Belirli hücreleri diğer hücrelere zarar vermeden ortadan kaldırmak, özellikle kurulu dokularda son derece zordur, ancak doku mühendisliği alanında acil bir hücre eliminasyon yöntemine ihtiyaç vardır. Burada, yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT) kullanarak karışık bir 3D hücre kültüründen spesifik hücre eliminasyonu için bir yöntem sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Yakın Kızılötesi Photoimmunotherapy Tekniği Karışık 3D Kültür seçici hücre Eliminasyon
Bu makalede
Özet
Özet
Doku mühendisliğindeki son gelişmeler birçok hastalık için yenilikçi çözümler sunmaktadır. Örneğin, indüklenmiş pluripotent kök hücre (iPS) kullanan doku mühendisliği, rejeneratif tıpta yeni bir yöntem olarak ortaya çıkmıştır. Bu doku rejenerasyonu umut verici olsa da, doku kültürleri sırasında istenmeyen hücrelerle kontaminasyon büyük bir endişe kaynağıdır. Ayrıca, transplantasyon sonrası tümörjenite ile ilgili bir güvenlik endişesi vardır. Bu nedenle, özellikle kurulu dokuda, korunması gereken diğer hücrelere zarar vermeden belirli hücrelerin ortadan kaldırılmasına acil ihtiyaç vardır. Burada, hedeflenmemiş hücrelere zarar vermeden yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT) ile in vitro olarak karışık bir 3D hücre kültüründen spesifik hücre eliminasyonu için bir yöntem sunuyoruz. Bu teknik, karışık hücre kültürlerinden veya dokulardan belirli hücrelerin elimine edilmesini sağlar.
Giriş
Diğer hücrelere zarar vermeden özel hücrelerin ortadan kaldırılması özellikle kurulmuş doku olarak, son derece zordur ve doku mühendisliği alanında bir hücre eleme yöntemi için acil bir ihtiyaç vardır. 3 - Günümüzde rejeneratif tıp alanında, embriyonik kök hücreleri (ES), pluripotent kök hücrelerini (PSC), ya da uyarılmış pluripotent kök hücre (iPS) kullanarak doku kültürleri umut verici malzemeler 1 bulunmaktadır.
Bu doku rejenerasyonu umut verici olmasına rağmen, istenmeyen hücreleri ile kirlenme önemli bir husustur. Ayrıca, transplantasyon 4,5 sonra tümorijenisite 'nin güvenlik endişesi v....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Not: Aşağıdaki protokol NUR-PIT kullanarak belirli hücreleri ortadan kaldırmak için gereken adımları açıklar. Kontroller ve NUR-PIT ve hücre canlılığı ile ilgili diğer ayrıntıları başka bir yerde 18 bulunabilir.
Monoklonal antikorlara IR700 1. Konjugasyon (mAb)
- 2-5 mg / 0.1 M Na 2 HPO 4 (pH 8.6) çözeltisi içinde ml'de ilgi mAb hazırlayın.
- Mikrosantrifüj tüpü içinde 0.1 M Na 2 HPO 4 çözeltisi (pH 8.6) içinde 10 mM IR700 30.8 nmol olan mAb 6.8 nmol karıştırın ve alüminyum folyo ile kaplı 1 saat için oda sıcaklığında inkübe edilir.
- iki kez 15 ml PBS ile PD-10 kolonu (Malzem....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
optik olarak EGFR aşın NIR PIT, A431 hücre hattı, etkin olabilmesi için, genetik olarak GFP ve lusiferaz (A431-Luc-GFP) ifade etmek için modifiye edilmiştir. NIR PIT olmayan bir hedef olarak Balb / 3T3 hücre çizgisi optik RFP (3T3-RFP) ifade etmek için modifiye edilmiştir. APC panitumumab-IR700 (pan-IR700) sentezlendi. Hücreleri (A431-luc-GFP ve 3T3-RFP) çeşitli oranlarda oluşmuştur Karışık sferoidler, bu protokol (Şekil 1) 'e göre imal edildi. Tekrarlanan NIR PIT pa.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu NIR PIT kullanarak hedef olmayan hücrelere zarar vermeden karışık bir 3D hücre kültüründen spesifik hücre eliminasyonu için bir yöntem ortaya koymaktadır. Şimdiye kadar, hiçbir pratik hücre eleme yöntemi doku sağlandıktan sonra veya transplantasyon sonrasında bulunmamaktadır. Böylece, NIR-PIT bunu gerçekleştirmek için gelecek vadeden bir yöntemdir. APC 'ler mAb kendisi benzer farmakokinetiği göstermektedir, çünkü bu teknik, aynı zamanda, in vivo 18,22 yararlanılabilir. hedef .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Bu araştırma Kanser Araştırma Ulusal Sağlık Enstitüleri İntramural Araştırma Programı, Ulusal Kanser Enstitüsü, Merkezi tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| IRDye 700DX Ester Kızılötesi Boya | LI-COR Bioscience (Lincoln, NE, ABD) | 929-70011 | |
| Na2HPO4 | SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, ABD) | S9763 | |
| Sephadex G25 sütunu (PD-10) | GE Sağlık (Piscataway, NJ, ABD) | 17-0851-01 | |
| Coomassie (bradford) Plus protein tahlili | Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, ABD) | PI-23200 | |
| Perfecta3D 96 Kuyulu asılı Damla Plakaları | 3D Biomatrix Inc (Ann Arbor, MI, ABD) | HDP1096-8 | |
| Optik güç ölçer | Thorlabs (Newton, NJ, ABD) | PM100 | |
| LED: L690-66-60 | Marubeni America Co. (Santa Clara, CA, ABD) | L690-66-60 | |
| Vectibix (panitumumab) | Amgen (Thousand Oaks, CA, ABD) | ||
| 35 mm cam alt tabak, tabak boyutu 35 mm, kuyu boyutu 10 mm | Cellvis (Dağ Manzaralı, CA, ABD) | D35-10-0-N |
Kaynaklar
- Robinton, D. A., Daley, G. Q. The promise of induced pluripotent stem cells in research and therapy. Nature. 481 (7381), 295-305 (2012).
- Yamanaka, S. Induced pluripotent stem cells: past, present, and future. Cell stem cell. 10 (6), 678-684 (2012).
- B....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
