Bu protokol, Drosophila melanogaster'in yumurtlama tercihlerini tek hayvan çözünürlüğünde test etmek için yüksek verimli bir testi tanımlar. Bu tahlil, basit bir karar verme sürecini kontrol eden genleri ve devre bileşenlerini tanımlamak için basit, verimli ve ölçeklenebilir bir platform sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Yüksek Verimli Testi Bireyin Yumurta Yumurtlayan Tercihler incelemek için
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Son zamanlarda, Drosophila yumurtlama tercihi basit karar verme süreçlerine nöral temelini incelemek için bir genetik uysal bir model olarak ortaya çıkmıştır. yumurtalarını yatırmak siteleri seçerken, erkek sineklerin kendi seçenekleri göreceli çekiciliği sıralama ve seçme yeteneğine sahiptir "daha büyük iki mal." bir de toplum tabanlı ve kurmak için zahmetli olduğu gibi, bu basit karar verme sürecini altında yatan devre bazında aramak için sistematik bir genetik tarama yaklaşım almak istiyorsa Ancak, çoğu yumurtlama tercih deneyleri pratik değildir. Tek kadın yumurtlama tercihlerini okuyan verimini arttırmak için, biz en fazla otuz bireyin her can aynı anda tahlil yumurtlama tercihleri her kadın yüksek yumurtlama oranına sahip sağlayan bir protokol yanı sıra uçar özel odalarını geliştirdi (yani onların tercihi kolayca ayırt edilebilir ve daha inandırıcı olduğunu). Yaklaşımımız yürütmek kolaydırve çok tutarlı sonuçlar üretir. Ayrıca, bu odalar, video yumurtlama hayvanların kayıt ve optogenetics çalışmaları için ışık sunmak için izin farklı ekleri ile donatılmış olabilir. Bu makalede, bu odalar içinde denenecek olan sinekler hazırlanması için, bu odalar ve prosedür imal edilmesi için planları içerir.
Giriş
Drosophila melanogaster, davranışların sinirsel temelini incelemek için güçlü bir genetik model organizmadır. Nöronları hedefli bir şekilde manipüle etmek için genetik araçların hızlı gelişimi ve karmaşık davranışsal analiz araçlarının ortaya çıkması, çeşitli doğuştan gelen ve öğrenilmiş davranışların duyusal-motor dönüşüm süreçlerinin altında yatan devre mekanizmalarını inceleme yeteneğimizi önemli ölçüde geliştirmiştir1-3.
Drosophila yumurtlama, basit karar verme süreçlerinin sinirsel temelini incelemek için uygun bir modeldir. Özellikle, Drosophila dişilerinin, bir yumurtayı belirli birseçenek....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Sinekler hazırlanması 1. tahlil edilecek
- Kültür standart pekmez uçar / 25 ° C ve% 65 nemde belirlenen inkübatör de Mısır unu medya. Şişeleri doldurmadık özen gösterin. Örneğin, dar bir gıda şişenin içine 8 kadın ve 6 erkek koydu.
Not: Burada kullanılan "ince gıda şişenin" 2.3 cm'lik bir iç çapa sahiptir. Biz genellikle her şişenin içine sinek gıda yaklaşık 10 ml dağıtılmıştır. Kullandığımız sinek yemek tarifi burada açıklanmıştır: http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.html. - 2 - Şekil 1E gösterildiği gibi 3 gün kadın eclosion sonra, taze maya hamurlu şişeleri hazırlamak. % 0.5 propionik as....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Yumurtlama odaları birçok parçadan oluşur: bir alt tabaka (alt) parçası, bir bölücü (orta) parçası, bir yükleme (üst) parça ve 2 sürgülü kapı (Şekil 1A - D). Bu parçalar yumurtlama deneyler daha önce bağımsız kurulum sinekler ve yüzeyler için kullanılır. Şekil 1F dişi sineklerin yumurtlama için hazır olduğunda şişeler nasıl görünmelidir gösterir. Sinekler düz alt-tabaka ve bir sükroz içeren alt-tabaka arasında bir seçim verildiğinde, dişi sağlam .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
odaları ve burada açıklanan protokoller önceki yumurtlama deneyleri üzerinde çeşitli geliştirmeler var. Birincisi, önemli ölçüde tek hayvan tercihlerini analiz etmek ve verimi arttırmak. Her oda 30 tek kadın tahlil edebilir ve bir saat kurmak için daha az sürer. İkincisi, önceki yöntemlere göre yumurtlama tercihleri tutarlılığını artırmak. arena boyutlarının standardizasyon, yüzeyler arasındaki yumurtlama substratların boyutu ve mesafe daha kolay farklı deneysel gün arasında ve farklı araştırma gruplarının sonuçları k.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Duke Physics Shop'a, özellikle de Phil Lewis'e, davranışsal aygıtları ve ekleri inşa etmemize ve çizimi oluşturmamıza yardımcı oldukları için teşekkür ederiz. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından R01GM100027 numaralı ödülle finanse edilmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Ultra Saf Agaroz | Invitrogen | 16500-500 | |
| Sükroz | Sigma | S0389 | |
| Su banyosu ve nbsp; | Fisher | 15-462-6Q | |
| LifeCam Sinema web kamerası | Microsoft | H5D-00013 | |
| Kırmızı LED'ler | Cree | C503B-RAN-CA0B0AA1 | |
| Yumurtlama odaları | Özel Yapı | ||
| Kamera tutucular | Özel Yapı LED | ||
| tutucular | Özel Yapı | ||
| Fly şişeleri (dar) | Cenevre | MÖ 32-116 |
Kaynaklar
- Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory. Curr. Biol. 23 (17), 752-763 (2013).
- Yamamoto, N. C., Koganezawa, M. Genes and circuits of courtship behaviour in Drosophi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
