Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Oksidatif Stres Direnci Ölçüm

15.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52746

⸱

9 Mayıs 2015

 , 
1Goodman Cancer Research Center, McGill University, 2Department of Biochemistry, McGill University

Bu makalede

Düzeltme bildirimi

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Özet

C. elegans, oksidatif stres direncinde yer alan sinyal iletim yolaklarını incelemek için çekici bir model organizmadır. Burada, 96 oyuklu plakada birkaç oksitleyici ajan kullanarak sıvı fazdaki C. elegans hayvanlarının oksidatif stres direncini ölçmek için bir protokol sunuyoruz.

Özet

Üretim ve reaktif oksijen türlerinin detoksifikasyon arasındaki dengesizliğin sonucudur Oksidatif stres, kardiyovasküler ve nörodejeneratif hastalıklar, diyabet, yaşlanma ve kanser gibi kronik insan bozuklukları, büyük bir katkıda bulunuyor. Bu nedenle, hücre sistemlerinde değil, aynı zamanda bütün organizmalar kullanılarak sadece oksidatif stres çalışma için önemlidir. C. elegans yüksek evrimsel korunmuş olan oksidatif stres sinyal iletim yollarının, genetiğinin incelemek için cazip bir model organizmadır.

Burada, biz C. oksidatif stres direnci ölçmek için bir protokol sağlamak sıvı içinde elegans. Bu tür paraquat (PQ) ve H2O 2 Kısaca, ROS-indükleyici reaktifler M9 tampon içinde çözülür ve çözeltiler 96 gözlü bir mikrotitre plakasının gözenekleri içinde bölünür. Senkronize L4 / genç yetişkin C. elegans hayvanlar oyuklara transfer edilir (5-8 hayvan / oyuk) ve hayatta kalma ölçülürher saat en fazla solucanlar ölene kadar. Verilerin yanlış yorumlanmasına yol açabilecek oksidatif stres üzerine hayvanların davranışlarını etkileyebilecek yaşlanma, plakalarda streslerinin düşük konsantrasyonu kullanılarak bir oksidatif stres direnci deneyi yaparken. Bununla birlikte, bu tarifnamede tarif edilen deneyde, bu sorun yalnızca L4 / genç yetişkin hayvanlar kullanılmaktadır çünkü pek mümkün değildir. Ayrıca, bu protokol, ucuz ve sonuçlar genetik ekranlar cazip bu teknik kılan bir gün içinde elde edilmektedir. Genel olarak, bu oksidatif stres ile ilişkili insan bozukluklarının daha iyi karakterizasyonu tercüme edilebilir oksidatif stres sinyal iletim yollarını, anlamanıza yardımcı olacaktır.

Giriş

Ökaryotlarda, mitokondri elektron taşıma zincirinde yer alan oksidatif fosforilasyon ATP şeklinde enerji üretimi temel sürücüdür. Reaktif oksijen türleri (ROS) Bu işlem doğal bir yan ürünü bulunmaktadır. Sinyal molekülleri olarak önemli bir rolü olmasına rağmen, aşırı ROS DNA hasarı protein karbonilasyonu ve lipid oksidasyonuna neden olabilir. ROS üretimi ve detoksifikasyon arasında bir dengesizlik enerji tükenmesi, hücresel hasara yol açan oksidatif strese neden olur ve hücre ölümünü 1,2 tetikler. Oksidatif stres, yaşlanma ve kanser, diyabet, kalp-damar ve nörodejeneratif hastalıklar 3-9 dahil olmak üzere birçok yaşamı tehdit eden hastalıkların gelişimine katkıda bulunur.

Hücreler uygun ROS düzeylerini korumak için ve oksidatif hasara karşı 1,2 bileşenlerinin korumak için enzimatik ve non-enzimatik savunma stratejilerini geliştirmişlerdir. Süperoksit dismutaz (SOD) enzim conve ilk hareketDaha sonra, katalaz veya peroksidaz enzimleri tarafından suya dönüştürülür H2O 2, RT süperoksit. Sigara enzimatik savunma stratejilerinin daha çok temel hücresel bileşenleri korumak makromoleküllerle, karşılaştırıldığında ROS ile daha hızlı reaksiyona molekülleri içerir. ROS enzimler detoks koruyucu rolüne rağmen, bazı ROS molekülleri antioksidan savunma mekanizmalarını kaçış ve oksidatif hasara yol açar. Algılama, onarım ve hasarlı hücre bileşenlerinin bozulması oksidatif strese 1,2 sırasında gerekli savunma stratejileri vardır.

Stres direnci ve özellikle oksidatif stres yer alan sinyal yolları çok evrimsel 10,11 muhafaza edilir. Organizma koşullar sadece kısmen çoğaltılmış hücre kültürü deneyleri, 12,13 büyük önem taşımaktadır model organizmaların oksidatif stresin çalışmanın aksine. C elegans cul kolay ve ucuz olabilir serbest yaşayan nematod olanAgar medya üzerinde bir bakteri çim tured. Küçük boyutta normal olarak (yaklaşık 1 mm uzunluğunda) ve genetik manipülasyonlar kolaylaştıran kendiliğinden gübre hermafrodit olarak büyür. Bu hızlı bir yaşam döngüsü ve yüksek üreme kapasitesine, nesilden başına yaklaşık 300 yavru üreten o büyük ölçekli genetik ekranlar 14 gerçekleştirmek için güçlü bir araç yapma vardır. C. C. elegans genomunun tam dizilenmiş ve genlerin% 40-50, insan hastalığı ile ilişkili genlerin 15-18 homologları olduğu tahmin edilmektedir. RNAi kullanılarak ilgi genlerinin yok etme, hızlı ve C kolay elegans. Gene aşağı düzenleme E. hayvan besleme ile elde edilebilir İlgi 19 mRNA hedef çift iplikçikli RNA eksprese eden bir plazmide E. coli bakterileri. Bu nedenle, büyük ölçekli RNAi ekranlarını kullanarak gen fonksiyonu belirlenmesi kanseri 20,21 dahil olmak üzere insan hastalıklarının anlaşılması üzerinde büyük etkisi vardır.

O çalışmalarıC. xidative stres direnci elegans oksidatif stres 13,22 direnç muhafaza mekanizmaları tanımlanmasına yol açmıştır. Belirlenen bazı yollar hipoksi, ısı ve ozmotik stres gibi diğer stresler yanı gibi uzun ömürlü ve direnci modüle ortak yollar vardır. Bu yollar, insülin sinyalizasyon, TOR sinyalizasyon ve Otofaji sayılabilir. Diğer önemli yollar gibi, ya da hasar onarım gibi ısı şoku proteinleri ve şaperon 11,13,22 olarak süperoksit dismutaz enzim ve katalaz enzimleri olarak ROS detoksifikasyon içerir.

Bu protokol C. oksidatif strese karşı direnci nasıl belirleneceği açıklanır sıvı içinde elegans. Daha önce C'de kaybı ortaya FLCN-1 (ok975) oksidatif strese karşı artmış bir direnç göstermiştir beri protokol göstermek için FLCN-1 (ok975) ve vahşi tip hayvanlara kullanılan elegans 23. Ayrıca, bu daha iyi direnç gösterme bağlı olduğunu göstermiştirAMPK ve Otofaji hücresel biyoenerjitiklerinin artırır ve gerilme direnci 23 teşvik eden bir sinyal ekseninde. PQ reaktif oksijen türleri 24 üretmek için elektron taşıma zinciri engelleyen bir oksidatif stres olduğunu. Aynı deney, adapte edilebilir ve ROS kaynakları veya ROS üreten bileşikler, H2O 2 ve rotenone gibi kullanılabilir. Benzer deneyler, PQ düşük konsantrasyonlarda 25,26 kullanılan plakalar üzerinde geliştirilmiştir. Bu deneyde avantajı çok hızlı ve sonuçlar bir gün içinde elde edilebilir olmasıdır. Buna ek olarak, 96 gözlü plakalar içinde oksidatif stres direnci deneyi gerçekleştirmek için kullanılan sıvının toplam hacmi PQ-ihtiva eden plakalar hazırlamak için kullanılır hacmi ile karşılaştırıldığında düşüktür. Bu nedenle, kullanılan PQ miktarı sıvı analizde ise ucuz tahlil işler ve zehirli atıkların üretimini sınırlayan, düşük. Bununla birlikte, levha tahlilleri ile karşılaştırıldığında bu analizde sınırlamaları la bulunmaktadırSıvı deneyde gıda ve sıvı oksijen daha düşük bir konsantrasyonda CK hava ile karşılaştırıldığında. Bunlar bazı durumlarda, sonuçlar etkileyebilecek önemli faktörlerdir. Bu nedenle, bu tahlilde elde edilen sonuçlar desteklemek için tavsiye edilir, oksidatif stres direnci diğer yöntemlerle tekrarlanabilirlik teyit etmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Reaktifler 1. Hazırlık

  1. C. medyanın hazırlanması (Bu durumda, vahşi tip hayvan ve FLCN-1 (ok975) mutant hayvanlarda) elegans büyümesi.
    1. Tris HCI ve 5.5 g Tris baz, 2.4 g, Bactopetone 31 g, NaCl 20 g ve kolesterol 0.08 g 'ını ihtiva Youngren tek Bacto-pepton (MYOB), kuru bir karışım Modifiye hazırlayın. Sallayarak iyice karıştırın.
      NOT: Bu karışım MYOB ortamı 10 L hazırlamak için yeterlidir.
      Not: normal büyüme ortamı (NGM) plakaları MYOB plakalar 27 yerine kullanılabilir. Bununla birlikte, plakaların aynı tip suşlar arasında bağımsız tekrarlar arasında geçerli bir karşılaştırması için kullanılmalıdır. Bu protokol, biz sadece MYOB plakaları kullanılır.
    2. MYOB kuru karışımın 6 g, agar 17 g eklenerek MYOB ortamı 1 L hazırlayın ve 122 ° C 'de 45 dakika süre ile H2O ve otoklav ile 1 L'ye tamamlanır. Plakaları dökün ve 2 gün boyunca oda sıcaklığında kurumaya bırakın.
    3. Steril teknik kullanılarak, kültürlerdeki 100 ml'sini aşılamakE. LB sıvı ortamında yeniden E. coli OP50 bakteri ve 37 ° C 'de O / N büyür.
    4. E. Tohum MYOB plakaları E. coli OP50 bakterileri. 48 st için oda sıcaklığında büyümesi izin verin.
  2. RNAi kullanılarak gen baskılanması Hazırlık
    1. MYOB RNAi besleme tabak hazırlayın. Adımlar 1.1.1 ve 1.1.2 gibi devam edin. Otoklav sonra, ortam yaklaşık 55 ° C'ye kadar soğutulur ve eklemek için izin 1 M izopropil β-D-1-tiogalaktopiranosid (IPTG) ve 100 mM ampisilin, 1 ml 1 mi.
    2. Streak E. E. coli HT115 kontrol EV veya agar plakaları ampisilin üzerinde FLCN-1 spesifik RNAi (50 ug / ml) / tetrasiklin (15 ug / ml) ya da ifade eden bir plazmid ile transforme edilmiş bakteriler. 37 ° C'de, kültür O / N büyütün.
    3. Koloniler seçin ve E. aşılamak E. coli HT115 kontrol EV ya da belirli bir RNAi 1 FLCN ve ya 37 ve # LB / ampisilin (50 ug / ml), orta ve O / N kültürünün yetiştirilmesi eksprese eden bir plazmid ile transforme edilen bakteri176 ° C.
    4. E. ile Tohum plakalar E. coli HT115 EV bakteri veya HT115 FLCN-1 RNAi bakteri.
      NOT: Kullanımdan önce oda sıcaklığında plakaları 48 saat tutun. Besleme RNAi demonte etkili ise, DS-RNA 28 teslim diğer yöntemleri kullanabilirsiniz.
  3. Parakuat (PQ) ile oksidatif stres oluşturma:
    1. PO 4 KH 2, 3 g karıştırılarak M9 tampon hazırlanması, Na 2 6 g HPO 4, 5 g NaCI ve MgSO 4 0.25 g · 7 H2O Damıtılmış su ile 1 L'ye getirin. Oda sıcaklığında 122 ° C ve mağaza şişe 45 dakika süreyle otoklavlanmaktadır çözeltisi.
    2. Analiz gününde, M9 / PQ-içeren solüsyon hazırlanır. (M9 4 ml tampon içinde eritildi PQ 0,1028 g oyuk başına M9 / PQ 40 ul ile bütün bir 96 gözlü plakalar doldurur) Bu protokol için, 100 mM PQ kullanın.
      DİKKAT: PQ tehlikeli ve son derece toksik bir bileşiktir. Uygun kurallarına göre işlemek.
      NOT: İlk yeni s çalışanTren veya yeni bir durum, bu 7-10 saat içinde hayvanları öldürmek için kullanılacak en iyi konsantrasyonunu belirlemek için PQ artan konsantrasyonları hayatta kalma tahlil için tavsiye edilir.

Yaş senkronize L4 Nüfus 2. Hazırlık

  1. E. ile seribaşı taze MYOB plaka Transferi 20 gebe yetişkin çift cinsiyetli E. coli OP50 bakterileri. Tahlil sırasında gerekli solucanlar sayısına dayalı birkaç tabak hazırlayın.
  2. Onları 6 saat sonra anneleri kaldırmak platin tel solucan kıracağı kullanarak yumurtalarını bırakmak için izin verin. Bıraktıkları yumurta sayısını değerlendirmek için mikroskop altında plakaları kontrol edin.
  3. Yumurtaların açılması ve 48 saat boyunca 20 ° C'de büyümeye izin verin. Bu zamanda, hayvanlar, bir geç L4 / genç yetişkin aşamasındadır. Aynı sahne hayvanları seçin ve PQ çözüm içeren kuyulara aktarın.
    NOT: 48 saat inkübasyon, sadece yabani tipte hayvanlara benzer şekilde büyümeye mutantlar için geçerli olduğundan, bu gelişim takip etmek önemlidirYeni test mutantların oranı, vahşi tip gelişme hızına aksi halde, başka bir zaman çizgisi kullanılmalıdır uygun sağlamak.
  4. Alternatif olarak, senkronizasyon tekniklerini kullanın. Hipoklorit çözeltisi kullanılarak L1 larvalarının solucanların senkronize popülasyonunu üretmek (25 ml su,% 5.25 sodyum hipoklorit 125 mi, 4 M NaOH, 50 ml, ışıktan izole etmek için alüminyum folyo ile bir şişe sarın). Yoğun bir ağartıcı tahlil sırasında hayvan davranışını etkiler olabilir Bununla birlikte, bu deney için, bu, tavsiye edilmez.
    DİKKAT: kurallarına göre hipoklorit solüsyonu tutun.
    Not: aşağı ilgilenilen geni düzenleyen özel RNAi bakteri ile ekim yapılmış RNAi plakalara annelerin transferi hariç olmak üzere, bölüm 2'de tarif edildiği gibi çift cinsiyetli eşitlemeye RNAi kullanırken. RNAi ile demonte zayıf olduğunda, birden nesiller için beslenme tavsiye edilir.

3. Oksidatif Stres Direnci Deneyi

  1. Pipet 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna (taze elde edilmiş) 100 mM PQ çözeltisi 40 ul. Her durumda (tedavi, mutant, vs.) replike olarak en az 12 kuyu kullanın. Bir platin tel solucan maşası kullanarak, her iyi başlangıç ​​ve bitiş zamanlarını gösteren 5-8 L4 larvaları hayvanları transfer.
  2. Başka bir koşul başlatırken, başlangıç ​​ve bitiş zamanlarını not edin. Başlangıç ​​zamanından itibaren bir saat sonra ölü hayvanları solucanlar aktarılması ve puanlama arasındaki inkübasyon süresi içinde 20 ° C'de plaka koyun.
  3. Diseksiyon mikroskobu kullanarak, hayatta kalma her saat saymak. Yavaşça saymak başlamadan önce plakayı sallayın. Ölü hayvanlar gibi, hatta yüksek yoğunluklu ışık lekelenme sonra, hareket etmeyen solucanlar belirtiniz. Ayrıca canlı hayvanların sayısını göstermektedir.
    NOT: Yüksek büyütmede solucan şekli, kuyrukları ve baş hareketi baktığımızda, diri ölü solucanlar belirlemeye yardımcı olur.
  4. En solucanlar ölene kadar bu adımı her saat tekrarlayın.

4. Every Time Point Survival Yüzde Belirlenmesi

  1. Iyi her transfer hayvanların toplam sayısı ekleyerek durum başına toplam hayvan sayısını hesaplayın. Hasarlı veya transfer etmesi halinde öldürülen hayvan geçiyoruz.
  2. Her zaman noktası için, (12 kuyuda ölü hayvanların toplamı) durumuna başına ölü hayvanların toplam sayısını hesaplamak. Her zaman noktası için, ve hayatta kalma (100 eksi yüzde ölümü) yüzdesi (ölü hayvanlar 100 ile hayvanların toplam sayısına bölünmesiyle ve çarpılır sayısı) ölüm yüzdesini hesaplar.
  3. Bu deney en az 3 bağımsız kez tekrarlayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Karşılaştırılması vahşi tip C. elegans FLCN-1 (ok975) mutant hayvanlar

Burada yabani tip C direncini belirlemek için 100 mM PQ kullanılan oksidatif stres, ısı ve anoksi 23 karşı gösterilmiştir FLCN-1 (ok975) ile karşılaştırıldığında elegans hayvanlar. Tedavi 4 saat, yabani tip% 48.3 sonra hayatta olarak FLCN-1 (ok975) hayvanlarda% 77.8 hayatta kalma ile karşılaştırıldığında. Beklendiği gibi, FLCN-1 (ok975) mutant hayvanlar yaba...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

C. elegans kolaylıkla kültürlenebilir yana in vivo genetik olarak oksidatif stres direnci çalışma için çekici bir model organizma ve hızlı bir şekilde genetik olarak özdeş yavruların çok sayıda yol açar. Oksidatif stres direncini ölçmek için birden çok yöntem, daha önce tarif edilmiştir ve böyle PQ, rotenone, H2O 2 ve juglon 25,26,29-32 gibi çeşitli ROS kaynakları ile kültür levhaları takviyesi dayanmaktadır. Burada 100 mM PQ kullanılarak 96 yuvalı plakalar içinde sıvı oksidatif s...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Biz C. Caenorhabditis Genetik Merkezi'nden kabul elegans suşları. Finansman desteği Terry Fox Araştırma Enstitüsü tarafından sağlandı. Biz de Rolande ve Marcel Gosselin Lisans Bursu ve McGill Entegre Kanser Araştırma Eğitim Programı kanser araştırma FRN53888 içinde CIHR / FRSQ eğitim hibe EP verilen destek için minnettarım.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Agar bakteriyolojik sınıfMulticell800-010-LG
Bakteriyolojik peptonOxoidLP0037
Sodyum klorür biyoteknoloji sınıfıBioshop7647-14-5
KolesterolSigmaC8503-25G
UltraPure tris hidroklorürInvitrogen15506-017
Tris aminometanBio Basic Canada Inc77-86-1
IPTGSanta Cruz Biyoteknolojisc-202185A
AmpisilinBioshop69-52-3
Maya özüBio Basic Inc.8013-01-2
Metil violojen diklorür hidratAldrich kimyası856177-1G
Petri kabı 60 x15 mmFisherFB0875713A
Pipeti 10 mlFisher1367520
Potasyum fosfat monobazikG-BiosciencesRC-084
Magnezyum sülfat heptahidratSigmaM-5921
Sodyum fosfat dibazikBioshop7558-79-4
Discovery v8 stereo zeiss mikroskobu
96 iyi şeffaf mikrotitre plakası
flcn-1 RNAi kaynağıAhringer Kütüphanesi

Kaynaklar

  1. Schieber, M., Chandel, N. S. ROS function in redox signaling and oxidative stress. Curr Biol. 24, R453-R462 (2014).
  2. Alfadda, A. A., Sallam, R. M. Reactive oxygen species in health and disease. J Biomed Biotechnol. 2012, 936486(2012).
  3. Finkel, T., Holbrook, N. J. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing. Nature. 408, 239-247 (2000).
  4. Di Carlo, M., Giacomazza, D., Picone, P., Nuzzo, D., San Biagio, P. L. Are oxidative stress and mitochondrial dysfunction the key players in the neurodegenerative diseases. Free Radic Res. 46, 1327-1338 (2012).
  5. Gandhi, S., Abramov, A. Y. Mechanism of oxidative stress in neurodegeneration. Oxid Med Cell Longev. 2012, 428010(2012).
  6. Trushina, E., McMurray, C. T. Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases. Neuroscience. 145, 1233-1248 (2007).
  7. Touyz, R. M., Briones, A. M. Reactive oxygen species and vascular biology: implications in human hypertension. Hypertens Res. 34, 5-14 (2011).
  8. Gorrini, C., Harris, I. S., Mak, T. W. Modulation of oxidative stress as an anticancer strategy. Nat Rev Drug Discov. 12, 931-947 (2013).
  9. Sosa, V., et al. Oxidative stress and cancer: an overview. Ageing research reviews. 12, 376-390 (2013).
  10. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. Reactive Oxygen Species and Aging in Caenorhabditis elegans: Causal or Casual Relationship. Antioxid Redox Signal. 13, 1911-1953 (2010).
  11. Baumeister, R., Schaffitzel, E., Hertweck, M. Endocrine signaling in Caenorhabditis elegans controls stress response and longevity. J Endocrinol. 190, 191-202 (2006).
  12. Markaki, M., Tavernarakis, N. Modeling human diseases in Caenorhabditis elegans. Biotechnol J. 5, 1261-1276 (2010).
  13. Rodriguez, M., Snoek, L. B., De Bono, M., Kammenga, J. E. Worms under stress: C. elegans stress response and its relevance to complex human disease and aging. Trends Genet. 29, 367-374 (2013).
  14. Hope, I. A. Practical approach series. , Oxford University Press. 282(1999).
  15. C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282, 2012-2018 (1998).
  16. Ahringer, J. Turn to the worm! Current opinion in genetics & development. 7, 410-415 (1997).
  17. Wheelan, S. J., Boguski, M. S., Duret, L., Makalowski, W. Human and nematode orthologs--lessons from the analysis of 1800 human genes and the proteome of Caenorhabditis elegans. Gene. 238, 163-170 (1999).
  18. Culetto, E., Sattelle, D. B. A role for Caenorhabditis elegans in understanding the function and interactions of human disease genes. Hum Mol Genet. 9, 869-877 (2000).
  19. Fire, A., et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
  20. Lamitina, T. Functional genomic approaches in C. elegans. Methods Mol Biol. 351, 127-138 (2006).
  21. Poulin, G., Nandakumar, R., Ahringer, J. Genome-wide RNAi screens in Caenorhabditis elegans: impact on cancer research. Oncogene. 23, 8340-8345 (2004).
  22. Moreno-Arriola, E., et al. Caenorhabditis elegans: A Useful Model for Studying Metabolic Disorders in Which Oxidative Stress Is a Contributing Factor. Oxid Med Cell Longev. , 705253(2014).
  23. Possik, E., et al. Folliculin regulates ampk-dependent autophagy and metabolic stress survival. PLoS Genet. 10, e1004273(2014).
  24. Fukushima, T., Tanaka, K., Lim, H., Moriyama, M. Mechanism of cytotoxicity of paraquat. Environ Health Prev Med. 7, 89-94 (2002).
  25. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. Superoxide dismutase is dispensable for normal animal lifespan. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 5785-5790 (2012).
  26. Schulz, T. J., et al. Glucose restriction extends Caenorhabditis elegans life span by inducing mitochondrial respiration and increasing oxidative stress. Cell Metab. 6, 280-293 (2007).
  27. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  28. Timmons, L. Delivery methods for RNA interference in. C. elegans. Methods Mol Biol. 351, 119-125 (2006).
  29. Wang, B. Y., et al. Caenorhabditis elegans Eyes Absent Ortholog EYA-1 Is Required for Stress Resistance. Biochemistry (Mosc). 79, 653-662 (2014).
  30. Paz-Gomez, D., Villanueva-Chimal, E., Navarro, R. E. The DEAD Box RNA helicase VBH-1 is a new player in the stress response in C. elegans. PLoS One. 9, 97924(2014).
  31. Ward, J. D., et al. Defects in the C. elegans acyl-CoA synthase, acs-3, and nuclear hormone receptor, nhr-25, cause sensitivity to distinct, but overlapping stresses. PLoS One. 9, 92552(2014).
  32. Staab, T. A., Evgrafov, O., Knowles, J. A., Sieburth, D. Regulation of synaptic nlg-1/neuroligin abundance by the skn-1/Nrf stress response pathway protects against oxidative stress. PLoS Genet. 10, e1004100(2014).
  33. Greer, E. L., et al. An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in. C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).
  34. Allen, E., Walters, I. B., Hanahan, D. Brivanib, a dual FGF/VEGF inhibitor, is active both first and second line against mouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance to VEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, 5299-5310 (2011).
  35. Apfeld, J., O'Connor, G., McDonagh, T., DiStefano, P. S., Curtis, R. The AMP-activated protein kinase AAK-2 links energy levels and insulin-like signals to lifespan in C. elegans. Genes Dev. 18, 3004-3009 (2004).
  36. Lee, H., et al. The Caenorhabditis elegans AMP-activated protein kinase AAK-2 is phosphorylated by LKB1 and is required for resistance to oxidative stress and for normal motility and foraging behavior. J Biol Chem. 283, 14988-14993 (2008).
  37. Honda, Y., Honda, S. The daf-2 gene network for longevity regulates oxidative stress resistance and Mn-superoxide dismutase gene expression in Caenorhabditis elegans. FASEB J. 13, 1385-1393 (1999).
  38. Restif, C., Metaxas, D. Tracking the swimming motions of C. elegans worms with applications in aging studies. Med Image Comput Comput Assist Interv. 11, 35-42 (2008).
  39. Buckingham, S. D., Sattelle, D. B. Fast, automated measurement of nematode swimming (thrashing) without morphometry. BMC Neurosci. 10, 84(2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Düzeltme


Formal Correction: Erratum: Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.

A reference was corrected in the publication of Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates. There was an error with reference 34 in the Citations section. It has been updated from:

Allen, E., Walters, I.B., Hanahan, D. Brivanib a dual FGF/VEGF inhibitor,is active both first and second line againstmouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance toVEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, (16) 5299-310 (2011).

to:

Allen, A. T., Maher, K. N., Wani, K. A., Betts, K. E., & Chase, D. L. Coexpressed D1- and D2-like dopamine receptors antagonistically modulate acetylcholine release in Caenorhabditis elegans. Genetics. 188, 579-590 (2011).

Etiketler

96 kuyucuklu Mikrotitrasyon PlakasıParaquat UygulamasıSağkalım AnaliziSenkronize L4 Genç ErişkinDiseksiyon MikroskobuM9 TamponuRNA InterferansıGenetik Taramalar
Oksidatif Stres Direnci Ölçüm
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.