Translasyonel kanser araştırmaları insan dokularının çıkarılmasına bağlıdır. Ex vivo analiz için ekstraksiyon yöntemlerini optimize etmek için çok fazla çalışma yapılmıştır. Burada, sınırlı numunelerden maksimum veri çıktısına izin veren doku işleme yöntemlerini açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Translational Kanser Araştırma İnsan Doku ile Çalışma
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
İnsan yararına yapılan tıbbi araştırmalar, insan dokularına ve deneklere olan gereksinim nedeniyle büyük ölçüde engellenmektedir. Bununla birlikte, insan örnekleri için onay alındıktan sonra, organların, dokuların ve hücrelerin bütünlüğünü en üst düzeyde sağlamak için değerli numuneler büyük bir özenle ele alınmalıdır. Ne yazık ki, tanım gereği doku işleme, dokuların konakçıdan çıkarılmasını gerektirir, bu da büyük hücresel strese neden olabilecek ve sonraki analizler üzerinde büyük etkileri olabilecek bir değişikliktir. Bu stresler, numunenin artık alındığı bölgeyi temsil etmemesine neden olabilir. Bu nedenle, temsil edilebilirliği sağlamak için bu numuneler işlenirken katı bir protokole uyulmalıdır. Numune işleme için en uygun tekniğin kullanıldığından emin olmak için istenen tahlil(ler) de dikkate alınmalıdır. Burada, sınırlı doku örneklerinden sonraki üretimi en üst düzeye çıkarmak için işlenmiş doku üzerinde gerçekleştirilebilecek doku alımı, işleme ve çeşitli analizler için bir protokol özetlenmiştir.
Giriş
Tıbbi araştırma, insan hücre hatları ve hayvan modellerinde hem çalışma son derece yararlanmıştır. Hücre çizgileri iyi bir sistem elemanlarının kontrolü, hem de uygun organizmadan hücrelerin kullanımı için izin verir. Hücre hatları yanıtları 1 etkileyebilecek diğer hücrelerin, stromal bileşenleri ve organların etkisini özetlemek değil, çünkü daha fazla temsilcisi olurken, sağlık ve hastalık sorumlu olabilir mekanizmalarının büyük ölçüde basitleştirilmiş anlık sunar, insan hücreleri ile çalışma. Öte yandan, hayvan modelleri, insan hastalığını ve genetik heterojenite üreyen tamamen doğru olmasa da, çoğu modelde 2,3 bütün hayvan sistemlerinin giriş....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Etik bildirimi: Bu protokol Texas MD Anderson Kanser Merkezinde Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Numune Alımı
- Artı tümör ve ilgili normal dokudan 10-12 araştırma doku örneklerini toplayın. Islak buz üzerinde saklayın örnekleri otolitik önlemek için.
- Patolojik tanı kolaylaştırmak amacıyla tüm dokuları, tıbbi cihazlar ve gerekli inceleme için Patoloji Anabilim bir cerrahi prosedür sırasında çıkarılan yabancı cisimlerin gönder.
- Uygulanabilir araştırma ve doku bankacılığı politikaları ve prosedürlerine uygun olarak araştırma için ayrılan doku anlaştım.
NOT: Biospecimen toplama patologlar koordinasyonunu ge....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Aşağıda gösterilen sonuçlar işlenmiş bir melanom tümör üzerinde geniş bir immün fenotipleme için akış sitometri yolluk stratejisini betimliyor. Boyama gün, doku numunesi 225 RPM dönme altında, 37 ° C'de, sindirilmiş ve kolajenaz I ve 60 dakika boyunca kuluçkalama DNase I ile homojenize edildi. Sindirme işlemini takiben, bir hücre süspansiyonu artıkları yok etmek için 70 mikron hücre süzgecinden süzüldü ve hücreler, immün hücre fenotipleme antikorlar sitometri floresan etiketli akışı ile boyandı. MACS tamponu i.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Sonuçta, işleme yöntemleri, istenen hipotez tarafından dikte ve (Şekil 1) yapılacak teknik testlerin tahmin edilmelidir. Aşağıdaki bölüm, doku kesitlerinde gerçekleştirilebilir potansiyel tahlilleri açıklamak için özet olarak hizmet vermektedir. Hiçbir ayrıntılı bir bakış anlamına gelir, ama teknikleri anlatan ve onların güçlü ve zayıf yönlerini listeleyerek kılavuz örnek işleme yöntemleri ve alt testlerin seçimi yardımcı olmak için tasarlanmıştır gereğidir.
Boyama Flow cyto.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, John G. ve Marie Stella Kenedy Memorial Vakfı (Hibe # 0727033) ve Melanom Araştırma İttifak hayırsever katkıları ile desteklenmiştir. Yazarlar Dr. Ignacio Wistuba, Dr. Victor Prieto, MD Anderson Kanser Merkezi Dairesi yanı sıra, doku dağıtımı, toplanması koordine ve translasyonel araştırma kolaylaştırmak için Texas MD Anderson Kanser Merkezi Kurumsal Doku Bankası (ITB) University of teşekkür etmek istiyorum Patoloji ve Melanom Ay Shot Programı. Son olarak, yazarlar melanom etkilenen tüm hastalara ve ailelerine teşekkür etmek istiyoruz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| İğneler | BD | 305167 | |
| Paslanmaz çelik tek kullanımlık neşterler | Miltex | 4-410 | |
| Doku kültürü kabı | Corning | 353003 | |
| Biyopsi Kasetleri | Thermo Fisher | 58931 | |
| RNA stabilize edici çözelti | Ambion | AM7021 | |
| 1.5 ml Eppendorf tüpleri | Phoenix | MAX-815 | |
| 50 ml tüpler | Corning | 430290 | |
| %10 Nötr Tamponlu Formalin | StatLab Tıbbi Ürünler | 28600-5 | |
| Formalin Kapları | Fisher Scientific | 23-032-059 | |
| Optimum kesme sıcaklığı çözümü (OCT) | Sakura Finetek | 4583 | |
| Tissue-Tek Kriyomold | Sakura Finetek | 4557 | |
| Dnase I | Roche | 10104159001 | |
| Kollajenaz I | Roche | 11088793001 | |
| 70μ m hücre süzgeçleri | BD Bioscience | 352350 | |
| 96 kuyulu yuvarlak alt plakalar | Corning | 3799 | |
| Canlı/Ölü leke çözümü | Yaşam Teknolojileri | L34957 |
Kaynaklar
- Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. Cell Biology. Fixing problems with cell lines. Science. 346, 1452-1453 (2014).
- van der Worp, H. B., et al. Can animal models of disease reliably inform human studies. , PLoS Med. 7, e1000245 (2010).
- McCabe, P. M., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
