Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Karma Polimer / Fulleren Nanopartikül photosensitizers Şefliği ile Fotodinamik Tedavi

8.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/53038

⸱

28 Ekim 2015

 , 
1NanoScience Technology Center, University of Central Florida, 2Department of Chemistry, University of Central Florida, 3Department of Materials Science and Engineering, University of Central Florida, 4CREOL, The College of Optics and Photonics, University of Central Florida

Bu makalede

Özet

Bu protokol, fulleren ile harmanlanmış iletken polimer nanopartiküllerin üretimi için bir yöntemi tanımlar. Bu nanopartiküller, Fotodinamik Terapi (PDT) için yeni nesil ışığa duyarlılaştırıcılar olarak potansiyel kullanımları açısından araştırıldı.

Özet

Bu makalede, Fotodinamik Terapi (PDT) için yeni nesil ışığa duyarlılaştırıcılar olarak fulleren ile harmanlanmış iletken polimer nanopartiküllerin üretimi ve tekrarlanabilir in vitro değerlendirmesi için bir yöntem bildirilmiştir. Nanopartiküller, yarı iletken polimer MEH-PPV'nin (poli[2-metoksi-5-(2-etilheksiloksi)-1,4-fenilevinilen]) fulleren PCBM (fenil-C 61-bütirik asit metil ester) ile uyumlu olmayan bir çözücü varlığında hidrofobik etkileşimi ile oluşturulur. MEH-PPV, yüksek üçlü oluşum oranlarına ve fulleren PCBM'ye verimli şarj ve enerji transferine yol açan yüksek bir sönme katsayısına sahiptir. Son işlemlerin, fulleren destekli üçlü ve radikal oluşumu yoluyla PDT sisteminin verimliliğini arttırdığı ve MEH-PPV'nin ultra hızlı deaktivasyonunun uyarıldığı belirtildi. Burada bildirilen sonuçlar, bu nanopartikül PDT duyarlılaştırıcı sistemin oldukça etkili olduğunu ve kanser hücre hatlarına beklenmedik bir özgüllük gösterdiğini göstermektedir.

Giriş

Fotodinamik Terapi (PDT) photosensitizers hedef dokuya uygulanır ve foto ışığa maruz kaldığında reaktif oksijen türlerinin (ROS) oluşturur. Böyle tekli oksijen ve süperoksit olarak ROS türleri oksidatif stres, hücre ve dokuların 1-4 sonraki yapısal hasara neden olabilir. Nedeniyle uygulama kolaylığı için bu yöntem etkin incelenmiş ve klinik çalışmalar yer 5,6 almış. Bununla birlikte, bu (azalmış biyolojik ve potansiyel akut toksisite yol açar) hassaslaştırıcı karanlık hassaslaştırıcıların toksisitesi, gün ışığına (nedeniyle hassasiyetini seçici olmayan dağılıma), hastanın duyarlılığı ve hidrofobiklik kadar önemli sorunlar devam ediyor.

Burada fabrikasyon ve in-vitro PDT için yeni nesil ışığa olarak fullerenin ile harmanlanmış polimer nanopartiküller yapma değerlendirilmesi bir yöntem sunduk. Nanopartiküllerin kendiliğinden agregasyon oluşturulmaktadıriletken polimerin MEH-PPV (poli [2-metoksi-5- (2-etilheksiloksi) -1,4-fenilenvinilen]) bu malzemelerin uyumlu içinde çözüldü fulleren PCBM (fenil-Cı-61 -bütirik asit metil ester) ile Çözücü hızlı olmayan bir uygun bir solvent (Şekil 1A) içine enjekte edilir. Ev sahibi polimer olarak MEH-PPV seçimi üçlü oluşumu yüksek oranda neden yüksek sönme katsayısı ile motive ve fulleren PCBM 7 verimli ve ultra hızlı şarj ve enerji transferi hem edilir. Bu özellikler tekli oksijen ve FDT süperoksit oluşumunun duyarlılık için idealdir.

Fulleren aslında hem moleküler ve nanoparçacık formunda 8-13 yılında PDT uygulanmıştır. Ancak, şiddetli sitotoksisite daha da geliştirilmesi 12 engelliyordu. Burada MEH-PPV bir dizi matrisi içinde fulleren kapsülleme bir PDT hassaslaştırıcı malzemesi kompozit MEH-PPV / PCBM nanopartiküller sonuçlar bu gösteriyor ki iözünde sitotoksik değil nedeniyle yukarıda belirtilen Fotofiziksel özelliklerine kanser nanoparçacık büyüklüğüne ve yüzey yükü nedeniyle hücreler ve düşük ışık dozlarda verimleri oldukça etkili PDT tedavisi doğru özgüllük gösterir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Kültürleme Hücre Soyları

  1. En az 2 dakika süreyle sıcak su içinde soğutucu şişeleri tutarak çözülme TE 71 (fare timik epitelial hücreler), MDA-MB-231 (insan meme kanseri hücreleri), A549 (insan akciğer kanseri hücreleri) ve OVCAR3 (insan yumurtalık tümörü hücreleri) . 106 x g'de 6 dakika boyunca, her bir hücre hattı ve santrifüj uygulanıp% 10 FBS ile takviye edilmiş 10 ml DMEM ortamı.
  2. Süspansiyon aspire ve pelet 3ml medya ekleyebilirsiniz. Düzgün bir kaç kez pipetleme hücreleri karıştırın. Bu hücre çözeltisi T75 balonlarına içinde% 10 FBS ile takviye 7 mi DMEM ortamı ısıtılmış ön ekleyin ve 37 ° C'de% 95 hava /% 5 CO2 nemli bir atmosferde şişeler tutun. Passage 0 olarak bu şişeyi etiketleyin.
  3. Hücrelerin hücre birleşmesi% 80 ulaştığında, 10 dakika boyunca% 0.05 tripsin ile inkübe edilerek hücreler hasat edilir. Medya eşit miktarda ekleyerek tripsin nötralize eder. Santrifüj 106 x g'de 6 dakika boyunca bu çözelti. Süspansiyon çıkarın ve buna 3 ml taze medya ekleyin. Wel Mixl, 7 mi ortam içeren bir kültür şişesine az miktarda (100 ul) aktarın. Inkübatörde kültür şişesi inkübe edin. Passage 1 olarak şişeyi etiketleyin.
  4. Geçit 11 veya 12 kadar, kültür hücre hatları.

Nanopartiküller 2. Fabrikasyon

  1. ~ 10 -6 M (düzeltilmiş) seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözeltisi hazırlanması
    1. Bir şişe içinde 1 mg Poly molekül ağırlığına sahip [2-metoksi-5- (2-etilheksiloksi) -1,4-fenilenvinilen] (MEH-PPV) (ortalama Mn) 150,000-250,000 g / mol ve 3 ml tetrahidrofuran (THF) ekleyin . Sıcak bir plaka üzerinde 80 ° C'de ısıtılırken 2 saat boyunca karıştırın.
    2. 0.2 um'lik bir şırınga filtresi kullanılarak yeni bir şişe içinde, yukarıda çözelti filtre. 'Sulandırılmamış MEH-PPV stok solüsyonu' olarak bu çözüm etiketleyin. Adımlarla 2.1.3 ve 2.1.4 de açıklandığı gibi bu çözüm konsantrasyon ince ayar sonra nanoparçacık hazırlık dahil olacak.
    3. 3 ml THF içinde seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözeltisi 50 ul ekle. 'Seyreltilmiş MEH-PPV stok solüsyonu' olarak bu çözüm etiketleyin. UV-vis spektroskopi ile 495 nm'de absorbansı, bir 1 cm'lik kuartz bir küvete transfer ve ölçün.
    4. Seyreltilmiş MEH-PPV stok çözeltisinin absorbansı 0.17 daha yüksek ise, bir seferde birden THF 1 ml ekleyerek seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözelti seyreltik ve 495 nm 'de ölçülen absorbans gelene kadar adım 2.1.3 tekrar 0.13-0.17 arasında değişmektedir.
    5. Aşağıda gösterildiği gibi Lambert-Beer yasası kullanılarak seyreltilmiş MEH-PPV stok solüsyonu molaritesini hesaplayın. Burada, 0.15 emme protokolü geri kalanı için bir örnek olarak kullanılmıştır (örneğin., Gözlenen absorbansa göre aşağıdaki hesaplamalar ayarlayın), kullanılan MEH-PPV tükenme katsayısı 10 7 M-1 cm yol uzunluğu kullanılan -1 olduğu 1 cm.
      A = ε xbxc (Denklem 1)
      (ε - molar tükenme katsayısı, A - absorbans, b - yol uzunluğu, c - solüsyonun konsantrasyonu)
      0.15 = 10 7 M-1 cm-1 x 1 cm XC (Denklem 2)
      c = 1.5 x 10 8 M (Denklem 3)
      Aşağıdaki gibi sulandırılmamış MEH-PPV stok solüsyonu konsantrasyonu bulmak için bu konsantrasyon kullanın:
      M 1 V = 1 M 2 V 2 (Denklem 4)
      0.15 x 10 -7 M x 3050 ul = M 2 x 50 ul (Denklem 5)
      M = 2 9,15 x 10 7 M (Denklem 6)
      Bu 'arındırılmış sulandırılmamış MEH-PPV stok solüsyonu' yoğunlaşmasıdır.
  2. Düzeltilmiş seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözeltisi içinde MEH-PPV kitle hesaplanması
    1. Bölüm 2.1.4 'de elde edilen molaritesi ve 10 6 g / mol olan MEH-PPV moleküler ağırlığı (Mw), kullanılarak, aşağıda gösterildiği gibi ayarlanır seyreltilmemiş stok çözeltisi 1 ml MEH-PPV'nin kütlesi hesaplanır.
      M = n / V (n -. No mol, V - L hacim) (Denklem 7)
      Bu durumda, 1 ml MEH-PPV kütlesi und ayarlandı veiluted stok çözeltisi 9.15 x 10 -4 gr olduğunu.
  3. MEH-PPV içinde Karıştırma PCBM
    1. Fenil-Cı 61 -bütirik asit metil ester (PCBM) kütlesini hesaplanır ağırlıkça% 50 PCBM kütlesine göre tanımlanan ağırlıkça% 50 PCBM katkılı MEH-PPV çözelti yapmak için hazır MEH-PPV çözeltisi içine eklenecek MEH-PPV (yani, MEH-PPV yarısı kütle). Bölüm 2.2 elde MEH-PPV ağırlığını kullanarak.
      MEH-PPV x% 100 = ağırlıkça% 50 PCBM arasında PCBM / 9.15 x 10 -4 gr Kütle (Denklem 8)
      PCBM = 4.57 x 10 -4 gr kütlesi (Denklem 9)
    2. Bir şişe içinde, 1 mg PCBM tartılır ve 500 ul THF ilave edin. 910,88 g / mol olarak PCBM moleküler ağırlığı kullanılarak bu çözelti içinde PCBM konsantrasyonunu hesaplamak
      PCBM çözeltisi = 0,001 g / l (910,88 g / Mol x 500 ul), molaritesi (Denklem 10)
      PCBM çözeltisinin molaritesi = 2.19 x 10 -9 mol / ul (Denklem 11)
    3. PCBM çözeltisinin hacmini hesaplayın arındırılmış eklemek için gerekli ME sulandırılmadan'H-PPV stok solüsyonu, basamak 2.3.2 hesaplanan molarite ile THF içinde ağırlıkça% 50 PCBM katkılı MEH-PPV çözelti elde etmek için
      4,57 x PCBM x 1 mol / 910,88 gx 1 ul / 2.19 x 10 -9 mol = 229 ul 10 -4 gr (Denklem 12)
      Arındırılmış seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözeltisi 1 ml PCBM çözeltisi 229 ul ilave edin ve iyice karıştırın.
  4. Çökeltme yöntemi ile nanopartiküllerin hazırlanması
    1. Aktarım, kendisine bağlı bir iğne ile 1 ml şırınga içine karıştırılır MEH-PPV / PCBM çözeltisi 1 mi.
    2. Hızla 1200 rpm'de karıştırıldıktan DI 4 ml su içine karıştırılır MEH-PPV / PCBM çözeltisi 1 ml enjekte edilir. Enjeksiyondan hemen sonra karıştırarak durdurun. Daha fazla işlem olmadan bu nanopartiküller kullanın.

Görüntüleme için Nanopartiküller ile Hücre Hatları 3. Kuluçka

NOT: Tüm görüntüleme deneyleri 35 mm petri tamamlandı

  1. Nanoparti ve Alımhücre hatlarında kartılması
    1. 12. geçişine kadar Kültür hücre hatları. 35 mm Petri tabaklarda 12. geçiş kültürü hücreleri de. 24 saat sonra hücreler,% 40 konfluent olacak şekilde, 35 mm Petri kaplarına eklenir hücreleri konsantrasyonunu ayarlayın.
    2. Bu aşamada, petri kaplarında% 10 FBS ile takviye edilmiş DMEM ortamı kaldırma iki kez 1 x DPBS hücreleri yıkayın ve Petri tabaklarına 2 ml DMEM içinde nanopartiküller süspansiyon 100 ul ilave edin.
    3. 24 saat sonra petri gelen DMEM / nanopartiküller süspansiyon kaldırmak ve 1x DPBS 3 kez hücreleri yıkayın. Daha sonra 10 dakika süreyle% 4 paraformaldehid ile inkübe edilerek hücrelerin tespit. DPBS ile iki kez yıkanır. 2 dakika için boya ile inkübe edilerek 300 nM DAPI ile hücrelerin Leke. DPBS ile iki kez yıkanır. Ardından görüntüleme için DPBS hücreleri tutun.
  2. ROS Algılama
    1. Kültür A549 ve bölüm 3.1.1 açıklandığı üzere Petri, hücre satır başına 6'da OVCAR3 hücre hatları. EtiketPetri kapları olarak, Tablo 1 'de gösterilen.
    2. Tablo 1 'de gösterilmiş ve 24 saat süreyle inkübe olarak petri kutularının üç 2 ml DMEM içinde nanopartikül süspansiyon 100 ul ekle. Hafif dozda almak 24 saat sonra hücrelerin yıkayın ve HBSS (Hank Dengeli Tuz Çözeltisi) hücreleri askıya ücretsiz medya boya olacak Petri kapları için.
    3. 15 dakika boyunca güneş simülatörü lambayı Isınma. UV ışığı süzmek için lambanın önünde UV filtresi yerleştirin. Petri yüzeyinde 0,5 güneş (50 mW / cm 2) yoğunluğu elde etmek için lamba gücünü ayarlayarak bir referans güneş pili ile lamba kalibre edin. Bu özel kurulumda bu durum lambası verilen 218 W güç ile elde edilmiştir.
    4. 180 J aşağıdaki hesaplamalar gösterildiği gibi / cm2 bir hafif doz sonuçlanır 60 dakika boyunca lambası (kapağın açık) altında petri kaplarına yerleştirin:
      50 mW / cm2 x 3.600 saniye / 1.000 = 180 J / cm2
    5. HBSS çıkarın ve yıkanmadan daha petri kaplarına,% 10 FBS ile takviye edilmiş DMEM ortamı 2 mi ekleyin. 2 saat daha inkübe hücreleri.
    6. Pozitif kontrol için 30 dakika boyunca 100 uM hidrojen peroksit (H2O 2) ile hücrelerin inkübe edin.
    7. 37 ° C'de 30 dakika boyunca boya ile inkübe edilmesi ile ROS tespit reajanı 5 uM değerinde bir nihai konsantrasyona sahip her petri hücreleri Leke.
    8. 10 dakika boyunca% 4 paraformaldehit ile inkübe edilerek hücreleri saptamak. DPBS ile iki kez yıkanır. 2 dakika için boya ile inkübe edilerek 300 nM DAPI ile hücrelerin Leke. DPBS ile iki kez yıkanır. Ardından görüntüleme için DPBS hücreleri tutun.
  3. PI ve Aneksin V FITC tarafından apoptoz ve nekroz
    1. Kültür 5. Petri kapları her hücre hattı. Kalan 2 petri kontrol numuneleri olacak ise bu Petri üçü deney için olacaktır. E kadar nanopartiküller ile deney için 3 Petri kapları inkübebölüm 3.1.2 xplained. Kontrol numuneleri nanopartiküller ile inkübe değildir.
    2. 24 saat inkübasyondan sonra adım 3.2.3 izleyin.
    3. Lamba (kapağı açık) altında 3 deney petri kaplarına yerleştirilir ve 20 dakikada, 40 dakikada bir ve 60 dakikada bir bir tane çıkarın. Bu 60, 120 ve 180 ışık dozlarda J / cm2, sırasıyla (bölüm 3.2.4 hesaplama) maruz bırakıldı üç numune verir. Daha sonra, kontrol petri kutularının birine 180 J / cm2 ışık dozajını. Bu nanopartiküllerin yokluğunda tutulan ışık dozu ile kontrol edilmesidir. Işık kalan kontrol numunesine doz (hayır nanopartiküller ve uygulanan ışık dozu) uygulama yapmayınız.
    4. % 10 FBS ile takviye edilmiş DMEM ortamı ile HBSS takın ve 4 saat boyunca inkübatör petri kapları tutmak.
    5. 15 dakika için boya ile inkübe edilmesi ile deneysel ve annexin V FITC 20 ul kontrol petri hücreleri Leke. DPBS ile iki kez yıkanır. C Leke2 dakika boyunca boyalarla inkübe edilerek 300 nM DAPI olarak 300 nM PI (propidyum iyodür) ile arşın. DPBS ile iki kez yıkanır. Ardından görüntüleme için DPBS hücreleri tutun.

Nanopartiküller 4. İçsel Sitotoksisite

  1. 96-çukurlu levhalarda yer alan hücreler ve kültürü Sayım
    1. Ortamı çıkarmayı ve 10 dakika boyunca% 0.05 tripsin ile hücrelerin inkübasyonu takiben DPBS hücreler iki kez yıkayarak Kültür şişelerinden alınan hücreler hasat. Elde edilen hücre çözeltisine,% 10 FBS ile takviye 2 mi DMEM ortamı. Gömleklere hücre kümeleri ayırmak için düzgün bir çözüm karıştırın.
    2. Hücre süspansiyonu 100 ul almak ve% 10 FCS ile takviye edilmiş 900 ul DMEM ortamına ilave edin. İyice karıştır. Bir hemasitometre üzerine bu süspansiyonu 10 ul yerleştirin. Hemasitometre kullanarak hücreleri sayın ve 4.1.1 4 10 x 5 hücre / ml hücre süspansiyonu konsantrasyonunu ayarlamak.
    3. 5 96 oyuklu plakalar 0 saat, 24 saat olarak etiketlenmiş çıkarınızr, 48 saat, 72 saat ve 96 saat. Bu şekilde / oyuk 2500 tohum hücreleri Tablo 2 'de gösterildiği gibi kuyu içine 5 x 10 4 hücre / ml hücre çözeltilerinin 50 ul (TE 71 ve A549) ekleyin. OVCAR3 ve MDA-MB-231 hücre hatları için aynı prosedürü yapın.
    4. 24 saat sonra 1 x DPBS ile kuyu yıkama ve Tablo 2 'de gösterildiği gibi kuyu içine nanopartiküllerin artan konsantrasyonlarda 50 ul ilave edin., 20 100 eklenerek, farklı nanopartikül konsantrasyonları hazırlayın ve DMEM 2.4.2 den nanopartikül süspansiyonu 180 ul kadar sırasıyla nihai 0.4 x 10 -4 mg / ml'lik konsantrasyonlar elde nanopartikül 2 ml hacim, 2.0 x 10 -4 mg / ml ve 3.6 x 10 -4 mg / ml elde etmek. Her bir hücre hattı nanopartiküller her bir konsantrasyonu için üçlü yer alır.
  2. Karanlıkta, hücre canlılığını ölçen
    1. Hemen nanopartiküller ekledikten sonra 0 saat plakasına 10 ul MTT ekleyin. Formazan kristalleştirme için 4 saat süre ile plaka inkübeals oluşturulur. Kuyulara 50 ul çözünme çözeltisi ekleyin. Formazan kristalleri çözmek üzere, 6 saat boyunca plaka inkübe edin.
    2. Mikro levha okuyucusu ile 570 nm'de absorbans kaydederek 0 saat plakanın hücre canlılığı ölçülür.
    3. 24 saat plaka için, 1x DPBS hücreleri yıkayın ve nanopartiküller ile her bir kuyu sonra 24 saat inkübasyon 50 ul medya ekleyebilirsiniz. MTT ekleyin ve aynı 4.2.1 ve 4.2.2 açıklanan plaka okuyun.
    4. 48 saat, 72 saat ve 96 saat için plakalar, 1 kez DPBS hücreleri yıkayın ve nanopartiküller ile 24 saat inkübasyondan sonra kuyulara 50 ul ortamı eklenir. Kalan sürelerde inkübe hücreleri.
    5. 4.2.1 ve 4.2.2 de açıklandığı gibi 4.2.5) belirli zaman noktalarında hücre canlılığı ölçün.
    6. (N = 3) 3 kez tam bir deney tekrarlayın

5. PDT sonra Hücre Canlılık Ölçme

  1. Hücrelerin sayılması ve 96 oyuklu plakalar içinde kültürlenmesi.
    1. 9 bir dizi EtiketTE 71 + A549 plakaları ve OVCAR3 + MDA-MB-231 plakaları hem Tablo 3 'de gösterildiği gibi 6 oyuklu plakalar. 4.1.3 gösterilen plakaların düzeni aynı olacaktır.
    2. 4.1.2 Tablo 2 'de gösterildiği gibi, aynı düzeni ile Bölüm 4.1'de açıklandığı gibi 96-yuvalı plakalar Seed.
    3. 24 saat plakalarına nanopartiküller ekledikten sonra, 4.1.4'de açıklandığı gibi.
    4. Nanopartiküllerin ilave edildikten sonra 24 saat 1x DPBS hücreleri yıkayın ve her bir oyuğa 50 ul HBSS ekleyin.
    5. 3.2.3 açıklandığı üzere, ilgili ışık dozlarla plakaları ışın tedavisi.
    6. % 10 FBS ile takviye edilmiş 50 ul DMEM ortamı ile HBSS değiştirin ve PDT sonra ilgili süreler boyunca inkübe edin.
    7. 4.2.1 ve 4.2.2 açıklandığı gibi, her bir zaman süresinden sonra, hücre canlılığı ölçülür.

6. Floresan Mikroskopi

  1. Nanopartiküllerin Uptake
    1. Mikroskop a lambaları açınnd görüntüleme önce lazer 30 dakika. Mikroskop sahnede (bölüm 3.1 açıklandığı gibi) sabit hücreleri içeren petri koyun.
    2. . Tablo 4 de gösterildiği gibi filtre kullanarak nanopartiküller ve DAPI floresans toplamak ImageJ yazılım faz kontrastı, nanoparçacık ve DAPI görüntü Yerleşimi.
  2. ROS Algılama
    1. Görüntüleme önce mikroskop 30 dakika lambaların açın. Mikroskop sahnede (bölüm 3.2'de açıklandığı gibi) hücreleri içeren petri koyun.
    2. . Tablo 4 de gösterildiği gibi filtre kullanarak saptama reaktif maddesi nanopartiküller, DAPI ve ROS floresans toplamak ImageJ yazılım faz kontrastı, nanoparçacık, DAPI ve ROS tespit reajanı görüntü Yerleşimi.
  3. PI ve Aneksin V FITC tarafından apoptoz ve nekroz
    1. Görüntüleme önce mikroskop 30 dakika lambaların açın. Açıklandığı gibi (hücreleri içeren Petri kabı koyunmikroskop sahnede bölüm 3.3).
    2. . Tablo 4'te gösterildiği gibi filtreler kullanılarak nanopartiküller, DAPI, PI ve Annexin V FITC gelen floresan toplayın ImageJ yazılım faz kontrast, nanoparçacık, DAPI, PI ve Annexin V FITC görüntüleri Yerleşimi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Alım ve nanopartiküllerin içsel sitotoksisite

Ağırlıkça% 50 harmanlanmış MEH-PPV / PCBM nanopartiküller TE 71 ile inkübe edilmiştir, MDA-MB-231, A549 ve OVCAR3 hücre çizgileri. PCBM karıştırma seviyesi konjuge polimerler ve fullerenler 14 arasında ideal bir yük ve enerji transferi özellikleri temin ettiği gösterilmiştir ağırlıkça% 50 PCBM olarak seçildi. Nanoparçacık alımının Floresan görüntüleri Şekil 1B'de gösterilmiştir. Hücreler nanoparçac...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Nanopartiküller imalatı sırasında nanoparçacık alımını sağlamak için bazı kritik önlemler korumak için gerekli oldu. Bu solüsyonun konsantrasyonu oluşturulmuştur nanopartiküllerin büyüklüğü belirlemede önemli bir rol oynadığı görülmüştür gibi THF (ağırlıkça% 50 PCBM ile harmanlanmış) bir 10 -6 M MEH-PPV çözelti DI su içine enjekte etmek için hazırlanmıştır. Konsantrasyon UV-vis spektroskopi ile kontrol edilmiştir. Protokol aşamasında olduğunu ilk bu çözümün beri UV-vis spektrumları almadan önce ilk olarak haz...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Yazarlar, bu çalışmanın bir KARİYER ödülü (CBET-0746210) ve CBET-1159500 ödülü aracılığıyla bu çalışmaya mali destek için Ulusal Bilim Vakfı'na (NSF) minnetle teşekkür eder. Hücre kültürü konusundaki yardımları için Dr. Turkson'a (Hawaii Üniversitesi Kanser Merkezi) ve Dr. Altomare'ye (Central Florida Üniversitesi Tıp Fakültesi) teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Poli[2-metoksi-5- (2-etilheksiloksi)-1,4-fenilenevinil] (MEH-PPV)Sigma Aidrich536512-1Gortalama Mn  150.000-250.000
[6,6]-Fenil C61  bütirik asit metil ester (PCBM)Sigma Aidrich684449-500MG% 99.5
Tetrahidrofuran (THF)EMDTX0284-6Drisolv
1 ml şırıngaUlusal Bilim Şirketi37510-1MEH-PPV çözeltisinin filtrasyonu için
Şırınga filtresiVWR28145-49525 mm, 0.2 ve mikro; m, PTFE
1 ml şırıngaHamilton Company81320Nanopartiküller yapmak için MEH-PPV çözeltisinin suya enjeksiyonu için
Dulbecco'nun Eagle's Medium/Ham's F-12 50/50 Karışımı (DMEM)Corning (VWR)45000-350
Hank'in fenol kırmızısı içermeyen Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)Kalite Biyolojik (VWR)10128-740
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin, 1x kalsiyum ve magnezyum içermez (DPBS)Corning (VWR)45000-436
Fetal Sığır Serumu, Düzenli (Isıyla Etkisizleştirilmiş) (FBS)Corning (VWR)45000-736
Tripsin EDTA 1x% 0.25Corning (VWR)45000-664Tripsin / 2.21 mM EDTA, sodyum bikarbonat, kalsiyum ve magnezyum içermeyen HBSS'de Domuz Parvovirüsü Test Edildi
%16 ParaformaldehitElektron Mikroskobu Bilimleri 15710%16 paraformaldehit, PBS DAPI eklenerek %4'e seyreltilir
. Biotium VWR89139-054Nükleer leke
5 ml pipetlerVWR82050-478
75 cm2 kültür şişesiHücrelerin kültürlenmesi içinVWR82050-856
MTT tahlilleri için96 oyuklu plakalarVWR82050-771
Havalandırma Delikleri ile Doku Kültürü KaplarıGreiner Bio-One (VWR)82050-538
Propidium iyodürMoleküler problarP3566
Annexin V FITCInvitrogenA13199apoptoz için boya
Celltiter 96 non-R 1000 tahlillerPromega (VWR)PAG4000MTT
CellROX Yeşil Reaktif, oksidatif stres tespiti içinROS için InvitrogenC10444 algılama
UV-vis spektrometresiAgilent 8453
Floresan spektrometresiNanoLog HoribaJobin Yvon
Dinamik ışık saçılmaPD2000DLS, Hassas dedektör
İnkübatörNuAir DH Autoflow
Konfokal mikroskopZeiss Axioskop263X yağa daldırma objektif lensi
Epilüminesans mikroskobuOlympus IX7160X suya daldırma objektif lens, Andor Zyla sCMOS kamera
Güneş SimülatörüNewport 67005 Oriel Instruments
Referans güneş piliOriel VLSI Standartları Dahil
Mikroplaka okuyucuBioTek Ex808
HemositometreHausser Bilimsel Ortaklık3200Hücreleri saymak için
>

Kaynaklar

  1. Dolmans, D., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  2. Dougherty, T. J., et al. Photodynamic therapy. J Natl Cancer Inst. 90 (12), 889-905 (1998).
  3. Ferrari, M. Cancer nanotechnology: Opportunities and challenges. Nat Rev Cancer. 5 (3), 161-171 (2005).
  4. Oleinick, N. L., Morris, R. L., Belichenko, T. The role of apoptosis in response to photodynamic therapy: what, where, why, and how. Photochem Photobiol Sci. 1 (1), 1-21 (2002).
  5. Ormond, A., Freeman, H. Dye Sensitizers for Photodynamic Therapy. Materials. 6 (3), 817-840 (2013).
  6. Pass, H. I. Photodynamic Therapy in Oncology - Mechanisms and Clinical Use. J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).
  7. Sariciftci, N. S., Smilowitz, L., Heeger, A. J., Wudl, F. Photoinduced electron transfer from a conducting polymer to buckminsterfullerene. Science. 258 (5087), 1474-1476 (1992).
  8. Sperandio, F. F., et al. Photoinduced electron-transfer mechanisms for radical-enhanced photodynamic therapy mediated by water-soluble decacationic C-70 and C84O2 Fullerene Derivatives. Nanomed-Nanotechnol. 9 (4), 570-579 (2013).
  9. Fan, J. Q., Fang, G., Zeng, F., Wang, X. D., Wu, S. Z. Water-Dispersible Fullerene Aggregates as a Targeted Anticancer Prodrug with both Chemo- and Photodynamic Therapeutic Actions. Small. 9 (4), 613-621 (2013).
  10. Grynyuk, I., et al. Photoexcited fullerene C-60 disturbs prooxidant-antioxidant balance in leukemic L1210 cells. Materialwiss Werkstofftech. 44 (2-3), 139-143 (2013).
  11. Liu, X. M., et al. Separately doped upconversion-C-60 nanoplatform for NIR imaging-guided photodynamic therapy of cancer cells. Chem Commun. 49 (31), 3224-3226 (2013).
  12. Trpkovic, A., Todorovic-Markovic, B., Trajkovic, V. Toxicity of pristine versus functionalized fullerenes: mechanisms of cell damage and the role of oxidative stress. Arch Toxicol. 86 (12), 1809-1827 (2012).
  13. Chen, Z. Y., MA, L. J., Liu, Y., Chen, C. Y. Applications of Functionalized Fullerenes in Tumor Theranostics. Theranostics. 2 (3), 238-250 (2012).
  14. Park, S. H., et al. Bulk heterojunction solar cells with internal quantum efficiency approaching 100%. Nat Photonics. 3 (5), 297-302 (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İletken Polimer NanopartiküllerFulleren PCBMNanopartikül ÜretimiÇökeltme YöntemiHücresel Alım AnaliziROS TespitiMTT AnaliziFloresan GörüntülemeGüneş Simülatörü
Karma Polimer / Fulleren Nanopartikül photosensitizers Şefliği ile Fotodinamik Tedavi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.