Yöntem makalesi

Medaka Yumurta kullanma Gümüş Nanocolloids tuzluluk bağımlı zehirlilik Deneyi

DOI:

10.3791/53550

⸱

18 Mart 2016

 , 
1Graduate School of Life Sciences, Toyo University, 2Research Center for Life and Environmental Sciences, Toyo University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Embriyonik evreler, ksenobiyotiklere en duyarlı olanlardır. Kimyasal toksisite tuzluluğa bağlı olmasına rağmen, toksisitenin suda yaşayan organizmalara tuzluluk bağımlılığını test etmek için hiçbir yöntem yoktur. Burada, toksisitenin suda yaşayan embriyolara tuzluluk bağımlılığını belirlemek için yeni ve yüksek verimli bir yöntem açıklıyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tuzluluk su ortamında önemli bir özelliğidir. Sudaki organizmalar için tatlı su, tuzlu su ve deniz suyunun yaşam alanları tanımlar. kimyasallar ve Sucul organizmalar için ekolojik riskler değerlendirmelerinin toksisite testleri sıklıkla tatlı yapılmaktadır, ancak Sucul organizmalar için kimyasalların toksisite pH, sıcaklık, tuzluluk ve bağlıdır. Hiçbir yöntem Sudaki organizmalar için toksisite tuzluluk bağımlılığını test etmek için, ancak var. Onlar tatlı su, tuzlu su ve deniz suyuna adapte çünkü Burada, Medaka (Oryzias latipes) kullanılır. embriyo yetiştirme ortamı (ERM) (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x ve) yumurta (1x ERM ve 30x ERM Medaka gümüş nanocolloidal parçacıklar (SNCS) toksisitesini test etmek için kullanılmıştır sahip ozmotik basıncı eşdeğer farklı konsantrasyonlarda sırasıyla tatlı ve deniz suyu, için). Altı oyuklu plastik tabak olarak, üç kopya halinde 15 Medaka yumurta 10 mg / L ve en SNCS maruz bırakıldı# 8722, 1, karanlıkta, pH 7 ve 25 ° C 'de ERM'in farklı konsantrasyonlarda.

Gün 6 ve gündüz (bölüm 4) kuluçkalık üzerine larva tam vücut uzunluğu 15 sn ve göz çapı başına kalp hızını ölçmek için bir diseksiyon mikroskobu ve bir mikrometre kullanılır. embriyolar kuluçka veya gün 14 kadar gözlenmiştir; Daha sonra 14 gün (bölüm 4) her gün çıkma oranı sayıldı. embriyolarda gümüş birikimi görmek için tümevarımsal gümüş testi çözümleri konsantrasyonu (Bölüm 5) ve dechorionated embriyolar (bölüm 6) açıkça tuzluluk arttıkça artan Medaka embriyolar SNCS KAG toksisitesini ölçmek için plazma kütle spektrometresi birleştiğinde kullandık. Bu yeni yöntem bizi farklı tuzluluk kimyasalların toksisite test etmenizi sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1979 yılında test kimyasallar için Ekonomik İşbirliği ve Kalkınma Örgütü (OECD) test kriterlerine Teşkilatı'nın kuruluşundan bu yana, 38 deney kılavuzları kurallar, Biyotik Sistemleri 1 üzerine etkileri Bölüm 2'de yayınlanmıştır. tatlı su habitatlarının, yani tatlı su bitkilerden olmuştur test Sudaki organizmalar Tüm; yosun; Böyle piresi ve chironomids olarak omurgasızlar; Bu tür Medaka, Zebra balığı ve gökkuşağı alabalığı gibi balıklar. tuzlu su ortamlarına kıyasla, tatlı su ortamları daha doğrudan insan ekonomik ve endüstriyel faaliyetler etkilenir. Onlar kirlilikten daha yüksek risk altındadır, çünkü bu nedenle, tatlı su ortamları test için ön plana çıkmışlardır.

Haliç dahil kıyı bölgelerde, tuzluluk acı su ve deniz suyu koşulları arasında değişir ve bu alanlar genellikle endüstriyel aktivite 2 tarafından kirletilmektedir. Kıyı alanları ve bunların ilişkili sulak h ile karakterizedirüksek ekolojik biyolojik çeşitlilik ve verimlilik. Kıyı ekosistemleri nedenle kimyasal kirlenmeye karşı korunmalıdır. Ancak, acı su ve deniz suyu ortamlarında ekotoksikolojik araştırma var sınırlı kalmıştır.

Sakaizumi 3 Japon Medaka yumurta metil civa ve tuzluluk arasındaki toksik etkileşimler okudu ve test çözeltisi ozmotik basıncı artırarak metil civa toksisitesini arttırdı bulundu. . Sumitani ark 4 sızıntı suyu toksisitesini araştırmak için Medaka yumurta kullanıldı; Onlar yumurtalara sızıntı suyunun osmotik denklik embriyogenez sırasında anormallikleri uyaran anahtarı olduğunu ortaya koymuştur. Buna ek olarak, Kashiwada 5 plastik nanopartiküller (çapı 39,4 nm) kolay tuzlu koşullar altında Medaka yumurta koryon (15x embriyo yetiştirme ortamı (ERM)) üzerinden nüfuz bildirmiştir.

Tipik bir küçük balık modeli, Japon Medaka (Oryzias latipes ) Temel biyoloji ve ekotoksikolojisine 6 kullanılmaktadır. Japon Medaka deniz suyuna tatlı gelen dolayı son derece gelişmiş klorür hücrelerinin 7 arasında değişen koşullarda yaşayabilir. Bunlar tuzluluk geniş bir yelpazede olan koşullarda test etmek için yararlı olduğu umulmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada kullanılan Japon Medaka sıkıntı ve rahatsızlık hafifletilmesi için göz önünde bulundurularak, insani Toyo Üniversitesi kurumsal kurallarına uygun olarak tedavi edildi.

1. Gümüş Nanocolloids (SNCS)

  1. Saflaştırılmış SNCS satın (20 mg / L-1,% 99.99 saflıkta, partikül damıtılmış su içinde süspansiyon haline getirilmiş 28.4 ± 8.5 nm ila ortalama çap).
  2. Indüktif eşleşmiş plazma kütle spektrometresi ile gümüş saflık ve konsantrasyon doğrulamak (ICP-MS) kullanma kılavuzuna 8'e göre analiz eder. ICP-MS için tedavi öncesi yöntemi Bölüm 7'de açıklanan analizler.

SNC Çözümleri Farklı tuzluluk ile (Gümüş Colloids ve Ag + Karışımlarının) 2. Hazırlık

  1. 60 g NaCl, 1.8 g KCI, 2.4 g CaCI2 · 2H 2 O ve 9.78 gr MgSO 4 · 7H 2 O Arıza sebebinin L 1 aşağıdakilerden oluşan 60 x ERM'yi hazırlanmasırapure su; ultra saf su içinde NaHCO 3% 1.25 ile 7.0 arasında pH değeri ayarlanır.
  2. gece boyunca 25 ° C'de bir ERM çözeltisi karıştırılır.
  3. seyreltilmiş ERM ile SNCS karıştırın. Her SNC-ERM karışık çözelti, 40 ml hazırlayın. Nihai konsantrasyon ERM farklı konsantrasyonlarda SNCS 10 mg / L -1 (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x veya).
  4. Ultra saf su içinde% 0.625 ile 7.0 arasında SNC-ERM karışık çözelti NaHCO 3 pH ayarlayın. Ag + salma asidik koşullar 9 kolaylaştırılır, çünkü pH ayarlaması SNC çözeltisinin hazırlanması için çok önemlidir.
  5. SNCS için bir referans bileşiği olarak iyodinin 3 kullanın.
    1. Sulandırılmış ERM ile Agno 3 karıştırın. 15.7 mg / L arasında bir iyodinin 3 konsantrasyonda iyodinin 3 -ERM karışık çözelti, 40 ml hazırlamak -1 ERM'in farklı konsantrasyonlarda (10 mg / L-1 gümüş) (1 x, 5x, 10x, 15x, 20x veya 30x) .
      Not: AgNO 3 gümüş kolloid toksisitesini incelemek içinçözünür bir gümüş kaynağı solüsyonu, gümüş koloitler ve çözünür gümüş karışımı SNCS için bir referans bileşik olarak kullanılır.

3. Medaka Kültür ve Yumurta Hasat

  1. Medaka (O. latipes) (turuncu-kırmızı suşu) (60 erkek ve 60 kadın) edinin.
  2. gruplar olarak kültür Medaka (20 erkek ve bir grup olarak 20 kadın) bir Medaka akış kültür sistemi kullanılarak 3 L tanklarda 1x ERM.
    1. Aşağıdaki koşullarda Kültür:
      kültür ortamının pH aralığı 6.2 ila 6.5
      Işık: karanlık döngüsü: 16: 8 saat
      Kültür ortamının sıcaklığı: 24 ± 0.5 ° C
      kültür ortamının ozmotik basınç: 257 mOsm
  3. (Günde beş kez) (günde bir kez) saat 10:00 'Artemia salina nauplii üzerinde Medaka Yem ve 09:00, 11:00, 13:00, 15:00 ve 17:00 yapay kuru balık diyet yem.
    1. A. elde salina nauplii.
    2. plastik kabı içinde bir% 3.0 tuz solüsyonu 5 L hazırlayın.
    3. beher tuz çözeltisine tuzlu su karidesi yumurta 30 g ekleyin.
    4. Bir havalandırma pompası kullanılarak (4 L / dk-1) geçirilerek, 48 saat boyunca 25 ° C'de kuluçkaya.
    5. 48 saat sonra, köpüren durdurun.
    6. 5 ila 10 dk yumurtadan A. ayırmak için çözüm bekletin çıkmamış yumurta ve yumurta kabuğu arasından salina nauplii (çözelti alt kısmı) (çözelti üst kısmı).
    7. durultma yoluyla çözeltinin üst tabakayı çıkarın.
    8. 283 um gözenekli bir elekten çözelti alt kısmının filtre ve 198 um arasında açıklıkları olan bir net geçmesine nauplii toplar.
    9. 6 saat içerisinde Medaka için nauplii besleyin.
  4. kadın Medaka olurken sonra, dişilerin organları hafifçe dış yumurta kümeleri kaldırmak veya sm kullanarak akvaryum dibinden yumurta toplamakTüm ağ (net büyüklüğü 5 cm x 5 cm, delik boyutu 0.2 mm x 0.2 mm).
  5. 5 saniye boyunca musluk suyu akan yumurta küme durulayın.
  6. 30x ERM çözüm durulanır yumurta kümelerinin tüm ekleyin.
  7. 1 dakika sonra çözeltiden kümeleri kaldırın ve yavaşça kuru kağıt havlu ve silindir arasındaki yumurta kümeleri yerleştirin.
  8. 30x ERM geri yumurta koymak.
  9. bir mikroskop altında döllenmiş yumurta seçin.
  10. forseps kullanarak altı-iyi plastik plakalar 1x ERM 810 yumurta, seçilen yerin.
  11. 21. gelişim aşamasına kadar bir kuluçka 25 ± 0.1 ° C'de kuluçkaya (Medaka embriyoların gelişim aşamaları Iwamatsu 10 çalışmalarından tanımlanmıştır.)
  12. bir mikroskop altında gelişme aşamasında 21 inkübe yumurta dışarı seçin.
  13. 1x ERM ile seçilen yumurta durulayın.
  14. Pozlama deneyleri (bölüm 4) ile durulanır yumurta Konu.

4. Toksisite SNCS test veya AgNO 3 Farklı ERM tuzluluk de

  1. Medaka yumurta yıkayın (aşama 21), test çözeltisi [SNCS (10 mg / L-1) ya da iyodinin 3 ile üç kez ERM'in her bir konsantrasyonu (1 x, 5x (15.7 mg / L-1, 10 mg / L-1, gümüş gibi) , 10x, pH 7'de 15x, 20x, 30x veya)]. Kontroller olarak, pH 7, 30 x ERM'e 1 x yumurta kullanımı.
  2. Altı oyuklu plastik plakalar her bir test çözeltisi, 5 ml 15 durulandı yumurta ekleyin. (SNC için poz deneyler üç kez yapın veya AgNO 3 toksisite her test solüsyonu kullanarak test.)
  3. alüminyum folyo tabak sarın.
  4. Enkübasyon kadar ya da 14 gün boyunca karanlıkta 25 ° C 'de sarılmış inkübe edin.
  5. Biyolojik değişiklikler ve ölü yumurta maruz yumurta her 24 saat gözlemlemek (Şekil 1 ve 2).
  6. Test çözümleri her 24 saat değişimi.
  7. aşağıdaki gibi gözlemleri gerçekleştirin.
    1. maruz kalma 6. günde, o (15 saniyede) kalp hızını saymakbir kronometre (Şekil 3a) ile bir mikroskop altında F Medaka embriyolar.
    2. Maruziyet 6. günde, bir mikrometre (Şekil 3b) kullanılarak bir mikroskop altında Medaka embriyoların göz boyutu (çap) ölçün.
    3. Kuluçka gününde, bir mikrometre (Şekil 3c) kullanarak bir mikroskop altında larva tam vücut uzunluklarının.
    4. 14 gün (Şekil 3d) üzerinde yumurtadan maruz yumurta sayısını saymak.

SNC Çözüm Çözünür Gümüş ve Gümüş Analizi 5. İzolasyon

  1. 14,000 x bir 3 kDa'lık bir zar filtre ile filtre her SNC çözeltisi (gümüş kolloidler ve çözünür gümüş bir karışımı) çözünür gümüş izole g ve 10 dakika süre ile 4 ° C. 1x ERM'in agrege SNCS bildirilen ortalama çapı 67.8 mil 11, çünkü SNCS çözünür gümüş izole etmek için 3 kDa'lık bir zar filtresi kullanınnd Ag + o 0.162 nm 12'dir; 3 kDa'lık bir membran 2 nm 13 ya da daha fazla bir çapa sahip olan parçacıklar hariç tutar.
  2. ICP-MS yapan kılavuzu 8'e göre, ICP-MS analizi (Şekil 3E) tarafından filtre edilmiş çözelti (= çözünebilen gümüş konsantrasyonu), 50 ul gümüş konsantrasyonu ölçümü. ICP-MS için tedavi öncesi yöntemi Bölüm 7'de açıklanan analizler.

Medaka Embriyolar Gümüş Biyoakümülasyon 6. Ölçüm

  1. Bölüm 4'de anlatıldığı gibi Medaka SNCS yumurta (evre 21) ya da iyodinin 3 Açığa.
  2. Maruziyet 6. günde, Medaka Kitap 14'te tarif edilen protokole göre enzim kuluçka Medaka'nın kullanılarak yumurta (yani, dechorion) koryon çıkarın.
  3. ICP-MS işletim manuel 8 (Şekil 3f) 'ye göre ICP-MS analizi ile dechorioned yumurta gümüş konsantrasyonu ölçün. önICP-MS yöntemi, Bölüm 7'de açıklanan analizler.

ICP-MS Analizi ile Gümüş Konsantrasyon 7. ölçümü

  1. (; Bölüm 1 gümüş konsantrasyonu doğrulama için) örnekleri [gümüş çözeltisi 50 ul ekleyin; Üç dechorionated embriyolar (bölüm 5); ya da bir 50 mL teflon çanağa filtre edilmiş çözelti (bölüm 5)], 50 ul.
  2. 50 ml'lik bir cam kap, aşırı saf, nitrik asit 2.0 ml ilave edilir.
  3. (yaklaşık 3 saat) kurur hemen öncesine kadar 110 ° C'de sıcak bir plaka üzerinde karışımı ısıtın.
  4. Tamamen organik madde çözülür 2.0 ultra saf nitrik asit ilave edildi ve beher için hidrojen peroksit, 0.5 ml ekleyin.
  5. (yaklaşık 3 saat) kurur hemen öncesine kadar sıcak plaka üzerinde yine karışımı ısıtın.
  6. % 1.0, aşırı saf, nitrik asit çözeltisinin 4 ml artığı içinde çözündürülür.
  7. Transfer santrifüj tüpüne 4 ml.
  8. (Üç kez olmak üzere toplam) iki kez 7.7 7.6 tekrarlayın. Nihai hacim 12.0;mi.
  9. Kullanma kılavuzuna 8'e göre ICP-MS analizi ile (% 1.0 ultra saf nitrik asit içinde eritilmiş) numune gümüş konsantrasyonu ölçümü.
    1. Bir iç ve bir dış standart solüsyonu kullanın gümüş konsantrasyonu ölçmek için (Malzeme Listesi). iç ve dış standart bir çözüm Laboratuvar Akreditasyon Amerikan Derneği (A2LA) tarafından akredite edilmiştir. Gümüş tespit limitleri 0.0018 ng / ml -1 (çözüm) ve 0.016 ng mg ağırlık -1 (embriyo gövdesini) idi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

SNC toksisite tuzluluk etkisi çok açıktı: deformite veya ölüm indüksiyon tuzluluk bağımlı (Şekil 1 ve 2). Biz (10 mg / L -1) -exposed embriyolar SNC fenotipik biyobelirteçleri (kalp atım hızı, göz boyutu, tam vücut uzunluğu ve çıkma oranı) ölçüldü. Bu fenotipik biyomarkırlar tuzluluk bağımlı SNC toksisite ortaya koydu.

Kalp hızı 29.6 32.2 atım / kontrollerde 30x ERM 1x boyunca 15 sn...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Medaka deniz suyu son derece hoşgörülü bir tatlı su balığıdır; o da bu balığın orijinal doğal yaşam Japon sahil 6 kapalı tuzlu su olduğu bilinmemektedir. Bu nedenle, Medaka balık klorid hücreleri 7 iyi gelişmiştir. Bu benzersiz özellik balık sadece tek bir tür kullanarak (tatlı su deniz suyu için) tuzluluk bir fonksiyonu olarak çevre kimyasalların toksisite test etmek için yeni bir yol ile bilim adamları sağlar.

aşamada 21, Medaka yumurta elde etmek için, yumurta Genell...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Toyo Üniversitesi Yaşam Bilimleri Enstitüsü'nden Bayan Kaori Shimizu ve Bay Masaki Takasu'ya teknik destekleri için minnettarız. Bu proje, Toyo Üniversitesi Özel Araştırma Vakfı ve Biyo-Nano Elektronik Araştırma Merkezi'nden (SK'ye) araştırma hibeleri ile desteklenmiştir; Japonya Özel Okulları için Teşvik ve Karşılıklı Yardımlaşma Kurumu'nun Bilim Araştırma Teşvik Fonu tarafından (SK'ye); Risk Değerlendirmeleri için Yeni Proje Fonu tarafından, Ekonomi, Ticaret ve Sanayi Bakanlığı'ndan (SK'ya); Zorlu Keşif Araştırmaları için Yardım Hibesi ile (SK'ye 23651028 ödül); Bilimsel Araştırma için Yardım Hibesi (B) ve (C) (SK'ye 23310026 ve 26340030 ödül); ve Japonya Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan Özel Üniversiteler için Stratejik Araştırma Üssü Projesi (SK'ye S1411016 ödül) için Yardım Hibesi ile.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Gümüş nanokolloidlerÜtopya Gümüş Takviyeleri
NaClNacalai Tesque, Inc.31319-45ERM
KClNacalai Tesque, Inc.28513-85ERM
CaCl2· yapmak için; 2H2ONacalai Tesque, Inc.06730-15ERM
MgSO4· yapmak için; 7H2ONacalai Tesque, Inc.21002-85ERM
NaHCO3 Nacalai Tesque, Inc.31212-25ERM
AgNO3Nacalai Tesque, Inc.31018-72
pH metreHORIBA, Ltd.F-51S
DengeMettler-Toledo Uluslararası A.Ş.MS204S
medaka (Oryzias latipes) turuncu-kırmızı suşUlusal Çevre Araştırmaları
medaka akışlı kültür sistemiMeito Suien Co.MEITOsystem
Artemia salina nauplii yumurtalarıJaponya evcil hayvan tasarım Co, Ltd4975677033759
havalandırma pompasıJaponya evcil hayvan tasarım Co, Ltdgürültüsüz w300
Otohime larva β-1Marubeni Nissin Feed Co., LtdOtohime larva β-1Yapay kuru balık diyeti
diseksiyon mikroskobuLeica microsystemsM165FC
mikrometreFujikogaku, Ltd.
kuluçka makinesiNksystemTG-180-5LB
çalkalayıcıELMI Ltd.Aizkraukles 21-136
6 kuyulu plastik plakalarGreiner CELLSTARM8562-100EA
alüminyum folyoAS ONE Co.6-713-02
kronometreDRETEC Co., Ltd.SW-111YE
3 kDa membran filtreEMD Millipore Corporation0,5 ml santrifüj tipi filtre
50 ml Teflon beherAS ONE Co.
Özel claritas standardıSPEXertificateZSTC-538Dahili standart için
Özel claritas standardıSPEXertificateZSTC-622Harici standart
ultra saf nitrik asitKanto Chemical Co.28163-5B
hidrojen peroksit Kanto Kimya A.Ş.Atomik absorpsiyon spektrometrisi için18084-1B
ICP-MSThermo ScientificThermo Scientific X Serisi 2 
sıcak tabakTiger Co.CRC-A300
yapmak için yapmak için yapmak içinEnstitüsü1045002333431097 için Serisi

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2 Effects on Biotic Systems. , OECD. Available from: http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-2-effects-on-biotic-systems_20745761 (2015).
  2. National Coastal Condition Report. , Environmental Protection Agency, Office of Water and Office of Research and Development. Washington, DC. (2001).
  3. Sakaizumi, M. Effect of inorganic salts on mercury-compound toxicity to the embryos of the Medaka, Oryzias latipes. J. Fac. Sci. Univ. Tokyo. 14 (4), 369-384 (1980).
  4. Sumitani, K., Kashiwada, S., Osaki, K., Yamada, M., Mohri, S., Yasumasu, S., et al. Medaka (Oryzias latipes) Embryo toxicity of treated leachate from waste-landfill sites. J. Jpn. Soc. Waste Manage. Exp. 15 (6), 472-479 (2004).
  5. Kashiwada, S. Distribution of Nanoparticles in the See-through Medaka (Oryzias latipes). EHP. 114 (11), 1697-1702 (2006).
  6. Iwamatsu, T. The Integrated Book for the Biology of the Medaka. , University Education Press. Japan. (2006).
  7. Miyamoto, T., Machida, T., Kawashima, S. Influence of environmental salinity on the development of chloride cells of freshwater and brackish-water medaka, Oryzias latipes. Zoo. Sci. 3 (5), 859-865 (1986).
  8. XSERIES 2 ICP-MS Getting Started Guide Revision B - 121 9590. , Thermo Fisher Scientific Inc.. Available from: http://202.127.146.37/eWebEditor/uploadfile/20130314161434190.pdf (2007).
  9. Kashiwada, S., Ariza, M. E., Kawaguchi, T., Nakagame, Y., Jayasinghe, B. S., Gartner, K., et al. Silver nanocolloids disrupt medaka embryogenesis through vital gene expressions. ES & T. 46 (11), 6278-6287 (2012).
  10. Iwamatsu, T. Stages of normal development in the medaka Oryzias latipes. Mech. Dev. 121, 605-618 (2004).
  11. Kataoka, C., Ariyoshi, T., Kawaguchi, H., Nagasaka, S., Kashiwada, S. Salinity increases the toxicity of silver nanocolloids to Japanese medaka embryos. Environ. Sci.: Nano. 2, 94-103 (2014).
  12. Shannon, R. D. Revised effective ionic radii and systematic studies of interatomic distances in halides and chalcogenides. Acta Cryst. 32, 751-767 (1976).
  13. Pore size chart. , Spectrum Laboratories, Inc.. Available from: http://jp.spectrumlabs.com/dialysis/PoreSize.html (2015).
  14. Wakamatsu, Y. Medaka Book, 6.1: Preparation of hatching enzyme. , National BioResource Project (NBRP) Medaka. Available from: [cited 2015] https://shigen.nig.ac.jp/medaka/medakabook/index.php?6.1%20preparation%20of%20hatching%20enzyme (2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Tuzluluk Toksisite AnaliziEmbriyo Yeti tirme OrtamKalp At m H z l mG z ap l mV cut Uzunlu u l mICP MS AnaliziG m Biyoak m lasyonuKulu ka Oran

İlgili makaleler