Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

Özet

Bu makale, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modelinin indüksiyon ve skorlama yöntemlerini, çeşitli hastalık evrelerinde sırasıyla akış sitometrisi ve kantitatif PCR kullanılarak lenf düğümleri, dalak, kan ve omurilikteki immün hücre dağılımı ve mRNA sitokin seviyelerinin değerlendirilmesi ile birlikte

açıklamaktadır.

Özet

Multipl skleroz, bilişsel, motor bozukluğu ile sonuçlanan santral sinir sistemi (CNS) lezyon formasyonu ile karakterize bir enflamatuar otoimmün hastalık, olduğu tahmin edilmektedir. Ayrıca, CNS'de lezyon oluşması, motor hasar ile karakterizedir ve otoimmün ve enflamatuar reaksiyonların etkili olduğu için, deneysel otoimmün ensafalomiyelitis (EAE), MS için yararlı bir hayvan modelidir. EAE modelleri bir miyelin oligodendrosit proteini farede (MOG) _35-55 türetilmiş bir peptit ile indüklenir. EAE fareler ilerleyici bir hastalık seyrini gelişir. Bu ders, üç aşamaya ayrılır: preklinik faz (gün 0-9), hastalık başlangıcı (gün 10 - 11) ve akut faz (gün 12 - 14). MS ve 'EAE CNS infiltre otoreaktif T-hücreleri tarafından indüklenir. Bu T hücreleri, daha bağışıklık hücrelerinin işe neden kemokinler ve sitokinler salgılarlar. Omurilik d nedenle, immün hücre dağılımıÜç hastalık evrelerini uring araştırılmıştır. T hücreleri, B hücreleri ve monositler aktivasyonu / çoğalması / toplama başladığı hastalığın zaman noktası vurgulamak için, lenf düğümleri, dalak ve kan immün hücre dağılımı da değerlendirildi. Ayrıca, üç hastalık aşamalarında çeşitli sitokinlerin (IL-1β, IL-6, IL-23, TNFa, IFNy) seviyeleri, hastalığın enflamatuar süreçleri hakkında bilgi edinmek için, tespit edilmiştir. Sonuç olarak, veri EAE patoloji sırasında bağışıklık hücrelerinin fonksiyonel profilinin bir bakış sağlar.

Giriş

Multipl skleroz (MS) ve karşılık gelen bir hayvan modeli, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), merkezi sinir sisteminde (CNS) otoimmün nöroenflamasyon değişiklikleri göstermektedir. Erken aktif MS ve 'EAE lezyonlar infiltre bağışıklık hücrelerinin varlığı ile karakterize edilir. Etiolojisi bilinmemektedir, ancak yaygın reaktif T hücrelerinin aracılık ettiği miyelin yıkımına dahil kabul edilir. Bu oto-reaktif T-hücreleri, dolaşım B hücreleri, monositler ve nötrofiller gibi diğer bağışıklık hücreleri çekmek pro-enflamatuar sitokinler ve kemokinleri salgılar. Monositler makrofajlar içine ayırt. reaktif T hücresi tarafından salgılanan interferon gamma (IFNy) pro-....

Protokol

ETİK TABLOSU: Bizim deneysel prosedürler Regierungspräsidium Darmstadt (Almanya) Etik Komitesi tarafından onaylanmış Ulusal ve Avrupa düzenlemelerine teyit edilmiştir. Tüm çabalar hayvan acı en aza indirmek ve kullanılan hayvanların sayısını azaltmak için yapılmıştır.

1. EAE Modeli

1. EAE modeli indüksiyonu
   1. EAE uyarılması için 10 ila 13 haftalık dişi 129S4 / SvJae x C57BL / 6 fareleri kullanın.
   2. Üst içine farelere subkutan enjeksiyon verin ve ensefalitojenik MOG _35, bel _- 400 ug Mycobacterium tuberculosis içeren 200 ul komple Freund`s adjuvan (CFA) emülsifiye ₅₅ (miyelin ....

Sonuçlar

Şekil 1, bu makalede açıklanan farklı yöntemler şematik bir bakış verir. 1) Fare MOG _35-55 antijen enjeksiyonu almak ve 10.7 ± 0.3 gün ²⁸ sonra ilk klinik belirtiler gelişir. EAE farelerin bir temsilci hastalık kursu. Şekil 1'de 2) Çeşitli dokular (dalak, lenf düğümleri, bel omurilik) gösterilir ve kan preklinik faz (Günlük 2 gün 4 sırasında farklı zaman noktalarında kontrolü ve EAE fareler elde.......

Tartışma

Burada anlatılan EAE modeli MS bir model olarak çok dikkat çeken ve rutin MS ³² için terapötik stratejilerin test kullanılır. Fare hastalık MS'in birçok klinik ve histolojik özellikleri sergiler ve nöronal antijenlere otoimmünite indüksiyon kaynaklanır. miyelin antijenlerine sensitizasyon CNS, kan-beyin bariyeri bozukluğu ve böylece, bağışıklık hücresi infiltrasyonu ile ilişkilidir. Bulgularımız, bağışıklık hücreleri, akut fazda lenf nodlarında geçici artış olduğunu göstermektedir. Dalak T hücreleri ve B .......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
ABI Prism 7500 Dizi Tespit Sistemi	Applied Biosystems, Austin, ABD		kantitatif PCR sistemi
Accutase	Sigma Aldrich Münih, Almanya	A6964	hücre ayırma çözeltisi
CD3-PE-CF594	BD, Heidelberg, Almanya	562286
CD4-V500	BD, Heidelberg, Almanya	560782
CD8-eFluor650	eBioscience, Frankfurt, Almanya	95-0081-42
CD11b-eFluor605 eBioscience	, Frankfurt, Almanya	93-0112-42
CD11c-AlexaFluor700	BD, Heidelberg, Almanya	560583
CD19-APC-H7	BD, Heidelberg, Almanya	560143
CD45-Vioblue	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Almanya	130-092-910
CompBeads	BD, Heidelberg, Almanya	552843	kompanzasyon boncukları
Kollajenaz A	Sigma Aldrich Münih, Almanya	C0130
Sitometrik mutlak sayım standardı	Polyscience, Eppelheim, Almanya	BLI-580-10
Sitometre Kurulumu ve İzleme boncukları	BD, Heidelberg, Almanya	642412
DNase I	Sigma Aldrich Münih, Almanya	D5025
EAE Kiti	Hooke Laboratuvarları, Lawrence, ABD	EK2110
F4/80-PE-CY7	BioLegend, Fell, Almanya	123114
İlk İplikçik cDNA Sentez kiti	Thermo Scientific, Schwerte, Almanya	K1612
Fc reseptörü-1 bloke edici tampon	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Almanya	130-092-575
Akış sitometrik mutlak sayım standardı	Polyscience, Eppelheim, Almanya	580
FlowJo yazılımı v10	Treestar, Ashland, ABD		akış sitometri yazılımı
LSRII/Fortessa	BD, Heidelberg, Almanya		akış sitometresi
Ly6G-APC-Cy7	BD, Heidelberg, Almanya	560600
Lysing solüsyonu	BD, Heidelberg, Almanya	349202
Maxima SYBR Green	Thermo Scientific, Schwerte, Almanya	K0221	floresan DNA bağlayıcı boya
RNeasy Mini Kit	Qiagen, Hilden, Almanya	74104	RNA ekstraksiyon kiti