Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Biyoparlaklık Görüntüleme Afrika Trypanosomiasis Geç Evre Enfeksiyon Algılama için

7.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/54032

⸱

18 Mayıs 2016

 , 
1Department of Infection and Immunity, London School of Hygiene & Tropical Diseases

Bu makalede

Özet

Bu el yazması, geç evre enfeksiyonun izlenmesini sağlamak için Afrika tripanozomlarının biyolüminesan bir suşunun kullanımını açıklar ve in vivo canlı görüntülemenin merkezi sinir sistemi içindeki enfeksiyonları gerçek zamanlı olarak görselleştirmek için nasıl kullanılabileceğini gösterir.

Özet

İnsan Afrika tripanozomiyazı (HAT), iki aşamada ortaya çıkan çok aşamalı bir hastalıktır; erken kan evresi ve parazitin merkezi sinir sistemini (CNS) istila ettiği geç evre. Geleneksel metodolojiler parazitlerin varlığını belirlemek için beynin çıkarılmasını gerektirdiğinden, geç evrenin in vivo çalışması sınırlı kalmıştır.

Biyolüminesans görüntüleme, lusiferaz transfekte edilmiş bir patojenin gerçek zamanlı olarak görselleştirilmesini sağlayan, invaziv olmayan, oldukça hassas bir optik görüntüleme şeklidir. Farelerde geç evre hastalık üretme kabiliyetine sahip transfekte edilmiş bir tripanozom suşu kullanarak, enfeksiyon seyri boyunca tek bir hayvanda bir CNS enfeksiyonunun kinetiğini inceleyebilir ve sistemik bir enfeksiyonun hareketini ve yayılmasını gözlemleyebiliriz.

Burada, Afrika tripanozomiyazisin biyolüminesans modelini kullanarak CNS enfeksiyonlarını incelemek için sağlam bir protokol açıklıyoruz ve isteğe bağlı aşağı akış yaklaşımlarıyla daha fazla analiz edilebilecek gerçek zamanlı non-invaziv gözlemler sağlıyoruz.

Giriş

İnsan Afrika tripanozomiyazı (HAT) veya uyku hastalığı, Trypanosoma brucei spp1'in vektör kaynaklı protozoan parazitlerinden kaynaklanır. Tahmini mevcut vaka sayıları her yıl 7 binden azdır ve Afrika kıtasında yaklaşık 70 milyon insan parazit enfeksiyonu riskine maruz kalmaktadır. Tedavi edilmezse çoğunlukla ölümcül olan hastalık, parazitlerin kanda bulunduğu, parazitlerin merkezi sinir sistemini (CNS) istila ettiği ve artık erken evre tripanozomal ilaçlarla tedaviye duyarlı olmadığı geç evreye ilerleyen erken bir hemolenfatik aşamayı içerir2. Geç evre HAT için mevcut ilaç tedavileri hem karmaşık, uzun süreli tedavi rejimlerine hem de ciddi yan etkilere ve bildirilen dirence sahiptir, bu nedenle yeni ilaç tedavilerine yönelik araştırmalar zorunludur3,4.

Geleneksel fare modellerinde geç evre insan Afrika tripanozomiyazı (HAT) çalışması uzun ve karmaşıktır, parazitik yükü izlemek için beyin dokusunun çıkarılması gereklidir5. Hayvan enfektif suşu T. b. brucei, tripanozomiyazisin çalışma modeli olarak kullanılır ve geç evre enfeksiyondan 21 gün sonra (dpi) ortaya çıkar. Fare modelinde vahşi tip biyolüminesan olmayan parazit enfeksiyonunu izlemek için, periferik kan filmleri veya kantitatif PCR, parazit yükünü belirlemenin tek yöntemidir. Beyindeki parazit yükü için, farenin itlaf edilmesi, beynin eksize edilmesi ve dokular üzerinde qPCR yapılması gerekir, bu da geç evre enfeksiyonda parazitlerin birden fazla zaman noktasında izlenmesini imkansız hale getirir. Bu, merkezi sinir sistemi (CNS) içindeki gerçek zamanlı enfeksiyonları takip edememe ile sonuçlanır.

İn vivo biyolüminesans görüntüleme (BLI), deneyin tamamı boyunca tek bir hayvanda izlenebilen bir fare modelinde parazit yayılımının ve hastalık ilerlemesinin son derece hassas, invaziv olmayan tespitini sağlayabilir6. BLI, lusiferaz katalizli bir reaksiyon tarafından üretilen görünür spektrumdaki ışık emisyonuna dayanır. Yayılan fotonlar daha sonra bir şarj bağlantılı cihaz (CCD) kamera7 tarafından algılanır. Bu amaçla, patojen, bir lusiferaz proteinini eksprese etmek için genetik olarak modifiye edilir ve substrat, lusiferin, ilgilenilen zaman noktalarında enjeksiyon yoluyla eklenir. Bu yöntemin temel avantajı, aynı hayvanın minimum yan etki ile birkaç kez görüntülenebildiği uzunlamasına çalışmalar yapabilme yeteneğidir. Elde edilen biyolüminesans sinyali ölçülebilir, böylece patojen yükü gösterilir.

Kırmızıya kaymış bir biyolüminesans T. b. brucei'nin optimizasyonu ve validasyonu, non-invaziv prosedürler yoluyla geç evre enfeksiyonun araştırılmasını, parazitlerin kan filmi mikroskobundan daha erken tespit edilmesini ve geç evre tripanozomiyazda CNS enfeksiyonu ve ilaç taramasını incelemek için gereken zamanı, maliyeti ve hayvan sayısını büyük ölçüde azaltmıştır8,9. Bu protokolde, farelerin biyolüminesan tripanozomlarla enfeksiyonunu ve daha sonra hastalık ilerlemesinin ve CNS penetrasyonunun nicelleştirilmesi için parazitlerin in vivo olarak nasıl görselleştirileceğini gösteriyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

ahlâk
Tüm çalışmalar UK Home Office Animals onayı (Bilimsel Prosedürler) Yasası 1986 ve Hijyen ve Tropikal Tıp Hayvan Refahı ve Etik Değerlendirme Kurulu London School of altında yürütülmüştür. kılavuz ARRIVE bu raporda takip edilmektedir.

Bioluminescent Trypanosoma brucei brucei Vivo Passage 1.

  1. T. bir Kriyoprezerve stok (adlandırılır stabilate) çıkarın b. brucei suşu sıvı azot 9 (MTA aracılığıyla Hijyen ve Tropikal Tıp London School Profesörü John Kelly temin edilebilir) GVR35-VSL-2 ve oda sıcaklığına gelmesini bekleyin. Steril fosfat tamponlu glukoz tuz (PBS-G), pH 8.0 (1 L PBS + 15 g glukoz) 10, 2 x 10 4 tripanozomlar / ml stabilate seyreltilir.
    Not: T. b. brucei GVR35-VSL-2 insanlarda bulaşıcı olmayan ve SAPO deneyleri yürütmek için imkanları lisanslı gerektirir.
  2. enjvb 25 G iğne ile intraperitonal yoldan (İP) ile tripanozomlarına seyreltilmiş 0.2 ml 20-25 gram ağırlığında dişi CD1 fare. Bu "donör fare" dir. Belirli Patojen Free (SPF) -cage ve yem ad libitum içine enfekte fare yerleştirin.
    Not: CD1 fareler bir outbred zorlanma ve T. vardır b. brucei GVR35 enfeksiyonlar suşta iyi karakterize edilir. Ancak, bu protokol aynı zamanda doğal ya da genetiği değiştirilmiş suşları için geçerli olmakla birlikte, görüntüleme 6,9 hassasiyetine etkileyebilecek o kürk rengi dikkat etmek önemlidir.
  3. kan numunesi alarak periferik parasitemia izleyin. plastik süzgeç içine fare koyun ve 21 G iğne veya venesection ile venepunkturdan tarafından kuyruk kan 5 ul almak ve kırmızı kan hücreleri parçalanması ve daha kolay sayım sağlamak için% 0.85 steril amonyum klorür ile 1/10 karıştırın.
  4. Neubauer hemositometrede Seyreltilmiş Kan sayın.
    1. Her iki odalarına seyreltilmiş kan yükleyin. tüm merkez gr saymakbir odanın id n tripanozomlann vermek. Kan = n x 10 4 tripanozomlar / ml tripanozomlann konsantrasyonu, herhangi bir seyreltme faktörü ayarlamak ve iki odadan ortalamasını hesaplar.
      Not: Yaklaşık 5-7 gün sonra enfeksiyon, periferal parazitemi 2 x 10 4 tripanozomlar / ml'lik bir konsantrasyonda bir enfeksiyon gerçekleştirmek için yeterli artacaktır.
  5. tripanosom seviyeleri 1.6 adıma geçmek, gerekli farelerin sayısı için yeterince yüksek olduğunda. Bir verici bir fare 6 x 10 4 tripanozomlar / ml'lik bir parazit seviyesi 10 farelerin enfeksiyonu için yeterlidir.
    Not: istatistiksel olarak anlamlı bir grup boyutları için, n = 6 fare, her tedavi grubu için 8 ihtiyaç vardır. diğer enfeksiyon modeller için, güç hesapları uygun grup boyutlarını belirlemek için uygulanacak gerekir.
  6. (Yaklaşık 5-10 dakika 28-30 ° C'de) bir ısı kutusu içine yerleştirin fareler kuyruk damarları genişletmek için izin vermek.Terminal anestezi neden 20 mg / 25 G iğne ile kg pentobarbital iv yönetmek için. Onayla fare hafifçe hiçbir geri çekilme refleksi olmadığından emin olmak için, pedallar Sürüş Esnasında basılarak uyuşturulduktan.
  7. Bir Bijou tüpüne 5.000 USP birim / ml'de 5 mi heparin aliquoting ve bir 1 ml şırınga ucunda iğne üzerinden iki emerek, bir 21 G iğne Heparinize.
  8. heparinize 21 G iğne ile 1 ml şırınga alın ve göğüs kafesi altında merkezi iğne sokarak anestezi geçiş fare üzerinde kalp ponksiyon gerçekleştirin (kan boncuk iğne tabanında havuz olacak) ve yavaşça pistonu geri çekin böylece kalbin odasına daraltmak için değil. kan 0.7 ml az toplayın.
  9. Yukarıdaki adım 1.1 olarak PBS-G pH 8.0 içinde 2 x 10 4 tripanozomlar / ml'lik bir aşının üretilmesi için enfekte olmuş kan seyreltilir.
    Not: Bu noktada, geri kalan kan% 8 gliserol,% 20 ısıyla inaktive edilmiş cenin ca karıştırılarak stabilate üretilmesi için dondurularak saklanabilirEğer serumu (hi-FCS) ve% 72 enfekte kan. Yavaş yavaş sıvı azot aktarmadan önce, C / dk ° -1 soğutma hızını elde etmek için bir kap dondurma yavaş dondurma kullanılarak -80 ° C 'de dondurma.

Deneysel Fare 2. Enfeksiyon

  1. nazikçe ılık damarları genişletmek için bir ısıtma kutusu içine CD1 dişi fareler (~ 21-25 gr) yerleştirin. plastik kısıtlama içine ısıtılmış fareler yerleştirin ve fare başına 4.000 tripanozomlann eşdeğer kuyruk damar içine 25 G iğne ile damar 0.2 ml seyreltilmiş inokulum enjekte. Kanamayı durdurmak için daha sonra enjeksiyon yerinde basıncı yerleştirin.
    Karın içi enfeksiyon enfeksiyonun geçerli bir yol olduğunu ve daha önceki çalışmalarda 10 kullanılmıştır, ancak intravenöz yolla bu daha az tekrarlanabilir bulduk: edin.
  2. SPF-havalandırmalı kafeslerde 3'lü gruplar halinde enfekte fare ve kafesi Rastgele. Bir kontrol olarak, yabani tip olmayan biyolojik olarak ışık veren parazit, T ile CD1 dişi farelerin enjekte b. brucei GVR35 (n =3).
  3. Kan Film Mikroskopi sayesinde Enfeksiyon Monitör
    1. Noktası 5 ul bir cam lam üzerine venepunkturdan ya venesection kan ve (hafifçe ince bir film oluşturmak için bir slayt üzerinde kan damlayı ikinci cam slayt kullanılarak) kan yayma gerçekleştirin. kuru hava slaytlar bırakın.
    2. DH 2 O ile yıkamadan önce 10 dakika süreyle Giemsa ile% 100 metanol ve leke kan yayma düzeltmek ve kurumaya bırakın. 100X objektif altında görünümü (fov) 10 alanda tripanozomlann sayısını.
      Not: Kan çekim gibi erken bir gün sonrası enfeksiyon gibi bütün hayvan invaziv olmayan görüntüleme yanında yapılır. Hayvanlar, bir dizi işleme tabi tutarken numuneler, oda sıcaklığında saklanabilir ve daha sonra sayılabilir gibi, tripanosom kantitatif bu yöntem hemositometre sayımı tercih edilir.

3. Biyoparlaklık Görüntüleme Enfeksiyon iz

Not: enfeksiyon izlemek için, bütün animEl non-invaziv görüntüleme kullanılabilir.

  1. 30 mg / ml'de Dulbecco Fosfat Tamponlu Salin (DPBS) D-lusiferin, ateşböceği lusiferaz alt-tabaka, bir stok çözelti hazırlayın. Filtre sterilize ve -20 ° C'de parçalar halinde dondurma.
    Not: D-luciferase duyarlı ışık, bu nedenle folyo alikotları sararak ışıktan korumak. Bu aktiviteyi 11 etkileyebilir olarak art arda luciferase-çözülme donma yok.
  2. Oda sıcaklığına kadar D-luciferase bir kısım ısıtın. (Nonbioluminescent vahşi tip parazit türü ile enfekte edilmiş kontrol farelerinde de dahil olmak üzere), kafesin her fare çıkarın ve intraperitonal 25 G iğne ile 150 mg / (DPBS içinde seyreltilmiş) ısıtıldı, D-luciferase kg enjekte edilir. / Dakika 2.5 L% 2 izofloran / O 2 karışımı ile anestezi sağlamak için yaklaşık 5 dakika boyunca, bir izofloran odasına fareler yerleştirin.
    Not: Onlar anestezi altında olduğunda Fareler hareketsiz hale gelir. Burada kullanılan kamera için, 3 fare, bir anda işlenebilir. farenin anesthet isedaha uzun bir süre 30 dakika yanıstarak, oftalmik merhem, yapay gözyaşı kurumasını farelerinin gözleri önlemek için uygulanabilir.
  3. Burada anlatılan görüntüleyici için Yazılımı açmak ve üreticinin talimatlarına göre yazılımı kullanarak makineyi başlat. Kamera ve ısıtmalı plaka sıcaklığı ulaştığında görüntü kazanır.
    Not: Bu cihaz, genellikle bir gecede arka plan kalibrasyonları yapmak için makinenin sağlayan kapalı değil. yeniden başlatmak gerekiyor durumunda, öncelikle bir kalibrasyon kontrolü çalıştırmanız gerekir.
  4. (3.5 bakınız) kamera içine anestezi fareler yerleştirin. herhangi bir parlak bioluminescent sinyal yoluyla kanama en aza indirmek için fareler arasında büyük siyah ayırıcılar kullanın. pozlama süreleri bir dizi kullanarak görüntü fareler; Görünüm E orta binning, 1 f / durdurma ve açık filtre ve alanla 1, 3, 10, 30, 60 ve 180 saniye, (12.5 x 12.5 cm 2).
    Not: vahşi tip nonbioluminescent GVR35 parazit ile enfekte kontrol fareleri bir backgr sağlamakound biyoparlaklık değer. Bu model ile, bir lusiferin kinetik deney (Şekil 6), biz 10 dakika biyoışıldama sinyal tepe Uygulamayı takip ve görüntüleme yaklaşık 3 fareler için 5 dakika sürer bulmuşlardır. anestezi ve fareler görüntüleme dikkate bu zaman ölçeği alın.
  5. Farelerin tam görüntüleme sağlamak için, ventral, dorsal ve lateral görünüm elde etmek için döndürün. ardışık hayvanlar arasındaki görüntüleme için oryantasyon sırayla tutarlılığı korumak.
  6. görüntüleme sonra fareler SPF-kafes dönmeden önce gözlem altında anestezi kurtarmak için izin verir.
  7. gün 21 sonrası enfeksiyon kadar her 7 gün fareler görüntüleme devam edin. tüm hayvan üzerinde biyoparlaklık sinyali istikrarlı bir artış olmalıdır.
  8. D21, görüntü ve kan filmi / kg diminazene aceturate intraperitonal 40 mg fareler, yukarıda tarif edilen ve bir doz olarak fareler. Bu ilaç periferik parasitemia silecektir ancak kan Brai geçmeyeceğimn bariyer ve bu nedenle MSS enfeksiyonu daha iyi görselleştirme sağlar.
    Not: Diminazene aceturate erken evre, hayvan trypanosomiasis tedavisi için kullanılan iyi bilinen bir ilaçtır.
  9. D28 ve D35 de görüntüleme ve izleme devam edin.

4. MSS Enfeksiyon Onaylama

  1. D35 'de, yukarıda açıklandığı gibi resim fareleri (3.1-3.4 adım).
  2. görüntüleme sonra, daha fazla analiz için kan toplama aşamasında 1.6-1.8 detaylı olarak farenin anestezi ve asıl bulbus olfaktoryusları alındı ​​farelerden kurtarmak için izin verir.
  3. kardiyak delme ardından, 20 ml PBS ile fareler serpmek (isteğe bağlı: 3 mg / perfüzyon çözüm luciferase ml ekleyin) organlara kan temizlemek ve zaman aralığındaki beyin bölgesi temizlenir olabilir luciferin etiketi reintroduce kalp yoluyla adım 4.1.
  4. Yavaşça beyin izin, kavisli makas kullanılarak kafatası çevresi etrafında tabanından kesme ve kafatasının üst kısmı kapalı kaldırarak beyin kaldırmakhafifçe kavisli bir forseps ile kaldırılması gerekir.
  5. Yeterli luciferase Kesilerek çıkarılan beynin eklendi sağlamak için, siyah plastik pipet önce görüntüleme organ üzerindeki 15 mg / ml lusiferin 50 ul bir bölümü üzerine Kesilerek çıkarılan beynin yerleştirin. Yukarıdaki ayarları kullanarak görüntü. Bu beyin hemisfer enfeksiyon lokalizasyonu gösterecektir.
    Not: Daha önce 8 açıklandığı gibi kesilmiştir beyin üzerinde parazitemi Mansap miktar qPCR yapılabilir. Diğer alternatif aşağı uygulamalar tespit sonucu beyin dokusunda parazitleri tespit etmek histoloji veya immünohistokimyasal içerebilir.

Biyoparlaklık Görüntüleme 5. kantitasyonu

Not: Biyoparlaklık görüntüleme yazılımı ile ilgi alanları (ROI) bölgesini kullanarak sayısal ve arka plan biyoparlaklık için düzeltilebilir.

  1. ROI aracını kullanarak, bütün hayvan kantitatif a için bir dikdörtgen ROI oluşturmaknd fare kuyruk tabanına burnunun ucunu kapatmak için fare resmin üzerine getirin. Her hayvan ve her zaman noktası için aynı boyutta kutusunu kullanın. beyin için ROI bakarken, görüntüdeki fare kafası bölge üzerinde konumlandırma, aynı şekilde dairesel ROI kullanın.
  2. İstenirse, enfeksiyon görsel gösterimi için aynı spektrum görüntülenmesini ayarlayın.
    Not: Burada kullanılan yazılım otomatik olarak minimum ve maksimum foton sayıları için ayarlanmış her bir görüntü için bir renk haritası oluşturur. görüntülerin bir dizi arasındaki görsel karşılaştırma etkinleştirmek için, renk skalası, tüm görüntüler için aynı değerlere ayarlanmalıdır.
    1. En yüksek biyolüminesans ve araç paleti üzerinde 'Görüntü ayarlamak' sekmesi ile görüntüyü kullanarak, logaritmik ölçek ve uygun bir renk skalası minimum ve maksimum (ampirik olarak tespit edilmesi) seçin. deney boyunca tüm görüntüleri bu ölçek uygulayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu protokol T. ile farelerin enfeksiyonu takiben hastalığın ilerlemesini takip etmek nasıl gösterir b. brucei, insan Afrika trypanosomiasis için bir model. Şekil 1 tedavi ve görüntüleme aşamaları için takvimi gösteren deneysel protokol çizelgesini gösterir. 2 periferik parasitemia ölçmek için kullanılan sabit bir Giemsa lekeli kan yayması bakış tipik bir alanı gösterir Şekil, tripanozomlar ve kırmızı kan hücreleri ile m...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bir biyolojik olarak ışık veren T gelişimi b. brucei GVR35 suşu geç dönemde erken bir tripanozom enfeksiyon görselleştirme sağlar. Önceki enfeksiyon modelleri parazitler beyin olduğunda kan filmi mikroskopi gerçek zamanlı olarak, geç evre tespit koyamadık ve parazit yükünün 12 belirlemek için enfekte farelerin beyinleri seçilmesini ve çıkarılması gerekti. tek bir fare enfeksiyon bütünlükleri içinde ve herhangi bir aşamada gözlemlenebilir enfeksiyonun hızlı bir nicel değerlendirme süresi boyu...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Biz T. sağlamak için John Kelly ve Martin Taylor (Hijyen ve Tropikal Tıp London School) teşekkür ederim b. brucei GVR35-VSL-2 ve in vivo görüntüleme tavsiye için Dr. Andrea Zelmer (LSHTM). Bu çalışma Bill ve Melinda Gates Vakfı Küresel Sağlık Programı (hibe sayısı OPPGH5337) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
PBSSigma, İngiltereP4417tabletleri pH 7.4
GlikozSigma, İngiltereG8270%99,5 (moleküler) sınıf
Amonyum klorürSigma, İngiltereA9434%99,5 (moleküler) sınıf
Heparin (lityum tuzu)Sigma, İngiltereH0878
Hi-FCSGibco, Life Technologies, İngiltere10500-064500 ml
DPBSSigma, İngiltereD4031Steril filtreli
Bay FrostyNalgene, İngiltere
GiemsaSigma, İngiltereG5637
D-LuciferinPerkin Elmer, İngiltere
Sigma, İngiltere115144-35-9
Diminazen asetüratSigma, İngiltereD7770Analitik sınıf
IVIS Lumina IIPerkin Elmer, Birleşik Krallıkait tescilli yazılımdan temin edilebilen diğer biyogörüntüleyiciler e.
; diğer aletlerin kendi
Greiner Bio-oneN2516
21 G İğnelerGreiner Bio-oneN2138
Çift buzlu mikroskop lamıVWR, İngiltere631-0117
1.5 ml Mikrosantrifüj tüpüStarLab, İngiltereI1415-1000
7 ml Bijou tüpüStarLab, İngiltereE1412-0710
Fare tutucuSigma, İngiltereZ756903Kısıtlayıcımız şirket içinde yapıldı, bu benzer bir model
Bruker, Kodak Living Image v. 4.2 Perkin Elmer, Birleşik Krallık'ta Perkin Elmer IVIS cihazları için Birleşik Krallık'a mevcuttur1 ml Şırıngaları olabilir Fisher Scientific, Birleşik Krallık 10142104 20 ml Şırınga Fisher Scientific, Birleşik Krallık 10743785 25 G İğneler

Kaynaklar

  1. Brun, R., Blum, J., Chappuis, F., Burri, C. Human African trypanosomiasis. Lancet. 375 (9709), 148-159 (2010).
  2. Rodgers, J. Trypanosomiasis and the brain. Parasitology. 137 (14), 1995-2006 (2010).
  3. Barrett, M. P., Boykin, D. W., Brun, R., Tidwell, R. R. Human African trypanosomiasis: pharmacological re-engagement with a neglected disease. Br. J. Pharmacol. 152 (8), 1155-1171 (2007).
  4. Barrett, M. P., Vincent, I. M., Burchmore, R. J. S., Kazibwe, A. J. N., Matovu, E. Drug resistance in human African trypanosomiasis. Future Microbiol. 6 (9), 1037-1047 (2011).
  5. Jennings, F. W., Whitelaw, D. D., Urquhart, G. M. The relationship between duration of infection with Trypanosoma brucei in mice and the efficacy of chemotherapy. Parasitology. 75 (2), 143-153 (1977).
  6. Andreu, N., Zelmer, A., Wiles, S. Noninvasive biophotonic imaging for studies of infectious disease. FEMS Microbiol. Rev. 35 (2), 360-394 (2011).
  7. Sadikot, R. T., Blackwell, T. S. Bioluminescence imaging. Proc. Am. Thorac. Soc. 2 (6), 537-540 (2005).
  8. Burrell-Saward, H., Rodgers, J., Bradley, B., Croft, S. L., Ward, T. H. A sensitive and reproducible in vivo imaging mouse model for evaluation of drugs against late-stage human African trypanosomiasis. J. Antimicrob. Chemother. 70 (2), 510-517 (2015).
  9. McLatchie, A. P., et al. Highly sensitive in vivo imaging of Trypanosoma brucei expressing 'red-shifted' luciferase. PLoS Negl. Trop. Dis. 7 (11), e2571(2013).
  10. Jennings, F. W., et al. Human African trypanosomiasis: potential therapeutic benefits of an alternative suramin and melarsoprol regimen. Parasitol. Int. 51 (4), 381-388 (2002).
  11. Wiles, S., Robertson, B. D., Frankel, G., Kerton, A. Bioluminescent monitoring of in vivo colonization and clearance dynamics by light-emitting bacteria. Methods Mol. Biol. 574, 137-153 (2009).
  12. Rodgers, J., Bradley, B., Kennedy, P. G. E. Combination chemotherapy with a substance P receptor antagonist (aprepitant) and melarsoprol in a mouse model of human African trypanosomiasis. Parasitol. Int. 56 (4), 321-324 (2007).
  13. Kamerkar, S., Davis, P. H. Toxoplasma on the brain: understanding host-pathogen interactions in chronic CNS infection. J. Parasitol. Res. 2012, 589295(2012).
  14. Franke-Fayard, B., et al. Murine malaria parasite sequestration: CD36 is the major receptor, but cerebral pathology is unlinked to sequestration. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (32), 11468-11473 (2005).
  15. Hitziger, N., Dellacasa, I., Albiger, B., Barragan, A. Dissemination of Toxoplasma gondii to immunoprivileged organs and role of Toll/interleukin-1 receptor signalling for host resistance assessed by in vivo bioluminescence imaging. Cell. Microbiol. 7 (6), 837-848 (2005).
  16. Lewis, M. D., et al. Bioluminescence imaging of chronic Trypanosoma cruzi infections reveals tissue-specific parasite dynamics and heart disease in the absence of locally persistent infection. Cell. Microbiol. 16 (9), 1285-1300 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

MSS EnfeksiyonuIn Vivo GörüntülemeTrypanosome bruceiKan Yayması MikroskopisiLusiferin EnjeksiyonuDiminazin Aseturatİlgi BölgesiBeyin Parazit Yükü
Biyoparlaklık Görüntüleme Afrika Trypanosomiasis Geç Evre Enfeksiyon Algılama için
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.