Method Article

Astrositler Üç boyutlu Konfokal Morfometrik Analizi Protokolü

DOI:

10.3791/53113

⸱

December 11th, 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Clinical and Experimental Medicine, Linköping University, 2Neurophysiology Research Center, Shahed University, 3Cellular and Molecular Research Center, Iran University of Medical Sciences, 4School of Advanced Technologies in Medicine, Iran University of Medical Sciences

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CNS'deki astrositler, zararlı uyaranlara yanıt olarak fonksiyonel ve yapısal özelliklerini değiştirir. Bu rapor, hastalıklı durumlarda veya terapötik müdahaleler sonrasında üç boyutlu astrosit morfolojisinin değerlendirilmesi için bir protokol sunmaktadır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyindeki glial hücreleri gibi, astrositler, merkezi sinir sistemindeki çeşitli işlevsel rolleri vardır. Zararlı uyaranların varlığında, astrositler işlevsel ve yapısal özellikler, reaktif astrogliasis denilen bir durum değiştirir. Burada, astrositler morfolojik özelliklerin değerlendirilmesi için protokol verilmektedir. Bu protokol şube yüzey alanı ve bir astrosit (astrosit topraklarında) kapsamında dokusu, şube, hücre gövdesi ve nukleus dahil olmak üzere tüm astrosit, hacmi, yani 12 farklı parametrelerin ölçümü yanı sıra toplam uzunluğu ve numarasını içeren, şiddeti astrosit tespiti için kullanılan antikorların floresan immünoreaktivitesinin ve astrosit yoğunluğu (sayı / 1000 mikron 2) evi. Volocity 6,3 ölçümleri için kullanılmıştır gibi, bu amaç için, üç boyutlu (3D) odaklı mikroskopik resimleri oluşturulur, ve 3 boyutlu görüntü analizi yazılımı gibi bulundu. Amiloid beta 1-40 maruz Sıçan beyin dokusu 1-40) bir yöntem mevcut için kullanılmıştır. Bu protokol, aynı zamanda, in vivo ya da in vitro koşullarında ya da diğer hücre 3D morfometrik analizi için kullanılabilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sağlıklı, merkezi sinir sistemi (CNS) içinde, astrositler, kan akışı, enerji metabolizmasında, sinaptik fonksiyon ve plastisite ve hücre dışı iyon düzenlenmesinde önemli bir rol oynarlar ve nörotransmitter 1-3 homeostazı. Buna ek olarak, astrositler farklı zararlı uyaranlara ve hipertrofisi, çoğalması ve astrositler 4,5 fonksiyonel biçimlenme ile karakterizedir reaktif astrogliyozun yoluyla travma, enfeksiyon, iskemi veya nörodejenerasyon gibi anormal şartlarda cevap.

Reaktif astrogliasis terapötik girişimlerin klinik sonuçlarını etkileyebilir, bu nedenle, dokuda inflamatuar yanıtı ve onarım sürecini mühendis ve olab....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Tıp Bilimleri İran Üniversitesi Etik Komitesi (Tahran, İran) tarafından onaylanan Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım (NIH) için Kılavuzu'nda belirtilen politikalara uygun olarak yürütülmüştür.

1. Hayvanlar, Cerrahi ve Numune Hazırlıklar

NOT: 3D odaklı mikroskopik analiz için beyin dokusunu hazırlayın.

  1. Iki gruba rastgele Divide hayvanları: Aβ 1-40 -injection (n = 8) ve genistein, tedaviden Aβ 1-40 -injection (n = 8); ameliyat öncesi sonda 1 saat ile genistein (örneğin, polietoksile hint yağı gibi bir araç içerisinde seyreltilmiş 10 mg / kg) tatbik.
  2. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu bölüm 3B morfometrik analizi ile üretilen, nicel ve nitel gözlemlere ilişkin bazı örnekler verilmektedir. Daha önce de belirttiğimiz 12 parametrelerin tam sonuçlar için, önceki yayın 10 bakın.

Nitel Gözlemler

Astrositler Aβ 1-40 enjekte sıçanlar (Şekil 1) genellikle uzun olan ince veya kalın dalları sergiledi. Kısa dalları ile birkaç küçük stellat şeklindeki astrositler serebral korteks gözlendi ve astrositlerde kompakt b.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Geçerli protokol, astrosit morfolojisi ile ilişkili 12 farklı parametrelerini değerlendirmek için 3D konfokal morfometrisi kullandı. Bu amaçla, Aβ 1-40 olan sıçanların hipokamp dokusunda - ya da bir anti-enflamatuvar ajan olarak genistein, ön muamele olmaksızın uyarılan astrogliyozun kullanılmıştır. 3D görüntüler ve morfometrik yazılımını kullanarak, astrositlerde morfolojisi yani astrogliyozun üzerinde genistein etkisini göstermek başardık.

Beyin dokusu içi ve.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Tıp Bilimleri İran Üniversitesi (Tahran, İran) Östergötland County Konseyi (İsveç) ve Hücresel ve Moleküler Araştırma Merkezi hibe ile desteklenmiştir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Amiloid beta 1-40Sigma Aldrich79793-70 &°C'de tutun; C
GenisteinSigma Aldrich446-72-0-20 & derece; C
glial fibriler asidik proteine karşı polikolonal tavşan antikorlarıDAKOZ0334
alkalin fosfat konjuge domuz anti-tavşan IgG antikorlarıDAKO
Sıvı Kalıcı KromojenDAKOK0640
Sıvı kalıcı Kırmızı Yüzey TamponuDAKOK0640
Cremophor ELSigma Aldrich27963Polietoksillenmiş hint yağı - Adım 1.1
LSM 700 Konfokal Lazer Tarama MikroskobuCarl Zeiss
Volocity 6.3Perkin Elmer Inc.,Görüntü
Analizi 2000Tekno Optik
Streotaksik aparatÇalma
Grafik pedi Prizma 5Grafik pedi yazılımı Inc.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
  2. Pellerin, L., et al. Activity-dependent regulation of energy metabolism by astrocytes: an update. Glia. 55

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Astrocyte MorphologyConfocal Microscopy3D Image AnalysisVolocity SoftwareGFAP ImmunostainingFluorescence IntensityAstrocyte TerritoryNuclear VolumeBranch LengthCell Density

Related Articles