Yöntem makalesi

Gen İfade Etkileyen Sinyal İletimi Pathways tanımak Tavuk Embriyo uzuvlar Geliştirme içine Boncuk eklenme

DOI:

10.3791/53342

⸱

17 Ocak 2016

 , 
1Division of Animal Sciences, School of Biosciences, University of Nottingham

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Büyüme faktörlerine veya sinyal yollarının spesifik inhibitörlerine batırılmış boncukları gelişmekte olan embriyolara aşılayarak, etkilerini in vivo olarak doğrudan test etmek mümkündür. Bu protokolde, bu moleküllerin gen ekspresyonu ve sinyal iletimi üzerindeki etkilerini belirlemek için boncuklar uzuv tomurcuğuna aşılanır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tavuk embriyo kullanarak doğrudan büyüme faktörleri ya da gen ekspresyonu ve sinyal transdüksiyon yollarının aktivasyonu ile ilgili sinyal yollarının spesifik inhibitörleri ya da etkilerini test etmek mümkündür. Bu teknik, belirli zamanlarda için kesin olarak tanımlanmış gelişim aşamalarında sinyal molekülleri teslim izin verir. Bu embriyolar, hasat edilmiştir ve gen ekspresyonu in situ melezleme ya da immün ile gözlemlenen sinyal transdüksiyon yollarının aktivasyonu, örneğin, incelenebilir sonra.

U0126, bir MEK inhibitörü batırılmış bu FGF18 batırılmış bir video heparin boncuk veya AG 1-X2 boncuk, ovo ekstremite tomurcuk içine aşılı edilir. Bu FGF18 U0126 tarafından inhibe edilir MyoD ve ERK fosforilasyonu ve endojen ve FGF18 kaynaklı hem MyoD ekspresyonunu uyardığını göstermektedir. Bir retinoik asit antagonisti batırılmış Boncuk FGF18 tarafından prematüre MyoD indüksiyon potansiyalize edebilir.

Bu yaklaşım bize olabilirFarklı büyüme faktörleri ve inhibitörleri ve geniş bir yelpazesi ile ed de gelişmekte olan embriyonun diğer dokularda uyarlanmıştır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kuş embriyolar yıllardır 1 gelişim çalışma için güçlü bir araç sağladı. Bunların en yararlı özelliklerinden biri bunların manipüle edilmeleri nispeten kolay olmasıdır. Dış gelişimi, hücre kaderine 2,3 çalışmak için klasik bir bıldırcın piliç kimera sistemi olarak örnekler dahil olmak üzere çeşitli micromanipulations embriyo ulaşmak için yumurta açıp gerçekleştirmek mümkün kılar, geliştirme 4,5 sırasında belirli dokularda aşırı ekspresyona yönelik retrovirüslerin enjeksiyonu ve eksplant kültürü gelişimsel sinyal kaynaklarını 6 tanımlamak için. Daha yakın zamanlarda GFP ifade transgenik tavuk hattından greft ile etiketsiz bilgisayarlar arasında oluşturulan kimeralardır klasik aşılama ve genetik modifikasyon kombinasyonu gelişimi 7,8 dair önemli bilgiler sağlayabilir göstermiştir.

Kuş embriyo manipüle edilebilir kolaylığı uzuv incelemek için o mükemmel bir model yapmıştırgelişimi 9. In vivo gelişmekte bacaklarda özgü büyüme faktörlerinin uygulanması bacak desenlendirme 10,11 değiştirebilir ve bu sürecin 12 içgörü sağlamaya devam faktörlerin belirlenmesinde etkili olmuştur. Bu yaklaşım aynı zamanda, kas gelişimini düzenleyen faktörleri incelemek için kullanılır olmuştur ve böyle Wnts 13, BMP 14 ve HGF 15 gibi sayısız sinyaller için roller ortaya çıkardı.

Son zamanlarda bu teknik, bacak tomurcuk miyojenik gen ekspresyonunu kontrol sinyalleri araştırmak için kullanılmıştır ve FGF18 ve retinoik asit arasındaki etkileşimler MyoD ekspresyonu 16 zamanlamasını kontrol göstermiştir. Boncuklar üzerine yüklendi ve daha sonra belirlenen gelişim aşamalarında spesifik dokular doğrudan aşılanabilir büyüme faktörleri ve küçük moleküllerin bir kombinasyon kullanılarak gelişimi esnasında hemen hemen her zaman ve bölge müdahale imkanı verir. Bu inve için kullanılmıştırhücre gruplarının desenlendirme 17,18, nöral şartnamede 19, nöral krest göç 20 ve eksen uzantısı 21 dahil olmak üzere birçok süreçleri stigate.

Burada tavuk bacaklarda gelişmekte olan ya da büyüme faktörleri ya da inhibitörlerin batırılmış boncuklar aşılama için bir yöntem tarif eder. Bu in situ hibridizasyon ile, kas spesifik gen ekspresyonunu analiz ederek Miyogenesis bu sinyallerin etkisini belirlemek amacıyla kullanılmıştır. Bu tür retinoik asit veya belirli bir sinyal yollarının küçük molekül inhibitörleri olarak küçük hidrofobik moleküller için büyüme faktörleri ya da AG 1-X2 boncuklar için kullanılan heparin batırılmış boncuklar, kullanılarak greft tarif eder. Bununla birlikte, diğer boncuklar da FGF'ler 22 ve 23, her iki Shh teslim etmek için kullanılmıştır temin edilebilmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Etik Beyanı: Bütün bu deneyler hayvan bakımı ve Nottingham Üniversitesi etik kurallara uyun.

Tırnak için Heparin Boncuk 1. Hazırlık

  1. Kullanmadan önce PBS içinde iyice heparin boncuk yıkayın. Not: boncuk PBS içinde bir çamur olarak 4 ° C 'de muhafaza edilebilir.
    1. PBS, 1 ml damla bir 20 ul pipet ile stoktan bunları kaldırarak aşılama için boncuk seçin. Daha sonra 3 santimetrelik bir petri tabağına PBS 20 ul damla içine boncuk aktarmak için 2 ul ayarlanmış bir mikropipet kullanın. P2 pipet ile seçilen boncuklar transfer diseksiyon mikroskobu stereo kullanarak, boyutuna göre boncuk seçin ve; Bu yaklaşık 100 mikron çapında idealdir.
  2. Boncuk PBS çıkarın. 20 ul pipet ve ince bir saatçi pensesi ile kılcal hareket ile artık sıvı sıvının en çıkarın. Not: fiili büyüme yüzden mümkün olduğunca ortadan kaldırmak için önemlidirbu boncuklar ilave edildiğinde r seyreltilmez.
  3. Boncuklar üzerine, doğrudan büyüme faktörü Pipet. FGF18 için PBS içinde% 0.1 BSA içinde 0.5 mg / ml'de yeniden rekombinant FGF18 0.5 ul ekle. Buharlaşan sıvının önlemek için çanağın kenarları etrafında birkaç damla su koyun.
  4. Oda sıcaklığında 1 saat için boncuklan inkübe edin. Pasteur pipeti ile çanak su damlalarını ve aşılama için hazır buz üzerine yerleştirin.
  5. Onlara görselleştirmek yardımcı olmak için aşılama öncesi (saydam boncuk için) aktarım işlemlerinin% 2 fenol kırmızısı 4-5 boncuk Gerekirse. Embriyo transfer olmadan önce PBS içinde durulayın.

Tırnak için AG 1-X2 Boncuk 2. Hazırlık

  1. 0,2 N formik asit ile Türevlendirilen boncuk Kullanımdan önce.
    1. Bu kullanım, 1.5 ml mikrosantrifüj tüp boncuk aktarmak için bir spatula yapmak için. 0,2 N formik asit 1 ml ilave edin ve 1 saat süre ile bir çalkalama platformu üzerinde yıkayın.
    2. Sonra P1000 pipet ile formik asit çıkarın ve 1 ile değiştirinml su. 1 saat yıkayın ve formik asit kalan çıkarmak için altı kez tekrarlayın.
    3. P1000 pipet ile kalan sıvıyı çıkarın ve 4 ° C'de boncuk saklayın. Not: Bu aşamada bütün artık suyun ayrılması için gerekli değildir.
  2. 3 cm'lik bir petri kabına küçük bir spatula kullanılarak stoktan yaklaşık 5-10 ul hacmi tanelerin küçük pelet çıkarın ve DMSO'nun 1 ml ekleyin (ya da ilaç içinde çözünmekte çözücü hangisi geçerli ise). Not: Bu doğru boyutta olanlar seçmek için hangi birkaç yüz boncuk sağlamalıdır.
  3. Sonra başka bir 3 santimetrelik bir petri tabağına bir çözücü 20 ul damla yaklaşık 100 um çapında boncuklar aktarmak için 2 ul ayarlanmış bir P2 pipet kullanın.
  4. 20 ul pipet ve 2 ul pipet ile herhangi bir kalıntı çözücü ile çözücü çıkarın. İlacın 20 ul uygulanacak değiştirin.
    Not: tutarlılığı (ya da hiç çözücü kullanılır) DMSO içinde 100 uM bir konsantrasyonda ilaç çözünmesi için,Bazı küçük molekül inhibitörleri olarak -80 ° C de 20 ul ve deposuna kısım kararsızdır ve tekrarlanan donma-çözülme önlemek için en iyisidir. Gerekirse o boncuk iliklerine önce istenilen konsantrasyonda ilacın sulandırmak. Etkili konsantrasyon, her bir ilaç için ampirik olarak tespit edilmesi gerekebilir.
  5. 1 saat süreyle inkübe edin. Bu moleküllerin çoğu ışığa duyarlı olarak ışıktan koruyun.
  6. Suda çözünmüş% 2 fenol kırmızısı 20 ul içine 2 ul ayarlanmış bir p2 pipet ile aktarım işlemlerinin 4-5 boncuk aşılama önce. Boncuk görselleştirmek için bir stereo mikroskop kullanarak bu adımı gerçekleştirin. İnce saatçiler forseps ile tek bir boncuk veya bir tel döngü çıkarın ve embriyo aktarmadan önce PBS içinde yıkayın. Bu faaliyetin kaybına neden olabilir kullanımdan önce fazla 15 dakika 2% fenol kırmızısı boncuk bırakmayın.

3. Tungsten İğneleri hazırlanması

  1. 3-4 cm uzunlukta ince tungsten tel kesin. Ucuna tel tek parça takınBunsen beki bir cam Pasteur pipeti ve eritebilir pozisyonda sabitlemek için. Bunlar, kullanım sırasında zarar görmüş, yedek olmadığından emin olmak için 10 iğne kadar hazırlayın.
  2. Bir blowtorch ateşe telin ucunu yerleştirin ve (2-3 dk civarında) tungsten beyaz parlıyor ve ucu keskin kadar orada tutun. Not: Kullanım sırasında iğne temizlenebilir ve gerektiğinde blowtorch yeniden bilenmiş.
    NOT: Bu iğneler boncuklar aktarmak için döngüler yapmak için kullanılabilir. Yavaşça tezgah iğne dokunmak ve bir döngü oluşturacak şekilde viraj olacak.

Boncuk Greft 4. hazırlanması Embriyolar

  1. Istenen sahne (en uzuv tomurcuk manipülasyonları için 3-5 gün) ulaşıncaya kadar kör uç yukarı gelecek şekilde yumurta kuluçkaya yatmaktadır. Kabuğunu kırmak ve daha sonra kabuk kaldırmak ve embriyo maruz forseps kullanmak künt ucunda künt forseps musluk kullanma. Yumurta kabuğu zarı emin olun da kaldırılır.
    Not: PBS 1-2 ml yardımcı olmak için bir Pasteur pipeti ile eklenebilirBu zar sarısı yapışıyor eğer. Yavaşça, sarısı yüzeyine PBS pipetle sarısı zarar vermemeye özen forseps ile membran tutup, yavaşça yumurta çekin.
  2. 10 ml şırınga ile yumurta ve 19 G iğne albümin 5 ml kadar kaldırın. Embriyo sağkalım oranları azaltabilir büyük hacimlerin çıkarılması gibi yumurta mühürlemek için kullanılan bant ile temas yapmaz embriyo sağlamak için gerekli olan tek kadar götür.
  3. Embriyo 15 100 U penisilin içeren PBS ml ve 0.1 mg streptomisin / ml sanatçılar india mürekkep 5-6 damla görselleştirmek için. 0.5-1 enjekte ml doğrudan 1 ml şırınga ile embriyo ve 25 G iğne altında.
  4. Dihidrat etmez embriyo sağlamak için yumurtanın içine% 1 fetal buzağı serumu ve 100 U penisilin ve 0.1 mg streptomisin / ml PBS 2-3 ml ekleyin. Bilenmiş saatçiler forseps kullanarak vitellin membran kaldırmak ve gelişmekte olan ekstremite tomurcukları üzerinde amniyon açın. Embriyo kurumaz emin olun veGerekirse, daha fazla PBS / FCS ekleyin.
    NOT: bacak tomurcukları açıkça embriyonun kanadında eşleştirilmiş çıkıntılar olarak görülebilir. Bu aşamalarda embriyo böyle sağ tarafı normal üst olduğunu dönecek. Sonuç olarak, doğru ayağının içine doğru geriye boncuk greft ve karşı, kontrol olarak bırakıldı olanları kullanmak için, normalde daha kolaydır.
  5. Boncuk implante edilecek uzuv tomurcuk içine bir kesi yapmak için bir bilenmiş tungsten tel kullanın. Genç aşamalarında bu zor olmasına rağmen mümkün ekstremite tomurcuk aracılığıyla tüm yol kesme kaçının.
    NOT: Büyük embriyoların (HH evre 22 ve üzeri) yılında aşılama için ama uzuv kendisi küçük tomurcuk olarak bu daha zor genç aşamalarında bacak tomurcuk belirli bölgeleri seçmek mümkündür. O bacak tomurcuk, yani özellikle genç aşamalarında, boncuk proksimal ekstremite kalır aşılı boncuk geçmiş büyüyecek hatırlamak da önemlidir.
  6. Ya ekstra ince wa kullanarak büyüme faktörü veya ilaç ya bir boncuk Pick uptchmakers forseps veya tungsten iğne yapılmış bir döngü. Boncuk DMSO veya fenol kırmızısı ya batırılmış edilmişse, embriyo başvurmadan önce PBS içinde yıkayın. Forseps / tel döngü ile embriyo boncuğu aktarın. Sonra kesi içine boncuk eklemek için bilenmiş tungsten tel kullanın.
  7. Embriyo hidrate tutulmasını sağlamak yumurta PBS / FCS 1-2 ml ekleyin, ancak bu embriyolar zarar ve boncuk yerinden neden olabilir olarak embriyo kendisi doğrudan uygulamaktan kaçının. Bantla yumurta Seal ve inkübatör dönmek.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HH aşamada 21 MyoD boyama gelişmekte Somitlerin (Şekil 1A) miyotom gözüyle görülebilir, ancak bacak miyoblastlar geliştirilmesinde ifade değildir. Şekil 1B, bir FGF18 kordon greft, aşağıdaki MyoD 6 saat boyunca in situ hibridizasyon gösterir. Karşı bacak bir ifade yoktur ise MyoD boncuk yakın miyoblastların indüklenir. U0126 batırılmış bir boncuk, MEK, MyoD (Şekil 1C) bloklar FGF18 indüksiyon spesifik bir inhibitörü olan Co-aşılama. Benzer HH aşamada 21 bir U01...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ovo dokuların geliştirilmesi için doğrudan uygulanabilir boncuk greft kullanımı, uygulandıkları hangi gelişim aşamasında ve pozlama süresi boyunca eşsiz kontrol vererek gelişim sırasında büyüme faktörü sinyalizasyon rolünü incelemek için güçlü bir araçtır.

Molekülünün her türü için boncuk seçimi önemlidir. Her ampirik bu boncuklar üzerinde inhibitör etkinliğini test etmek için gerekli olmasına rağmen, burada anlatılan önleyicileri ve retinoik asit gibi küçük hidrofobik moleküller, genellikle...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma kısmen Nottingham Üniversitesi Erken Kariyer ödülü tarafından DS'ye verilen bir ödülle finanse edilmiştir. RM, Irak Eğitimi Geliştirme Yüksek Komitesi tarafından finanse edilmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Heparin akrilik boncuklarSigmaH5263Kullanılan akrilik-heparin boncuklar durdurulmuştur. Bununla birlikte, yedek bir ürün mevcuttur, Heparin agaroz boncukları, kedi no H6508. Bunlar şeffaftır, bu nedenle çalışmak daha zordur ancak AG 1-X2 boncuklar, AG 1-X2 boncuklar
Bio-Rad140-1231
Affi Gel mavi boncuklarBio-Rad153-7301; 153-7302Bu boncuklar, Shh ve FGF'ler dahil olmak üzere bir dizi büyüme faktörü ile kullanılmıştır ve heparin boncukları
FGF18Peprotech100-28'inyerini almak için kullanılabilir.PBS'de% 0/1 BSA ile yeniden süspanse edin, 0.5-1ul'lik tek kullanımlık alikotlar hazırlayın ve -80 ° C'de saklayın. Partiler ve tedarikçiler değişebilir, bu nedenle etkili bir doz belirlemek için farklı konsantrasyonlar test edilmelidir.
U0126Hücre Sinyalizasyonu9903DMSO'da 20mM'ye kadar stok yapın ve -80 ° C'de tek kullanımlık alikotlarda saklayın. Işıktan koruyun.
BMS-493Tocris Biosciences3509DMSO'da yeniden askıya alın ve -80 ° C'de tek kullanımlık alikotlarda saklayın. Işıktan koruyun.
Siyah Hint mürekkebiWindsor ve Newton5012572003384 (30 ml)Bu ürüne alternatifler mevcut olsa da, bazı mürekkepler embriyolar için toksik olduğundan dikkatli olunmalıdır
Tungsten tel, 0,1 mm çap. %99,95Alfa Aesar10404
Penisilin / streptomisinSigmaP0781PBS/mürekkep ve PBS/FCS'de 100X seyreltin
, ,

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Davey, M. G., Tickle, C. The chicken as a model for embryonic development. Cytogenetic Genome Research. 117, 231-239 (2007).
  2. Le Douarin, N. The Nogent Institute--50 years of embryology. International Journal of Developmental Biology. 49, 85-103 (2005).
  3. Le Douarin, N. M. The avian embryo as a model to study the development of the neural crest: a long and still ongoing story. Mechanisms of Development. 121, 1089-1102 (2004).
  4. Bell, E., Brickell, P. Replication-competent retroviral vectors for expressing genes in avian cells in vitro and in vivo. Molecular Biotechnology. 7, 289-298 (1997).
  5. Abu-Elmagd, M., et al. Wnt/Lef1 signaling acts via Pitx2 to regulate somite myogenesis. Developmental Biology. 337, 211-219 (2010).
  6. Munsterberg, A. E., Lassar, A. B. Combinatorial signals from the neural tube, floor plate and notochord induce myogenic bHLH gene expression in the somite. Development. 121, 651-660 (1995).
  7. McGrew, M. J., et al. Efficient production of germline transgenic chickens using lentiviral vectors. EMBO Reports. 5, 728-733 (2004).
  8. Valasek, P., et al. Cellular and molecular investigations into the development of the pectoral girdle. Developmental Biology. 357, 108-116 (2011).
  9. Tickle, C. The contribution of chicken embryology to the understanding of vertebrate limb development. Mechanisms of Development. 121, 1019-1029 (2004).
  10. Riddle, R. D., Johnson, R. L., Laufer, E., Tabin, C. Sonic hedgehog mediates the polarizing activity of the ZPA. Cell. 75, 1401-1416 (1993).
  11. Tickle, C., Alberts, B., Wolpert, L., Lee, J. Local application of retinoic acid to the limb bond mimics the action of the polarizing region. Nature. 296, 564-566 (1982).
  12. Rosello-Diez, A., Torres, M. Regulative patterning in limb bud transplants is induced by distalizing activity of apical ectodermal ridge signals on host limb cells. Developmental Dynamics. 240, 1203-1211 (2011).
  13. Anakwe, K., et al. Wnt signalling regulates myogenic differentiation in the developing avian wing. Development. 130, 3503-3514 (2003).
  14. Amthor, H., Christ, B., Weil, M., Patel, K. The importance of timing differentiation during limb muscle development. Current Biology. 8, 642-652 (1998).
  15. Brand-Saberi, B., Muller, T. S., Wilting, J., Christ, B., Birchmeier, C. Scatter factor/hepatocyte growth factor (SF/HGF) induces emigration of myogenic cells at interlimb level in vivo. Developmental Biology. 179, 303-308 (1996).
  16. Mok, G. F., Cardenas, R., Anderton, H., Campbell, K. H. S., Sweetman, D. Interactions between FGF18 and retinoic acid regulate differentiation of chick embryo limb myoblasts. Developmental Biology. 396, 214-223 (2014).
  17. Abou-Elhamd, A., Cooper, O., Münsterberg, A. Klhl31 is associated with skeletal myogenesis and its expression is regulated by myogenic signals and Myf-5. Mechanisms of Development. , 126-852 (2009).
  18. Schmidt, M., Tanaka, M., Munsterberg, A. Expression of (beta)-catenin in the developing chick myotome is regulated by myogenic signals. Development. 127, 4105-4113 (2000).
  19. Stavridis, M. P., Lunn, J. S., Collins, B. J., Storey, K. G. A discrete period of FGF-induced Erk1/2 signalling is required for vertebrate neural specification. Development. 134, 2889-2894 (2007).
  20. Martinez-Morales, P. L., et al. FGF and retinoic acid activity gradients control the timing of neural crest cell emigration in the trunk. Journal of Cell Biology. 194, 489-503 (2011).
  21. Olivera-Martinez, I., Storey, K. G. Wnt signals provide a timing mechanism for the FGF-retinoid differentiation switch during vertebrate body axis extension. Development. 134, 2125-2135 (2007).
  22. Logan, M., Simon, H. G., Tabin, C. Differential regulation of T-box and homeobox transcription factors suggests roles in controlling chick limb-type identity. Development. 125, 2825-2835 (1998).
  23. Borycki, A. G., Mendham, L., Emerson, C. P. Jr Control of somite patterning by Sonic hedgehog and its downstream signal response genes. Development. 125, 777-790 (1998).
  24. Sweetman, D., et al. FGF-4 signaling is involved in mir-206 expression in developing somites of chicken embryos. Developmental Dynamics. 235, 2185-2191 (2006).
  25. Chapman, S. C., Collignon, J., Schoenwolf, G. C., Lumsden, A. Improved method for chick whole-embryo culture using a filter paper carrier. Developmental Dynamics. 220, 284-289 (2001).
  26. Sweetman, D., Wagstaff, L., Cooper, O., Weijer, C., Münsterberg, A. The migration of paraxial and lateral plate mesoderm cells emerging from the late primitive streak is controlled by different Wnt signals. BMC Developmental Biology. 8, 63(2008).
  27. Scott, B. B., Lois, C. Generation of tissue-specific transgenic birds with lentiviral vectors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the U.S.A. 102, 16443-16447 (2005).
  28. Seidl, A. H., et al. Transgenic quail as a model for research in the avian nervous system: a comparative study of the auditory brainstem. Journal of Comparative Neurology. 521, 5-23 (2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Boncuk GreftlemeB y me Fakt rleriMyoD EkspresyonuERK FosforilasyonuMEK nhibit rRetinoik Asit AntagonistiIn Situ Hibridizasyon

İlgili makaleler