Solungaç tırmıkları, faringeal dişler ve branş kemikleri dahil olmak üzere branş iskeleti, çoğu balıkta birincil gıda işleme bölgesi olarak hizmet eder. Burada, bu iç iskeleti üç omurgalı dikme sırtlarında incelemek ve düz bir şekilde monte etmek için bir protokol açıklıyoruz. Bu yöntem aynı zamanda çeşitli diğer balık türleri için de geçerlidir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Diseksiyon ve Threespine Stickleback Brankial İskelet Düz montaj
Bu makalede
Özet
Özet
Omurgalı başının arka faringeal segmentleri, balıklarda gıda işlemenin birincil bölgesi olan dalsal iskelete yol açar. Balık dalsal iskeletinin morfolojisi, bir türün diyetiyle eşleştirilir. Üç omurgalı yapışkan balıklar (Gasterosteus aculeatus), çeşitli özelliklerdeki evrimleşmiş farklılıkların genetik ve gelişimsel temelini incelemek için bir model sistem olarak ortaya çıkmıştır. Stickleback'lerin deniz popülasyonları, sayısız yeni tatlı su gölünü ve deresini defalarca kolonileştirdi. Bu tatlı su ortamlarında yeni diyete adaptasyon, muhtemelen bağımsız olarak türetilmiş tatlı su popülasyonlarında tekrar tekrar gelişen bir dizi kraniyofasiyal değişikliğin temelini oluşturmaktadır. Bunlar, branş iskeletinde üç ana desen değişikliğini içerir: solungaç tırmığı kemiklerinin sayısında ve uzunluğunda azalma, faringeal diş sayısında artış ve dalsal kemik uzunluklarında artış. Burada, üç omurgalı yapışkan sırtlı balıklarda iç dal iskeletini incelemek ve düz bir şekilde monte etmek için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz. Tüm üç boyutlu branş iskeletinin diseksiyonu ve büyük ölçüde iki boyutlu bir hazırlığa düz bir şekilde monte edilmesi, dalsal iskelet morfolojisinin kolay görselleştirilmesini ve nicelleştirilmesini sağlar. Bu diseksiyon yöntemi ucuz, hızlı, nispeten kolaydır ve çok çeşitli balık türlerine uygulanabilir. Stickleback'lerde, bu verimli yöntem, kraniyofasiyal modellemeyi kontrol eden genomik bölgeleri haritalamak için genetik çaprazlamalardaki iskelet morfolojisinin nicelleştirilmesine izin verir.
Giriş
çeşitlilik inanılmaz bir miktar özellikle balıklar arasında, omurgalılar arasında baş iskeleti var. Birçok durumda bu çeşitlilik, farklı beslenme stratejileri 1 kolaylaştırır - 4, ve her ikisi de dış ve iç kraniofasyal desenlendirme büyük değişiklikler içerebilir. brankiyal iskelet bir balık boğaz dahili olarak yer alan ve ağız boşluğu en çevreler. brankiyal iskelet solungaçları destekleyen ön dördü 5 seri homolog segmentleri, oluşmaktadır. Birlikte bu beş segment balık ve onların yiyecek 5 arasında bir arayüz olarak işlev görür. solungaç diken, yutak dişleri ve brankiyal kemikleri de dahil olmak üzere özellikleri çok sayıd....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm balık çalışmaları California-Berkeley Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (protokol numarası R330) tarafından onaylandı. Ötenazi% 0.1 sodyum bikarbonat 39 ile tamponlanmış% 0.025 Tricaine-S daldırma kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Bütün aşamalar oda sıcaklığında gerçekleştirilir.
1. Hazırlık
Not: sıkıca kapatabilir ve yatay döşenebilir konik tüpler veya sintilasyon şişeleri adımları 1.1-1.5 gerçekleştirin. Balıklar sürekli sarsılmış olması gerekir, fakat nazikçe tersini veya boyama çözeltisine balık her tarafını ortaya çıkarmak ve leke eşit dokuya nüfuz sağlamak için tüpler veya şişelere raf sallayarak mümkün olduğu....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Önemli trofik özelliklerin çeşitli ölçülebilir bir disseke ve düz monte brankiyal iskelet Bu protokol sonuçları (Şekil 4). Dorsal görünümünde, solungaç diken, tüm faringeal diş plakaları, ve neredeyse tüm brankiyal kemiklerin tüm satırları kolayca görüntülendi ve 22 sayısal olabilir - 24,35,36,38,42. Alizarin Kırmızı S diğer belirteçleri (örneğin, transgenik GFP 42) ve görselleştirme alternatif bir yöntem ile çif.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Brankial iskelet, bir balığın boğazında bulunan ve yemek borusuna giderken gıda maddelerini manipüle eden, filtreleyen ve çiğneyen karmaşık bir kemik setidir. Solungaç tırmıklarının, faringeal dişlerin ve branşiyal kemiklerin desenlenmesi de dahil olmak üzere birçok ilginç trofik özellik, türler arasında ve türler içinde farklılık gösterir. Bu özelliklerin çoğunun, branşiyal iskelet in situ ile doğru bir şekilde ölçülmesi zor veya neredeyse imkansızdır (örneğin, solungaç tırmığı uzunluğu, branşiyal kemi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma kısmen NIH R01 #DE021475 CTM ve NAE'ye NSF Lisansüstü Araştırma Bursu tarafından finanse edilmiştir. Görüntüleme konusundaki yardımları için Miles Johnson'a ve el yazmasının eleştirel okuması için Priscilla Erickson'a teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Potasyum Hidroksit (KOH) | EMD | PX1480-1 | |
| Gliserol | Sigma-Aldrich | G7893-4L | |
| %10 Nötr Tamponlu Formalin (NBF) | Azer Scientific | NBF-4-G | |
| Alizarin Kırmızı S | EMD | AX0485-3 | |
| Mikroskop Kapak Camları 22 mm x 60 mm | VWR | 16004-350 | |
| 100 mm x 10 mm Cam Petri Çanak | Kimble Chase | 23064-10010 | |
| Sylgard 184 Silikon Elastomer Kiti | Ellsworth Yapıştırıcılar | 184 SIL ELAST KİTİ 0.5KG | Diseksiyon plakaları yapmak için cam veya plastik Petri kaplarına dökülebilir |
| Modelleme Kil | Sargent Art | 22-4000 | 1 lb krem |
| Sintilasyon Şişeleri (500 kutu) | Wheaton | 986586 | Vidalı Kapaklı Borosilikat Cam |
| Forceps-Dumont #5 Inox (Biyoloji ucu) | FST | 11252-20 | Dumostars alternatif bir |
| Diseksiyon Makasıdır | FST | 15003-08 | Numunenin boyutuna bağlı olarak alternatif boyutlar mevcuttur |
| KL300 LED'li | Diseksiyon Mikroskobu | Leica | Diğer birçok model iyi çalışır, düz bir tabana sahip olmak |
| Mikrosantrifüj Tüplerine yardımcı olur 1.7 ml | Denville | C2170 | |
| Karton kayar tepsi | Fisher | 12-587-10 |
Kaynaklar
- Cooper, W. J., Westneat, M. W. Form and function of damselfish skulls: rapid and repeated evolution into a limited number of trophic niches. BMC Evol. Biol. 9 (24), (2009).
- Albertson, R. C., Kocher, T. D. Genetic and developmental basis of cichlid t....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
