Morris Water Maze Testi: Fare Gerilme ve Test Ortamı için Optimizasyon

Summary

Bu el yazması, Alzheimer hastalığının yaygın olarak kullanılan bir fare modeliyle kullanılmak üzere tasarlanmış bir Morris su labirenti (MWM) protokolünü açıklamaktadır. MWM, transgenik fare modellerinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Fare modelinin arka plan gerilimine duyarlı bir prosedürün uygulanması, grup farklılıklarını tespit etmek için çok önemlidir.

Abstract

Morris su labirenti (MWM), Alzheimer hastalığı gibi nörobilişsel bozukluklar da dahil olmak üzere transgenik fare hastalık modellerinde hipokampal bağımlı uzamsal öğrenmeyi ve hafızayı değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan bir görevdir. Bununla birlikte, kullanılan fare modelinin arka plan suşu, gözlemlenen davranışsal fenotip üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir ve bazı suşlar diğerlerine göre üstün öğrenme yeteneği sergiler. Transgen negatif ve transgen pozitif fareler arasındaki farkların tespit edilebilmesini sağlamak için, arka plan suşuna duyarlı bir eğitim prosedürünün tanımlanması esastır. MWM protokolünün fare modelinin arka plan suşuna göre uyarlanmaması, yetersiz veya aşırı eğitime yol açabilir, böylece prob denemelerinde grup farklılıklarını maskeleyebilir. Burada, F1 FVB/N x 129S6 arka planıyla kullanılmak üzere uyarlanmış bir MWM protokolü açıklanmaktadır. Bu, mutant P301L tau'nun (rTg (TauP301L) 4510 fareleri) Alzheimer hastalığı ile ilişkili hafıza eksiklikleri üzerindeki yaşa bağlı etkilerini incelemek için sıklıkla kullanılan bir arka plan türüdür. Ayrıca, kullanılan belirli test ortamı tarafından dikte edildiği gibi yeniden optimize etmek için bir strateji de açıklanmıştır.

Introduction

Transjenik fare modelleri, Alzheimer hastalığı (AD), patofizyolojisi, hem de terapötik müdahalelerin potansiyelini değerlendirmek için etkili olmuştur. Böyle Morris su labirenti (MWM) gibi bilişsel görevler, genellikle bellek açıklarının moleküler korelasyonun gösterilmesi ve klinik öncesi ilaçların etkinliğini değerlendirmek için bu modellerle birlikte kullanılır. Bilişsel görevin dinamik aralık ince tedavi etkilerini saptamak için yeterince geniş olması ki, çok önemlidir. AD fare modelleri ile bilişsel kusurlar genellikle yaşa bağlı olan ve fareler performans ilerici düşüşler görüntüler (örneğin, ^1). Hassas bir bilişsel görevin Kullanımı ve böylece yaşlanma hayvanlarla ilgili maliyetleri azaltarak, daha önce hayvanın hayatında ince farklılıkların tespitine olanak sağlayabilir. Örneğin, hipokampus bağımlı Barnes eğitim denemelerinin sayısını azaltarak 15-5 labirent d sonuçlanan, görevin zorluk arttıdaha erken yaşta 3xTg modelinde açıklarının etection önce ^2. bildirdi. Açıklarının önceki tespiti değil sadece, aynı zamanda bilişsel açıkları altında yatan moleküler değişiklikler tespit edilebilir olasılığını artırır, önemli bir zaman ve maliyet tasarrufu sağlar.

Bilişsel görevlerin duyarlılığını etkileyen faktörlerden biri fare modeli genetik arka plan türdür. Örneğin, BALB / c fareleri gibi C57BL / 6 ³ gibi başka suşlar ile karşılaştırıldığında, öğrenme ve hafıza görevlerinde üstün bir performans sergilerler. F1 FVB / N x 129S6 arka AD'nin en yaygın olarak kullanılan model, Tg2576 ve RTG (TauP301L) 4510 iki modelini kullanılmaktadır. Bu suş B6 / SJL fareler ⁴ dahil olmak üzere diğer suşlar için MWM akrabası üstün öğrenme yeteneğini sergiler. Çünkü bu üstün öğrenme yeteneği, geniş eğitimden sonra tek bir prob kullanımı aşırı eğitime kaynaklanan grup farklılıklarını maskeleyebilir. Buna ek olarak, sensitivitesiProb çalışmalarda y yaşa bağlı olabilir. Biz daha önce erken sonda denemeleri sınırlı gizli platformu eğitimden sonra, daha genç transgen-negatif yavru kontrollere göre genç Tg2576 farklılıkları daha duyarlıdır daha kapsamlı eğitim ⁵ sonra eklenen prob çalışmalar olduğunu göstermiştir. Daha önce prob denemeleri ⁵ olduğundan daha aksine, kapsamlı eğitim aşağıdaki sonda denemeleri eski littermates kıyasla Tg2576 fareler yaşlı (20-25 ay) daha duyarlıdır. Boyuna test yapılır ve belirli bir prob deneme duyarlılığı yaşa bağımlı özellikle eğitim boyunca sonda denemeler interspersing ederek, hassas bir deneme tespit edilme olasılığı artar. 1 F1 FVB / N x üstün performans göstermektedir daha geniş eğitim ile bir protokol çerçevesinde eğitimli B6 / SJL arka plan farelere kıyasla bu suş için optimize protokol çerçevesinde 129S6 fareler.

MWM olduğunugenellikle zaman ve laboratuvarlar ⁶ ikisi arasında tekrarlanabilir güvenilir önlemleri sağlamak için düşündüm. Örneğin, başlangıçta bizim Minnesota laboratuvar ^1,7 tarafından kullanılan birincil protokol başarıyla Batı Virginia Üniversitesi'nden ⁸ minör değişikliklerle uygulanmıştır. Benzer şekilde, değer düşüklüğü eşdeğer düzeyleri patojen içermeyen ya da geleneksel koşullar ⁹ altında muhafaza eğer yavruları kontrol etmek için 4510 fareler göreceli RTG (TauP301L) gözlendi. Ancak, test ortamı MWM görev duyarlılığını etkileyebilir. Böyle oda aydınlatma, hava delikleri, sıcaklık değişimleri ve sesler gibi tüm faktörler sonuçta performansı etkileyebilecek çevresel ipuçlarına ⁴ katkıda bulunur. Bizim Minnesota laboratuvar ve vivaryum yeni binasına taşındı zaman, yukarı vahşi tip performansında% 38 azalma büyük ölçüde görev ve transgen ilgili açıklarını tespit etme yeteneğine dinamik aralığını azaltarak gözlendi. Pe Bu değişiklikrformance eşdeğer boyut ve konfıgürasyona sahip olacak test odası tasarımı ve aynı uygulanan görsel işaretler kullanarak rağmen meydana geldi. Orijinal protokol A "re-optimize" yeni test ortamında MWM görevin dinamik aralığı artırmak için gerekli oldu.

İşte F1 FVB / N ile kullanım için tasarlanmış orijinal protokol 129S6 background ⁵ açıklanmıştır x. Bazı çalışmalarda stres önermek için performans ¹¹ bu strese bağlı açığı hafifletmek kötü MWM performansı ¹⁰ ve ön-işleme ile ilişkili, bir ön-işleme protokol havuzunun oluşturulması ve parçalanmasına önce MWM test fareler ACCLIMATE için tasarlanmıştır . Ön işleme ardından, fareler yükseltilmiş platform bayrak ile işaretlenmiştir hangi görünür bir platform eğitimi, tabi. Görünür bir platform eğitim sensorimotor anormallikleri ile ilgili performans sorunları ile fareler tanımlamak için kullanılır. Prot açıklanan dışlama kriterlerini kullanarakocol bölümünde, performans yetersiz fareler gizli platformu eğitim ve prob çalışmaların daha sonraki sınavlar kaldırılır. Sensorimotor performans verileri dışarı çarpanlarına çünkü gizli eğitim platformu ve prob çalışmalarda bozuklukları bilişsel olarak yorumlanır. Görünür bir platform eğitimin tamamlanmasından sonra, fareler platformu suya ve dış uyaranlara göre aynı konuma kalır gizli bir platform eğitime başlamak. Platform (prob denemeler) çıkarılır hangi Denemeler ek eğitim etkisini değerlendirmek için gizli bir platform eğitimi boyunca serpiştirilmiş. Prob denemeleri Her günün başlangıcında meydana Çünkü, ek gizli platformu eğitimden önce, sonda denemeleri 20 saat gecikme aşağıdaki platformun yerini hatırlamak hayvanın yeteneğini ölçmek, referans hafızasında ¹² bir ölçü olarak kabul. Son olarak, hangi yollarla bu orijinal protokol yeniden optimize zaman test ortamında değişikliklerkesintiye kontrol performansı açıklanmıştır.

Protocol

Tüm deneysel işlemler Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) standartlarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir ve Batı Virjinya Üniversitesi IACUC tarafından onaylanmıştır.

1. Ön işleme

1. Havuz Kurma
   1. Rahat bir yüksekliğe yükseltilir, böylece ön işleme havuzu Prop.
   2. Yaklaşık 1 cm arasında bir seviyede ön-işleme havuzda 2 L su (21 ° C) yerleştirin.
      Not: boyama katmayın.
2. Prosedür
   1. Test odasına vivaryum farelerin getirin.
   2. Konu kimlik doğrulama (konu numarası, kuyruk dövme, kulak klipsi, vb.).
   3. Kalıcı bir kalem ile işaretleyin farenin kuyruğu test edilecek kalır olanlardan test öncesi işleme uğramıştır kafes içinde fareler ayırt etmek. Aynı renk ile tek kafes içinde tüm fareleri işaretleyin.
   4. Approxima için transfer beher fare yerleştirintely 5 sn. Sonra, yavaşça ön işleme havuza beher dışına fareyi dökün.
   5. Bir zamanlayıcı kullanarak, fare 20 saniye havuzda kalmasına izin verir.
   6. 20 saniye sonra yavaşça fare önünde (o olta balıkçılığı olmadan) kepçe yerleştirin. Kısaca fare kepçe keşfetmek için izin ve gerekirse, yavaş yavaş kaldırırken hafifçe farenin altında kepçe kaydırarak kepçe almak için fareyi teşvik ediyoruz. Kepçe ile fareler korkutmak için özen gösterin.
   7. Fare kepçe sonra, tutma kafesine geri taşıyın.
   8. 10 gün boyunca günde bir kez kafese her bir fare için bu prosedürleri. (Her hayvan sonra örneğin) Düzenli aralıklarla, bir net kullanarak havuzdan fekal boli ve yatak pick up.
   9. (Bir fare kafes tamamlandıktan sonra gibi) düzenli aralıklarla su ile Transfer kabı durulayın.
   10. Bu adımlar tamamlandıktan sonra, su ile birkaç defa transferi beher durulayın su dışarı dökümüHavuz ve su ile havuz yaklaşık iki kez yıkayın.

2. Görünür Platform Eğitimi

1. Kurulum Fare Performans Takip Yazılımı, örneğin Viewer (Malzeme Tablo bakınız).
   1. "Filtreleme ve Nesneler" sekmesi - 'Yapılandırma' başlığı altında labirent boyutlarına uyacak şekilde videoyu kalibre.
   2. Yazılım kökenli fare ayırt böylece filtreleri ayarlayın.
      1. Izleme yazılımı hayvan tanımlar, böylece "Background filtresi" alanının altındaki "hassasiyetini" ayarlayın.
      2. Izleme yazılımı hayvan tanımlar zamanlar "kabul et" seçeneğini tıklayın. Labirent alanı dışında alanları karartma için "düzenle" seçeneğini seçin.
      3. Uygun "Hayvan filtresi" ve "min seçin. Hayvan boyutu ".
2. Run Sheets oluşturma
   1. Her Fareyi listeleyen bir çalışma sayfası, her potansiyel konumu ve anormal davranışları hakkında bilgi içeren notlar için bir alan oluşturun.
   2. Her bir fare grubu için aynı olan görünür bir platform test yerleri önceden belirlemek. Bu nedenle, ilk deneme için, platform fare duvara yakın sağ tarafında, labirent içine yerleştirildiği karşı tarafında yerleştirileceği önceden belirler. İkinci deneme için, platform, her fare için arka duvarı boyunca farklı bir konumda yer olacağını önceden belirlemek ve bu 6 çalışmaların her biri için devam edeceğini.
3. Oda Kurma
   1. Odanın etrafında asın perdeleri böylece herhangi bir mekansal ipuçları gizlenmiş.
4. Küvet Kurma.
   1. O "Yapılandırma" konulu yapılandırma ayarları ile eşleşen labirent sağlayarak izleme yazılımı yapılandırma eşleşecek şekilde küvet yerleştirin - "Bölge Tanımı" sekmesini seçin. Not: hELPS tub kolayca kez doldurulmuş tehcir değil gibi su ile doldurarak öncesinde doğru konumda olduğundan emin olmak için.
   2. Musluk suyu ile doldurun küveti ve termometre kullanarak, su sıcaklığı yaklaşık 21 ° C olduğundan emin olun. Yaşlı fareler ⁸ kullanırken soğuk su, özellikle performansı etkileyebilir su, test boyunca bu sıcaklık bir derece içinde kalmasını sağlamak.
      Not: boyama katmayın.
   3. Önceden belirlenmiş yerleri kullanarak, 13 cm yüksekliğe ulaşır ve küvet ilk konumda cesur "S" üzerine kabartma şeklinde karakter ile 4.5 cm x 4.5 cm, bir monte bayrağı vardır platformu, koyun, böylece yaklaşık olarak 1 inç su yüzeyi üzerindedir.
5. Prosedür
   1. Beher doğru renk kalıcı bir kalem kullanarak kuyruk ve yeri işaretlemek, kafes ilk fareyi atın konu kimliğini doğrulamak.
   2. Yavaşça mous yerKüvetin içine e sayacını başlatmak ve izleme yazılımı hayvan izleme emin olun. 2 dakika fare kadar platformu bulmak için izin verin. Fare platformu bulur sonra, platform üzerinde fare 20 sn bekleyin.
   3. Hayvan platformu bulur ve atlamak ya da düşmek devam ederse, fareyi kepçe ve platform üzerinde fare yerleştirin. Fare atlamak veya platformu düşmek devam ederse, platform üzerinde fare tutun, böylece fare platformu üzerinde kalan küvet kaçmak için yol olduğunu öğrenir.
      Not: Fare 20 sn kombine süre platformda kalmalıdır; Fare 5 saniye sonra kapalı atlar eğer böylece, platform üzerinde kalan süre miktarı 15 sn ve 20 sn sıfırlanmaz.
   4. Hayvan 2 dk döneminde platformu bulmak için başarısız olursa, fare kepçe ve 20 saniye boyunca bir platform üzerine yerleştirin.
   5. Platformda 20 sn sonra, ön-işleme eğitim yapıldığı gibi platformdan fareyi kaldırmak ve th fare koyunE ısıtıldı kafes kağıt havlu ile kaplı ve 30 saniye için bir ısıtma yastığı ve ısı lambası tarafından ~ 31 ° C'ye ısıtıldı. Belirli bir yaşta, fare ya da fare belirli soyları sağlamak için, bir rektal termometre ile vücut sıcaklığının periyodik bir değerlendirme yapılmalıdır suya maruz neden olduğu hipotermi farklı olarak duyarlı değildir.
   6. Isıtma lambası ile tutma kafesine 2 dakika sonra, çalışmalar arasındaki kurtarmak için, sadece bir ısıtma yastığı, ancak hiçbir ısı lambası ile tutma kafesine fare aktarın. Sonunda, test sırasında aynı tutma kafesin içine bir tek ev kafesinden tüm fareleri yerleştirin.
   7. Her fare deneme tamamlandıktan sonra koku ipuçlarını bozmak için, bir net enkaz labirent temizleyin.
6. Gruptaki her fare için bu adımları yineleyin. Her fare ilk deneme tamamlandıktan sonra, ikinci önceden belirlenmiş konuma platformu taşıyın.
   Not: Platform, tek bir duruşma sırasında her fare için aynı yerde kalır ve olacaktakip eden çalışmalarda diğer önceden belirlenmiş yerlere taşındı. Bu, 2), böylece sağlam bir görsel yeterlilik gösteren, görünür platforma doğrudan yüzmek kaçmak için bir platform vardır öğrenmek ve 3) hiçbir motorlu açıkları var) o fareler 1 sağlamak için yapılır.
7. Test ilk 3 gün boyunca 6 denemeleri için bu prosedürleri uygulayın. Bu durumda, her bir deneme arasında yaklaşık 10 dakika boyunca (Şekil 2), test günü 1, 2, ve 3 görünür eğitim gerçekleştirin.
8. Görünür bir platform eğitimi sırasında, platforma ulaşmak için gecikme ölçmek hayvanın yol uzunluğunu izlemek için hayvan izleme yazılımı kullanın ve hız yüzmek. Bir excel elektronik tablo "Deneysel liste" ve doğrudan ihracat altındaki "Su labirent" sekmesinden bu ölçümleri alın.
   Not: Bir yandan zamanlayıcı kullanımı da izleme yazılımı doğruluğunu sağlamak için yararlı olabilir.

3. Morris Water Maze Gizli Platformu Eğitim

1. SOdaya kadar et
   1. Laboratuvarda mekansal ipuçlarını gizlemek için odada perdeleri asmak.
   2. Perdelerin üzerinde stratejik ipuçları yerleştirin. Ipuçları geniş olduğundan emin olun ve daha iyi görüş için zıt renkler (ex .: siyah ve beyaz) içerirler. Onlar küvetin içinden fareler görülebilir bir mesafede ve yükseklikte askıda ipuçları. Not: ipuçları statik ve test süresince hareket etmiyor.
2. Fare Performans Takip Yazılımı Kurulumu
   1. "Filtreleme ve Nesneler" sekmesi - 'Yapılandırma' başlığı altında labirent boyutlarına uyacak şekilde videoyu kalibre.
   2. Yazılım kökenli fareler ayırt böylece filtreleri ayarlayın.
      1. Görünür bir platform testleri açıklandığı gibi Morris su labirenti gizli platformu eğitimi için filtreler kurmak için (2.1.2.1-2.1.2.3 adımlar) aynı prosedürleri kullanın.
   3. Labirent içinde dört eşit kadran oluşturun
      1. Tıklayın"Bölge tanımı" sekmesi altındaki "Elips" seçeneği ilk ve ekrandaki labirent eşleşen bir daire oluşturun. Not: Bu sekmede, kurmak, gerçek bir labirent görüntülenir, bu nedenle gerçek labirent kurulumu ile bilgisayar kurulumunu maç seçeneği izin verir.
      2. "Dikdörtgen" seçeneğini tıklayın ve dört eşit kareler oluşturmak. Yeni oluşturulan daire içinde dört eşit kadran oluşturmak için ekrandaki bu kareler yerleştirin.
   4. Labirent platformlar oluşturun.
      1. "Elips" seçeneğini seçin ve bir daireyi kullanılacak platformun boyutu oluşturun. Not: Labirent platformu yerleştirilmesi önceden bir Elipsi platformunun tam boyutunu oluşturmak için yararlı olabilir.
      2. Hedef kadranda merkezinde yeni oluşturulan bir platform konumunu yerleştirin. (O geri kalanı doğru platformlar ayırt etmek için bu nesne "hedefi" adını tavsiye edilir). Kritik adım: kutusunda sadece bel"Izgara" ow, hedef platformu için "tetikleyici" altında "dur" seçeneğini seçin. Bu fare platformu ulaştığında programın durmasına neden olur.
      3. Diğer üç özdeş bir platform alanları yaratmak ve diğer kadranlarda kesin yerlere koyun. Seçmeyin "tetikleyici" seçeneğinde "dur".
3. Run Sheets oluşturma
   1. Her fare, her deneme, platforma ulaşmak için zaman yazmak için bir boşluk listeleyen bir çalışma sayfası ve anormal davranışları (Tablo 1) Unutulmaması gereken bir boşluk oluşturun.
   2. Bir psödo-rastlantısal bir şekilde her bir farenin salma noktası önceden belirler. Platforma baştan yalancı rasgele platforma mesafe 4 yerlerin her biri eşit derecede kullanılır her gün eşit şekilde seçimi ve açıyı kullanın (yani., Sola veya sağa itibaren) içinde ve gün arasında dengelenir.
      Not: platformunun yerini kaçaksac orjinal pozisyonundan hareket etmiyor platformun yerini sağlamak. Platform izleme yazılımı üzerinde oluşturulan dört bölgelerin birinin merkezinde olduğundan emin olun.
      Not: boyuna test çeşitli yaşlarda yürütülmektedir, her yaşta yeni bir konuma platformu taşıyın.
4. Labirent Kurma
   1. "Bölge tanımı" sekmesi - su labirenti veya labirent ve "Yapılandırma" konulu yapılandırma ayarı arasında bir maç var, öyle ki kamera ya ayarlayın.
   2. Labirent (N, S, E, W) dört görünmeyen kadran etiketleyin. Fareler sağlamak için izleme yazılımı yapılandırma ile bu maç, doğru başlangıç ​​noktalarından serbest bırakılması emin olun.
      Kritik Adım: Yeri labirentin dışında ve labirent içinde ipuçları olmayan bir konumsal olmayan hipokampus bağımlı görev teşkil verilen yüzme hayvanın bakış dışında bu etiketler.
   3. Musluk Wate ile labirent doldurunR (yaklaşık 21 ° C) platformu, su yüzeyinin altında, yaklaşık 5 mm'dir ve böylece.
   4. Önceden tespit edilmiş bir konumda bir platform yerleştirin.
      Not: Platformun konumu tüm gün çalışmalar boyunca test edilen tüm fareler için aynı kalır.
   5. Su opak hale getirmek için toksik olmayan beyaz tempera boya kullanın. Platformun üst yüzerken hayvanların göz seviyesinden görünmez olmasını sağlamak için bunu yapın.
5. Prosedür
   1. , Kafes fare atın, doğru renk kalıcı bir kalem kullanarak kuyruk işaretleyin ve beher yerleştirmek.
   2. O duvara bakan girer ve böylece yavaşça, labirent içine fare dökün. Not: Her fare benzersiz deneme için aynı başlangıç ​​konuma yerleştirilir.
   3. Farenin ilk sürümü olarak, zamanlayıcı başlayacak ve test değil kolayca görülebilir fareler tarafından bir alanda duruyor. Hayvan izleme yazılımı düzgün hayvanı izleme emin olun.
   4. Hayvan platforma ulaştığında, 15 saniye için platform üzerine kalmasını sağlar.
      Not: Bu oda içinde mekansal konumu şark hayvan izin verir.
   5. Platformda 15 saniye sonra, labirent hayvan kaldırmak ve ısıtmalı kafes fare dönün.
   6. Fare platformu bulur ve atlamak veya 15 saniye önce düşmek ilerlemektedir, fare kepçe ve fare kaçış platformu ilişkilendirmek öğrenir böylece 15 saniye geri kalanı için platforma geri yerleştirin.
   7. Fare 60 saniye içinde platformu bulamazsa, hafifçe fare kepçe ve platformda üzerine yerleştirin. O zaman, 15 saniye platformda kalması kepçe ile hayvan kaldırmak ve ısıtmalı kafesine geri getirmek için izin verin.
   8. Koku ipuçlarını bozmak için bir net ile enkaz labirent temizleyin.
   9. Grupta geri kalan fareler için bu prosedürleri. Böylece, test günü 4 ile 9 arasındaki için, gizli bir platform trenin dört deneylerHer deneme arasında yaklaşık 20 dakika ile günde ing.
   10. Her deneme için başlangıç ​​yeri pseduorandomly değiştirin. Böylece, duruşma 1 sırasında, daha sonra, aynı başlangıç ​​yerden tüm fareleri serbest izleyen çalışmalar için bir başlangıç ​​pozisyonundan prosedürü tekrarlayın. Her gün, bir mekânsal olmayan, non-hipokampal bağımlı motorik strateji geliştirmek değil hayvanları sağlamak için serbest bırakma noktaları değişir. Fareler gün bir şekilde N, S, E ve B noktaları salınır, örneğin, bir sonraki gün aynı sırayla serbest değildir.
   11. Gizli bir platform eğitimi sırasında, platform hayvanın yol uzunluğunu ve zaman yüzdesini ulaşmak veya hayvan her labirent kadranda harcıyor uzaklaştırmak gecikme ölçmek için hayvan izleme yazılımı kullanın. "Deney listesinde" altında "Su labirent" sekmesinden bu ölçümleri elde etmek ve bir excel elektronik tablo doğrudan ihraç edilebilir.
       Not: Bir yandan zamanlayıcı kullanın takibi doğruluğunu garantiyazılımı.

4. Sonda Denemeler

1. Fare Performans Takip Yazılımı Kurulumu
   1. Bir istisna dışında (3.2.1-3.2.4.3 adımlar) Morris su labirenti gizli platformu prosedüründe olduğu gibi aynı prosedürleri kullanın. Kritik adım: sonda denemeleri için "tetikleyici" için "stop" seçeneğini sağlamak prob çalışmalar sırasında kapalıdır. Bu fare platformu alanı geçtiğinde durdurma programı önleyecektir.
2. Run Sheets oluşturma
   1. Her fare, her deneme ve anormal davranışları dikkat edilmesi gereken bir boşluk listeleyen bir çalışma sayfası oluşturun. Onlar platformun karşısındaki iki taraf arasında gidip şekilde prob çalışmalar sırasında bırakma noktasına Öncesi belirler. Bu nedenle, önceden tespit farenin platforma bitişik olan iki taraftan serbest değildir, öyle ki serbest noktaları.
3. Prosedür
   1. Takılı olduğu durum ile gizli bir platform eğitimi benzer prob denemeler DavranışHiçbir platformu labirent içinde yon.
   2. Önceden belirlenmiş bir salma noktasından bir fareyi bırakın. Sonda duruşma sırasında, platformu kaldırmak ve fare labirent içinde yüzmek 60 saniye vardır.
   3. Test sırasında, 4 sonda denemeler yapıyoruz. Prob denemeleri arasındaki farelerin bırakma noktasını değiştirin. Böylece, önceki prob deneme bundan akım probu deneme bırakma noktasını değiştirmek.
   4. Prob çalışmalar sırasında, hayvanın yol uzunluğunu izlemek için hayvan izleme yazılımı kullanın, hayvan labirent her kadranda geçirdiği zamanın yüzdesi ve bir hayvan daha önce platformed alana yüzer sayısı. Bir excel elektronik tablo "Veri analizi" sekmesine ve "Deneysel listesinin" altında "Su labirent" sekmesine ve doğrudan ihracat bu ölçümleri alın.
      Not: Bir yandan zamanlayıcı kullanımı da izleme yazılımı doğruluğunu sağlamak için yararlı olabilir.
   5. Önce bir prob deneme Davranışgün 6, 7, 8 ve 10. (Şekil 2) üzerine gizli eğitim platformu. Bu prob denemeler sonra, her gün eğitim gizli platformun 4 denemeler yapıyoruz. Böylece, günde 10 prob deneme sonra ek gizli platformu eğitim yapmazsanız, aksine bölüm 3'te anlatıldığı gibi ilk olarak, hemen aynı prosedürleri kullanarak tüm fareler için gizli bir platform eğitimi ardından bir soruşturma yapmak.

5. Analizler

1. Görünür Platform Eğitimi
   1. ANOVA'lar ayrı (a) yol uzunluğu için, (b) gecikme platformu bulmak, ve (c) arası konu değişken ve gün veya eğitim bloklar olarak (örneğin tedavi olarak ya da başka bir değişkene) transgen ile hız yüzmek tekrarlanan tedbirleri Davranış denek içi değişken. Not: Daha karmaşık tasarımlar için bir istatistikçi ile bir istişare yararlı olabilir. Örgütü hakkında bilgi ^8,13 bakınız düzgün alzheimer sık kullanılan modelleri ile bu görevi iktidara yeterli boyutları7 hastalığı.
   2. Performans Beceriksizlik
      1. Testin usul bileşenlerini elde ve gizli platform ve prob performansı müteakip istatistiksel analizler bu fareler çıkarmayın görsel veya motor beceriksizlik gösteren fareler, ya da hayvanlar da dahil olmak üzere, performans yetersiz fareler tanımlayın.
         1. Ortalama gecikme hesaplayın ve her fare görebilir platformu eğitim için son gün hız yüzmek. Bu motor veya görme engelli göstergesi olabileceğinden, grubun üzerinde 2 standart sapma anlamına yollarla fareler çıkarın.
         2. Belirlemek ve yönlendirmek için başarısız fareler kaldırmak veya kaçış kepçe takip ya da mantar vidalı yüzme ya da yüzer olarak anormal davranışlar sergileyen fareler.
2. Morris Water Maze Gizli Platformu Eğitim
   1. (A) yol uzunluğu tekrarlanan tedbirler ANOVA'lar Davranış, (b) gecikme gizli platformu bulmak için, (c) hız, ve (d) yüzde zamanı ya da yüzde yüzmekdenek içi değişken olarak arası konu değişken ve denemeler olarak transgen ile kadranda mesafe.
3. Sonda Denemeler
   1. Swim hız
      1. Denek içi değişken olarak arası konu değişken ve denemeler olarak transgen ile prob deneme karşısında yüzme hızına tekrarlayan ölçümler ANOVA'lar yürütün.
   2. Platform geçiş indeksi
      1. Diğer 3 kadranda eşdeğer konuma ortalama geçişleri - fare hedef konumu haçlar kez PCI = sayısını: Her fare için sonda deneme konfigürasyonu kullanarak platformu geçiş indeksi (PCI) aşağıdaki formül kullanılarak hesaplanır.
         Not: Daha fazla eğitimli bir platform konumu üzerinde geçişleri, ya thigmotaxic yüzme olmayan bir mekansal strateji ile gösterildiği gibi dört yerlerde üzerinde yaklaşık olarak eşit geçişleri belirtildiği gibi bu, fare mekansal arama stratejisi kullanıyor olup olmadığını belirlemek için yapılır.
      2. Davranış tekrarladıdenek içi değişken olarak aradaki konu değişken ve denemeler olarak transgen ile PCI önlemler ANOVA'lar.
   3. Yüzde süresi veya kadranda yüzde mesafesi
      1. Yüzde süresini hesaplamak veya her fare labirent dört çeyrek daireye harcıyor mesafe. Denek içi değişken olarak arası konu değişken ve denemeler olarak transgen ile zamanın yüzde veya mesafeye tekrarlayan ölçümler ANOVA'lar yürütün. Mekansal arama stratejisi kullanıldığını belirlemek için yüzde zamanı kullanın; hedef kadranda yaklaşık% 25 zaman bulguları fareler şans düzeyinde performans ve mekansal arama stratejisi kullanarak değil göstermektedir.
   4. O / N unutmadan
      1. Bir önceki günün son deneme platformu bulmak için gecikme prob deneme platform alanı kapısı gecikme karşılaştırın. Not: Sonda deneme platform kapısı gecikme platfor bulmak için gecikme önemli ölçüde daha uzun olması durumundaönceki gün gizli platformun son duruşma sırasında m, platform konumu sonra O / N unutma gerçekleşiyor.
4. Post Hoc Analizi
   1. Her duruşmada Transgenin post hoc karşılaştırmalar anlamlı RMANOVAs izleyin.

Yeni Test Ortamı için yeniden optimizasyon 6. Örnek

1. Ön işleme. Konut odasında öncesi taşıma yapıyoruz. Tüm oturum için bir taşıma arabası kapakları olmadan kafesleri yerleştirin.
   Not: Ön işleme prosedürünün değiştirilmesi için hedefleri daha kademeli işleyicisi manipülasyonlar ve pozlama ulaşım cihazlara tanıtmak (beher ve kepçe) ve zaman fareler bir kendi kafesinin mikroizolatör kapaklarının olmadan ve dış ev kafes içinde arttırmak için vardır açık alan ve parlak ışık koşulları.
   1. Gün 1 ve 2
      1. Fareler kafes olmak ellere gelmesini bekleyin, nazik dokunmadan, ardından, Dövme denetim ve kuyruk işaretleme kaldırdı suretiyle izledi. Ön işleme Günü 2 başlayarak, kapaklar ⁹ kaldırılmış ise yuva bina ve barınak için ek malzeme sağlamak için kafes içinde ek yuvalama malzemesini yerleştirin.
   2. 3. ve 4. günlerde
      1. Taşıma behere koyun kepçe ve ön işleme kutusunda görünür platformun bayrağı ve fareler deneme başına 2 dakika 2 denemeleri için keşfetmenizi sağlayacak.
      2. Ön taşıma sırasında bu protokolde su kullanmayınız. Aksine, kutu zemin karşılamak için yeterli temiz yatak içerir ve her iki cinsiyette denenmektedir eğer kadın ve erkek kirli çöp az miktarda kokulu olduğundan emin olun. Her gün çarşaf değiştirin.
   3. 5. Gün
      1. 20 saniye her hafif kirli çöp ve 3 denemeleri görebilir platformu bayrağı içeren ön-işleme kutusuna yerleştirin fareler. Ve kutudan fareler taşımak için beher ve kepçe kullanın.
2. Görünür Platform Eğitimi
   1. (Rutin Minnesota test ortamı için kullanılır) 27 ° C'de ayarlayın su sıcaklığı.
   2. Cued platformu edinme üzerine ev kafesine fareler dönün.
   3. 60 sn kadar fareler görünür bir platform elde etmek için izin verin.
   4. 5 gün boyunca günde 3 çalışmaların oluşan eğitimler yürütün.
3. Gizli Platform Eğitimi
   1. Görsel ipuçları değiştirin. Bir büyük perde işleyicisi belirsiz, ya ortadan kaldırmak veya havuzu çevreleyen dar başka perdeler yapmak dışında daha açık bir oda var şekilde. Oda hakkında ek nesneler koymayın (örneğin, açık raflar, beyaz bir sembol, bir siyah ve beyaz plaj topu, büyük siyah huniler, dizüstü bilgisayarlar ve siyah dolma hayvan siyah kumaş poster) dengelenmiş ama daha değişik görsel Cue'nun sonuçlanan, Daha önce kullanılan daha ayarlayın.
   2. Görünür bir platform Traini gizli platformu eğitimi 72 saat tamamlanmasının ardından başlayacakng, çalışmalar arasında, yaklaşık 30 dakikalık bir arayla.
   3. 8 gün boyunca 2 denemeleri oluşan eğitimler yürütün.
4. Sonda Denemeler
   1. Prob denemeleri 72 gizli eğitim denemeleri 8 Aşağıdaki hr, 12, ve 16.Include çalışmalarda 8-9 arasında 3 günlük bir aralığı ve eğitim 12-13 gerçekleştirin.
   2. 30 saniye süreyle prob süreyi ayarlayın.

Results

Biz Şekil 3 beta-amiloid (Tg2576 fareler) ve mutant P301L tau uzamsal referans hafızasında (RTG (TauP301L) 4510 fareler) (örn ^1,5,7,8). Etkilerini incelemek amacıyla Morris su labirenti kullanmış temsili sonuç motoru ve görsel yeteneklerini değerlendirmek için test ortamı A. kullanan öğrenme ve bellek ⁸ erişkin başlangıçlı P301L tau ifadesinin etkisini inceleyen çalışmada bildirilen, fareler, her eğitim bloğu oluşuyordu görünür platformu eğitim blokları karşısında karşılaş...

Discussion

MWM görev yaygın mekansal öğrenme ve hafıza değerlendirmek için kullanılır. Ancak, bu görevin sağlamlığı pek çok faktör tarafından etkilenir ve arka plan zorlanma ve test ortamı hem de optimizasyon gerektirir. Şekil 4, aynı eğitim protokolü gösterilen ve iki farklı test odaları (eşdeğer boyut ve düzeni) kullanılan görsel ipuçları olarak uygulanan önemli ölçüde farklı prob performansını vermiştir. Test odasına birçok özellik mekan hissi ⁴ katkıda bulunabilecek bu yana, iki oda testi daha zor y...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
İzleyici İzleme yazılımı	Biobserve		Bu özel yazılım bir gereklilik değildir - başka izleme sistemleri de mevcuttur
Ön işleme havuzu			Boyutlar yaklaşık 1 fit genişlik x 2 fit uzunluk x 1,5 fit derinlik
Plastik beher			1 L
Kepçe
Küçük ağ
Kronometre
Toksik olmayan beyaz tempera boya			Herhangi bir renk boya kullanılabilir; ancak, çoğu izleme yazılımı programı, boyanın hayvanın rengiyle kontrast oluşturmasını gerektirir.
Görünür platform			Renk, labirentinkiyle kontrast oluşturmalıdır
Perde çubuğu
Perdeler
Dairesel küvet			Genellikle beyaz renklidir; yaklaşık 4 fit çapında
Gizli platform			Su ile aynı renge boyanmış