Bu makale, yetişkin farelerde ön beyin bıçak yaralanması oluşturmak için ayrıntılı bir protokolü açıklamaktadır. Bıçak yaralanması, daha sonra standart immünohistokimya yöntemleriyle incelenebilen ciddi reaktif gliozis ve glial skar oluşumuna neden olur.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
CNS'nin yaralanmasını takiben, astrositler topluca reaktif astrogliozis olarak adlandırılan çok çeşitli biyokimyasal, morfolojik ve moleküler değişikliklere uğrarlar. Reaktif astrositler, sırasıyla nöral onarımı inhibe eden ve teşvik eden hem enflamatuar hem de koruyucu etkiler gösterir. Reaktif astrogliozisin çeşitli fonksiyonel özelliklerinin altında yatan mekanizmalar iyi anlaşılmamıştır. Bu mekanizmaların daha iyi anlaşılması, yaralı CNS'yi tedavi etmek için terapötik stratejiler geliştirmek için kritik öneme sahiptir. Burada, bir ön beyin bıçak lezyonu kullanarak yetişkin fare ön beyninde reaktif astrogliozu tetiklemek için bir yöntem gösteriyoruz. Bu lezyon modeli basit, güvenilirdir ve yaralanmayı oluşturmak için sadece stereotaksik bir cihaz ve bir neşter bıçağı gerektirir. Bıçak lezyonlarının ön beyinde bir yaralanma modeli olarak kullanımı iyi bilinmektedir ve nöronal dejenerasyon, nöroinflamasyon ve kan beyin bariyerindeki (BBB) bozulmalar gibi çok çeşitli nöropatolojik sonuçları ele alan çalışmalara uygundur. Bu nedenle, ön beyin bıçak yaralanması modeli, CNS'nin travmaya yanıtı üzerine çok çeşitli çalışmalar için uygulanabilecek güçlü bir araç olarak hizmet eder.
Giriş
Yaralı CNS'yi tedavi etmek için başarılı tedaviler geliştirmenin en büyük zorluğu, travma tarafından tetiklenen karmaşık çok hücreli olayların tam olarak anlaşılmamasıdır. Reaktif astrositler, yeni tedaviler için umut verici bir hedef olarak giderek daha fazla kabul görmektedir1. Tarihsel olarak nöral onarıma düşman olarak kabul edilse de, reaktif astrositler artık enflamatuar süreçlerin zayıflamasını ve ikincil hasarı ve nörodejenerasyonu2-6'nın sınırlamasını içeren karmaşık, çok hücreli bir nöroprotektif yanıtın kritik bileşenleri olarak kabul edilmektedir. Reaktif gliozisin nöropatolojik özellikleri uzun zamandır iyi tanımlanmış olmasına rağme....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Karışık C57BL / 6 arka plan üzerine Yetişkin (3-4 aylık) erkek fareler bu protokol kullanıldı. Hayvanlar, 12 saat aydınlık / karanlık döngüsünde tutuldu ve gıda ve suya serbest olarak ulaşmalarına izin verilmiştir. Bu protokolde yapılan tüm işlemler Drexel Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanan protokollere göre gerçekleştirilmiştir.
1. Cerrahi Alan hazırlanması
- % 70 etanol ile, cerrahi tablo dezenfekte, daha sonra, emici ped ile tüm cerrahi tezgah kapağı ve stereotaksik bitişik cerrahi aletler sağlayabilir.
- Manipülatör kolunun olmadan stereotaksik ekipman ayarlayın. Stereotaksik ıs....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu prosedürü geçiren hayvanlar gerekmez, çünkü post-operatif bakım uzman, kısa veya uzun süreli zaman sağ kalım süreleri kolayca yaralanma sonrası akut veya kronik patolojiyi araştırmak için ihtiyaca göre, çalışmaya dahil edilmiştir. Böyle GFAP ve soma hipertrofisi artışı gibi reaktif gliozis temel özellikleri, gibi erken yaralanma sonrası 2-3 gün olarak görülebilir. Reaktif astrositlere için çoğalması zirve faz yaralanma 10 şu günlerde 3-5 sırasında. Aşağıda gösterilen temsilcisi sonuçları 7 gün önce bir bıç.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu kafatası ya da altta yatan dura delme sırasında hasar görmemesi çok önemlidir. Patlak değil kafatası sağlamak için sondaj yaparken hafif baskı uygulayın. Dura sağlamak için kafatası parçasını kaldırma kemik ile kaldırdı değilken ek olarak, dikkatli olunmalıdır.
ön beyin bıçak yaralanması modelleri burada MSS bir delici yaralanma nitelendirdi. Böyle FPI veya CCİ olarak TBI modellere göre daha az klinik çevrilebilir olsa da, ön beyin bıçak lezyon modeli ayrık MSS hakaret tarafından tetiklen.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Teknik yardım için Katherine Clark'a teşekkür ederiz. A.D.R.G. kısmen 5K01MH097957-03 tarafından finanse edilmektedir
.....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Stereotax | Harvard Aparatı | 726049 | |
| Yüksek hızlı mikro matkap | Harvard Aparatı | 724950 | |
| paslanmaz çelik neşter bıçağı, #11 | MedVet | JOR581S | |
| 5/45 açılı forseps | Güzel Bilim Araçları | 11251-35 | |
| Jelköpük sünger 12 cm x 7 mm | Fisher | NC9841478 | |
| Rb anti-GFAP | DAKO | Z033429-2 | Seyreltme - 1:20.000 (parlak alan); 1:1.000 (floresan) |
| Shp anti-BrdU | Abcam | ab1893 | Seyreltme - 1:20.000 (parlak alan); 1:500 (floresan) |
| Biyotinile keçi tavşan karşıtı | Vektör Laboratuvarları | BA-1000 | Seyreltme - 1:400 (parlak alan) |
| Biyotinile tavşan anti-koyun | Vektör Laboratuvarları | BA-6000 | Seyreltme - 1:400 (parlak alan) |
| Alexafluor 488 keçi anti-tavşan | Yaşam Teknolojileri | A-11008 | Seyreltme - 1:400 (parlak alan) |
| Alexafluor 568 eşek anti-koyun | Yaşam Teknolojileri | A-21099 | Seyreltme - 1:1.000 (floresan) |
| DAPI Nükleik Asit Leke | Yaşam Teknolojileri | D3571 | Seyreltme - 1:1.000 (floresan) |
| Kresil Menekşe Asetat | Sigma Aldrich | C5042-10G | Seyreltme - %1 (parlak alan) |
Kaynaklar
- Hamby, M. E., Sofroniew, M. V. Reactive astrocytes as therapeutic targets for CNS disorders. Neurotherapeutics. 7 (4), 494-506 (2010).
- Bush, T. G., et al. Leukocyte infiltration, neuronal degenerati....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
