Onkolitik viroterapiler, hepatosellüler karsinom (HCC) tedavisinde yeni terapötikler olarak geliştirilme aşamasındadır. Burada, onkolitik virüsün hepatik arteriyel uygulaması yoluyla HCC'nin lokorejyonel tedavisi için bir yöntem tanımlanmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Sıçanlarda Ortotopik HCC Lokorejyonel Tedavisi için oncolytic virüs transarteryel İdaresi
Bu makalede
Özet
Özet
Hepatosellüler karsinom (HKK) tedavi seçenekleri kısıtlı ve prognozu kötü olan bir hastalıktır. Son yıllarda, onkolitik viroterapiler, malignite ile savaşmak için potansiyel olarak güçlü araçlar olduklarını kanıtlamışlardır. Karaciğerdeki benzersiz ikili kan akımı nedeniyle, ağırlıklı olarak arteriyel kan akımı ile beslenen ortotopik karaciğer tümörlerine lokal olarak tedaviler uygulamak mümkündür. Onkolitik virüslerin hepatik arteriyel iletiminin, multifokal HCC lezyonlarının güvenli ve verimli transdüksiyon etkinliği ile sonuçlandığını ve bunun da immün yetkinliği yeterli sıçanlarda sağkalımın önemli ölçüde uzamasına yol açtığını daha önce göstermiştik. Bu prosedür, birçok HCC hastasına sağlanan standart palyatif bakım olan hastalarda transarteriyel embolizasyon uygulamasını yakından taklit eder. Sıçanlarda hepatik arter yoluyla tümör tedavilerinin uygulanabilmesi, geliştirilmekte olan yeni viral vektörleri değerlendirmek için oldukça karmaşık bir klinik öncesi modele izin verir. Burada, ortotopik HCC'yi tedavi etmek için onkolitik virüs vektörlerinin infüzyonu için hepatik arterin mikrodiseksiyonu için ayrıntılı protokolü açıklıyoruz.
Giriş
Hepatosellüler karsinom (HCC) dünya çapında beşinci en yaygın kanser ve önemli bir sağlık sorunu 1,2 yapma kansere bağlı ölümlerin üçüncü lider nedenidir. Transarteryal embolizasyon (TAE) ya da transarteryal kemoembolizasyon (TACE) içeren tümör rezeksiyonu veya bu bekleyen karaciğer nakli, lokal tedavi için uygun olmayan hastalar için standart palyatif bakım 3,4 olarak uygulanır. Çevreleyen karaciğer portal ven 5,6 onun kan kaynağının çoğunluğunu alırken bu tedaviler, tümörler hepatik arter kan akışının neredeyse sadece beslenen sayede karaciğerde ikili kan kaynağının benzersiz bir özellik istifade eder.
HCC için mevcut tedavilerin son derece sınırlı etkinliklerinin nedeniyle, onkolitik virüs umut verici bir alternatif terapötik maddeler olarak ortaya çıkmıştır. JX-594, son zamanlarda PEXa-VEC adını, bir timidin kinaz silinmiş aşı vektörü, granülosit-m ile silahlı olduğunuHCC 7 Faz II klinik deneme tamamladı acrophage koloni uyarıcı faktör (GM-CSF). Daha yakın bir zamanda, insan interferon-beta ifade eden bir yeniden birleştirici veziküler stomatit virüs vektörü (VSV), sorafenib dirençli HCC (NCT01628640) bir safha I klinik deneme girmiştir. onkolitik virüsler yakın hastalarda HCC için klinik uygulama için onay alma taşımak gibi, etkili bir uygulama yolu için ihtiyaç multifokal hastalık açıktır hedef. Sistemik teslim verimsiz tümör iletimi için büyük ölçüde etkisiz olmakla birlikte, tümör içi uygulamalar hastalığın ilerlemesine karşı duyarlı uninjectable mikroskobik lezyonlar bırakarak, enjekte edilen tümör tedavisinin etkinliğini sınırlayabilir.
Biz ortotopik HCC hedeflemek için lokoregional şekilde onkolitik virüs tedavisi yönetmek için sıçanlarda hepatik arter izole bir yöntem kurduk. Biz göstermiştir ki güvenli ve verimli olarak bu yönetim rota sonuçlarıBağışıklık yetkili sıçanlarda 8-10 anlamlı sağkalım uzaması sonucu, multifokal HCC nodüllerin transdüksiyonunu ettik. Burada, biz, erişme diseksiyon ve sıçanlarda hepatik artere enjekte yöntemi tarif etmektedir. Prosedürün bir şema, Şekil 1 'de gösterilmiştir (daha önce 9 yayınlanmıştır)
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Not: Aşağıdaki adımlar kurumumuzun kuralları ve Bavyera, Almanya'nın yerel yönetimler çerçevesinde yapılmıştır. Yerel hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından dikte edildiği gibi bu protokolü üretmek için tüm girişimler, hayvanların insanca tedavi için yerel kurallarına bağlı kalınarak yapılmalıdır. Örneğin, birçok enstitü steril eldivenler kemirgen ameliyat sırasında giyilen gerektirir. Ayrıca, virüsler ile çalışma, kişisel ve çevre güvenliği için dikkat çekici, yerel yönetmeliklere göre yapılmalıdır. Bakım düzgün kontamine atık imha etmek ve (otoklav ve üreticinin talimatlarına göre uygun bir antiviral dezenfektanla temizleyerek, yani) aletleri ve çalışma alanı temizlemek için alınmalıdır.
Başlangıç Cerrahi öncesi 1. Hazırlıklar
- (Otoklav yoluyla, yani) cerrahi aletler sterilize.
- appropr virüs seyreltinkullanılan spesifik virüs toksisitesi ve sıçan soyunun duyarlılığına bağlı olarak değişecektir iate konsantrasyonu.
Not: bir erkek Buffalo sıçanlarda veziküler stomatit virüsü kullanılarak, örneğin,, genellikle bu modelde maksimum tolere edilen doz, 1 ml hacim içinde 10 7 PFU enjekte edilir.- 1 mi şırıngalarda (aseptik teknik kullanılarak) virüs önceden doldur ve şırınga ve iğne hava ortadan kaldırmak için dikkat edilerek, 30 G iğne ekleyin.
- gerekli tüm malzeme ve ekipman ile cerrahi alan hazırlayın ve dezenfekte etmek için etanol ile bölgeyi püskürtün. gazlı çubukları ve pamuk uçlu aplikatörler nemlendirilmesi steril tuzlu su çözeltisi (% 0.9 NaCl) ile küçük bir kap doldurun.
Sıçan 2. Hazırlık
- (Yerel hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından belirtildiği gibi) uygun doz 30 dakikada önce cerrahi prosedür başlamadan, bir analjezik uygulayın. Örneğin,metamizol yüksek bir doz (100-200 mg / kg) tatbik.
- Inhalasyon (izofluran) ya da enjekte edilebilir (örneğin, MMF şekilde bilinmektedir medetomidin bir karışımı (0.15 mg / kg), midazolam (2 mg / kg) ve fentanil (0.005 mg / kg),) anestezi kullanılarak sıçan anestezisi. % 1-3 bir buharlaştırıcı vasıtasıyla isolflurane yönetmek ve normal solunumu ve kalp hızını devam ettirebilmek için gerektiği gibi ayarlayın.
- Devam etmeden önce, sıçan tamamen uyuşturulmuş ve ayak pedi kısma ve bir reaksiyon için gözlemleyerek ağrı hissediyorum mümkün olduğundan emin olun.
- anestezi sırasında kurumasını önlemek için bir veteriner göz merhemi sürün.
- sadece küçük bir veteriner saç kesme makinesi kullanarak genital üzerinde aşağı sternum karın alan tıraş. Cildi zarar vermeden yakın bir tıraş elde etmek için özen gösterin.
- inhalasyon anestezi ile, uygun bir büyüklükte burun konisi içine burun yerleştirirseniz, ön ve arka ayakların üzerinde bant kullanarak cerrahi yatağa sıçan düzeltmek ve. bir ısıtma yastığı yerleştirinSıçan altında vücut ısısını korumak için. antiseptik boya bir alkol çalkalama ve uygulama, ardından cerrahi sınıfa ait bir dezenfektan ile karın bölgesi, dezenfekte.
3. Laparotomi
- Böyle 15. olarak, küçük bir eğri neşter kullanılarak, doğrudan orta hat boyunca deri tabakası içinde küçük bir dikey bir kesi yapmak. xiphoid sürecine kadar kesi uzatın. Sonra, yavaşça bir neşter kesi yapmak için Adson forseps bir çift ile kaldırarak kas tabakası kesilirken, ve daha sonra cerrahi makas ile xiphoid sürecine kadar kesi uzatmak. karın boşluğu organları delmek veya xiphoid sürecin her iki tarafında küçük damarları zarar vermemeye özen gösterin.
- kas ve cilt yaymak ve tüm karın bölgesi ortaya çıkarmak için karın karşısında retractor yerleştirin.
- Steril serum fizyolojik ile iki 7.5 x 7.5 cm 2 gazlı bezlerden ıslatın ve cerrahi üst kısmında birini yayıldıŞekil 2A'da gösterildiği gibi, açma ve alt kısmında bir.
Karaciğer Arter 4. İzolasyonu
- yavaşça karın boşluğundan dışarı bağırsak ve çekum kaldırın ve alt gazlı bez üzerine koyun, steril serum fizyolojik ile nemlendirilmiş iki nemli pamuk aplikatör bezlerden kullanarak. nemli organları tutmak için ve yolumdan onları tutmak için üzerine gazlı bez katlayın.
- İki nemlendirilmiş pamuk aplikatör bezlerden kullanarak, yavaşça bu aşamada görünümünde en baskın lob olacak sol lateral karaciğer lobu, yukarı kaldırın. lob tamamen yukarı doğru çevrilmiş ve daha önce yerleştirilen gazlı bez üstünde dinlenmeye sağlayan, lobun alt lifli zarından kesilmiş yaylı makas küçük bir çifti kullanılarak, yukarı lob çevirin ve. yerinde tutmak için lob üzerinde gazlı bez bez katlayın.
- Şimdi görünümünde en ön lob sonraki lobun (anterior kaudat) ile devam edin. thbir mikroskop ve ince forseps e yardım, bırakın ve serbestçe yukarı çevrilmiş izin için lobu çevreleyen ince bir zar teşrih. sol lateral lob ile birlikte gazlı bez bez altına lob yerleştirin.
- artık görünür olacak arka kaudat lobu, gözlemleyin. tamamen arka kaudat lobun incelemek ve yukarı ve gazlı bez içinde birlikte önceden yerleştirilen karaciğer lobları ile çevirmek için adımı yineleyin 4.3.
- Sadece kaudat lobun orijinal konumuna altında, şimdi görünür ve kolayca güçlü nabız tarafından tanınan olacaktır hepatik arter, bulmak. anatomik sağ arter ardından, görünümünden gastroduodenal ve uygun karaciğer arterleri engellemeyecek kalın zar malzeme gözlemlemek. Ince forseps kullanarak, bu malzemeyi yukarı kaldırın ve yavaşça bu alanda herhangi bir küçük damarları önlemek için özen, onu gözyaşı. meydana gelebilecek herhangi bir kanamayı durdurmak için pamuklu aplikatör bezlerden kullanın.
- a bulunmembranlar düzgün disseke zaman bir mikroskop yardımıyla açıkça görünür olacak rterial dalları.
- Iki güzel, atravmatik forseps kullanarak, dikkatli bir hepatik arter, gastroduodenal arter ve onlar çevreleyen zarların (Şekil 2B) kurtulmuş şekilde uygun hepatik arter teşrih.
Enjeksiyon için Arter 5. Hazırlık
- Gastroduodenal arter altında bir 7-0 Prolen sütür geçirin ve sadece çatallanma (uygun yerleştirme için bakınız Şekil 1) Yukarıdaki, uzak ucunda kalıcı bir bitişik harfleri bağlamak için mikro iğne tutucu kullanın. Ucunda kalan dikiş materyali yaklaşık 2 inç izin ve Şekil 2C olarak, öğretilen arteri çekmek için bir iğne tutucu ile kelepçe.
- Geçici olarak kan akımını (Şekil 2C) engellemek için ortak hepatik arter üzerinde küçük bir kelepçe yerleştirin.
Not: Bu impİğne arterden çıkarıldıktan sonra ortant büyük kanamanın önlenmesi için. Bundan başka, kan akışı bloke yavaş virüs yönetim ve daha transdüksiyon verimliliği sağlar.- Önemli: Kan akışı durur o zaman miktarını sınırlamak için hızlı bir şekilde çalışın - hepatik arter sıkma 5 dakika içinde arterin enjeksiyon ve müteakip ligasyonu gerçekleştirin.
- Mümkünse, gastroduodenal arter keskin odak ve doğru 30 G iğne eklemek için yeterince büyük görünen, öyle ki diseksiyon mikroskobu büyütme artırır. gastroduodenal arterin lümenine enjeksiyon şırınga ucunu yerleştirin ve pistonu itmek yavaş yavaş.
Not: İğnenin Uygun yerleşim doğru hepatik arter yoluyla ve karaciğere doğru doğrudan akan enjekte çözüm neden olacaktır.- transdüksiyon verimliliği maksimize etmek çok yavaş enjeksiyon yapın.
- tüm enjeksiyon hacmi tatbik edildikten sonra, yavaş yavaş arterden iğne geri.
Not: enjeksiyon yerinde kanama olmamalıdır. meydana gelir kanama durumunda, bu kelepçe düzgün yerleştirilmiş değildir ve hızlı bir şekilde ayarlanması gerektiğini belirtir.
6. Kapanış
- gastroduodenal arter altında ikinci bir 7-0 Prolen sütür geçirin ve enjeksiyon yerinde üzerinde ikinci bir kalıcı bitişik harfleri kravat.
- hepatik arterden kelepçeyi çıkarın. karaciğere doğru düzgün hepatik arter yoluyla kan akışını onaylamak restore edilmiştir.
- bitişik harfler gevşek uçları kesilir.
- karın boşluğuna bağırsak ve karaciğer dönmeden önce hiçbir kanama olmadığından emin olun. ek orijinal yönü döndürülür dikkat edin.
- kavisli bir iğne ile 4-0 vikril dikiş materyali kullanarak ayrı katmanlar halinde kas ve cilt dikin. Yeri continuous sütür yaklaşık 1 mm aralıklı ve sıkı çekin.
- dikiş aşamasında, bir analjesik örneğin buprenorfin gibi (0.05 mg / kg) tatbik.
- anestezi sıçan çıkarın. izofluran kullanılmış ise, sıçan birkaç dakika içinde bilincini kazanmak gerekir. MMF enjekte edilebilir bir anestezi gibi kullanılmış ise, anestezinin ters olan, atipamezol (0.75 mg / kg), flumazenil (0.2 mg / kg), ve nalokson (9.12 mg / kg) deri altından enjeksiyonu ile antagonize ve hayvanlar 20 dakika içinde bilincini kazanmak için izin verir. İlk wakening aşamasında kızılötesi ısınma lambası ile sıcak sıçan tutun.
- sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayın.
- Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyin.
- sıkıntı patolojik belirtileri postoperatif sıçan Monitör ve devamıanaljezikler ile yerel hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından gerektiği gibi. Örneğin, buprenorfin / 0.05 mg uygulanan her 12 saat kg olabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
tecrübesi ile, (arter başarıyla disseke ve enjekte ve hayvan ameliyatı hayatta olduğu anlamına gelir) neredeyse% 100 başarı oranı elde edilebilir. Ancak, (vb tümör yükü derecesi, altta yatan karaciğer fonksiyon) ameliyat öncesinde sıçan sağlık durumu açıkça cerrahi müdahale sonucu bir rol oynayacaktır. Cerrahi müdahalenin ardından, fareler, tek başına tampon bile virüs olmadan enjekte edilmiştir, Geçici kilo kaybı ve karaciğer enzimlerinin hafif, geçici yükselme yaşamaya beklene...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Direkt intratümöral enjeksiyon, tek bir tümör nodülünün etkili tümör transdüksiyonu ile sonuçlanan en basit yöntem olmasına rağmen, hepatik arteriyel infüzyon, multifokal, ortotopik HCC'yi hedeflemek için ideal bir uygulama yolunu temsil eder. Bu yöntemin, onkolitik virüslü bağışıklık yetkin sıçanlarda HCC'yi tedavi etmek için hem güvenli hem de etkili olduğu kanıtlanmıştır. Ayrıca, HCC hastaları rutin olarak transarteriyel kemoembolizasyon uygulaması ile tedavi edildiğinden, burada açıklanan yöntem klinik bir ortama k...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, SFB 824 alt projeleri C6 ve C7 (DFG Sonderforschungsbereich 824), Alman Araştırma Vakfı, Bonn, Almanya tarafından desteklenmektedir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Veteriner makası | Aesculap | GT415 | Cerrahi alandan kürkü çıkarmak için ideal küçük, kablosuz düzeltici |
| Stereomikroskop | Zeiss | Stemi SV6 | |
| 30 G İğneler | Braun | 4656300 | 30 G x ½ " |
| 1 ml şırınga | Braun | 9161406V | Tüberkülin şırınga |
| Tek kullanımlık neşter | Tüy | 2975 # 15 | # 15 bıçak ve nbsp; |
| Standart cerrahi makas | Güzel Bilim Araçları | 14001-13 | Keskin/künt, cildi ve kasları açmak için |
| Adson forsep | Güzel Bilim Araçları | 1101-12 | Dişlerle, cildi ve kasları kavramak için |
| Alm ekartör | Güzel Bilim Araçları | 17008-07 | Künt dişli, ameliyat sırasında karın boşluğunu açmak için |
| Gazlı bez çubukları | Lohmann & Rauscher | 18504 | 7,5 cm x 7,5 cm, kullanımdan önce otoklavlanmalıdır |
| Pamuk uçlu aplikatör çubukları | Lohmann & Rauscher | 11970 | Steril |
| İnce uçlu foreceps | Güzel Bilim Aletleri | 11063-07 | 0,4 mm, açılı uç, hepatik arteri incelemek için |
| Vannas yaylı makas | Güzel Bilim Araçları | 91500-09 | Hassas kesim için |
| Mikro iğne tutucu | Güzel Bilim Araçları | 12076-12 | Gastroduodenal arteri bağlamak için |
| İğne tutucu | Güzel Bilim Araçları | 12005-15 | Tungsten karbür çeneler |
| 7-0 Prolene sütürler | Ethicon | 8648H | Gastroduodenal arteri bağlamak için kavisli iğneli polipropilen sütür |
| 4-0 Vicryl sütürler | Ethicon | V3040H | Kavisli iğne takılı Kızılötesi |
| ısıtma lambası | Beurer | IL11 | Ameliyat sonrası vücut ısısını korumak için |
Kaynaklar
- Murray, C. J., Lopez, A. D. Evidence-based health policy - lessons from the Global Burden of Disease Study. Science. 274, 740-743 (1996).
- Parkin, D. M., Bray, F., Ferlay, J., Pisani, P. Estimating the world cancer burden: Globocan 2000. Int J Cancer. 94, 153-156 (2001).
- Bruix, J., Sala, M., Llovet, J. M. Chemoembolization for hepatocellular carcinoma. Gastroenterology. 127, 179-188 (2004).
- Miraglia, R., Pietrosi, G., Maruzzelli, L., Petridis, I., Caruso, S., Marrone, G., Mamone, G., Vizzini, G., Luca, A., Gridelli, B. Efficacy of transcatheter embolization/chemoembolization (TAE/TACE) for the treatment of single hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol. 13, 2952-2955 (2007).
- Breedis, C., Young, G. The blood supply of neoplasms in the liver. Am J Pathol. 30, 969-977 (1954).
- Nakashima, T., Kojiro, M. Pathologic characteristics of hepatocellular carcinoma. Semin Liver Dis. 6, 259-266 (1986).
- Heo, J., et al. Randomized dose-finding clinical trial of oncolytic immunotherapeutic vaccinia JX-594 in liver cancer. Nat Med. 19, 329-336 (2013).
- Altomonte, J., Marozin, S., Schmid, R. M., Ebert, O. Engineered newcastle disease virus as an improved oncolytic agent against hepatocellular carcinoma. Mol Ther. 18, 275-284 (2010).
- Shinozaki, K., Ebert, O., Kournioti, C., Tai, Y. S., Woo, S. L. Oncolysis of multifocal hepatocellular carcinoma in the rat liver by hepatic artery infusion of vesicular stomatitis virus. Mol Ther. 9, 368-376 (2004).
- Shinozaki, K., Ebert, O., Woo, S. L. Eradication of advanced hepatocellular carcinoma in rats via repeated hepatic arterial infusions of recombinant VSV. Hepatology. 41, 196-203 (2005).
- Altomonte, J., et al. Synergistic antitumor effects of transarterial viroembolization for multifocal hepatocellular carcinoma in rats. Hepatology. 48, 1864-1873 (2008).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
