Mesaj Sütun Türevlendirme Reaksiyon Akış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi sütunlar kullanma

Andrew Jones; Sercan Pravadali-Cekic; Stanley Hua; Danijela Kocic; Michelle Camenzuli; Gary Dennis; Andrew Shalliker

doi:10.3791/53462

Method Article

Mesaj Sütun Türevlendirme Reaksiyon Akış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi sütunlar kullanma

DOI:

10.3791/53462

⸱

April 26th, 2016

Andrew Jones¹ , Sercan Pravadali-Cekic¹ , Stanley Hua¹ , Danijela Kocic¹ , Michelle Camenzuli² , Gary Dennis¹ , Andrew Shalliker¹

¹School of Science and Health, University of Western Sydney, ²Van′t Hoff Institute for Molecular Sciences, University of Amsterdam

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Post kolon türevlendirmesi (PCD) kullanan yöntemler için reaksiyon akışlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi kolonlarının kullanımına yönelik bir protokol sunulmuştur.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Post kolon türevlendirmesi (PCD) kullanan yöntemler için reaksiyon akışlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi kolonlarının kullanımına yönelik bir protokol sunulmuştur. PCD'nin modern HPLC sistemlerine ve kolonlarına uyarlanmasındaki en büyük zorluk, reaktif karışımını ve ardından türevlendirme reaksiyonunun gerçekleşmesini sağlayan büyük hacimli reaksiyon bobinlerine duyulan ihtiyaçtır. Bu büyük direk kolon ölü hacmi, bant genişlemesine yol açar, bu da gözlemlenen ayırma verimliliğinin kaybına ve aslında hassasiyette algılamaya neden olur. Reaksiyon akışı sonrası kolon türevlendirmesinde (RF-PCD), türevlendirme reaktifi/reaktifleri, mobil fazın akışına karşı, reaksiyon akış kolonunun dış portlarından bir veya ikisine pompalanır ve burada kolon ucu bağlantı parçası içinde bulunan bir frit içinde kolon atık suyu ile karıştırılır. Bu teknik, kolon çıkış suyunun ve türevlendirme reaktiflerinin daha verimli bir şekilde karıştırılmasına izin verir, bu da reaksiyon döngülerinin hacminin en aza indirilebileceği ve hatta tamamen ortadan kaldırılabileceği anlamına gelir. RF-PCD yöntemlerinin, gözlemlenen ayırma verimliliği ve sinyal-gürültü oranı açısından geleneksel PCD yöntemlerinden daha iyi performans gösterdiği bulunmuştur. RF-PCD tekniklerinin bir başka avantajı, merkezi limandan gelen atık suyun yetersiz durumda izlenmesi yeteneğidir. RF-PCD şu anda nispeten küçük bir kolon sonrası reaksiyon aralığı üzerinde denenmiştir, ancak şu anda RF-PCD'nin mevcut herhangi bir veya iki bileşene (her iki reaktif aynı anda eklendiği sürece) adapte edilemeyeceğini öne sürmek için hiçbir neden yoktur.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kolon sonrası türevlendirme (PCD) ile birleştirilen yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) analiz laboratuarda bir dizi konu çözümünde yararlı olan güçlü bir araçtır. Bu, ^1,2 uygun dedektörler paketi ile başka bir tespit edilemeyen bileşikler tespit seçici saptanması ve nicelenmesi ^3-5 alt sınırları sağlar veya hedef analitin sinyal geliştirmek için kullanılabilir önlemek için bir hedef analitin türetmek matriks etkileri ^6. Yaygın olarak kullanılan PCD reaksiyonları ^9,10 veya floreskamin ^11,12, 2,2-difenil-ile reaktif oksijen türlerinin türetme (ROS) ninhidrin orto-phthaladehyde ^7-9 olan amino ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dikkat: (metanol, yani MSDS) kullanmadan önce tüm malzeme ve reaktifler için malzeme güvenlik veri sayfaları (MSDS) bakınız. çözücüler ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) yıkayıcı işlerken tüm uygun güvenlik uygulamalarının kullanımını sağlamak. HPLC, analitik terazi ve dedektör enstrümantasyon mühendislik kontrollerinin uygun kullanımını sağlamak ve kişisel koruyucu ekipman (koruyucu gözlük, eldiven, laboratuvar önlüğü, tam uzunlukta pantolon ve kapalı parmak ayakkabı) kullanımını sağlamak.

Not: Bu protokol, ilgi konusu bir kimyasal bileşiğin doğası özgü, farklı bir reaktif ile reaksiyonu akış kolon sonrası türevlendirme 3 yöntem (RF-PCD) teknikleri açıkla....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

RF-PSD tarafından kullanılmak üzere uyarlanmıştır ilk PCD yöntemi 2,2-difenil-1-picrylhydrazil kökü (DPPH) ^• ²⁴ ile antioksidanların türetilmesi olmuştur. Bu reaksiyon. Koleva ve ark ²⁵ tanıtıldı ve yaygın beri kullanılmaktadır. Algılama, reaktif oksijen türlerinin varlığında, radikal DPPH ^• renksizleşme, gözlenen absorbans bir damla antioksidanlar sonuçlar dolayısıyla varlığına dayanır. DPPH ^• Reaksiyon genellikle 500 ul veya ^13-15 daha.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

RF-PCD bant genişletilmesi etkilerinin en aza indirilmesi ve ayırma performansını artırmak, reaksiyon bobinler kullanılmadan HPLC atık sonrası sütun ile türetme reaktif verimli karıştırma sağlar. RF-PCD yöntemler de tespit yöntemi ile ilgili olarak, sinyal yanıt olarak iyileşme göstermiştir. Camenzuli ve ark., ²⁸ espresso kahve numunesinde ROS tespiti için DPPH ^• reaksiyon akış sütun kullandığını rapor için ilk oldu. Yaptıkları çalışmada çeşitli DPPH ^• reaktif akış oranları ile .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma UWS ve ThermoFisher Scientific tarafından desteklenmiştir. Yazarlardan biri (DK), Avustralya Yüksek Lisans Ödülü'nün alındığını onaylar.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
HPLC cihazı	Agilent	1290 Serisi HPLC
Türevlendirme sistemi için Ek Pompa(lar)	Shimadzu	LC-20A
RF sütun			Ticari olmayan
PEEK boru	Sigma Aldrich	Z227307
Kolon durdurucular			Kolon
PEEK tüp kesici	Sigma ile sağlanır Aldrich	Z290882
Analitik Terazi Terazisi			4 noktalı analitik terazi
Kron izle			Bilimsel Olmayan ekipman
Eluent toplama şişeleri			Düz tabanlı herhangi bir Küçük şişe işe yarayacaktır, örn, HPLC şişeleri HPLC
Şişeleri			Kullanılan
alete bağlı olacaktırMobil faz ve türevlendirme çözüm(ler)i için	kaplarSigma Aldrich	Z232211
Genel Laboratuvar cam malzemeleri			Hacimsel Şişeler, pippetler, vb. Miktar ve hacimler numune hazırlama yöntemine bağlı olacaktır.
Metanol	Sigma Aldrich	34860
DPPH	Sigma Aldrich	D9132
Amonyum Asetat	Sigma Aldrich	17836
Amonyak	Sigma Aldrich	320145	Aşındırıcı
Asetonitril	Sigma Aldrich	34998
Floresamin	Sigma Aldrich	F9015
4- aminoantipiren	Acros Organics BVBA	AC103151000
Potasyum ferrisiyanür	AnalaR	B10204-30

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Srijaranai, S., et al. Use of 1-(2-pyridylazo)-2-naphthol as the post column reagent for ion exchange chromatography of heavy metals in environmental samples. Microchem. J. 99, 152-158 (2011).
Kubickova, A., Kubicek, V., Coufal, P.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Mesaj Sütun Türevlendirme Reaksiyon Akış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi sütunlar kullanma

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles