Cıva(II)'nin disisteinil tetrapeptitlere farklı nispi oranlarında oluşan komplekslerin elektrosprey iyonizasyon orbitrap kütle spektrometresi ile karakterizasyonu sunulmuştur.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Elektrosprey İyonizasyon kütle spektrometresi ile Dicysteinyl tetrapeptidlerle ile Merkür (II) kompleksinin Bir Çalışma
Bu makalede
Özet
Özet
Bu çalışmada, cıva(II)'nin disisteinil tetrapeptide farklı nispi oranlarında oluşan komplekslerin elektrosprey iyonizasyon orbitrap kütle spektrometresi ile karakterizasyonu için bir yöntemi değerlendirdik. Bu strateji, diğer tekniklerin yanı sıra kütle spektrometresi kullanılarak tripeptitleri içeren cıva-disisteinil komplekslerinin önceki başarılı karakterizasyonuna dayanmaktadır. Cıva(II) klorür ve bir disisteinil tetrapeptit, değişen stokiyometrik oranlarda gazı alınmış tamponlu bir ortamda inkübe edildi. Oluşan kompleksler daha sonra hibrit bir doğrusal iyon ve orbi-tuzak kütle analizöründen oluşan bir elektrosprey kütle spektrometresi üzerinde analiz edildi. Elektrosprey iyonizasyon kütle spektrometresi (ESI-MS) spektrumları pozitif modda elde edildi ve gözlemlenen zirveler daha sonra farklı cıva izotopik dağılım modelleri ve ilişkili monoizotopik tepe için analiz edildi. Bu çalışma, belirtilen elektrosprey iyonizasyon koşulları altında oluşan komplekslerde cıva ve peptitin doğru bir stokiyometrisinin, farklı cıva izotopik dağılım modellerine dayalı olarak yüksek çözünürlüklü ESI MS kullanılarak belirlenebileceğini göstermektedir.
Giriş
Cıva zehirlenmesi1'in şelasyon tedavisi için reçete edilen mevcut klinik ilaçlar, cıva iyonlarının bağlanmasından ve sekestresyonundan sorumlu olan tiyol grup(lar)ını içerir2,3. Bununla birlikte, çalışmalar, bu küçük tiyol bileşiklerinin [dimerkaptosüksinik asit (DMSA) ve dimerkaptopropan-sülfonik asit (DMPS)] cıva şelasyon tedavisi4-6 için optimal olmadığını göstermiştir. Bu nedenle, cıva şelasyonu için tiyol bileşiklerinin rasyonel ilaç tasarımını geliştirmek için cıvanın tiyollerle ilişkisini ve karmaşık oluşum eğilimlerini anlamaya ihtiyaç vardır. Son zamanlarda, dithiol gruplarına sahip n-alkil ve aril disistenil tripe....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Not: Kullanmadan önce ilgili tüm malzeme güvenlik bilgi formlarını (MSDS) danışın. Cıva klorür toksik bir kimyasaldır. Onu ve ilgili tüm çözümleri teslim sırasında Kişisel koruyucu ekipmanlar (eldivenler, emniyet gözlükleri ve laboratuvar önlüğü) giyilmelidir. Ağır metaller için belirlenen açıkça etiketlenmiş kimyasal atık şişelerde çözümler atınız.
1. Hazırlık 5 mM gazı alınmış Amonyum format tamponu, pH 7.5
- HPLC dereceli su 450 ml amonyum format tamponu 0,1576 g çözündürülür. 1 M formik asit ve 7.5 1 M amonyum hidroksit ile, yukarıda çözeltinin pH ayarlayın. 500 ml'lik bir ölçülü balona bu çözüm aktarın ve 5 mM amonyum fo....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bir çalışma ESI kütle spektrometresi ile, iki tetrapeptidlerin, CGGC ve ODAÜ (Şekil 1) için olası cıva peptit kompleksi bileşimi karakterize etmek için yapıldı. CGGC ya ODAÜ ile civa (II) kompleksleri cıva karışımları reaksiyona sokulması suretiyle araştırılmıştır (II) ve üç farklı mol oranlarında Peptid çözeltileri: 1: 0.5, 1: 1, 1: 2 ((II) civa: peptid) . Civa (II) konsantrasyonu 7.5 x 10 -6 M ve peptit konsantrasyonu buna göre de değişecektir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Hidrofobik dicysteinyl tetrapeptit CGGC (Cı 10H 18 N 4 O 5S 2 MW = 338) (Şekil 1), cıva kompleksler oluşturan (II), Şekil 2'de gösterilen ve Tablo 1 Ayrıca, peptit dimerler ve trimerler de oluşturmasıyla ayrılır. aşamalı olarak, reaksiyon karışımı içindeki peptit miktarı arttıkça. M / z ilişkili dimerlerin değerleri [(2M + H) + = 677] ve trimerler ile gösterildiği gib.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Bildirilen çalışma için herhangi bir açıklama yapılmamıştır.
Teşekkürler
MN-S Ulusal Bilim Vakfı desteği kabul RUI yazarları minnetle Thermo Fisher Scientific LTQ Orbitrap XL kütle spektrometresi kullanımına ilişkin Greensboro, Kuzey Carolina Üniversitesi'nde Triad Kütle Spektrometre Tesisi kabul Che 1011859. verin. Yazarlar bu çalışmaları ile ilgili faydalı görüş ve önerileriniz için Greensboro, Kuzey Carolina Üniversitesi'nden Daniel Todd, Vincent Sica ve Brandie Erhmann teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Cıva(II) klorür | Sigma-Aldrich | 429724 | Son derece toksik |
| Amonyum format | Sigma-Aldrich | 516961 | |
| Formik asit | Sigma-Aldrich | F0507 | |
| Amonyum hidroksit | Fisher | A512-P500 | |
| HPLC su | Fisher | W5-4 | |
| HPLC Asetonitril | Fisher | BP2405-1 | |
| HPLC Metanol | Balıkçı | A452-4 |
Kaynaklar
- Clifton, J. C. Mercury exposure and public health. Pediatr. Clin. N. Am. 54, 237-269 (2007).
- Andersen, O. Principles and Recent Developments in Chelation Treatment of Metal Intoxication. Chem. Rev. 99, 2683-2710 (1999).
- Aposhian, H. V., Maiorino, R. M., Gonzal....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
