Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Tavuk İşitsel Organ gen Transferi tarafından

9.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/53864

⸱

17 Nisan 2016

 , 
1The Solomon H. Snyder Department of Neuroscience, The Center for Sensory Biology, The Johns Hopkins University, School of Medicine

Bu makalede

Özet

İşitme organı işitmeye aracılık eder. Burada, gelişmekte olan tavuk işitme organında işitsel progenitör hücre proliferasyonu ve farklılaşmasını incelemek için optimize edilmiş modifiye edilmiş bir in ovo mikro-elektroporasyon yöntemi sunuyoruz.

Özet

Tavuk embriyo gen fonksiyonunun manipülasyonlar ovo göreli kolaylıkla yapılabilir embriyonik gelişme çalışmak için ideal bir model sistemleridir. iç kulak işitme duyu organı duymak yeteneğimizi için kritik öneme sahiptir. Bu destek hücreleri (SC'ler) glial gibi son derece uzmanlaşmış duyusal (HCS) mekano nakleden saç hücrelerden oluşur epiteli ve çevresindeki evler. Işitsel organlarda yapısal farklılıklara rağmen, işitsel organ gelişimini düzenleyen moleküler mekanizmalar evrimsel memeliler ve kuşların arasında muhafaza edilir ovo elektroporasyon E1 erken aşamalarında büyük ölçüde sınırlıdır -. E3. Nedeniyle E5 işitsel organ göreli geç gelişmesine, E3 geçmiş ovo elektroporasyon ile işitsel organın manipülasyonlar nedeniyle daha sonraki aşamalarda tavuk embriyo ileri gelişimine zordur. Burada sunulan yöntem de ilgi genleri hedef için geçici bir gen transferi yöntemisahne E4 - ovo mikro-elektroporasyon yoluyla gelişmekte olan tavuk işitsel duyu organ E4.5. Bu yöntem, gain- ve-kaybı fonksiyonları bilinen plazmid DNA bazlı ekspresyon vektörleri ile uygulanabilir ve en bütün embriyoya edu (5-etinil-2'-deoksiuridin) eklenerek ovo hücre çoğalma tahlilinde birleştirilebilir elektroporasyon süresi. yeşil ya da kırmızı floresan proteininin (GFP veya RFP) ifade plazmaları kullanımı deneyci hızla elektroporasyon başarıyla gelişen iç kulağın işitme bölümünü hedef belirlemek için izin verir. Bu yöntem yazıda, GFP Electroporated örneklerin temsili örnekleri gösterilmiştir; elektroporasyon sonra 96 saat ve işitsel organ yanlısı duyusal alana GFP hedefleyen in situ hibridizasyon RNA tarafından doğrulandı - embriyolar 18 toplandı. yöntemi kağıt da CellProlif analiz etmek edu analog timidin kullanımı için optimize edilmiş bir protokol sağlardurmasýna; immüno-etiketlenmesi birleştiren edu Click kimyası eğitsel göre hücre çoğalma tahlilinin bir örneği temin edilmiştir.

Giriş

Memeli ve kuş işitsel duyu organı arasındaki morfoloji farklılıkları ve hücresel desenlendirme rağmen, moleküler faktörler ve duyusal HC geliştirmeden sorumlu yollar evrimsel 1-3 korunmuş olduğu düşünülmektedir. işitsel HCS ve çevrelerindeki SC'ler evler baziler papilla, iç kulak otocyst outpocketing olarak gelişir. Erken HC ve SC atalarıdır bir havuz otik plakod / otik fincan sinir-duyu yetkili etki alanı (NSDAP) içinde belirtilir. Kader-haritalama verileri nöronal ve duyusal soylar bağlantılı ve otik fincan antero-ventral bölgesinde bulunan ya da fareler ve tavuk 4,5 yılında otocyst NSDAP kaynaklanan olduğunu kanıtlar sunmaktadır. İlk olarak, Nöroblastlar sonunda işitsel ve vestibüler ganglionlar bölünmüş işitsel-vestibüler ganglion, nöronlar yol vermek için NSDAP dan tabakalara. Bu nöronlar beyin sapı iç kulak ve çekirdeklerin duyusal HCS innerve. th hücreleriNSDAP kalır at mekano nakleden duyusal HCS ve bunların ilişkili AVM oluşan işitsel duyu organı dahil olmak üzere çeşitli duyusal yamalar, yol düşünülmektedir.

civciv ve sıçangil hem de, işitme organı duyusal progenitör hücre döngüsü çıkış ve HC farklılaşma degradeler karşı meydana gelir. Civciv, işitsel progenitör hücre döngüsü çıkış ~ E5 etrafında başlar ve tabandan tepeye doğru ilerler ve merkezden çevreye 6. Bir gün sonra, HC farklılaşma apeks başlar ve tabanına 7 ilerler. Fonksiyonel mekanizmalar karmaşık ameliyatları gerektirir diğer model sistemler uterus, embriyolar manipüle aksine ovo göreli kolaylıkla araştırılabilir olarak tavuk iç kulak gelişiminin incelenmesi birçok teknik avantajlar sağlamaktadır. Burada tarif edilen yöntem, olası Basila ilgi genleri hedef ovo mikro elektroporasyon kullananÖzellikle E4 otik vezikül r papilla alanı ön-ventral.

Ovo Elektroporasyon iyi kurulmuş ve genel olarak 8-14 kullanılan bir tekniktir. Elektroporasyon tekniği ilkesi nükleotidleri (örneğin, plazmid DNA, sentetik DNA ya da RNA oligonükleotidleri) negatif yüklü gerçeğine dayanır. DNA, ilgi konusu doku içine enjekte edilir. bir elektrik akımı doku boyunca yerleştirildiğinde, mevcut hücre duvarlarının geçici gözenekleri açılır ve negatif yüklü DNA, pozitif elektrot (anot) doğru akarken, DNA alımı için izin verir. kazanç fonksiyon-deneyleri için, ilgi konusu gen genellikle yeşil flüoresan protein (GFP) veya kırmızı flöresanlı proteindir (RFP) için uygun ekspresyon kasetleri içeren ifade plazmidleri alt klonlanır. kayıp-fonksiyon deneyleri plazmid tabanlı dominant negatif represör yapıları veya RNAi veya morfolino yapıları için c vardırommonly 15,16 kullanılır. Bazlı plazmid tipik mikroRNA (MiRNA) işlevi miRNA'lar sünger yapıları, inhibe etmek için, 17 kullanılabilir. Ovo mikro elektroporasyon yöntemi kolayca tüm embriyo edu ekleyerek ovo hücre çoğalma tahlilinde birleştirilebilir burada tarif edilen yöntem olup, işitme organı proliferasyonu ve farklılaşmasını kontrol eden molekül mekanizmalarının incelenmesi için izin verir.

elektroporasyon ve Edu eklenmesi bir gün işitsel organında hücre döngüsü çıkış başlangıcından önce olduğu otik vezikül içinde E4 gerçekleştirilir. tipik olarak 18 gerçekleştirilen bir işitsel organ Analizi - (HC farklılaşma sırasında) E5 (duyusal progenitör hücre döngüsü çıkış başlangıcı), E6 (HC farklılaşma başlangıcı) ve E7 elektroporasyon sonra 96 ​​saat; ve daha sonra ~ E9 (HC farklılaşma sonuna) kadar. Gen transferi bu elektroporasyon yöntemi olup, ~ 4 gün yaklaşık süren geçicidir becauSE ilgili genler, genomu içine entegre değildir, ancak yöntem, Tol2-aracılı gen transferi 11 gibi genomuna entegre yeteneğine sahip yapmak için, uygun plazmid DNA bazlı ekspresyon vektörleri ile kullanılmak için uygundur. Bu yöntemle sağlam GFP veya RFP ifade sürer ~ ile sinyalleri işaret solmaya, ancak işitsel organ karmaşık gelişimini incelemek için geniş bir zaman pencere sağlamak sonra kokleadaki 4 gün. Ovo gen aktarım yöntemi Bu roman ve özellikle işitme organı HC geliştirme odaklanmak araştırmalar için en uygun olan E4 olası işitsel organı, hedef sağlar. Bu çok daha genç gelişim aşamalarında 11,12 ya da in vitro baziler papilla eksplant kültürleri 18 kullanımı ile karşılaştırıldığında en elektroporasyona alternatif yöntemler, iyi bir yer.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

yumurta ve çıkmamış embriyolar için bakım ve etik ve insanca muamele edilir. çıkmamış embriyo kullanımı için tüm protokoller Tıp Baltimore, Maryland Johns Hopkins School Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından kabul edildi.

1. Yumurta ve ekspresyon yapıları hazırlanması

  1. Yumurtalar:
    1. 3 inkübe - 4 düzine döllenmiş tavuk yumurtası (Gallus gallus) 37 ° C'de onların yüzüne düz yalan.
      1. inkübasyon 24 saat sonra yumurtanın yuvarlak arka ucundan bir şırınga ile albümin 3 cc çekin ve şeffaf bir bantla delik mühür. Bu yumurta 19 üstünde erişim için pencere keserken kabuk yapışmasını embriyo olmadan embriyo erişim kolaylığı sağlayan, embriyo ve yumurta kabuğu arasında bir hava boşluğu oluşturur.
      2. İnkübasyon süresi 117 saatte, Hamburger ve Hamilton 20 gelişim aşamalarına göre embriyolar sahneE4 (HH24-25) de (Şekil 1D bakınız).
  2. İfade oluşturur:
    1. reaktifler kullanılarak plazmid DNA ve bir ticari olarak temin edilebilir preparat kitinin üretici tarafından yapılan protokoller hazırlayın. hazırlama son aşamasında, 500 ul TE (Tris-EDTA), 1.5 ml tüp içine kitte sağlanan tampon içine DNA elüte.
    2. Etanol 3 M sodyum asetat ve 50 ul ve boru 100,% 1 mL etanol ekleyerek konsantre DNA hızlandırabilir. -20 ° CO / N tüp yerleştirin.
    3. 4 ° C'de 14,000 rpm'de 30 dakika boyunca tüp santrifüjleyin. Süpernatantı ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca pelet hava-kurutun. ~ 4 ug / ul konsantrasyon elde edilmelidir, 15 ul TE tampon maddesi içinde pelet, eritin.
      Not: Burada kullanılan kontrol tanım yapılan bir tavuk β-aktin promotör tarafından yönlendirilen PMES IRES-GFP 10, ya da pCI-H2B-IRES-RFP vardır CMV promoteri tarafından tahrik edilir> 10 kadar.

Ovo Mikro elektroporasyon ve Ovo Hücre Proliferasyon Tahlili 2 tavuk

  1. İfade Construct ve Mikro-elektroporasyon Ovo Mikro enjeksiyon:
    1. 2.5 x 2.5 mm Kutu Platin Isıtma Filament için aşağıdaki optimize parametreler ile bir mikro-pipet çektirmenin kullanarak ince iğneler içine cam kılcal tüpler çekin: Basınç = 500, Isı = 600 ° C, Velocity = 105 ve Zaman = 64 çekin = 150 milisaniye (bakınız Tablo 1).
    2. Sol- ve mikroskop yan Sağ el mikro-manipülatör aşamalarında kurmak (Şekil 1A bakınız). Sağ el mikro-manipülatör cam kılcal iğne ve Solaklar mikro-manipülatör elektrotlar (Şekil 1A) tutar tutar.
    3. keserek mikro-enjeksiyon için ince çekti cam kapiller iğne hazırlayınBir forseps ile iğne ucu mikroskop altında çalışırken.
    4. Mikroskop altında çalışırken% 0.1 Hızlı Yeşil ile renklendirilmiş plazmid DNA 2.5 ul mikro-manipülatör kullanarak elle manuel olarak iğne doldurun.
    5. (Şekil 1A bakınız) bir kalıp / yumurta tutma cihaz içinde yan yatan yumurta yerleştirin. Makas 19 (Şekil 1A) kullanarak yumurtanın üstünde bir yuvarlak pencere kesti.
    6. Mikroskop altında çalışırken, dikkatle forseps kullanarak embriyo kaplayan iki membranlar açın.
    7. Mikroskop altında çalışırken, elle mikro-manipülatör kullanarak ve mikro-elektro-sağ elinizi kullanarak mikro-enjeksiyon sağ kulak vezikül lümene plazmid DNA yaklaşık ~ 0.5 ul teslim.
      1. Aynı anda sol ışığımdır kullanırken bu yüzden, Sağ mikro-manipülatör (Şekil 1B-D) DNA ile sağ kulak vezikül lümen mikro-enjekte yapmakEmbriyonun baş aşaması E4 dips çünkü ga forcep, embriyonun baş sakinleştirmeye. Bu otik vezikül zarar verecektir çünkü, otik vezikül lümeni geçmiş mikro-enjekte etmeyin.
      2. Hemen mikro-enjeksiyon sonrasında, mikroskop altında çalışırken, pozitif (anot) platin elektrot ön-ventral sağ kulak vezikül ve paralel olarak negatif 2 mm elektrot (katot) ile 2 mm yerleştirmek için Sol mikro-manipülatör kullanın 1 mm aralıklı (Şekil 1 C). 100 milisaniye süre ve 200 msn aralıkla 12 V 4 darbeleri sunun. sol kulak vezikül bir iç işlenmemiş kontrol olarak hizmet vermektedir.
        NOT: 1x PBS batırılmış bir pamuk uçlu çubukla electroporations arasında elektrotlar temizleyin.
  2. Ovo Hücre Proliferasyon Tahlili:
    1. Hemen elektroporasyon sonra el bütün üzerine 50 ul Edu çözüm bırakarak 0.25 mg 50 ul ekleyin / ml edu 1x PBS içindeBir pipet kullanarak ovo embriyo. bant ile yumurta Seal ve 18 için inkübatör dönmek - 96 saat.
    2. ( 'Şekil 1 EE bakınız) standart floresan mikroskop kullanılarak 24 saat - dikkatle bandı çıkarın ve 18 sonrası otik vezikül içinde floresan GFP veya RFP sinyali embriyolar kontrol edin. Floresan sinyal varsa, ( '' Şekil 1 FP bakınız) bu noktada analizler için embriyolar hasat veya bant ile yeniden mühürlemek ve hasat için inkübatör iade ve sonraki aşamalarda analiz eder.
      NOT: - 7 saat elektroporasyon 10 sonra PMES IRES-GFP yapı ile GFP sinyali Anlatım 6 açıktır.

Yerinde hibridizasyon ve immünohistokimya RNA 3. Embriyo Hasat ve Doku İşleme

  1. forseps kullanarak embriyolar hasat. Soğuk 1x PBS embriyo durulayın. onun boynundan başını keserek, embriyoların başkanları kaldır4 ° C 'de% 4 paraformaldehid O / N olarak kafaları forseps kullanılarak ve yerleştirin. kafasının içinde% 4 paraformaldehit girmesine izin vermek üzere, bir forsepsle kullanarak beyin delikler.
  2. 4 ° C'de O / N (1X PBS)% 30 sukroz içinde kafaları kurutmak.
  3. kuru buz ve metilbütan (2-metilbütan) içindeki bir bulamacı içinde hızlı dondurulması ile kriyokoruyucu ortam içinde kafa monte edin. Alternatif olarak, hızlı sıvı azot ile kriyokoruyucu ortamda başlarını dondurma. -80 ° C de monte kafaları saklayın.
  4. 12 mikron kalınlığında doku bölüme başlarını cryosection ve superfrosted mikroskop cam slaytlar üzerine tüm iç kulak içeren doku bölümleri toplamak.
  5. Daha önce 4,21 açıklandığı gibi in situ hibridizasyon ve immünohistokimya standart RNA gerçekleştirin ve kit üreticisi tarafından sağlanan protokol izlenerek edu hücre çoğalması için analiz edin.
    NOT: Saç hücreleri tavşan poliklonal kullanılarak tespit edilebilir a-MyosinVIIa (Myo7a) birtibody (1: 1,000, Proteus Biosciences) ile ve floresan etiketli ikincil antikor (1: 250, keçi anti-tavşan AlexaFluor 488; Invitrogen).

4. Görüntü Yakalama ve İşleme

  1. dijital görüntüleme ekipmanları ile görüntü alabilir. Standart bir floresan mikroskop ve (5x gelen büyütme 40x arasında değişen) standart geniş alan mikroskobu kullanarak in situ sonuçları ile görüntü immünhistokimya sonuçları.
  2. Görüntü işleme yazılımı kullanarak görüntüleri işlemek.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

yeşil floresan protein içeren bu yöntem, kağıt plazmid DNA içinde (GFP) ifade kasetleri ~ bir sonuçta 12 V ve 4 100 milisaniye darbe süresi ile bakliyat ve 200 milisaniye aralıklarla optimize parametreleri ile gelişmekte olan tavuk baziler papilla (BP) içine hedef aldı % 50 embriyo sağkalım oranı ve BP içine hedefleme plazmid-DNA etkinliği. (Beyaz ok Şekil 1, EE ') ve GFP tanımı bir süre boyunca takip edilebilir embriyoların geliştirilmesinde ana GFP tanımının Flores...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Ovo mikro-elektroporasyon burada anlatılan yöntem geliştirilmesi işitsel organ haline gen transferi için optimize edilmiştir. Tipik olarak, gen fonksiyonu / ifade işlemek için kullanılan plazmid DNA bazlı ekspresyon vektörleri ile uyumludur. E4 elektroporasyon zamanlaması işitsel organında HC geliştirme odaklanmak araştırmalar için en uygunudur. En kritik adımlar iğne ile çok derin gidiyor ve otik vezikül zarar vermeden otik vezikül lümenine DNA mikro-enjekte otik vezikül ön-ventral alanı tarafından içine DNA h...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Biz ifade plazmaları ve in situ sondaları Dr. Doris K. Wu teşekkür Duyu Biyoloji görüntüleme tesisi için Johns Hopkins Üniversitesi Merkezi ve İşitme ve Denge Merkezi. Bu çalışma LE NIDCD Grant T32 DC000023 tarafından desteklenen

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Steril 1x PBS pH 7.4gibco10010-023
Hızlı Yeşil FCF TozuSigmaF7252-5G
EdU TozInvitrogenE10187
Click-IT EdU Alexa Fluor 555 Görüntüleme KitiInvitrogenC10338
HiSpeed Plazmid Midi Kiti (25)Qiagen12643
ECM 830 ElectroSquarePorator BTX Harvard Aparatı
Muz - Micrograbber Kablo KitiBTX Harvard Aparatı45-0216
Sağ El ve Solak MikromanipülatörlerDünya Hassas Aletler A.Ş.M3301R ve M3301L
İki adet 12 mm Manyetik Tutma Cihazı Aşamaları, 7 inç dikey direklerleWorld Precision Instruments Inc. M10
Metal Çelik Taban Plakası 12x24 inçDünya Hassas Aletler A.Ş.5479
Yumurta Makasları 12 cm uzunluğunda kavisli, 12 mm ekstra ince bıçaklar; Bahar MakasDünyası Hassas Aletler A.Ş.  14120
İğneleri çekmek için Micropippette ÇektirmeSutter Instrument Co.P-97
2.5x2.5 mm Kutu Platin Isıtma FilamentiSutter Instrument Co.
Cam Kılcal Tüpler / İğneler / Elyaf Yok / Borosil 1 mmFHC27-30-0
Hamilton Cam Şırınga 100 & mu; lHamilton80601 Model 710LT
Hamilton Cam Şırınga için Mineral Yağ (Ağır)Fisher ScientificO122-1
Cam Şırınga ve Cam Kapiler İğneleri bağlamak için Polietilen Boru / Toksik OlmayanBecton Dickinson and Company (BD)427420 Intramedic Clay Adams Marka
3 cc Tek Kullanımlık ŞırıngalarBecton Dickinson and Company (BD)309657
Tek Kullanımlık 21 Gauge İğnelerBecton Dickinson and Company (BD)305122
Bir çift 2 mm PlatinElektrot Bulldog Bio. / NepageneCUY611P3-2
Elektrot TutucuBulldog Bio. / NepageneCUY580
Bir çift Dumont ince forseps numara 5Güzel Bilim Araçları (FST)Yumurtaları
kapatmak için mat kaplama görünmez bantOfis Deposu520-928
Pamuk Uçlu ÇubuklarFisher Scientific23-400-101
Steril filtre uçları

Kaynaklar

  1. Bissonnette, J. P., Fekete, D. M. Standard atlas of the gross anatomy of the developing inner ear of the chicken. The Journal of comparative neurology. 368, 620-630 (1996).
  2. Cantos, R., Cole, L. K., Acampora, D., Simeone, A., Wu, D. K. Patterning of the mammalian cochlea. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 11707-11713 (2000).
  3. Whitfield, T. T. Development of the inner ear. Current opinion in genetics & development. 32, 112-118 (2015).
  4. Raft, S., et al. Cross-regulation of Ngn1 and Math1 coordinates the production of neurons and sensory hair cells during inner ear development. Development. 134, 4405-4415 (2007).
  5. Satoh, T., Fekete, D. M. Clonal analysis of the relationships between mechanosensory cells and the neurons that innervate them in the chicken ear. Development. 132, 1687-1697 (2005).
  6. Katayama, A., Corwin, J. T. Cell production in the chicken cochlea. The Journal of comparative neurology. 281, 129-135 (1989).
  7. Cotanche, D. A., Sulik, K. K. The development of stereociliary bundles in the cochlear duct of chick embryos. Brain Res. 318, 181-193 (1984).
  8. Alsina, B., et al. FGF signaling is required for determination of otic neuroblasts in the chick embryo. Developmental biology. 267, 119-134 (2004).
  9. Chang, W., et al. Bmp4 is essential for the formation of the vestibular apparatus that detects angular head movements. PLoS genetics. 4, e1000050(2008).
  10. Evsen, L., Sugahara, S., Uchikawa, M., Kondoh, H., Wu, D. K. Progression of neurogenesis in the inner ear requires inhibition of Sox2 transcription by neurogenin1 and neurod1. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 33, 3879-3890 (2013).
  11. Freeman, S., Chrysostomou, E., Kawakami, K., Takahashi, Y., Daudet, N. Tol2-mediated gene transfer and in ovo electroporation of the otic placode: a powerful and versatile approach for investigating embryonic development and regeneration of the chicken inner ear. Methods in molecular biology. 916, 127-139 (2012).
  12. Kamaid, A., Neves, J., Giraldez, F. Id gene regulation and function in the prosensory domains of the chicken inner ear: a link between Bmp signaling and Atoh1. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30, 11426-11434 (2010).
  13. Neves, J., Kamaid, A., Alsina, B., Giraldez, F. Differential expression of Sox2 and Sox3 in neuronal and sensory progenitors of the developing inner ear of the chick. The Journal of comparative neurology. 503, 487-500 (2007).
  14. Neves, J., Uchikawa, M., Bigas, A., Giraldez, F. The prosensory function of Sox2 in the chicken inner ear relies on the direct regulation of Atoh1. PLoS One. 7, 30871(2012).
  15. Das, R. M., et al. A robust system for RNA interference in the chicken using a modified microRNA operon. Developmental biology. 294, 554-563 (2006).
  16. Wu, C. Y., Hooper, R. M., Han, K., Taneyhill, L. A. Migratory neural crest cell alphaN-catenin impacts chick trigeminal ganglia formation. Developmental biology. 392, 295-307 (2014).
  17. Kumar, M. S., et al. Suppression of non-small cell lung tumor development by the let-7 microRNA family. Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 3903-3908 (2008).
  18. Jacques, B. E., Dabdoub, A., Kelley, M. W. Fgf signaling regulates development and transdifferentiation of hair cells and supporting cells in the basilar papilla. Hearing research. 289, 27-39 (2012).
  19. Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing chicken eggs for developmental studies. Journal of visualized experiments: JoVE. , e306(2007).
  20. Hamburger, V., Hamilton, H. L. A series of normal stages in the development of the chick embryo. Journal of morphology. 88, 49-92 (1951).
  21. Oh, S. H., Johnson, R., Wu, D. K. Differential expression of bone morphogenetic proteins in the developing vestibular and auditory sensory organs. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 16, 6463-6475 (1996).
  22. Bell, D., et al. Spatial and temporal segregation of auditory and vestibular neurons in the otic placode. Developmental biology. 322, 109-120 (2008).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Ovo i ElektroporasyonMikroenjeksiyon Tekni iEdU Proliferasyon AnaliziGFP Ekspresyon PlazmidiRNA n Situ HibritlemeOtik Vezik l HedeflemeSens r Projenit r H crelerT y H cresi DiferansiyasyonuEmbriyonik G n D rt
Tavuk İşitsel Organ gen Transferi tarafından
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.