakın.
    3. (Şekil 2) 17 ° C'de test için, uzakta iki tarafında hayvan muhafazaları gelen '' yaklaşık 0.25 kutuları yerleştirin ve ıslak buz ile doldurun 2.
    4. (Şekil 2) 12 ° C'de test edilmesi için, uzak iki tarafında muhafazalar ile ilgili '' yaklaşık olarak 1.25 kutuları pozisyon ve kuru buz ile doldurun 2.
    5. (Şekil 2) 5 ° C'de test için yaklaşık 0,25 '' uzak iki tarafında muhafazaları kutuları yerleştirin ve kuru buz ile doldurun 2.
      1. Kuru buz ile cam soğutma yaparken, odada CO 2 birikmesini önlemek için yeterli havalandırma olduğundan emin olun.
  2. İstenilen sıcaklık aralığı ulaşması cam bekleyin.
  3. Plaka üzerinde muhafazaları fareler ekleyin.
    NOT: Bir beyaz gürültü jeneratör gürültü bozuklukları azaltmak için kullanılabilir.
  4. Fareler gelmesini bekleyin.
    NOT: Tesisimizde bu yaklaşık 2.5 saat sürer, ancak bu hayvan barınağı ve taşıma koşullarına göre önemli ölçüde değişebilir.
  5. Kutular ısındı su, ıslak buz veya kuru buz dolu tutulmasını sağlayarak istenilen sıcaklık aralığında cam koruyun.
    NOT: Bizim aparat ile kutuları buz kabaca her 90 dakika ile doldurulmuş olması gerekir.
    NOT: 17 ° C koşulu için, buz ile doldurmadan önce tahliye deliklerinden alüminyum kutuları su en boşaltmak için yardımcı olur. Bu sıcaklık daha iyi ve pr stabilize edecekOlay taşması
    NOT: Kuru buz kesin miktarı mevsimsel değişiklik, ancak genel olarak sıcaklık sabit tutacak kutusunun tüm uzunluğu boyunca tam daha fazla kutu ¼ tutmak olacaktır.

Sabit Sıcaklıklarda 3. Test Fareler

  1. Davranışsal oda dışında, kuru buz dolu yarısı bir buz kovası doldurun.
  2. Bir çekiç ya da tokmak kullanarak, ince bir toz haline kuru buz ezmek.
    NOT: kova aşırı doldurulması zor tamamen toz haline kuru buz ezmek için yapacaktır.
  3. Düz jilet veya makas kullanarak, 3 ml şırınga üst kesti.
  4. Bir 21 G iğne kullanılarak, şırınga (toplam 6 delik), karşı uçlarında 3 delik karıştırmak.
    NOT: Kuru buz sıkıştırarak ederken bu delikler yüceltme tarafından oluşturulan basınç azalacak. Kesme şırınga çok deneyler için yeniden kullanılabilir.
  5. Şırınga, kuru buz tozu ve davranışsal odasına el kronometre al.
  6. Kuru buz tozu yarısı dolu şırınga odasına doldurun. Düz bir nesneye karşı şırınga kesme ucunu tutun ve sıkıca pistonu kullanarak tozu sıkıştırmak. Dikkatli ol; plastik piston bükmeyin veya basınç kırılabilir. Bu durumda, yeni bir şırınga pistonu değiştirin.
  7. Şırınga kenarına geçmiş sıkıştırılmış kuru buz pelet ucunu uzatın.
  8. Istirahatte tamamen olan test fareler.
    1. 30 ° C, 23 ° C ve 17 ° C sıcaklıkta, 4 camına pençeleri ve sahip deney fareleri hareketli, ama 19 tam uykuya değil.
    2. 12 ° C ve 5 ° C de, hareketli ya da atlama 2 pençeler veya 4 pençe olup Hangi Test fareleri.
  9. Yavaşça, hedefleme için aynalar kullanarak ama sıkıca fare hindpaw (Şekil 1A) 2 altındaki cam yüzeyine karşı düz pelet floş basın. El-Sayacı başlatmak.
  10. Zamanlayıcı durdurun ve fare uzakta soğutmalı cam hareket ettiğinde pelet çıkarın.
    NOT: çekilme hareketi, dikey veya yatay olabilir.
    1. Fare çok kısa bir süre pençe taşır ve daha sonra soğutma yüzeye dönerse fare uzak bir kalıcı hamle yapana kadar, zamanlama ve uyarıcı devam edin.
      NOT: Bizim laboratuvar olguların çoğunda fareler için 20 sn maksimum uyaran saatini kullanır.
  11. Her hayvanın her pençe en az 3 değerleri toplanana kadar bu test prosedürü tekrarlayın. En az 15 dakika herhangi bir pençe üzerinde en az 7 dakika, ve ayrı ardışık denemeler aynı fare zıt pençeleri test Ayrı denemeler.
  12. Gerektiğinde, soğutma (Şekil 3) 1, farklı oranlarını üretmek üzere, çeşitli cam kalınlığı kullanır.
    NOT: soğutma oranı ters cam kalınlığı ile ilişkilidir.

4. Soğuk Uyum sırasında Fare Test

NOT: Bu cam plat olarak test sağlayan bir alternatif protokoldürE ziyade plaka stabilize ve fareler tamamen soğuk ortama adapte kez daha, soğutur.

  1. Aparatı kurmak için Bölüm 1'de listelenen talimatları uygulayın.
  2. RT (Şekil 7A) 2 de temel ölçümleri almak için Bölüm 3'te listelenen talimatları uygulayın.
  3. Kuru buz ile alüminyum kutuları Öncesi serin.
  4. Başlangıç ​​geri çekme gecikmeleri ölçülmüştür sonra, uzak muhafazaları ile ilgili her iki tarafında plaka, yaklaşık 1.25 'ise önceden soğutulmuş kutuları pozisyon (Şekil 7A etiketli ok, "kuru buz ilave") 2'dir.
  5. Cam plaka soğurken mümkün olduğunca sık ölçümleri alarak, ölçümler almak için Bölüm 3'te listelenen talimatları uygulayın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

30 ° C, 23 ° C, 17 ° C ve 12 ° C 'de başlayan farelerden ortaya davranışsal tepkileri yüksek oranda tekrarlanabilir (Şekil 4A), 20 bulunmaktadır. Arka ayağın altında elde edilen soğuk uyarıcı ölçmek için, fareler ketamin / ksilazin / asepromazin kokteyli ile anestezi uygulandı ve pençeleri bir T-tipi filaman termokupl (Şekil 4B), 20 üst camın üzerine tespit edilmiştir. Cam soğuduktan veya arzu edilen test aralığına ısıtıldı. Plaka plaka (Şekil 5A) ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CPA, farelerde soğuğa duyarlılığı ve soğuğa adaptasyonu değerlendirmek için kullanılabilir. Çok çeşitli sıcaklık aralıklarında dizginlenmemiş, alışmış hayvanlarda soğuk tepkileri ölçmek için uygun maliyetli ve etkili bir yol sağlar. Ayrıca, kolayca ölçülebilen ve analiz edilen bir çıktı değişkeni ile net bir davranışsal yanıt sağlar. Enflamasyon1, nöropatik hasar1, analjezikler1, genetik nakavtlar20 ve genetik nöron ablasyon çalışmaları26'nın neden olduğu soğuğa ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, el yazması düzenlemesi için tüm Gereau Laboratuvarı'ndan gelen katkılara teşekkür etmek ister. Bu çalışma, DSB'ye 1F31NS078852 numaralı NINDS fonları ve RWG'ye NS42595 NINDS fonu tarafından desteklenmektedir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
T tipi termokupl probuPhysitempIT-24pCamın yüzey sıcaklığını ölçmek için kullanılır (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)
Cam plakaYerel cam şirketi (St. Louis, Stemmerich Inc)Pyrexkullanıyoruz. Laboratuvarımız genellikle 1/4 '' kullanır, ancak 3/16 '' ve 1/8 '' de yararlıdır
Termal Veri kaydediciExtechEA15Cam sıcaklığını takip etmek için termologger (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
3 ml ŞırıngaBD309657Üst kısım kesilir ve soğuk bir prob oluşturmak için şırıngada kuru buz sıkıştırılır
BilgisayarExtech logger kullanılıyorsa, St. Louis'deki Washington Üniversitesi'ndeki herhangi bir Pcwill çalışacak
Alüminyum kutuWashington Üniversitesi makine atölyesikutuları 3 'uzunluğunda, 4.5 '' genişliğinde ve 3 '' boyunda ve kapalı kapaklıdır. Her kutunun alt kısmına yakın bir kısa kenarına açılmış 1/2 inçlik bir delik vardır. Kutular ıslak buz veya sıcak su ile doldurulduğunda bu delikler lastik musluklarla doldurulur.
Isıtmalı su sirkülatörüVWRPompalı herhangi bir su sirkülatörü modeli çalışacaktır
21 G iğneBD305165Tam iğne boyutu önemli değil
El zamanlayıcısıHerhangi bir el zamanlayıcısı çalışacaktır
Aynabir düz ayna çalışacaktır
cam (borosilikat şamandıra) Herhangi

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice. Plos ONE. 7 (6), 8(2012).
  2. Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice. Journal of Neuroscience Methods. , (2014).
  3. Choi, Y., Yoon, T. W., Na, H. S., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral signs of ongoing pain and cold allodynia in a rat model of neuropathic pain. Pain. 59 (3), 369-376 (1994).
  4. Gauchan, P., Andoh, T., Kato, A., Kuraishi, Y. Involvement of increased expression of transient receptor potential melastatin 8 in oxaliplatin-induced cold allodynia in mice. Neuroscience letters. 458 (2), 93-95 (2009).
  5. Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate. Pain. 56 (2), 155-166 (1994).
  6. Pizziketti, R. J., Pressman, N. S., Geller, E. B., Cowan, A., Adler, M. W. Rat cold water tail-flick: A novel analgesic test that distinguishes opioid agonists from mixed agonist-antagonists. European Journal of Pharmacology. 119 (1-2), 23-29 (1985).
  7. Pinto-Ribeiro, F., Almeida, A., Pego, J. M., Cerqueira, J., Sousa, N. Chronic unpredictable stress inhibits nociception in male rats. Neuroscience letters. 359 (1-2), 73-76 (2004).
  8. Karashima, Y., et al. TRPA1 acts as a cold sensor in vitro and in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (4), 1273-1278 (2009).
  9. Knowlton, W. M., Bifolck-Fisher, A., Bautista, D. M., McKemy, D. D. TRPM8, but not TRPA1, is required for neural and behavioral responses to acute noxious cold temperatures and cold-mimetics in vivo. Pain. 150 (2), 340-350 (2010).
  10. Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats. Molecular pain. 1, 36(2005).
  11. Colburn, R. W., et al. Attenuated cold sensitivity in TRPM8 null mice. Neuron. 54 (3), 379-386 (2007).
  12. Dhaka, A., Murray, A. N., Mathur, J., Earley, T. J., Petrus, M. J., Patapoutian, A. TRPM8 is required for cold sensation in mice. Neuron. 54 (3), 371-378 (2007).
  13. Bautista, D. M., et al. The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold. Nature. 448 (7150), 204-208 (2007).
  14. Obata, K., et al. TrpA1 induced in sensory neurons contributes to cold hyperalgesia after inflammation and nerve injury. The Journal of Clinical Investigation. 115 (9), 2393-2401 (2005).
  15. Tang, Z., et al. Pirt functions as an endogenous regulator of TRPM8. Nature communications. 4, 2179(2013).
  16. Lee, H., Iida, T., Mizuno, A., Suzuki, M., Caterina, M. J. Altered thermal selection behavior in mice lacking transient receptor potential vanilloid 4. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 25 (5), 1304-1310 (2005).
  17. Pogorzala, L. A., Mishra, S. K., Hoon, M. A. The cellular code for Mammalian thermosensation. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (13), 5533-5541 (2013).
  18. Yalcin, I., Charlet, A., Freund-Mercier, M. -J., Barrot, M., Poisbeau, P. Differentiating thermal allodynia and hyperalgesia using dynamic hot and cold plate in rodents. The journal of pain official journal of the American Pain Society. 10 (7), 767-773 (2009).
  19. Callahan, B. L., Gil, A. S., Levesque, A., Mogil, J. S. Modulation of mechanical and thermal nociceptive sensitivity in the laboratory mouse by behavioral state. The journal of pain: official journal of the American Pain Society. 9 (2), 174-184 (2008).
  20. Brenner, D. S., Golden, J. P., Vogt, S. K., Dhaka, A., Story, G. M., Gereau, R. W. A dynamic set point for thermal adaptation requires phospholipase C-mediated regulation of TRPM8 in vivo. Pain. , (2014).
  21. Patwardhan, A. M., Scotland, P. E., Akopian, A. N., Hargreaves, K. M. Activation of TRPV1 in the spinal cord by oxidized linoleic acid metabolites contributes to inflammatory hyperalgesia. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18820-18824 (2009).
  22. Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate. Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).
  23. Rohacs, T., Lopes, C. M., Michailidis, I., Logothetis, D. E. PI(4,5)P2 regulates the activation and desensitization of TRPM8 channels through the TRP domain. Nature neuroscience. 8 (5), 626-634 (2005).
  24. Daniels, R. L., Takashima, Y., McKemy, D. D. Activity of the neuronal cold sensor TRPM8 is regulated by phospholipase C via the phospholipid phosphoinositol 4,5-bisphosphate. The Journal of biological chemistry. 284 (3), 1570-1582 (2009).
  25. Zhang, H., et al. Neurokinin-1 receptor enhances TRPV1 activity in primary sensory neurons via PKCepsilon: a novel pathway for heat hyperalgesia. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (44), 12067-12077 (2007).
  26. Wang, H., Zylka, M. J. Mrgprd-expressing polymodal nociceptive neurons innervate most known classes of substantia gelatinosa neurons. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (42), 13202-13209 (2009).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cold Plantar AssayCold SensitivityMouse AdaptationDry Ice PelletGlass PlateThermocouple ProbeWithdrawal LatencyAnalgesia MeasurementHypersensitivity TestTemperature Acclimation

Related Articles