Sporosarcina pasteurii bakterisi kullanılarak mikrobiyolojik olarak indüklenen kalsit çökeltme (MICP) protokolleri burada sunulmuştur. Çökeltilmiş kalsiyum karbonat, optik mikroskopi ve taramalı elektron mikroskobu (SEM) ile karakterize edildi. MICP'ye maruz kalmanın süngerin basınç dayanımını arttırdığı da gösterilmiştir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Mikrobiyolojik Kalsit Yağış Bağlı tarafından Aracılı
Bu makalede
Özet
Özet
Burada soruşturma kapsamında, özellikle bakteri (S. pasteurii) doğal bir enzim üreaz salgılama yoluyla ortamlarda meydana gelen üre (ureolysis) hidrolizini uyardığı, doğru koşullar altında, kendi yeteneği eşsizdir. ureolysis bu işlem olup, kimyasal reaksiyonlar zinciri yoluyla, kalsiyum karbonat çökeltilerinin oluşmasına neden olur. Bu Mikrobiyolojik Kaynaklı Kalsit Yağış (MICP) olarak da bilinir. MICP için uygun kültür protokolleri burada ayrıntılı. Son olarak, mikroskopi farklı mod altında görselleştirme deneyleri yağış sürecinin çeşitli yönlerini anlamak için yapılmıştır. optik mikroskop gibi teknikleri, Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) ve X-Işını Foto elektron spektroskopisi (XPS) kimyasal olarak son ürünü karakterize etmek için kullanılmıştır. Dahası, doğal gözenekli ortamın içinde gözeneklerini tıkar bu çökeltilerin yeteneği nerede sünger niteliksel bir deney yoluyla gösterilmiştirçubuklar uzunluk ölçekleri bir dizi olan bir gözenek ağı taklit etmek için kullanıldı. bakteriyel hücreler ihtiva eden kültür ortamı içinde daldırma bir sünger çubuğu nedeniyle kimyasal çöktürme sürekli işlemle elde edilen gözeneklerinin tıkanması sertleşir. sertleştirilmiş çubuk küçük deformasyon ile aynı ağırlığı desteklemek mümkün iken, sıkıştırılmış ve uygulanan bir dış yük altında sıkılmış olur bir kontrol sünger bar karşılaştırıldığında bu sertleştirilmiş sünger çubuk üstün güç sergiler.
Giriş
Sporosarcina pasteurii yüksek alkali ortamlarda (pH ~ 10) 1 hayatta mümkün gram pozitif bir bakteridir ve (MICP) 2-4 Mikrobiyolojik Kaynaklı Kalsit Yağış adında bir fenomenin bir etkeni olabilir bakteri türlerinden biridir. MICP kalsiyum karbonat çökelmesi uygun çevre koşulları altında, belirli mikropların neden olduğu bir işlemdir. S. pasteurii nedeniyle belirli koşullar altında MICP önemli miktarlarda uyarılması için olası bir ajan olarak tanımlanması son yıllarda önem kazanmıştır. Bu olasılık aslında kaynaklanıyor S. pasteurii üreaz enzimi bol miktarda salgılar eşsiz bir yeteneği vardır. Bu enzim, su moleküllerinin ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
NOT: Aşağıda açıklanan sırayla deneysel protokol gerçekleştirin. Bakteri kültürü protokolü Bölüm 1 'de tartışılmıştır (aynı zamanda bakınız Şekil 1). Bölüm 2 harici katkı maddeleri kullanılarak kültür ortamı zenginleştirmek için protokol açıklar. Bölüm 3 multi-mode mikroskopi için protokoller açıklanmaktadır. Tüm tek tek bileşenlerin ağırlıkları bir analitik terazi kullanılarak ölçülebilir. her solüsyonun hacmi volümetrik bir silindir kullanılarak ölçülebilir.
NOT: - ayrıntılar için kurumsal güvenlik ofisi danışın 2. Uygun biyogüvenlik protokolleri Bölüm 1 için takip edilmelidir.
1. Bakteriy....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
S. bir alkaliphile 24 nispeten sert koşullar yaşayabilir olmaktan pasteurii. Yukarıda belirtilen kültür protokolü, S. takip edildiğinde pasteurii bakteri zaman (Şekil 2A) üzerinde kalsiyum karbonat çökelmesine yol açar, bir bölme içine yetiştirilir. Şekil 2 (b) kültür ortamı içinde, bakteriyel hücre popülasyonunun bir faz-kontrast optik mikroskopik bir görüntüsünü gösterir. Bireysel hücreler oldukça belirgin.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kritik Adımlar: Bu yazının S. uygulanabilir bir örneğini kültürü için detaylı protokolleri açıklar pasteurii. Kültür hazırlandılar sonra, uygun olarak zenginleştirilmiş olmalıdır. Uygun kimyasal ortamı sağlamak için bir başarısızlık ya çok uzun zaman ölçekleri yağış veya bunun tam eksikliği yol açar, çünkü bu deney başarısı için çok önemli bir adımdır. S. pasteurii birkaç dış ajanslar oldukça duyarlıdır ve biyokimyasal sağlamlık ve tekrarlanabilirlik sağlamak için bakım ve has.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Helmholtz-Alberta Girişimi'ndeki ortaklara, Helmholtz Derneği'ne ve Alberta Üniversitesi'ne bu işbirliğine katılımdan kaynaklanan destek için teşekkür ederiz. Araştırma finansmanı, Helmholtz Derneği'nin Girişim ve Ağ Oluşturma Fonu, katılımcı Helmholtz Merkezleri ve Alberta Environment'ın ecoTrust programı aracılığıyla Alberta Hükümeti tarafından sağlanmaktadır.
Dr. Tanushree Ghosh, bir dizi kritik aşamadaki kritik girdileri için minnetle kabul edilmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Petridish | Fisher Scientific | FB0875712 | Agar plakası olarak kullanılan Petridish |
| Pyrex Şişeleri | Fisher Scientific | S63268 | Corning Erlenmeyer |
| Tris-Base | Promega | H5133 | Tris-Buffer |
| Hidroklorik Asit | Sigma-Aldrich | H9892 | 1.0 N, Bioreagent, hücre kültürü için uygun |
| Agar Tozu yapmak için kullanılıyor | Sigma-Aldrich | A1296 | mikrobiyoloji test edilmiş, bitki hücre kültürü test edilmiş, hücre kültürü test edilmiş, toz |
| Amonyum Sülfat | Moleküler Biyoloji için | Sigma-Aldrich | A4418 |
| Maya özü tozu | Sigma-Aldrich | 51475 | |
| Ölçüm Silindiri | Cole-Parmer | CP08559GC | Cole-Parmer A Sınıfı Dereceli Silindir, Cal Cert, TC ile; 1.000 ml, 1 / Pk |
| Reaktiflerin ağırlığını ölçmek için kullanılan | Analitik Terazi OHAUS | AX124E | |
| Otoklav | Brinkmann | 58619000 | |
| Otoklav Bandı | VWR | 52428864 | |
| Alüminyum Folyo | Sigma-Aldrich | Z185140 | şişeyi Otoklav Bakteri Stokuna yerleştirmeden önce kapatmak için kullanılıyor |
| Cedarlane | 11859 | -80 derece ve derece; S. pasteurii C stoğu, ATCC No. Cat'e karşı bahsedilir. Hayır. | |
| Mline Tek Kanallı Mekanik Pipetleyiciler, Değişken Hacimli | Biohit | 725010 | VWR tarafından 14005976 katalog numarasıyla pazarlanmaktadır |
| Mikropipet Ucu | Fisher Scientific | 212772B | Agar plakalarını kaşımak için kullanılır |
| Kuluçka makinesi | Bağlayıcı | 80079098 | Mikrobiyoloji İnkübatörü, BF Serisi |
| Çalkalama İnkübatörü | VWR | 14004300 | VWR İmza Tezgah Üstü Çalkalama İnkübatörler |
| Fosfat Tampon Salin (PBS) | Sigma-Aldrich | P7059 | |
| BD Falcon Express Pipet Destekli Pipetleme Cihazı | BD Biosciences | 357590 | VWR tarafından 53106220 Parafilm katalog numarası altında pazarlanmaktadır |
| Sigma-Aldrich | P7793 | Agar plakalarını kapatmak için kullanılıyor | |
| Üre | Sigma-Aldrich | U1250 | Besin ortamı için zenginleştirme |
| Sodyum Bikarbonat | Sigma-Aldrich | S8875 | Besin ortamı için zenginleştirme |
| Kalsiyum klorür | Sigma-Aldrich | C1016 | Besin ortamı için zenginleştirme |
Kaynaklar
- Gibson, T. An investigation of the Bacillus pasteurii group. Journal of Bacteriology. 28, 491-502 (1934).
- Greenfield, L. J. Metabolism and concentration of calcium and magnesium and precipitation of calcium carbona....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
