Method Article

Küçük Kirleticilerin İmmünolojik Analizi Su Örneklerinin Otomatik Katı Faz Ekstraksiyon Basit Bir Yöntem

DOI:

10.3791/53438

⸱

January 1st, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centre Suisse d'Electronique et de Microtechnique, 2Department of Chemistry and Applied Biosciences, ETH Zurich, 3Department of Information Technology and Electrical Engineering, ETH Zurich

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Otomatik ve minyatür bir sistem kullanılarak su örneklerinden östradiolün ekstraksiyonu ve ön konsantrasyonu için bir protokol sunulmuştur.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çevre su numunelerinin katı faz ekstraksiyonu (SPE) için yeni bir yöntem önerilmiştir. Geliştirilen prototip maliyet-etkin ve kullanıcı dostu ve hızlı otomatik ve basit SPE gerçekleştirmenizi sağlar. Önceden konsantre edilmiş çözelti, düşük bir organik çözücü içeriğine sahip immunodeney ile analiz ile uyumludur. Bir yöntem olup 100 mL su örneklerinde doğal hormon 17β-estradiol ekstraksiyonu ve konsantrasyonu için önceden tarif edilmiştir. Ters faz SPE oktadesil- silis sorbent ile gerçekleştirilir ve elüsyon metanol 50% v / v, 200 ul ile yapılır. Elüent metanol miktarı azaltmak için, di-su eklenerek seyreltilmiştir. El SPE sütunu hazırladıktan sonra, genel işlem 1 saat içinde otomatik olarak gerçekleştirilir. İşlemin sonunda, östradiol konsantrasyonu, ticari bir enzim-bağlantılı bağışıklık-sorbent deneyi (ELISA) kullanılarak ölçülmüştür. 100-kat ön konsantrasyonu elde edilir ve yalnızca 10% v / v metanol içeriği. Molekülün tam geri kazanım1 ng ile elde edilir / L-de iyonize ve sentetik deniz suyu örnekleri çivili.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Numune hazırlama herhangi bir analitik sürecinde önemli bir adımdır. Özel olarak, matriks etkileri, etkileşimleri azalmasını ve analit zenginleştirilmesi kaldırılması kesin sonuçlar elde edilir ve algılama düşük sınırları ulaşmak için gereklidir. Endokrin bozucu bileşikler (EDCs) nedeniyle canlı organizmalar üzerindeki etkisine özellikle kaygı olduğunda bile çevrede bulunan çok düşük seviyeleri. Doğal hormon 17β-östradiol Avrupa Su Çerçeve Direktifi kapsamında düzenlenen öncelikli maddeler listesine eklenecek AB su kirliliği İzleme Listesi mevcut ve eğilimli. Katı faz ekstraksiyonu (SPE), genel olarak, her iki kimyasal 1-5 (kromatografısi, kütle spektromet....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Not: Aşağıdaki protokol SPE% 50 h / h metanol ile C18 sorbent ve elüsyon ile 100 ml su numunesi üzerinde gerçekleştirilmiştir açıklanmaktadır. Zenginleştirilmiş örneği (ELISA) kiti linked immunosorbent bir enzim ile analizden önce,% 10 hac / hac metanol ulaşmak için seyreltilmiştir.

1. Reaktifleri hazırlanması

  1. Su örnekleri hazırlayın
    1. Önceki herhangi bir başka aşamasına, 0.2 um gözenek boyutlu filtreler ile, her 100 ml su örneği filtre.
    2. Bir su hacmi içine bir referans çözeltisi uygun hacimde seyreltilerek istenen konsantrasyona sahip örnek başak. Örneğin, 300 mg / L'lik bir konsantrasyonda E2 referans çöze....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sorbent ambalaj tekrarlanabilirliği kurutma ile değerlendirildi ve cam viyaller içinde pipetlendi sorbentin ağırlık ve ilk ve pre Şekil 2. Konsantrasyon gösterildiği gibi sonuç, 100 mi örnekler için test edildi enjeksiyonu sırasında Şekil 1. Tekrarlanabilirliği de gösterilmiştir edildi Konsantre örnekleri 17β-estradiol için ticari bir ELISA kiti kullanılarak tespit edilmiş ve Şekil 3'te gösterilmektedir çivili.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Immünolojik test kullanılarak analiz ve ardından su örneklerinin hazırlanması için yeni bir yöntem önerilmiştir. Enstrüman otomatik ve kullanıcı dostu bir şekilde katı faz ekstraksiyon gerçekleştirmenizi sağlar.

Sistem üflenmeden önce su numunesi filtrasyon kritiktir. Çözelti içinde hala mevcut herhangi bir parçacık potansiyel olarak akışkan ağ tıkar ve SPE sütunu engelleyebilir. Diğer önemli bir adım SPE kolonundan hazırlanmasıdır. Sütununda parçacıkların miktarı mümkün olan en iyi performa.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Avrupa Birliği Yedinci Çerçeve Programı FP7/2007-2013 tarafından 265721 no'lu hibe sözleşmesi kapsamında finanse edilmiştir. Yazarlar, bu projedeki destekleri için RIKILT Gıda Güvenliği Enstitüsü'ne (NL) teşekkür eder.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Filtre membranı 0.2 μ m gözenek boyutuMerck MilliporeGNWP04700Numune filtrasyonu için
Naylon membran 11 & mu; m gözenek boyutuMerck MilliporeNY1104700SPE sütunu için
Tek kullanımlık biyopsi yumruğu 5 mmTıbbi Bütçe39302439
Nucleodur C18 ec Macherey Nagel713550.0150 μ m parçacık çapı
Sentetik deniz suyuSigma AldrichSSWS500-500ML
MetanolVWR
17beta-estradiol standardıEnzo Life Science300 ng/ml
17beta-estradiol ELISA kitiEnzo Life ScienceADI-900-00896 kuyu, aralık 30 - 3.000 ng/L

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water. J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).
  2. Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Solid Phase ExtractionAutomated SPEWater Sample AnalysisImmunoassay CompatibilityEstradiol DetectionOctadecyl Silica SorbentMethanol ElutionELISA AnalysisEnvironmental MonitoringPollutant Pre concentration

Related Articles