Bu video, noninvaziv koşullar altında belirli bir preklinik fokal epilepsi modeli ile sedasyonlu sıçanlarda yüksek çözünürlüklü EEG'nin hazırlanma, kayıt ve kaynak analizi prosedürlerini tanıtmaktadır.
Yöntem makalesi
Bu video, noninvaziv koşullar altında belirli bir preklinik fokal epilepsi modeli ile sedasyonlu sıçanlarda yüksek çözünürlüklü EEG'nin hazırlanma, kayıt ve kaynak analizi prosedürlerini tanıtmaktadır.
Elektroensefalogram (EEG), fokal epilepsili hastalarda rezeksiyon için en olası beyin bölgelerinin hangileri olduğunu belirlemek için geleneksel olarak kullanılmıştır. Bu metodoloji, nöbetlerin, interiktal epileptiform deşarjların (IED'ler) ortaya çıktığı beynin aynı bölgelerinden kaynaklandığı varsayımına dayanır. Preklinik modeller, IED konumları ile fokal epilepside nöbet başlangıcının altında yatan gerçek bölgeler arasındaki korelasyonları bulmak için çok yararlıdır. Sıçanlar, epilepsi1'in klinik öncesi çalışmalarında yaygın olarak kullanılmıştır; Bu nedenle, bu özel türde fokal epilepsi için çok çeşitli modeller vardır. Ancak bu kadar küçük bir hayvanda çok kanallı EEG kaydetmek ve beyin kaynaklı görüntüleme yapmak zordur. Bu sorunun üstesinden gelmek için, kemirgenler2'den 32 kanallı EEG kayıtları elde etmek için patentli bir teknolojiyi ve Wistar sıçanlarında beyin anatomik yapıları için bir MRI olasılık atlasını beyin kaynağı görüntülemesi yapmak için birleştiriyoruz. Bu videoda, fokal kortikal displazili Wistar sıçanlarından çok kanallı EEG elde etme prosedürlerini tanıtıyoruz ve hem MRG atlasından hacim iletken modelini tanımlamak hem de IED'leri benzersiz bir şekilde belirlemek için gereken adımları açıklıyoruz. Son olarak, IED'lerin beyin kaynaklı görüntülerini elde ederek tüm metodolojiyi doğruluyoruz ve bunları nöbet başlangıcı sırasında farklı zaman dilimlerinde elde edilenlerle karşılaştırıyoruz.
Fokal epilepsili hastalarda EEG'den gözlenen interiktal epileptiform deşarjların (IED'ler) epileptogenezin yararlı belirteçlerini oluşturduğu gösterilmiştir3. Bu IED'lerin kaynaklandığı beynin içindeki bölgeler, tahriş edici bölgeler olarak adlandırılır ve pratikte EEG kayıtlarına dayanarak lokalize edilebilir4. Klinik öncesi modeller, bu tahriş edici bölgeler ile nöbet başlangıcının altında yatan gerçek bölgeler arasındaki korelasyonları bulmak için gereklidir. Bununla birlikte, insan kafa derisine kıyasla kafanın küçük yüzey alanı nedeniyle küçük hayvanlardan EEG kaydetmek zordur. Sıçanlarda kronik kayıt için invaziv yöntemlerkullanılabilse de 5, 6, şu anda anesteziye ihtiyaç duymadan akut koşullar altında kemirgenler üzerinde geleneksel EEG kayıtları elde etmek için teknikler mevcut değildir.
Bu sorunu çözmek için, kemirgenlerden gelen 32 kanallı EEG verilerini noninvaziv olarak kaydetmemizi sağlayan patentli bir EEG mini kapağı2 uyguluyoruz. Bu çalışmada, IED sıklığını korumak için bir analjezik ihtiyacı hakkında da kanıtlar sunuyoruz. Bu nedenle, EEG mini kapağının fiksasyonu izofluran altında yapılmasına rağmen, EEG kayıtları sadece sedasyon (deksdomitor) altında sıçanlarla elde edildi7. Bu çalışmada önerilen yöntem, fokal epilepsinin herhangi bir preklinik sıçan modelinde kullanılabilir. Bu metodolojinin yeteneklerini göstermek için, fokal kortikal displazide (FCD) irritatif ve nöbet başlangıçlı bölgeler arasındaki korelasyonları anlamak için uyguluyoruz. Bu amaçla, Wistar sıçanlarında FCD8'in "çift vuruşlu" bir modelini kullanıyoruz.
Beyin kaynağı analizi yapmak için: a) EEG ham verilerinden IED'leri doğru bir şekilde çıkarmak ve b) bireysel hayvan kafası için bir hacim iletken modeli elde etmek gerekir. Pratik bir hacim iletkeni modeli oluşturmak için, 31 Wistar sıçanının9 T2 görüntülerinin doğrusal olmayan kaydı yoluyla elde edilen ve ortalama yoğunluk/şekil görüntülerini içeren bir in vivo sıçan MRI atlası kullanıyoruz. Oluşturulan hacim iletkeni için ileri model, sınır eleman yöntemi (BEM)10 ile hesaplandı. İnsanlarda olduğu gibi, iki tipik IED modeli (keskin dalgalar ve sivri uçlar) tespit edildi ve akıllı bir özellik çıkarma, özellik seçimi ve sınıflandırma süreci yoluyla farklı kümelere ayrıldı11. Bu alt sınıflandırılmış sinyaller, farklı tahriş edici bölge türleriyle ilişkili beyin kaynağı lokalizasyonlarını tahmin etmek için kullanılır. Kaynak analizi adımlarını, Brainstorm12 adlı iyi bilinen bir kamu yazılımı kullanarak sunuyoruz. Her bir IED alt tipi için EEG kaynak lokalizasyonları ve nöbet başlangıç zaman dilimleri, Beyin Fırtınası'nda bulunan standartlaştırılmış düşük çözünürlüklü beyin elektromanyetik tomografisi (sLORETA)13 kullanılarak gerçekleştirildi.
Etik bildirimi: Bütün deneyler Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu Florida Uluslararası Üniversitesi (IACUC) (IACUC 13-004) tarafından kurulan politikalar takip gerçekleştirilir.
1. EEG Kayıtlar

Şekil 1. Belirli bir sıçan yerleştirilen EEG mini kap bir resmi.
Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
2. Beyin Kaynak Görüntüleme









Bir kez tüm işlemler düzgün şekilde tamamlanmasını, tahmini kaynaklar klinik öncesi model beyin yüzeyinde görülebilir. 5 çivilerin (üstte) ve IED keskin dalgaları (alt) belirli bir alt tipi tahmin kaynaklar göstermektedir. Buna ek olarak, 6 görüntüler Şekil nasıl bir nöbet kurulması sırasında ardışık zaman dilimlerinde kaynak dağılımı değişir. Bu sonuçlar fokal epilepsili fareler üzerinde yüksek çözünürlüklü EEG kayıt ve kaydedilen EEG kullanarak kaynak analizi yapmak için önerilen yöntemlerin yeteneği desteklemektedir.

Sivri farklı kümelere göre (üstte) ve keskin dalgalar (altta) ile IED Şekil 5. Tahmini beyin kaynak yerleri. (A) Zaman serisi, (B) EEG topografya ve (C) ekşi akım kortikalces. Değerlendirme kırmızı bir dikey çizgi (A) ile işaretli olan belirli bir zamanda gerçekleştirilir.
Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. 
Nöbet sırasında Şekil 6. Tahmini beyin kaynakları. Zaman anları kırmızı dikey çizgiler olarak işaretlenir.
Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Fokal epilepsi belirli bir klinik öncesi modelde non-invaziv kayıt kanallı EEG için yeni bir metodoloji tarif edilmektedir. kayıt ve analiz prosedürleri için ayrıntılar, spesifik deneysel ipuçları temin edilmiştir. Başarılı sonuçlar elde dikkate önemli faktörlerdir vardı. İlk olarak, EEG kayıtları için, yüksek kaliteli sinyalleri elde esastır. EEG macunu Doğru viskozite mini kap hazırlanması sırasında her elektrodun uygulanması gerektiğini ve sıçan kafası ve kulak saç tamamen tıraş sırasında çıkarılmalıdır. Empedans çek EEG kayıtları kalitesini onaylamak için en önemli adımdır. İkincisi, beyin kaynak görüntülemesi için uygun hacim iletken modeli üreten çok önemlidir. Her yüzey birlikte kayıt altına alınmalıdır. Ayrıca, üretilen elektrot konumları sıçan kafa derisi üzerinde gerçek elektrot konumları minimum mesafe hatası olmalıdır.
Hatta bu yazının kaynağını tanıttı rağmenBrainstorm 12 kullanılarak analiz yöntemleri, diğer açık yazılımları 16,17 ve ticari ürünler 18,19 kullanılarak yapılabilir. Ayrıca, sLORETA 13 yanında, bu tür birden fazla dipol modelleri ve algoritmasının gibi diğer ters çözeltiler 4 uygulanabilir.
Bu yaklaşımın bir sınırlama EEG kaydı sedasyon altında gerçekleştirilir çünkü davranış analizi yapılan edilemez olduğunu. Ancak, sıçanlarda 5,6 EEG kaydı için diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, bu yaklaşım non-invaziv olduğunu.
Bizim ilk sonuçlar fokal epilepsili bir sıçan tahriş edici bölgelerini tespit etmek, hem de nöbet başlatılması 11 altında yatan mekanizmaları ile ilişkilerini değerlendirmek için EEG kayıtlarından IED belirteçleri kesin sınıflandırma için önemini desteklemektedir. Buna ek olarak, bu tür özel IED EEG kaynak lokalizasyon resp iyi bir uyum gösterdiği gösterilmiştirözelliklerin etkili BOLD aktivasyonu ve devre dışı bırakma bölgeleri 20.
Çalışmamız biyomedikal mühendisleri tarafından geliştirilen yatak tezgah yatak stratejileri değerlendirmek için preklinik modellerin kullanımını teşvik edecek. Örneğin, IED ekstraksiyon Günümüzde, insanlarda önemli bir çaba gerekli manuel hastaneler, gerçekleştirilir. Bu çalışmada önerilen yöntem bunu otomatik olarak yapar. Biz FCD hastalara uygulandığında bu yöntemin kullanılması benzer sonuçlar üretecektir varsayımında. Biz bu değerlendirme ve insan veri kümesi içinde metodolojinin diğer yönleri için IRB protokoller hazırlanıyor.
Dahası, klinik öncesi modellerin kullanılması bize epilepsi 21 EEG kaynak lokalizasyonu yetenekleri ve sınırlamaları anlamanıza yardımcı olacaktır. Epileptogeneze ast beyin kaynaklarının doğru tahmin tedavi stratejileri ve cerrahi planlama için çok önemlidir. Ayrıca farelerde EEG kayıt için standart bir platforma sahip faydalı olacaktırKlinik öncesi çalışmalarda birçok anti-epileptik ilaçların etkinliğinin değerlendirilmesi. Bu epilepsi için EEG biyomarkerların değerlendirilmesi için yeni kapılar açacak epileptik sıçanlar non-invaziv sedasyon altında kaydedildiği ilk çalışmadır. Ancak, bu çalışmada sunulan tüm metodoloji diğer deneysel koşullar ve beyin bozuklukları genişletilebilir. EEG mini kapağı, aynı zamanda, diğer kemirgen tipler kullanılabilir.
Geçmişte, Wistar sıçanlarda bir forepaw stimülasyon paradigma EEG mini kap 2 ile kaydedilen verilerin kalitesini ve tekrarlanabilirlik değerlendirmek için kullanılır olmuştur. Ayrıca, beyin kaynak rekonstrüksiyon için doğrulamaları aynı anda bir bıyık stimülasyon paradigma 22 altında Wistar sıçanların laminer yerel alan potansiyelleri ile kaydedilen yüksek çözünürlüklü kafatası EEG den yapılmıştır. Bu yöntem, bu nedenle, özellikle fare s için bir MRI atlas varlığının Wistar sıçanlar için geliştirilmiştirTren. Ancak artık, fare 23, Sprague-Dawley fareleri 24 ve Paxinos ve Watson, sıçanlar 25 de dahil olmak üzere atlas standart formatı ile, diğer kemirgen türlerine uygulanabilir. Ayrıca, önerilen metodolojinin temel işlemler EEG önemli bir yöntemidir olan herhangi bir kemirgen preklinik modellerinde kullanılabilir. Ancak, bu yöntemin birçok açıdan EEG ön işleme (IED tespiti ve sınıflandırma) ile ilgili olanlar, epilepsi için özellikle bulunmaktadır. Ayrıca, araştırmacılar, farklı durumlarda sedasyon için kullanılan uygun ilaçlar farkında olmalıdır. Çalışmamızda izofluran ve dexdomitor kullanımı dikkatle nedeniyle IED üzerinde azaltılmış etkisi kabul edilmiştir. EEG ile ilgili olarak, bir fare olması durumunda, nispeten küçük bir kafa derisi yüzeyi önemli ölçüde kanal sayısını azaltacaktır.
Çıkar çatışması ilan etti.
Yazarlar değerli tavsiye ve verimli bir tartışma için Pedro A. Valdes Hernandez, Francois Tadel ve Lloyd Smith teşekkür etmek istiyorum. Biz de kanıt okuma için Rafael Torres teşekkür ederiz.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Veri Toplama Bilgisayarı | Hewlett-Packard | Z210 İş İstasyonu | |
| Dexdomitor | Orion Pharma | 6295000 | Deksmedetomidin hidroklorür |
| EEG Analiz Yazılımı | Mathworks Inc. | MATLAB R2011b | |
| Beyin Fırtınası | Sylvain ve ark. 2001 | ||
| OpenMEEG | Gramfort ve ark. 2010 | ||
| EEG Veri Akışı | Tucker-Davis Teknolojileri | RS4 Veri Akışı | |
| Yapıştır | Biotach | YGB 103 | |
| EEG Preamplifikatör | BioSemi | Aktif İki | |
| Beyin Ürünler | BrainAmp | ||
| Tucker-Davis Technologies | PZ3 Düşük Empedanslı Amplifikatör | ||
| EEG Kayıt Yazılımı | BioSemi | ActiView | |
| EEG Kayıt Yazılımı | Tucker-Davis Technologies | OpenEx - OpenDeveloper | |
| EEG SCSI Konektörü | BioSemi | Aktif İki SCSI Konektörü | |
| Beyin Ürünleri | D-sub Konnektör | ||
| EEG İşlemcisi | Tucker-Davis Technologies | RZ2 BioAmp İşlemci | |
| Tucker-Davis Technologies | Zif-Clif Dijital Headstage | ||
| Yüksek Çözünürlüklü EEG Mini-cap | Cortech Çözümleri | DA-AR-ELRCS32 | ABD patenti Başvuru No. 13/641,834 |
| İzofluran, USP | VedcoPiramal Sağlık NDC | 66794-013-25 | |
| İzopropil Alkol | Aqua Solüsyonları | 3112213 | %90 V/V Solüsyonu |
| Yağlayıcı Oftalmik Merhem | Rugby | NDC 0536-6550-91 | Steril |
| NaCl | Abbott | 2B8203 | Vateriner %0.9 Sodyum Kirür Enjeksiyonu USP |
| Fizyoloji Kayıt Yazılımı | ADInstruments | LabChart 7.0 | |
| Fizyoloji Kayıt Sistemi | ADInstruments | PowerLab 8/35 | |
| Şırınga | Monoject | 200555 | 12cc |
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste