Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) amacı çoklu doku parafin bloklar bireysel doku tanımlanmasında yardımcı olmak için bir oryantasyon aracı olarak işlev etmektir. Bu protokoller, ortak, düşük maliyetli histolojisi malzemelerden kolayca inşa edilmiş ve parafin bloklar ve kesitlerde güvenilir bir görsel belirteç olarak hizmet eder gösterilmektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Doğru DOKU Çok doku blokları her zaman nokta
Bu makalede
Özet
Özet
Çok doku parafin blokları verimlilik artışı, deneysel bütünlüğü ve azaltılmış zaman ve maliyet ile yüksek verimlilik analizi sağlar. Doku mikrodizileri çoklu doku parafin bloklar çoğunluğunu oluşturan, ancak giderek, araştırmacılar planlama ve teçhizat önemli yatırım yapmadan doku mikrodizilerinin avantajları birçok sağlayabilir birden bireylerden daha dokuları içeren olmayan dizilmiş blok kullanıyor. Herhangi bir çok doku analizi önemli bir bileşeni, her bir doku tanımlamak için kullanılan yönlendirme yöntemidir. Yöntemler uygun oryantasyon ve çoklu doku blokları dokuların belirlenmesi korumak için mevcut olmasına rağmen, pek çok, bir dizi içindeki değerli alanı tüketebilir dizilmemiş bloklar için çok uygun değildir ve / veya standart histoloji laboratuarda üretilmesi zordur. Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) açıkça parafin blok ve tüm doku kesitlerinde fo görünür basit, düşük maliyetli yönlendirme aracıdizilmiş olan ve olmayan dizilmiş düzenleri r güvenilir örnek tanımlama. Nokta o dokuya doğrudan bir değişiklik gerektirmez olmayan dizilmiş blokları için varolan yönlendirme yöntemlerine göre avantajlar sağlamaktadır, doku parçalarının düzenlemesinde esneklik sağlar.
Giriş
Tek bir parafin blok içinde birden kişilerden doku örnekleri embed yeteneği, tedavi ve bireyler arasında kolay yan yana karşılaştırma sağlayan slaytlar arasındaki değişkenliği ortadan kaldırır ve kesit ve örneklerin boyanması maliyetini ve iş yükünü azaltır. Bu çok-doku blokları tipik olmayan bir dizi düzeninde birden bireylerden alınan doku içeren her iki doku mikrodizileri (TMA) ya da parafin bloklar olarak üretilir. Örnek kimlik Bakım herhangi bir çok doku analizi başarısı için kritik öneme sahiptir. Araştırmacılar, analiz verimliliğini artırmak slaytlar arasındaki farklılıkları azaltmak, değerli doku kaynaklarını korumak, zaman ve deneyler 1 maliyetini....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
SPOT 1. İnşaat
- 1 dakika süre ile ya da tamamen çözülene kadar 15 ml konik bir tüp ya da 2 mi mikrofüj tüpüne ve vorteks 1 ml doku markalama boyaya Sığır Serum Albumin (BSA), 50 mg ekleyin.
Not: Bu protokol için biyokimyasal Sınıf BSA kullanın. Diğer sınıflarda ve saflık test edilmemiştir iken, sınıf ve saflık SPOT başarısı üzerinde önemli bir etkisi olmazdı beklenmektedir. - Jel tamamen eriyene kadar 10 saniye artışlarla% 30 güçte bir mikrodalga bir 15 ml konik tüp Isı 9 ml hidroksietil agaroz jel işlem.
- Tek bir 15 ml konik tüp içinde erimiş işleme jel ve boya-BSA çözüm birleştirin ve bir pipet ile iyice karıştırın. Çözüm vorteksle....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
NOKTA tüm parafin kesitlerde yuvarlak, parafin bloğunda parlak renkli nokta (Şekil 1A ve 2D) olarak görünür, ve H & E veya İHK boyama işlemi ile cam slayt üzerinde kalır (Şekil 1B - 1D ve 2D). Bu bariz bir görsel işaret yardımları, hem her doku parçası belirlenmesinde histotechnician ve araştırmacı ve histotechnician olarak iletişim kolaylaştırır mikroskopta slayt veri toplama araştırmacı doku parçalarının düzenlemesi göstermek için.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Noktalar Başarılı hazırlanması ve kullanımı birkaç teknik adımda dikkatli bağlılık gerektirir. Hidroksietil agaroz Erime yavaş ve düşük ısıda yapılmalıdır. Yüksek ısıda hızla Erime optimum sonuçlar daha az agaroz bazı arıza neden olabilir. Işlenmesi için parçalar halinde boya yüklü fişler keserken, her parçanın kalınlığı fazla 4.5 mm ve 7 mm'yi aşmaz emin olun. bunlar kalınlığında üniform 5 mm gibi yuvarlatılmış uçları atık olarak kaldırılır. 5 mm'den az adet bitişik doku malzemesi bitmeden kesitler tarafından b.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Yazarlar yazının eleştiri sağlamak için Dr. Brent Harris teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışmalar NIH / NCI hibe P30-CA051008 kısmen desteklenen Lombardi Kapsamlı Kanser Merkezi Histopatoloji ve Doku Paylaşılan kaynağın gerçekleştirilmiştir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Ulusal Kanser Enstitüsü veya Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Histogel Numune İşleme Jeli | Thermo Scientific | HG-4000-012 | http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html |
| Doku İşaretleme Boya | Üçgeni Biyomedikal Bilimler A.Ş. | TMD-5 | Herhangi bir doku işaretleme boyası büyük olasılıkla yeterli olacaktır. |
| Arraymold Kit A 2 mm (60 çekirdek) | Arraymold | 20015A | Herhangi bir manuel doku dizileyici benzer şekilde çalışır. |
Kaynaklar
- Jawhar, N. Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool. Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).
- Dhir, R. Tissue microarrays: an overview. Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).
- Parsons, M., Grabsch, H.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
