Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı

9.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/53537

⸱

30 Aralık 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biology, College of the Holy Cross, 2School of Medicine, Georgetown University, 3Department of Biochemistry, Giesel School of Medicine, Dartmouth College, 4School of Medicine, Tufts University, 5Transgenomic Inc., 6Department of Molecular, Cell and Cancer Biology, UMass Medical School

Bu makalede

Özet

Mekanosasyonu etkileyen yeni mutasyonları tanımlamak için, MARCM yöntemi ile üretilen mutant klonlarda sinek kıllarının dokunsal uyarımına davranışsal tepkiyi ölçen bir test tasarladık. Tekniklerin kombinasyonu, aksi takdirde ölümcül olabilecek mekanosensitif mutasyonların tanımlanmasına izin verir.

Özet

Çünkü memeli iç kulak saç hücrelerinin yapısal ve işlevsel homoloji, Drosophila dış duyu organlarını innerve nöronların mechanosensation çalışma için mükemmel bir model sistemi sağlar. Bu protokol, mechanosensation müdahale mutasyonları tespit etmek için kullanılabilir meyve sineği basit bir dokunmatik davranışını tarif etmektedir. Sineklerin toraks ya birinci ya da üçüncü ayağı bir tımar refleksini ortaya çıkarır bir macrochaete dokunsal uyarım kıl. Mechanotransduction (örneğin NOMPC gibi) müdahale mutasyonlar ya da refleks yayın diğer yönleri ile, bakım tepkisini inhibe edebilir. Yetişkin davranışların geleneksel ekran gelişimi sırasında gerekli rolleri vardır mutantlar cevapsız olurdu. Bunun yerine, bu protokol İfade tarafından oluşturulur ve işaretlenmesi için homozigoz mutant hücrelerin sadece sınırlı bölgeler için izin vermek için bir bastırılabilir hücre işaretleyici (MARCM) mozaik analizi ile dokunmatik ekran birleştirenYeşil floresan proteini (GFP) salgılamanın. Anormal davranış yanıtları için MARCM klonlar test ederek, daha geleneksel yöntemlerle cevapsız olurdu mechanosensation katılan yeni genlerin aramak için öldürücü p-element mutasyonlarının bir koleksiyon taranması mümkündür.

Giriş

İnsanlar, çevrelerinden gelen dokunma, basınç, titreşim veya ses dalgaları gibi mekanik uyaranları, mekanotransdüksiyon adı verilen bir süreçte sinir sistemi tarafından işlenebilecek duyusal bilgilere dönüştürme yeteneğine güvenirler. İnsanlar ve omurgasızlar arasındaki mekanotransdüksiyonun genel mekanik özelliklerinin çoğu aynıdır1, bu da Drosophila'yı mekanotransdüksiyonun moleküler mekanizmalarını incelemek için yararlı bir model haline getirir. Drosophila melanogaster, mekanik uyaranları aksiyon potansiyellerine dönüştürebilen iki set özel duyu organı (Tip I ve II) içerir. Tip I mekanoreseptörler, üç destek hücresi2 ile çevrili, tek bir dendrit veya duyusal sürece sahip bir nörona sahiptir. Tip I mekanoreseptörler arasında kıl mekanoreseptörleri, işitmeye duyarlı kordotonal organlar (Johnston organı) ve kanat vuruşları3 hakkında bilgi ileten kampaniform sensilla bulunur. Sineğin sırt tarafını kaplayan kıllar, Tip I organların en bol ve en kolay erişilebilir olanıdır. Omurgalılarda işitme ve denge ile ilişkili tüy hücrelerinin hücre dışı ortamına benzer şekilde, sinek mekanosensitif nöronları çevreleyen destek hücreleri, potasyum1 için alışılmadık bir konsantrasyon gradyanı oluşturan yüksek potasyumlu bir endolenf salgılar. Hem memeli hem de sinek sistemlerinin mekanosensitif nöronları, hücreyi depolarize etmek için bu yüksek hücre dışı potasyumu kullanır. Makroket kıllarının vücut duvarına doğru mekanik olarak uyarılmasına yanıt olarak, duyusal nöronlar, hücre zarının4 bu potasyum depolarizasyonu tarafından yönlendirilen bir aksiyon potansiyeli patlaması ile yanıt verir. Kılları innerve eden Drosophila duyusal nöronları, hem yapı hem de işlev açısından omurgalı kıl hücreleri de dahil olmak üzere diğer organizmaların mekanosensitif hücrelerine benzer1,5. Drosophila dış duyu organlarının deneysel manipülasyona erişilebilirliği ve araştırmacıların kullanabileceği genetik tekniklerin bolluğu, Drosophila'yı mekanosensasyonun moleküler temellerini araştırmak için mükemmel bir model sistem haline getirmektedir.

Sinekte, bir kılı innerve eden tek bir duyusal nöronun uyarılması, gözlemlenebilir bir davranışsal tepkiye yol açar. Farklı kılların uyarılması, uyarılan kıllara bağlı olarak spesifik, tekrarlanabilir davranışsal tepkiler uyandırır. Dokunsal stimülasyon üzerine, kafası kesilmiş vahşi tip sinekler, uyarılmış kılın yakınındaki alanı5-7 desenli bir dizi bacak hareketi ile temizledikleri karmaşık bir tımar refleksi sergilerler. Öğrenme7 veya koordinasyon ve lokomotor aktivite5 ile etkileşime giren bilinen tek gen mutasyonları için homozigot olduğunda, sinekler mekanik stimülasyona anormal şekilde yanıt verir. Bu nedenle, bu tımar refleksi, tek gen mutasyonlarının belirli, tekrarlanabilir bir davranış üzerindeki etkilerini incelemek için yararlı bir araçtır.

Tek bir makroket kılının uyarılmasına verilen güçlü davranışsal tepki, mekanotransdüksiyonda yer alan yeni genlerin tanımlanmasına yardımcı olma potansiyeline sahiptir. Bu protokol, mutasyonun mekanosensasyona müdahale ettiğini gösteren davranışsal bir tepkinin yokluğu için bir mutant sinek koleksiyonunu test etmek için kullanılır. Tarama için seçilen mutant koleksiyonunda, mutasyonlar yetişkinlikten önce ölümcüllüğe neden olur ve bu nedenle geleneksel yetişkin davranış ekranları kullanılarak test edilmesi imkansız olacaktır. Başlangıçta, bu öldürücü p-elementleri koleksiyonu, klonlardaki hücre büyüme kusurlarını test etmek için FRT rekombinasyon bölgeleri ile birleştirildi. Klonlar özellikle gözde yapıldı çünkü yetişkin sinekler laboratuvar ortamında fonksiyonel görüş olmadan hayatta kalabilir8. Bununla birlikte, tüm mekanoksuyumun giderilmesi, yetişkinlerin ciddi şekilde koordinasyonsuz olmasına veya eklosiyondan önce ölmesine neden olabilir5. Bu protokol, mutasyonların ölümcüllüğünü atlatmak ve yetişkin aşama testine izin vermek için mozaik bir yaklaşım kullanır. Organizmanın geri kalanı heterozigot kalırken, sınırlı sayıda yetişkin sinek duyu organında homozigot mutant hücreler oluşturmak için Bastırılabilir Hücre İşaretleyicisi (MARCM)9 ile Mozaik Analiz adı verilen bir genetik teknik kullanılır. Bu MARCM sinekleri yetişkinliğe kadar kolayca hayatta kalır, ancak kıllar, ilgilenilen ölümcül genler için homozigottur.

MARCM, homozigot mutant hücre bölgelerinin oluşturulmasına ve yeşil floresan proteinin (GFP) ekspresyonu ile işaretlenmesine izin verirken, organizmanın geri kalanı o belirli lokusta heterozigot kalır ve işaretlenmemiş9. MARCM, bireysel p-element mutasyonlarını beş yaygın genetik elementle birleştirir: yukarı akış aktive edici bir dizinin kontrolü altında GFP (UAS-GFP), genel bir promotörün kontrolü altında Gal80 baskılayıcı proteini (tub-Gal80), genel bir promotörün kontrolü altında Gal4 transkripsiyon faktörü (tub-Gal4), ısı şoku kontrollü bir promotör aracılığıyla eksprese edilen FRT rekombinaz enzimi ve bir FRT rekombinasyon bölgesi10. Mitotik rekombinasyonu ısı şoku ile aktive edilmiş bir rekombinaz yoluyla tahrik ederek, sınırlı sayıda hücre mutasyon için homozigot hale getirilir ve GFP ile işaretlenir. GFP ekspresyonu, heterozigot hücrelerde, kromozomun vahşi tip kopyası üzerinde Gal80'in varlığı ile baskılanır.

MARCM için bir ısı-şok protokolü, organizmanın çoğu heterozigot kalırken ve bu nedenle GFP ile işaretlenmemişken, sinek kılı dış duyu organlarında rekombinasyonu indüklemek için optimize edilmiştir. Bu protokol kullanılarak üretilen mozaik sinekler, notum yüzeyindeki post alar veya dorsal merkezi kıllarda en sık homozigot mutasyonlar içeriyordu.

MARCM'nin bu kombinasyonunun ve tımar davranışı ekranının faydasını bilinen bir mekanosensitif mutant olan NOMPC ile test ettik. Mekanoreseptör potansiyeli C (NOMPC) olmayan iyon kanalı, Drosophila5,11-13'teki mekanotransdüksiyon yolunun önemli bir bileşenidir. NOMPC, katyon kanalları5'in geçici reseptör potansiyeli (TRP) süper ailesine aittir ve Drosophila14,15'te mekanosensitif bir kanal olarak nitelendirilmek için tüm kriterleri karşılar: 1) NOMPC, Drosophila 13,16-18'in tip 1 duyusal nöronlarının siliyer uçlarında eksprese edilir, 2) NOMPC boş larvalarının dokunsal stimülasyona elektriksel bir yanıtı yoktur13, 3) Dokunmaya duyarsız hücrelerde NOMPC'nin ektopik ekspresyonu mekanik stimülasyona duyarlılığı indükleyebilir13, 4) Schneider 2 hücrelerinde NOMPC'nin heterolog ekspresyonu mekanosensitif bir kanal13 verir ve 5) NOMPC yetişkin mutantları mekanik stimülasyona yanıtlarında kusurlar gösterir5. Bu kanıtlar göz önüne alındığında, NOMPC mutant klonlarının, kılların mekanik stimülasyonuna yanıt olarak değiştirilmiş veya inhibe edilmiş bir tımar tepkisi göstereceğini tahmin ettik.

NOMPC mutasyonunu içeren bir MARCM stoğu, tımar testinin prensip kanıtı deneyinde kullanılmak üzere geliştirilmiştir. Mozaik sinekler, homozigot NOMPC mutant hücreleri içeren makroket kıllarda uyarıldı. Makroket kıllarının uyarılmasını takiben tımar yanıtının inhibisyonunu bekliyorduk. Test edilen 14 mutant kıl sineğinden sadece 2'sinin tekrarlanan stimülasyona tek bir yanıt verdiğini bulduk; Çoğu, homozigot mutant kılın uyarılmasına cevap vermedi. Bu MARCM tabanlı davranışsal tahlilin, bilinen bir mekanosensitif mozaik mutantında anormal bir tımar refleksi ürettiğini doğruladıktan sonra, bu teknik, ek mekanosensitif mutasyonlar için bir taramada kullanılabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Haçlar MARCM Sinekler oluşturmak için

  1. 22 santigrat derece veya standart Drosophila ortam Mısır unu pekmez ortam (% 0.13 Tegosept, 23.5 g / L maya, 60 g / L Mısır unu, 60 mL / L melas;, 4 mL / L asit karışımı 6.5 g / L agar) üzerine sinekler bakımı Bir 12-st ışık / karanlık döngüsünde.
    Not: Standart sıcaklık daha düşük bir sağlıklı MARCM-stoklarını tutmak için kullanılır. Bu 14 gün yumurta ve yetişkinlik arasındaki gelişimsel süresini uzatır.
  2. Bir yukarı-aktive dizisi (UAS-GFP), GAL80 bastırıcı protein, Gal4 transkripsiyon faktörü, bir kontrol altında (GFP gerekli genetik elementler içeren bir MARCM hazır stoktan - (8 gün eski, yaklaşık 1) bakire kadın kullanın ısı-şok odaklı rekombinaz ve FRT rekombinasyon sitesi).
    Not: Bizim MARCM hazır stokları aşağıdaki genotipleri içerir: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / CYO; tubGal4 / TM3Sb.
    Not: Belirli FRT sitesi mutasyon yere bağlı olacaktırgenomuna. Örneğin, FRT40A gibi NOMPC (MARCM protokolleri ile ilgili daha ayrıntılı bilgi için 10 bakınız) olarak kromozomun 2 sol kolunda, üzerinde mutasyon test etmek için kullanılır.
  3. Bir ilgi mutasyon ve buna tekabül eden FRT sitesini ihtiva erkeklere Çapraz MARCM hazır bakire kadın (; NOMPC3, FRT40A / CYO, örneğin w- + / +). Etkili MARCM indüksiyonu için kontrol etmek için, aynı FRT bölgesini ihtiva eden bir erkek sinekler kullanılarak bir ikinci çapraz ayarlanır, ancak mutasyonu olmayan. Melezlerde 1 erkek: 5 kadın yaklaşık bir oranını kullanın.

Döşeme 2. Zamanlı Yumurta

  1. Sinekleri, en az bir gece çiftleşme bırakıldıktan sonra, taze ortam ile yeni şişelere yetişkin hareket eder. Sinekler tekrar yeni şişe içine haçlar aktarmadan önce yaklaşık 4 saat karanlık ortamda yumurtalarını bırakmak için izin verin. Yumurtlama döneminin başlangıç ​​ve bitiş saatlerini not alın.
    Not: 4-hr interva sonundan önce medyaya yumurta sayısının yüksek olması göründüğünde kısa aralıklarla kabul edilebilirl.
    1. Isı, daha sonra şok olması için santigrat 22 derece 12 saat aydınlık / karanlık döngüsünde yeterli yumurta sayısına (yaklaşık 20'den fazla) ve mağaza ile şişeleri tutun.
      Not: Yetişkin onlar daha fazla test için muhafaza edilmesi tavsiye edilir davranışsal test ve verimlilik çıkarına uçar medya üzerinde yumurta düşük sayıda küçük şişeler (az 20 yaklaşık daha) yeterli sayıda elde etmek olası değildir.
      Not: Bizim sinekler 8 PM 8 saatleri arasında ışıkları ile yetiştirilir. 8 PM ve 8:00-gece yarısı - Biz puan daha yüksek yumurta yoğunlukları yol akşam saat, bu nedenle genellikle 4 ila zamanlı haç yapmak bulduk. Inkübatör düzenli aydınlık-karanlık döngüsü rahatsız etmemek için sinekler ertesi gün kuluçka iade edilir daha sonra karanlık bir kabine oda sıcaklığında kendi yumurtalarını ve.

3. Mitotik Birleşimi tetikleyebilecek Isı Şok gerçekleştirin

  1. Yaklaşık 85 - yumurtlama sonrasında 100 saat, yer v1 saat boyunca 37 ° C'de bir su banyosu içine IALS. Su seviyesi şişeleri medyanın yüksekliğinin üstünde ulaşır, ancak tam boğulmaktan larvaları önlemek için flakon daldırın olmadığından emin olun.
  2. Su banyosu şişeleri çıkarın ve oda sıcaklığında 1 saatlik toparlanma dönemine izin verir.
  3. Geri 37 santigrat derece su banyosu içine 1 saat yerleştirin şişeleri.
  4. Eclosion kadar 22 derece santigratta 12 saat ışık / karanlık döngüsünde inkübatör su banyosunda deposundan şişeleri çıkarın.

Davranışsal Test 4. Hazırlık

  1. Eclosion ardından, buz üzerinde sinekler uyutmak. MARCM için tüm genetik öğeleri içeren ve GFP-işaretli klonlar muhtemelen üst stoklarında kullanılan gözlemlenebilir fenotip belirteçler dayalı görülecektir işaret genotipleri ile sinekleri seçin. Iridektomi makasla sinekler başını kesmek.
    Not: Örneğin, genetik belirteçler olmadan sinekler için CYO (kıvırcık kanatlar) ve Sb (anız kıl) olduklarını gösteren seçilenmozaik bölgeleri oluşturmak için gerekli tüm genetik unsurlar içerecektir fy sinekler GFP ile işaretlenmiş.
    Not: Decapitation uyarıldığında uzak arasındaki yetişkin önlemek için gereklidir.
  2. Kapalı, nemli ortamda başsız sinekler yerleştirin ve yaklaşık 10 izin - kurtarma 20 saat. Sadece kullanım hakkı kendilerini daha fazla test için tedirgin o zaman uçar. Deney Dekapitasyon 30 saat içinde uçar.

5. Hareket Testleri

  1. Bir floresan diseksiyon mikroskop altında decapitated sinekler gözlemleyerek, kıl dış duyu organları da GFP ile işaretlenmiş homozigot klonları tanımlamak. Kıl adını ve sol veya sağ tarafına kaydedin. Herhangi bir potansiyel önyargı ortadan kaldırmak için, kıl stimülasyonu gerçekleştirmek laboratuar elemanı kıl, vahşi tip veya mutant genotipine kör olmalıdır.
  2. Sert saç veya ince forseps ile sinek vücudun doğru kıl GFP saptırma bir tımar refleksini işaretli ortaya ve bacak yeniden gözlemlemekyanıtlarının yokluğu. Stimülasyon ve bacaklarını hareket etmiyor sinekler sıfır puan kıl cevaben kendi bacak kaldırma sinekler birinin bir puan verin.
    Not: Daha önceki çalışmalarda 6,7 belirli bir kıl uyararak ortaya bacak tepkisini karakterize var. Bu, her bir fırça kılı yanıt bacak ve söz konusu kıl uyarılmasına yanıt sinekler oranını içerir. Biz sadece Vandervorst sınıflamasına 6 dayalı cevap bekleniyor bacak hareketleri attı.
  3. Birbirinden 2 dk aralıklı beş deneyler.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu protokolün başarısı büyük ölçüde test edilebilir sineklerin toplam verim bağlıdır, ısı şoku etkinliği mitotik rekombinasyon ve 2 dakika aralıklarla uyarılan sinekler sağlam bir davranışsal yanıt elde yeteneği teşvik etmek. Embriyoların yaklaşık% 12.5, gerekli MARCM elemanları ve GFP tanımı için potansiyele sahip Eclose yetişkin yaklaşık% 16,67 ihtiva göz önüne alındığında, bu zamana bırakır sırasında yumurta yüksek sayıda elde etmek için kritiktir. Başarılı bir Zamanlı bir örneği,

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Mutantlar toplama yetişkinler olarak tarama engel olur ölümcül p-element mutasyonları içerdiğinden bu protokol, bu protokol ilk olarak Lee ve Luo tarafından açıklanan karmaşık genetik tekniği kullanır. Drosophila mechanosensation etkileyen mutasyonların taranması için yetişkin bir davranış deneyi kullanır (1999) ve yetişkin ölümcül aşmak için Wu ve Luo tarafından bir protokol, (2006) gibi ayrıntılı. MARCM homozigot hücrelerinin klonal bölgelerini oluşturmak için homolog kromozomlar arasındaki mitotik rekombinas...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını var.

Teşekkürler

Istiyorum Yazarlar Bloomington stok merkezi, Liqun Luo, Charles Zuker ve Lily ve Yuh Nung Oca sinek stoklarının cömert paylaşımı ve finansman aşağıdaki teşekkür: Lisans Ford Fakültesi Yaz Bursu (JD ve SW) somas-URM (SW), Renee ve Anthony M. Marlon, MD (DL) '63 Yaz Araştırma Bursu (CL ve DL için) BD Kurumlar Yaz Araştırma Bursu James C. '75 ve Jane Colihan Yaz Araştırma Bursu (TO) aracılığıyla Mezunlar / Kutsal Haç Koleji Veli Yaz Araştırma Fonu ve Stransky Vakfı Yaz Araştırma Bursu (TO). Laboratuvarda tüm çalışmaları desteklemek için Kutsal Haç Koleji'nde Biyoloji Bölümü ve Dekanlığa Special thanks.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Bira Mayası (25 lb)MP Biyomedikal ICN90331225 Fly Food
Mısır (25 lb)MP Biyomedikal ICN90141125 Fly Food
Agar (1 lb)MoorAgar Inc.41004Fly Food
Tegosept (5 kg)Genesee20-259Fly Food
Pekmez (1 Galon)Sugarmill Marka - Thomsen Food Service0 2625Fly Food
Propionic AcidFisherA258-500Fly Food
Fosforik asitFisherA260-500Fly Food
Drosophila Şişeleri, Dar (PS)Genesee32-109Sinek Kültürleri
6oz Kare Tabanlı Şişe (PP)Genesee32-130Sinek Kültürleri
Flugs - Plastik Sinek ŞişeleriGenesee49-100Sinek Kültürleri
Rayon Topları, BüyükGenesee51-100Sinek Kültürleri
Droso-Dolgu, DarGenesee59-168Sinek Yemi
Hazırlama Droso-Dolgu, ŞişelerGenesee59-170Sinek Yemi Hazırlık
8A-C / c-kelepçe montajlı dişli tahrikli laboratuvar karıştırıcısı  1/15 HP, 700 rpm değişken hızlı, 115 V, 50/60 HzCleveland Mikser8A-CFly Food Hazırlama
Su ceketli SuFly Food Hazırlama
Günlük Büyüme OdasıForma ScientificIsı için sıcaklık ve aydınlık / karanlık döngüsü kontrollü
Su banyosuVWR şok
MicroScissors Güzel Bilim Araçları  15000-08Kafaları çıkarmak için
Fluroscence Diseksiyon MikroskobuZeissSteREO Discovery V8 GFP küp (KSC295-814D) bant geçiren filtre ile
Fluroscence Işık KaynağıZeissX-Cite 120Fiber optik ışık borusu bunu yapılandırmayı kolaylaştırır 
ScopeZeissAxioCam ICc1
için kamera Görüntü edinme yazılımıZeiss
Soğuk antezi içinbuz kovası
Soğuk anestezi dekapitasyonu içinev yapımı soğuk anestezi tepsisi
Nemli ortamda yavru sineklerin kurtarılması içinplastik kutular
Isıtıcısı

Kaynaklar

  1. Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
  2. Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
  3. Gillespie, P. G., Walker, R. G. Molecular basis of mechanosensory transduction. Nature. 413, 194-202 (2001).
  4. Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
  5. Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
  6. Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
  7. Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
  8. Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59(2005).
  9. Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
  10. Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
  11. Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
  12. Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
  13. Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
  14. Arnadottir, J., Chalfie, M. Eukaryotic Mechanosensitive Channels. Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).
  15. Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
  16. Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
  17. Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012(2010).
  18. Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
  19. de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
  20. Jarman, A. P. Studies of mechanosensation using the fly. Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

MARCM KlonlarıMekanosensasyon DeneyiTemizlik RefleksiMozaik AnaliziKıl StimülasyonuGFP İşaretlemeDavranışsal TaramaNOMpc MutasyonuFRT Bölgeleri
Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.