Hayvan araştırmalarında tekrarlanan kan örneklemesi gerekli ve önemlidir. Yetişkin zebra balıklarından tekrarlanan kan alımı için yeni, öldürücü olmayan ve güvenilir bir yöntem geliştirdik ve bu yöntemi glikoz metabolizması da dahil olmak üzere kan biyokimyası çalışmasına uyguladık.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Yetişkin Zebra balığı Kan Testleri için Tekrarlanan Kan Alma
Bu makalede
Özet
Özet
Tekrarlanan kan toplama laboratuvar hayvanları üzerinde yapılan en yaygın tekniklerden biridir. Ancak, Zebra balığı kan toplama için bir öldürücü olmayan protokol kurulmamıştır. Zebra balığı kan toplama için önceki metotlar, lateral insizyon, dekapitasyon ve kuyruk ablasyon gibi öldürücü bulunmaktadır. Böylece biz burada bu yordamı özetleyen ayrıntılı bir protokol, bir roman "tekrarlanan" kan toplama yöntemi geliştirdi ve mevcut var. Bu yöntem, minimal invaziv ve bu nedenle, aynı bireyden elde tekrarlanan kan örnekleme sağlayan zebrabalıkları için çok düşük bir ölüm oranına (% 2.3) elde edilir. Kan örneği maksimum hacim balık vücut ağırlığına bağlıdır. Aralıklarla tekrarlanan kan örneklemesi için hacim kan hemoglobin ölçümleri ile değerlendirildi vücut ağırlığının her hafta ya da ≤1% 2 haftada, bir ≤0.4% olmalıdır. Ayrıca, hemoglobin, açlık kan şekeri, plazma triaçilgliserol (TG) ve toplam cerkek ve dişi yetişkin zebrafish holesterol düzeyleri ölçüldü. Ayrıca diyet indükte obeziteye glikoz metabolizmasının bozulmasına araştırmak için, bu yöntemi uygulanır. Bu kan toplama yöntemi glukoz ve lipit metabolizması ve bir insan hastalık model organizma olarak zebrafish kullanımını artıracak hematolojik çalışmalar da dahil olmak üzere birçok uygulama, sağlayacaktır.
Giriş
Organları ve genetik insanlarda 1,2 benzemektedir, çünkü balığı insan hastalıklarında değerli bir model olarak artan bir popülerlik kazanmaktadır. Gelişimsel biyoloji alanında birçok çalışma zebra balığı ve insan gösteri hematopoiesis 3, hemostaz 4,5 ve myelopoiesis 6 benzerliği işaretli olduğunu göstermiştir. Yetişkin Zebra balığı da bu model organizma hisseleri nedeniyle insan hastalıklarında bozulduğu olanlarla ortak yollar immünolojik 7, nörodejeneratif 8 ve obezite ile ilişkili hastalıkların 9 çalışmak için kullanılır. Obezite ve obezite ile ilişkili hastalıkların (diyabet, karaciğer ya....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bütün hayvan prosedürleri Mie Üniversitesi Etik Kurulu tarafından onaylanmış ve uluslararası kurallara Japon hayvan refahı yönetmelik 'Refah ve Hayvanların Yönetimi Yasası' (Japonya Çevre Bakanlığı) göre gerçekleştirilmiştir ve uyulması bulundu.
Needle 1. Hazırlık
NOT: Bütün deneyler anestezi altında gerçekleştirildi ve tüm çabaları acıyı en aza indirmek için yapılmıştır. Ötenazi için, balık ≥20 dakika boyunca (≤4 ° C'de 5 parça buz / 1 kısım su), bir buz-su banyosu içine daldırıldı.
- Bir iğne çektirmesi (Şekil 1A) ile 1,0 mm dış çaplı cam kapiller çekerek cam iğneler mic....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
(Şekil 1J <1 mm delinmesi) ve% 2.3 gibi çok düşük bir mortalite oranı veren bu kan toplama yöntemi zebrabalıkları minimal hasara neden olmaktadır. Tek bir balık toplanan ve vücut ağırlığı (Şekil 3) bir ilişki değerlendirilebilir kan maksimum ses incelenmiştir. Biz toplanan maksimum kan hacmi doğrusal vücut ağırlığının (R = 0,813) ile ilişkili olduğunu bulduk. Tek bir balık (vücut ağırlığı = 1,071 g) toplanan kanın en büyük hacmi 25 ul oldu ve en küçük hacmi 0.115 g ağırlığında bir ba.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Biz seri erişkin zebrabalıkları kan elde etmek için burada ayrıntılı bir protokol mevcut. Bu yöntem gerçekleştirmek için basittir ve günlük olarak laboratuvarda kullanın. Bu kan toplama yöntemi Zebra balığı en dorsal aort içine bir cam kılcal iğne takmadan dayanmaktadır. Bu işlem sırasında, o dorsal aorta arıyor için kriter olduğu için omurgayı baskılamak için dikkatli olmak önemlidir. Omurga yaralanması azaltılması hayatta kalma oranını artıracaktır. Bu teknik, basit ve usta kolay olmasına rağmen, yüksek başarı ve haya.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma JSPS KAKENHI Hibe Numarası 25860294 ve 25590073 tarafından desteklenmiştir. Elle çizilmiş illüstrasyon için Bayan Yui Namie'ye ve zebra balığı bakımındaki yardımları için Bay Koshi Kataoka ve Bayan Sayuri Ichikawa'ya teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Filamentli cam kılcal damarlar | Narishige | GD-1 | 1.0 mm dış çap. |
| İğne çektirme | Narishige | PC-10 | İğneleri üretmek için |
| Heparin | Wako Saf Kimya Endüstrileri | 081-00136 | Heparinizasyon için |
| Aspiratör borusu tertibatı | Drummond | 2-040-000 | Kan alma için |
| Ampul dağıtıcı | Drummond | 1-000-9000 | Kan alma için |
| 2-fenoksietanol | Wako Saf Kimya Endüstrileri | 163-12075 | Balığın uyuşturulması için |
| DRI-CHEM3500V | Fujifilm-Hemoglobin | ölçümü için | |
| DRI-CHEM Slaytlar | Fujifilm | Hb-WII | Hemoglobin ölçümü için |
| Glutest Neo Super | Sanwa Kagaku Kenkyusho-Bood | glikoz ölçümü için | |
| Wako L-tipi TG kiti Wako | Saf Kimya Endüstrileri | 464-44201 | ölçüm |
| Wako L tipi CHO kiti | Wako Saf Kimya Endüstrileri | 460-44301 | Toplam kolesterol ölçümü için |
| Parafilm M | Alcan Ambalaj | PM996 | Kanı dışarı atmak için |
Kaynaklar
- Lieschke, G., Currie, P. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nat Rev Genet. 8 (5), 353-367 (2007).
- Penberthy, W. T., Shafizadeh, E., Lin, S. The zebrafish as a model for human disease. Front Biosci. 7, d1439-d1453 (2002).
- Stachura, D. L., Traver, D.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
