Diseksiyon ve Threespine Stickleback Brankial İskelet Düz montaj

Summary

Solungaç tırmıkları, faringeal dişler ve branş kemikleri dahil olmak üzere branş iskeleti, çoğu balıkta birincil gıda işleme bölgesi olarak hizmet eder. Burada, bu iç iskeleti üç omurgalı dikme sırtlarında incelemek ve düz bir şekilde monte etmek için bir protokol açıklıyoruz. Bu yöntem aynı zamanda çeşitli diğer balık türleri için de geçerlidir.

Abstract

Omurgalı başının arka faringeal segmentleri, balıklarda gıda işlemenin birincil bölgesi olan dalsal iskelete yol açar. Balık dalsal iskeletinin morfolojisi, bir türün diyetiyle eşleştirilir. Üç omurgalı yapışkan balıklar (Gasterosteus aculeatus), çeşitli özelliklerdeki evrimleşmiş farklılıkların genetik ve gelişimsel temelini incelemek için bir model sistem olarak ortaya çıkmıştır. Stickleback'lerin deniz popülasyonları, sayısız yeni tatlı su gölünü ve deresini defalarca kolonileştirdi. Bu tatlı su ortamlarında yeni diyete adaptasyon, muhtemelen bağımsız olarak türetilmiş tatlı su popülasyonlarında tekrar tekrar gelişen bir dizi kraniyofasiyal değişikliğin temelini oluşturmaktadır. Bunlar, branş iskeletinde üç ana desen değişikliğini içerir: solungaç tırmığı kemiklerinin sayısında ve uzunluğunda azalma, faringeal diş sayısında artış ve dalsal kemik uzunluklarında artış. Burada, üç omurgalı yapışkan sırtlı balıklarda iç dal iskeletini incelemek ve düz bir şekilde monte etmek için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz. Tüm üç boyutlu branş iskeletinin diseksiyonu ve büyük ölçüde iki boyutlu bir hazırlığa düz bir şekilde monte edilmesi, dalsal iskelet morfolojisinin kolay görselleştirilmesini ve nicelleştirilmesini sağlar. Bu diseksiyon yöntemi ucuz, hızlı, nispeten kolaydır ve çok çeşitli balık türlerine uygulanabilir. Stickleback'lerde, bu verimli yöntem, kraniyofasiyal modellemeyi kontrol eden genomik bölgeleri haritalamak için genetik çaprazlamalardaki iskelet morfolojisinin nicelleştirilmesine izin verir.

Introduction

çeşitlilik inanılmaz bir miktar özellikle balıklar arasında, omurgalılar arasında baş iskeleti var. Birçok durumda bu çeşitlilik, farklı beslenme stratejileri ¹ kolaylaştırır ^{- 4,} ve her ikisi de dış ve iç kraniofasyal desenlendirme büyük değişiklikler içerebilir. brankiyal iskelet bir balık boğaz dahili olarak yer alan ve ağız boşluğu en çevreler. brankiyal iskelet solungaçları destekleyen ön dördü 5 seri homolog segmentleri, oluşmaktadır. Birlikte bu beş segment balık ve onların yiyecek ⁵ arasında bir arayüz olarak işlev görür. solungaç diken, yutak dişleri ve brankiyal kemikleri de dahil olmak üzere özellikleri çok sayıd....

Protocol

Tüm balık çalışmaları California-Berkeley Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (protokol numarası R330) tarafından onaylandı. Ötenazi% 0.1 sodyum bikarbonat ³⁹ ile tamponlanmış% 0.025 Tricaine-S daldırma kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Bütün aşamalar oda sıcaklığında gerçekleştirilir.

1. Hazırlık

Not: sıkıca kapatabilir ve yatay döşenebilir konik tüpler veya sintilasyon şişeleri adımları 1.1-1.5 gerçekleştirin. Balıklar sürekli sarsılmış olması gerekir, fakat nazikçe tersini veya boyama çözeltisine balık her tarafını ortaya çıkarmak ve leke eşit dokuya nüfuz sağlamak için tüpler veya şişelere raf sallayarak mümkün olduğu....

Results

Önemli trofik özelliklerin çeşitli ölçülebilir bir disseke ve düz monte brankiyal iskelet Bu protokol sonuçları (Şekil 4). Dorsal görünümünde, solungaç diken, tüm faringeal diş plakaları, ve neredeyse tüm brankiyal kemiklerin tüm satırları kolayca görüntülendi ve ²² sayısal olabilir ^{- 24,35,36,38,42.} Alizarin Kırmızı S diğer belirteçleri (örneğin, transgenik GFP ⁴²⁾ ve görselleştirme alternatif bir yöntem ile çif.......

Discussion

Brankial iskelet, bir balığın boğazında bulunan ve yemek borusuna giderken gıda maddelerini manipüle eden, filtreleyen ve çiğneyen karmaşık bir kemik setidir. Solungaç tırmıklarının, faringeal dişlerin ve branşiyal kemiklerin desenlenmesi de dahil olmak üzere birçok ilginç trofik özellik, türler arasında ve türler içinde farklılık gösterir. Bu özelliklerin çoğunun, branşiyal iskelet in situ ile doğru bir şekilde ölçülmesi zor veya neredeyse imkansızdır (örneğin, solungaç tırmığı uzunluğu, branşiyal kemi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Potasyum Hidroksit (KOH)	EMD	PX1480-1
Gliserol	Sigma-Aldrich	G7893-4L
%10 Nötr Tamponlu Formalin (NBF)	Azer Scientific	NBF-4-G
Alizarin Kırmızı S	EMD	AX0485-3
Mikroskop Kapak Camları 22 mm x 60 mm	VWR	16004-350
100 mm x 10 mm Cam Petri Çanak	Kimble Chase	23064-10010
Sylgard 184 Silikon Elastomer Kiti	Ellsworth Yapıştırıcılar	184 SIL ELAST KİTİ 0.5KG	Diseksiyon plakaları yapmak için cam veya plastik Petri kaplarına dökülebilir
Modelleme Kil	Sargent Art	22-4000	1 lb krem
Sintilasyon Şişeleri (500 kutu)	Wheaton	986586	Vidalı Kapaklı Borosilikat Cam
Forceps-Dumont #5 Inox (Biyoloji ucu)	FST	11252-20	Dumostars alternatif bir
Diseksiyon Makasıdır	FST	15003-08	Numunenin boyutuna bağlı olarak alternatif boyutlar mevcuttur
KL300 LED'li	Diseksiyon Mikroskobu	Leica	Diğer birçok model iyi çalışır, düz bir tabana sahip olmak
Mikrosantrifüj Tüplerine yardımcı olur 1.7 ml	Denville	C2170
Karton kayar tepsi	Fisher	12-587-10