Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Böbrek sempatik sinir etkinliği ve kan basıncı bilinçli, intravenöz infüzyon ile aynı anda kayıt için yeni yaklaşımın kontrolsüz fareler.

10.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/54120

⸱

14 Şubat 2018

 , 
1Department of Pediatrics, University of Alberta, 2Department of Physiology & Biophysics, University of Mississippi Medical Center, 3Mississippi Center for Obesity Research

Bu makalede

Özet

İmzalat fareler fizyolojik olmayan sistemik kan basıncı, kan basıncı ve otonom sinir sistemi arasında yakın ilişki göz önüne alındığında otonomik sesi anlamlı değerlendirilmesi engellemektedir sergi. Böylece, aynı anda kayıt böbrek sempatik sinir etkinliği ve bilinçli farelerde intravenöz infüzyon ile kan basıncı için bir roman yöntemi gösterilmiştir.

Özet

Böbrek sempatik sinirler fizyolojik ve patofizyolojik olayları önemli ölçüde katkıda bulunur. Böbrek sempatik sinir etkinliği (RSNA) değerlendirme araştırma kronik böbrek hastalığı, hipertansiyon, kalp yetmezliği, şeker hastalığı ve obezite gibi birçok alanda büyük ilgi olduğunu. Sempatik sinir sistemi rolü kesin değerlendirme böylece hastalığı süreçleri anlaşılmasını ve deneysel sonuçlar doğru biçimde yorumlayabilmek için zorunludur. RSNA imzalat kemirgen fareler de dahil olmak üzere, geleneksel olarak ölçülür. Ancak, fareler genellikle çok düşük sistemik kan basıncı ve hemodinamik istikrarsızlık birkaç saat için anestezi ve ameliyat sırasında sergi. Anlamlı RSNA yorumlanması sempatik sinir sesi ve kardiyovasküler durum arasında samimi ilişki göz önüne alındığında bu fizyolojik olmayan devlet tarafından şaşırmış. Bu sınırlama geleneksel yaklaşımların adrese, bilinçli, serbestçe hareket farelerde RSNA ölçmek için yeni bir yöntem geliştirdi. Fareler kronik kan basıncı gibi Şah Venöz infüzyon kateter ve özel olarak tasarlanmış iki kutuplu elektrot RSNA doğrudan kayıt için sürekli izlenmesi için radyo-telemeters ile Enstrümante edildi. 48-72 saat iyileşme döneminde sağkalım oranı % 100 olarak ve tüm fareler normal davrandım. Bu zaman noktada, RSNA sırasıyla 4 ve 5 gün ameliyat sonrası % 70 ve fareler, % 50'si kadar alınan uygun sinyalleri ile fareler, % 80'başarıyla kaydedildi. Fizyolojik kan basıncı tüm farelerde kaydedildi (116±2 mmHg; n = 10). Yeme ve damat, literatürde gibi köklü kaydedilen RSNA arttı. Ayrıca, RSNA ganglionic abluka ve farmakolojik ajanlar ile kan basıncı modülasyon tarafından doğrulandı. Burada, RSNA açık kayıt bilinçli, serbestçe hareket farelerde için etkili ve yönetilebilir bir yöntemi açıklanmıştır.

Giriş

Biyomedikal Araştırma çeşitli alanlarda fare kullanarak ilgi sayısız genetiği modelleri gelişimi ile genişletmeye devam ediyor. Çoğunlukla, teknik gelişmeler hızı fareler Fizyoloji artan kullanımı ile devam ediyorum ve şimdi özellikle farelerde önemli fizyolojik parametrelerini ölçmek için geliştirilen minyatür cihazların etkileyici bir seçim olduğunu. Her ne kadar Telemetric cihazlar için ölçüm otonomik doğrudan bilinçli sıçan sinir sesi-si olmak be elde edilebilir için bir on yıl içinde bilinçli farelerde sinir etkinliğini değerlendirmek için küçültülmüş cihazlar şu anda kullanılabilir değil. Müfettişler genellikle aşmak bu sınırlama dolaylı yöntemleri ile (yani plazma veya idrar katekolaminler, farmakolojik otonomik abluka, spektral analizi kan kalıplarının otonom sinir sisteminin katkısını değerlendirerek basınç/kalp hızı)1.

Bu yaklaşımlar değerli bilgi sağlarken, soruşturma altında fenomen için sinirleri izole nüfus ayrık katkısını açığa yerine, genel olarak otonom sesi küresel bir resmini sonucudur. Alternatif olarak, doğrudan kayıt belirli sinir etkinliği imzalat farelerde, hangi kaygıları çok sayıda pozlar idam edildi. Bu son derece kararlı tansiyon fizyolojik Aralık içinde imzalat bir fare için birkaç saat ameliyatı takiben korumak zordur. Aslında, bu tür deneyler, kan basıncı kez bildirilmemiş ya da son derece düşük düzeyde sunulan (Yani 60-80 mmHg vs > 100mmHg bilinçli bir Mouse)2. Bir kez imzalat fare hazırlanmasında sergilenen kardiyovasküler sistem kırılganlık kan basıncı ve sempatik sesi3arasında aşırı duygusal ilişki göz önüne alındığında Otonomik sinir aktivitesinin anlamlı değerlendirme engellemektedir, 4.

Bu sınırlama, bilinçli, (RSNA) böbrek sempatik sinir aktivitesinin doğrudan kayıt için yeni bir yöntem adrese kontrolsüz fareler, ev onların kafes içinde rahatsız edilmeden geliştirilmiştir. Hem cerrahi ve deneysel yaklaşım başarılı bu tekniğin uygulanması için ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Bu hazırlık arteriyel basınç intravenöz ajanlar ilgi fare bozmadan demlemek eklendi yeteneği ile RSNA, ek olarak radiotelemetry üzerinden aynı anda kayıt için Dedektif sağlar.

Yirmi dört saat ameliyat sonrası, fareler normal davranır ve ağrı veya acı belirtileri göstermek değil. Fare rahat ile yiyecek, su ve çevre zenginleştirme sınırsız erişim ev onun kafes içinde dayanıyor ise deneysel kayıtları sonra 48 ila 72 saat ameliyat sonrası başlayabilirsiniz. Açık RSNA izlemeler sunulmaktadır ve sistemik kan basıncı farmakolojik modülasyon ek olarak gösterilenSQL ServerKitaplar, normal fiziksel hareketleri (örneğin, yeme ve damat) hayvan bu sinir popülasyona karakteristik yanıt. Kalite ve özgüllüğü RSNA sinyal daha da ganglionic abluka tarafından doğrulanmış. Bu el yazması bu tekniği5başlangıçta yayımlanmış bir açıklaması için görsel-işitsel tamamlayıcı içerir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bütün deneysel prosedürler uyarınca Ulusal Sağlık Rehberi Enstitüleri bakım ve kullanım laboratuvar hayvanları ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi Mississippi Üniversitesi Tıp Merkezi tarafından kabul edildi.

1. hayvanlar ve konut

  1. Ev fare (24-35 g) kurumsal laboratuvar hayvan tesisi vardıklarında.
  2. Fareler standart kemirgen chow ve musluk suyu sıcaklık ve nem kontrollü bir ortamda deneysel protokol her aşamasında ad libitum sunuyoruz.

2. özelleştirilmiş implante edilebilir RSNA elektrot imalatı

Not: implante edilebilir RSNA elektrot (aşağıda açıklanmıştır) kür ve sterilizasyon zaman karşılamak için zamanlanmış cerrahi işlem öncesinde en az birkaç gün inşa.

  1. Yalıtımlı paslanmaz çelik çoklu iplikçikli tel, 250 mm (tel çapı 0.0254 mm çıplak, 0.14 mm Kaplamalı) üç eşit uzunlukta kesin. Bir neşter bıçak (tercihen #11) yaklaşık 15 mm tel uzunlukları herbiri bir ucunu alttaki metalden ortaya çıkarmak için yalıtım malzeme şerit için kullanın.
    1. İki kutuplu elektrot yol açar (şekil 1A) oluşturmak için bir tek erkek uçlu konnektör (altın kaplama pirinç) bared sonuna sadece iki tel lehim. Üçüncü tel uzunluğu sonu çıplak bırakın. Bu yere tel işlev görür.
    2. Kısa bir (~2.0 - 2,5 cm) kayma parça 1.6 mm çap termo büzülme hortumunun üzerinde pin bağlayıcı ve tel tel ve pin bağlayıcı arasında yeni lehimli ortak tamamen kapsayacak.
      Not: Amplifikatör headstage takılı pin bağlayıcı ucunu maruz kalması gerekir.
    3. Tel ısı silah küçük pense veya hemostats ısıya duyarlı boru küçültmek ve elektrikle uçlu konnektör ve tel arasındaki bağlantıyı izole bir çift ile yukarıda tutun. İkinci tel/pin bağlayıcı için işlemi yineleyin.
  2. 200 mm boy polietilen boru kesme (PE 90; iç çapı 0,86 mm, dış çap 1,27 mm). Üç kablo (iki yol açar + tel zemin) grup ve el değmemiş biter onları birlikte aracılığıyla açık boru (şekil 1B) sonuna kadar iş parçacığı PE 90 boru içine tanıtmak.
    Not: Gruplamak ve elektrot korumak için PE işlevleri bir kılıf boru 90 yol açar ve tel zemin.
    1. Zemin tel tanımlamak ve PE 90 kılıf ile bipolar elektrot müşterileri ayırt etmek için biraz daha çekin.

3. inşaat elektrot uç

  1. Elektrot tellerin el değmemiş uçları diseksiyon mikroskop görselleştirin. 5 mm - uzun bir parçası daha küçük polietilen boru aracılığıyla elektrot üç yarım kalmış iş parçacığı (PE 10, iç çapı 0,28 mm, dış çap 0,61 mm) elektrot teller birbirine bağlamak için.
    1. Bu PE 10 boru üç elektrot tel üzerine bir 1.5 mm parça iş parçacığı. Bu boru PE 10 ilk 5 mm parça uzak 2.0 mm dinlenmek için ilerlemek.
    2. PE 10 boru kapak ve ipuçları izole etmek ve onları yere tel (Şekil 1 c) ayrı iki kutuplu elektrot İpucu ipuçları üzerine ikinci bir 1.5 mm parça iş parçacığı.
  2. Teller aşırı uzun makasla kesme.
  3. PE 10 boru elektrot teller için bireysel adet sıvı formülü cyanoacrylate tutkal küçük bir damla ile tutkal. Körelmenin 25 gauge iğne kontrolü geliştirmek ve dökülme azaltmak için tutkal tüp ucuna yerleştirin.
    1. PE 10 ve tel, arasındaki kavşakta iğne ucu yerleştirin sonra tutkal küçük bir damla dağıtmak ve PE boru iç kaplama tutkal görselleştirmek.
    2. Bir gecede tam olarak tedavi etmek tutkal izin.

4. ince elektrot uç hazırlanması için kayıt

  1. İki kutuplu elektrot ipuçları ve zemin tel ucu yalıtım kaplama #11 neşter bıçakla şerit. Rahatsız veya bu RSNA sinyal kalitesini etkileyecek gibi birden fazla Bükülü teller temel zarar değil.
  2. Kavrama 5.0 mm ve 1.5 mm PE 10 çapa ile arasında inşa elektrot forseps kavisli ve 90 ° açı (Şekil 1 d) oluşturmak üzere teller viraj.
    Not: Bu manevra sinir paket beşiği için en uygun bir konumda İki kutuplu elektrot yol zemin tel, yukarıda uzaklýkta tutulmalýdýr.

5. demir ayaklı inşaatı

  1. Elektrot dengelemek için bir kaide açar exteriorization üzerine fare orta scapular bölgesine 3 cm biteviye-in polietilen boru kesim tarafından inşa etmek (iç çap 2.70 mm, dış çap 4.00 mm).
    1. Forseps ile tüp kavrama ve bir ucu ısı tabancası üzerinde eritebilir. Yuvarlak bir sırt veya "flanş" oluşturmak için serin bir metal yüzeyine dik Boru Isıtmalı end tuşlarına basın.
    2. Öyle ki flanş elektrot ucunu doğru işaret ediyor bu Kaide üzerine inşa elektrot, iş parçacığı.
      Not: PE 90 kılıf ve ayaklı bir kez hayvan exteriorized elektrot müşteri adayları koruyacak.

6. sterilizasyon tamamlanan implante edilebilir elektrot

  1. Paket tek tek de sterilizasyon çanta ve ozon tamamlanan elektrot (TSO3) implantasyon önce sterilize.
    Not: yerel hastane sterilizasyon tesisi türünü sterilizasyon çanta ve prosedürü ile ilgili kurumlar arasında farklı olması gibi danışın.

7. anestezi ve ameliyat için hazırlık

  1. Analjezi 20 dakika cerrahisi (2 mg/kg Meloksikam, S.C.) başlatmak için önceden yönetmek. % 100 tıbbi oksijen ile aşılanmış bir indüksiyon odasında fareyi getirin. İsoflurane %0,5 4 ulaşmak için artışlarla anestezik yüzdesini artırmak için Buharlaştırıcı ayarlarını. Cerrahi uçak hafif basınç ayak veya ayak yastıkları ön plana uygulanan refleks yanıtı değerlendirirken tarafından değerlendirmek ve solunum hızı yavaşlama yanı sıra arka bacaklarda.
    1. Hayvan cerrahi tablosuna transfer ve cerrahi uçak ulaştı ve artık ayak-çimdik refleks sergileyen bir kez anestezi ile 1,5-%2 isoflurane bir nosecone üzerinden korumak. Toe-çimdik yanıt düzenli olarak tekrarlayın ve solunum tüm ameliyat boyunca değerlendirmek. Oftalmik merhem gözleri kuruluğu önlemek için geçerlidir.
    2. Jel dolu izotermal ısı pedleri ve karşılık gelen cerrahi masa her zaman hayvanın normal vücut ısısını korumak. İzotermal yastıkları bir 37 ° C su banyosunda depolamak ve yastıkları kez ameliyat sırasında fizyolojik vücut ısısını korumak için gerektiği şekilde değiştirin.
    3. Glycopyrrolate yönetme (50-70 µg/kg, subkutan (S.C.)) hava yolu salgıları hemen sonra anestezi indüksiyon aşırı üretimi önlemek için. Bu doz glycopyrrolate ikinci teker teker cerrahi işlem (adım 9.1) orta noktasını yönetmek.
    4. Aseptik koşullar altında tüm cerrahi prosedürlerini yürütecektir. Tüm cerrahi alet-si olmak be zamanlanmış ameliyat öncesi autoclaved emin olun. Cerrahi alan (7.2.1) açıklandığı gibi temiz ve kısırlık prosedürü boyunca korumak.
      1. Bir yüz maskesi, autoclaved yalıtım elbisesi ve steril, tek kullanımlık eldiven giymek. Tüm büyük ekipman boynu lamba, kapsam ve cerrahi tablo % 70 etanol ile anatomi gibi temiz. Düzenli olarak işlem sırasında % 70 etanol kısırlık sağlamak için cerrahi eldivenler için geçerlidir.
  2. Saç depilatory krem (hassas ciltler formül) tarafından takip küçük hayvan kılı makası ile hayvanın sol kanat, ventral boyun bölgesi ve dorsal midscapular bölge çıkarın.
    1. Bu iki cerrahi alan cerrahi temizlik çözüm uygulamaları alternatif 3 cilt temizlemek (% 10 Povidone iyot) ve % 70 etanol. Cerrahi temizlik çözüm son bir uygulama ile cerrahi alan hazırlamak.

8. cerrahi implantasyon RSNA elektrot

  1. Fareyi onun sağ tarafında hayvanın sol tarafı açığa cerrahın sola doğru işaret rostral ucuyla getirin. Bir neşter (#11) ile midscapular bölgesinin Cilt 5 mm kesi yapmak.
    Not: Bu hangi RSNA elektrot yol exteriorized sitedir.
    1. İkinci bir kesi yapmak (< 20 mm) sol kanat, omurga ve 2 mm için göğüs kafesi Kaudal dik örten deride. Tünel bir 13G paslanmaz çelik iğneden subkutan bu kesik kesik dorsal çıkış sitesinde için.
      Not: keskin kenarları iğne pürüzsüz, kesme kenarı sigara bırakmak için dosya.
    2. Steril implante edilebilir RSNA elektrot (Adım 2 - 6) 13 G iğne geçmek. 13 G iğne sol kanat karın kas üzerinde yalan elektrot uç bırakın için geri çekin. Deri altında yalan elektrot müşteri adayları bir parçasını bırakın ve--dan belgili tanımlık dorsal kesme ortaya çıkan diğer uzaklık bırakın.
  2. Elektrot uç yanına yerleştirin. Bir kesik doğrudan 8.1.1 içinde yapılan cilt kesi temel karın kası yapmak. Yağ ve bağ dokusu sırt kas boyunca sol böbrek ortaya çıkarmak için küçük pamuk uçlu uygulayıcıları ile ayırın.
    1. Cerrahi alan mikro-traktör ile açın ve böbrek geri çek. Geri dönüşümsüz renal sinirler zarar ve uygun bir RSNA sinyal kayıt engel böbrek nörovasküler demet germek değil için yapın.
      Not: Çelik mikro-traktör standart ataş ve 4-0 ipek uzunluğu moda izin. Bu çok da aseptik teknik korumak için cerrahi aletler ile sterilize emin olun.
  3. Yüksek bir güç diseksiyon mikroskop yardımı ile böbrek nörovasküler demet görselleştirin. Tipik olarak (ancak her zaman değil) renal arter ve ven ile birlikte ishal böbrek sinir paket tanımlayın. Çevre dokular gelen sinir demeti ince, düz Forseps ile incelemek.
    Not: Böbrek sinir demeti ile karşılaştırıldığında net görünür lenf damarları için bir "ip gibi" yansıtıcı bir görünüm, benzersiz donuk görünür.
    1. Mümkün olduğunca az sinir demeti işlemek. Değil dokunma, streç veya sinir paket kadar herhangi bir zamanda almak. İyi çünkü bu sinir canlılığı uzlaşma ve sürekli lenf sinir/elektrot sıvı havuzu üretmek sinir veya böbrek lenf kanalı tedarik engel veya tamamen sinir sinyal yok damarlar bozmak değil.
    2. Bırak olduğu gibi böbrek sinir demeti yardımcı olacak sinir uzun vadeli canlılığı korumak hem de sinir ve (yani kesitli bir sinir elektrotlar zaman ve doğal vücut hareketleri ile kapalı kayma) elektrot arasında istikrarlı temas korumak.
  4. RSNA elektrot uç karın tanıtmak. İki kutuplu elektrot uç ve zemin tel öyle ki böbrek nörovasküler demet dikey konumunu ayarlayın. Daha fazla yere tel temel alınan dokular ile iyi iletişim vardır ve elektrot böbrek kan dolaşımı (Şekil 1 d) ödün böbrek damarlarının sıkıştırmak değil öyle ki elektrot konumunu ayarlamak.
  5. Böbrek sinir deste açılı Forseps ile kaldırın. Elektrot uç sinir sinir her iki telleri ile doğrudan temas içinde bırakarak altında kayma.
    1. Parafin film küçük bir parça slip sinir/bipolar kabloları ve üçüncü (toprak) Tel (Şekil 1 d) arasında.
      Not: 24 saat ve steril fizyolojik serum implantasyon öncesinde durulama için % 70 etanol parafin filmde sterilize emmek.
    2. Herhangi bir kan kaldırmak veya sinir/elektrot küçük emici ile çevresinde sıvı sinir yaptı herhangi bir sıvı spears veya elektrot teller engel veya sinir sinyal söndürmek.
    3. Hızlı bir şekilde RSNA sinyal kalitesi (aşağıda açıklanan kur) istenirse sınayın.
      Not: havaya maruz sinir kuru ve canlılığı uzlaşma gibi bunu hızlı bir şekilde yapmanız gerekir.
    4. İki bileşenli silikon elastomer silikon havuzları altında ve çevresinde komple elektrik izolasyon (yani değil, sadece sinir üzerine bir damla) sağlamak için sinir sağlamak sinir/elektrot birimine uygulanır.
      Not: elektrot ipuçları da silikon kaplı olan olun. Zemin tel ile temas halinde temel doku kalmalıdır ve böylece elastomer havuzu bu tel altında gerekli değildir. Bu potansiyel olarak renal kan akımı engelleyebilir veya zamanla doğal vücut hareketleri ile yerinden olmak gibi silikon elastomer gereksiz düzeyde büyük bir miktarda uygulamaktan kaçının.
    5. Tamamen, tedavi silikon elastomer için 1-2 dakika sonra dikkatli bir şekilde "glob" Silikon dış kenarlarını Forseps ile Asansör ve küçük bir miktar sıvı formülü cerrahi yapıştırıcı uygulamak sağlar.
      Not: dolaşım zarar veya sinir için yaymak ve canlılığı uzlaşma gibi değil bu tutkal, aşırı miktarda uygulamak için dikkat ediniz.
  6. İş öğelerinin sürekli olmayan, absorbe dikiş (5-0) ile belgili tanımlık karın kesme kapatın. Aynı suture maddi ile benzer bir şekilde örten deride kapatın.

9. kan basıncı Radiotelemeter implantasyonu

  1. Fare sırtında, rostral sonuna doğru cerrah işaret ile yeniden konumlandırın. Anestezi nosecone gerektiği gibi ayarlayın. Glycopyrrolate ikinci doz bu noktada yönetmek için (bkz: 7.1.3).
  2. Sadece hayvanın alt çene altında başlayan ve sadece göğüs kafesi üzerinde uzanan bir ensizyon cilt (#11), neşter ile boyun bölgesinin olun. Temel boyun kasları ortaya çıkarmak için glandüler doku ayırın. Sol ortak Şah damarı açığa ve dokuları çevreleyen ayırın.
    Not: Bu artan ameliyat sonrası ölüm açabilir gibi vagus siniri zarar vermemesi için çok dikkat edin.
    1. 6-0 ipek sütür malzemesi arter altında üç parça geçmek. Bir dikiş kadar rostrally mümkün olduğunca konumlandırın ve gemi doldurmak için kravat. İkinci bir dikiş midway gemi uzunluğu boyunca konumlandırmak ve gevşek kravat. Son dikişi mümkün olduğunca caudally getirin ve gevşek bağlayın.
    2. Çoğu rostral dikiş geri çekmek ve göbek bandı küçük bir parça ile nosecone için güvenli. Kaudal çoğu dikiş gemi kan akımı sınırlamak için mikro-sivrisinek Forseps ile geri çek.
    3. Küçük bir insizyon attım damar duvarında güzel bahar makasla mümkün olduğunca rostrally olun. Gemi ve Kaudal dikiş için önceden içine fare tansiyon radiotelemeter kateter tanıtmak.
      1. Geçici olarak kateter stabilize, Kaudal retraksiyon bırakın ve kateter 10 mm. kravat dikiş yerde güvenli kateter çevresinde ilerlemek için orta dikiş bağla.
    4. Sağ kanadı boyunca subkutan bir cep telemetre vücuda tünel.

10. implantasyon ve Şah Venöz kateter Exteriorization

  1. Küçük pamuk uçlu uygulayıcıları Sağ juguler ven ortaya çıkarmak için kullanın. İki adet 6-0 ipek sütür malzemesi geminin geçmektedir.
    1. Bir dikiş kadar rostrally mümkün ve gemi doldurmak için kravat yerleştirin. İkinci dikişi mümkün olduğunca caudally getirin ve yavaşça damar içinde kan akışını durdurmak için geri çek.
    2. Güzel bahar makas rostral dikiş gibi mümkün olduğunca yakın damar duvarındaki küçük bir kesi yapmak için kullanın. Isı uzanan boru ile ven catheterize (OD 1.02 mm, OD için uzatılmış 0,64 mm), hangi öncesi steril fizyolojik serum dolu.
      Not: kateter ucu gemi perforasyon önlemek için yuvarlak eğim üretmek için neşterle kesilmiş olun. Başvuru için kateter (ölü boşluk) sıvı hacmi belirlemek (bkz: adımlar aşağıda 14,6 14,4).
      1. Kateter ~ 8 mm damar içine ilerlemek. Kateter gemi ve kateter yanı jel formülü cyanoacrylate tutkal küçük bir damla uygulanması çevresinde ipek sütür bağlama tarafından güvenli.
  2. Fare sol onun yanına koyun. Tünel 13 G paslanmaz çelik iğne kullanarak dorsal midscapular bölgenin çıkmak için boyun damar içi kateter.
  3. Fare sırtında yeniden konumlandırın. İş öğelerinin sürekli olmayan dikiş ile boyun kesi kapatın.
  4. Hayvan yüzükoyun sígara yerleştirin. Venöz kateter üzerine küçük bir deri altı düğme iş parçacığı. Belgili tanımlık düğme dikiş ile cilt altında güvenli. Karşılık gelen paslanmaz çelik Bahar üzerinde Venöz kateter konu ve kateter korumak için cilt düğmesini güvenli.

11. Exteriorized elektrot güvenliğini sağlama yol açar

  1. Güvenli polietilen Kaide korumak elektrot temel kas doku yapıştırıcı ile yol açar. Daha fazla destek için flanş üzerinden örten deri dikiş.

12. ameliyat sonrası kurtarma

  1. Antibiyotikli bir krem tüm kesikler için geçerlidir.
  2. Analjezik ilaç yönetmek. Ek dozlarda analjezik ilaç hayvan ağrı veya acı belirtileri gösteriyorsa iyileşme döneminde gerektiği gibi yönetmek.
  3. Ahşap çip yatak ve kurtarmak için kağıt havlu ile kaplı bir metabolik kafeste fareyi getirin. Hayvan sürekli olarak izlemek ve bilincinin tekrar yerine geleceğinden ve sternal recumbency koruyabilirsiniz kadar sahipsiz bırakmayın. Çevre zenginleştirme ve gıda ve su (ad libitum) bu noktada tanıtmak.
  4. Bobin elektrot kafes dışında deneme zamana kadar yol açar.
  5. Yer sıcak sıcaklık pedi kurtarma ilk 24 saat içinde belgili tanımlık kafes. Paslanmaz çelik yay ve damar içi kateter fizyolojik serum sürekli infüzyon sırasında iyileşme süresi (0.5 mL/saat) için döner/infüzyon sistemine bağlayın.
  6. Hayvan exteriorized kateter doğası gereği adanmış bir kafeste tek başına yer alan korumuş ve elektrot yol açar.

13. deneysel Kur kayıt kan basıncı ve RSNA için

  1. Paslanmaz çelik en iyi anti-titreşim tablo basit bir Faraday kafesi ile donatmak.
    Not: Bu Faraday kafesi bir ahşap çerçeve ve alüminyum ekran mesh ile inşa edilebilir. Elektriksel olarak herhangi bir elektriksel gürültü ortadan kaldırmak için tablo/Faraday kafesi zemin.
  2. Kan basıncı radiotelemetry alıcı Faraday kafesi içinde yerleştirin.
  3. Radiotelemetry alıcı ilişkili baskı çıktıyı adaptöre bağlayın. Bu bağdaştırıcı kayıt kan basıncı online veri toplama sisteme bağlayın.
  4. Eşleştirilmiş, ekranlı PVC kenarına elektrot erkek pim konektörleri (altın kaplama pirinç) ücretsizdir lehim iki erkek pim konektörleri kablo izole. Muz prizler bu eşleştirilmiş kablosunu ters ucuna lehim. Muz fiş bir preamplification headstage (10 X büyütme) bağlayın.
  5. Bu Pre amplifikatör için fark bir amplifikatör bağlamak. Sinir sinyal x10, 000 yükseltmek için ayarları yapın. Aşağıdaki gibi filtre ayarlarını yapma: düşük kesme, 100Hz; Yüksek kesim, 1000 Hz.
  6. Fareyi üzerine 48 ila 72 saat ameliyat sonrası Faraday kafesi içinde bulunan radiotelemetry alıcı içeren ev kafes yerleştirin. Kan basıncı sinyalleri kaydetmek için radiotelemetry sonda açın.
    Not: ameliyat öncesi 1 hafta boyunca kurulumunda eve kafes yerleştirerek fare Acclimating en uygunudur.
  7. Elektrot müşteri adayları fiþini ve iki kutuplu elektrot pim konektörleri RSNA kaydını başlatmak için (13,4) açıklanan karşılık gelen kadın pim konektörleri takın.
  8. Görüntülemek ve fizyolojik serum veya çözüm ilgi beslerken ise kan basıncı sinyalleri online ile bir bilgisayar, aynı anda kaydetmek. Saniyede 2500 örnek bir minimum hızında kayıt veri.

14. örnek deneysel protokol ve doğrulama RSNA sinyal

  1. Gıda ve su ücretsiz erişim sınırsız kendi ev kafeste fareler rahat olduğundan emin olun. Normal görünüm ve davranış özelliklerini doğrulamak için kurumsal hayvan bakımı yönergeleri izleyin.
  2. Aynı sıcaklık ve nem kontrollü Oda hangi RSNA kayıt gerçekleşecek farelerde ev. İntravenöz infüzyon yukarıda açıklandığı gibi devam sağlamak.
  3. Hayvan bir saatlik temel kan basıncı ve RSNA verileri kaydetmeden önce yukarıda açıklanan kayıt kurulum içinde yer alan en az 30 dakika sabitleme izin verme. Hayvan sessizce doğal hareketi sempatik tonda artış ile ilişkili olduğundan kayıt sırasında dinleniyor olun. Bu çözümleme sırasında göz ardı kayıt sırasında doğrudan dijital izleme üzerinde hayvan taşırken Not.
  4. Yavaş yavaş ilk baroreflex Cevabıyla test sodyum nitroprusside (2,5 µg/g 25 µL serum hacmi vücut ağırlığının) bolus infüzyon satır enjekte. Yavaş yavaş ~ 50 µL fizyolojik serum fizyolojik içeren satırı sifonu çek. Kateter ölü boşluk kaldırıldığından emin olun. Kayıt kan basıncı ve RSNA 2-5 dakika.
  5. Yavaş yavaş phenylephrine (20 µg/kg vücut ağırlığının 25 µL serum) bolus enjekte et. ~ 50 µL fizyolojik serum floş. Kateter ölü boşluk kaldırıldığından emin olun. Kayıt kan basıncı ve RSNA bir daha 10-15 dakika için.
  6. Postgangliyonik sinir sinyal doğası yavaş yavaş ganglionic belgili tanımlık kütük parçası, hexamethonium (50 µg/g vücut ağırlığının 25 µL serum) infüzyon satır içine bolus enjekte edilerek doğrulayın. ~ 50 µL serum floş. Kateter ölü boşluk kaldırıldığından emin olun. Kayıt devam etmek için birkaç dakika.
  7. Hexamethonium yönetim sonra arka plan gürültü (aşağıda açıklanmıştır) RSNA analizini kullanmak için bir tahmin olarak kalır kalan etkinliği kullanın.
  8. Fare ile isoflurane (%5 0,5 kadar artışlarla kademeli dozda) aşırı dozda ötenazi ve RSNA bir daha 30 dakika kayıt devam etmek. Not: Kalan sinyal de arka plan gürültü bir tahmini RSNA analizi için kullanılabilir.

15. veri analizi

  1. Kullanım veri alma yazılımı ham kan basıncı ve RSNA izlerini analiz etmek.
    1. Dijital olarak entegre ve tam dalga doğrultucu istimal bu bilgisayar yazılımı ham RSNA izleme. "Mutlak ayrılmaz" ayrılmaz ayarlarını seçin; 0.1 saniye6saat sabit çürüme uygulanır.
    2. (µV·s birimlerinde görüntülenir) entegre RSNA sinyal deneysel protokol her segment için analiz. Hayvan hareket olduğunda kayıt parçalarını dikkate almayın. En az 3 ölçümler temel ve deneme, deneysel bazı bölümleri sırasıyla alır.
    3. Sırasıyla baroreflex duyarlılık değerlendirmek için RSNA elde sodyum nitroprusside veya phenylephrine, için minimum ve maksimum kan basıncı düzeyde analiz.
    4. Yukarıda deneysel protokol her bölümü için tek bir değer verim alınan bireysel ölçümlere ortalama.
    5. RSNA yanıt RSNA yüzde değişim %1007' de belirlenmiş taban çizgisi üzerinden hesaplayarak ölçmek. Uygun olarak tam istatistiksel analiz.
      Not: Bu örnekte, bir öğrenci t testi ile istatistiksel analizi RSNA yanıt sodyum nitroprusside ve phenylephrine tamamlandı; önemi P değerleri ile kabul edildi < 0,05.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Açıklanan protokol, sağkalım oranı % 100 - tüm fareler hayatta ve iyi cerrahi işlem takip yeniden elde etmek bu çalışmada Enstrümante olduğunu. Cerrahi hazırlık, tüm fareler normalde davrandım tipik yeme, sergilenmesi damat ve keşif amaçlı davranışlar 24 saat içinde. Hayvan yok şu anda ağrı veya acı belirtisi gösterdi. 48 saat cerrahisi, doğrulanabilir ve net RSNA sinyal 10 12 fareler dışında kaydedildi. Bu sinyal bu fareler 72 saat sonrası ameliyatta devam edildi, ancak gerçek bir RSNA s...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada biz özetlenen, gösterdi ve roman yöntemi RSNA hedeflenen değerlendirilmesi bilinçli farelerde hareket ve konforlu ev onların kafes içinde dinlenmek ücretsiz için doğrulanmış. Cerrahi implantasyon arteriyel basınç radiotelemeter, kalıcı bir intravenöz infüzyon kateter ve özel olarak tasarlanmış iki kutuplu RSNA elektrot fareler cerrahiden kurtarıldı ve 48 ila 72 saat boyunca kesintisiz kalmıştı. Fareler kaldı konforlu kapatılan kafeste (deneysel dönemleri de dahil olmak üzere) her zaman onların ev ile yiyecek, su v...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

S.M.H. doktora sonrası Burslar--dan Kanada Enstitüleri tarafından desteklenmiştir Sağlık Araştırma (CIHR), kalp ve inme Vakfı Kanada (HSFC) ve Alberta yeniliklerin Sağlık Çözümleri (AIHS); J.E.H. ulusal kalp, akciğer ve kan Enstitüsü PO1HL-51971 bir hibe tarafından desteklenmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Teflon kaplı paslanmaz çelik çok telli telA-M Sistemleri7932000.001 inç çapında çıplak; 0.0055in çap kaplamalı
# 11 Neşter BıçağıFisher ScientificALMM9011
Havya ve lehimHerhangi bir marka veya modele uygun
Erkek minyatür pin konektörleriA-M Sistemleri520200Altın kaplamalı pirinç
Dişi minyatür pim konektörleriA-M Sistemleri520100Altın kaplama
pirinç Isı Shrink makaronRadio ShackModel #: 278-1610 |  Katalog #: 27816101,6 mm çap
Polietilen 90 (PE90) boruVWRCA-63018-7030,86 mm iç çap; 1,27 mm dış çap
Diseksiyon mikroskobuLeica MicrosystemsLeica M80Herhangi bir marka veya model de uygundur
Polietilen 10 (PE10) boruBraintree ScientificPE10  50 FT0,28 mm iç çap; 0,61 mm dış çap
Süper Tutkal SıvıLoctiten/aSıvı Formül; herhangi bir markaya uygun
Süper Yapıştırıcı JelLoctiten/aJel Formülü; herhangi bir markaya uygun
Polietilen boruBilimsel ÜrünlerBB31695-PE / 13Kaide için 2,7 mm iç çap; 4.0mm dış çap
Hastane Sterilizasyon Hizmetleri & Ozon Sterilizasyon paketleriYerel hastane sterilizasyon hizmetleriyle iletişime geçin
İzofluran anesteziAbbott05260-05
Deltafaz izotermal ısı yastıkları ve ameliyat masasıBraintree Scientific39OPIsı pedlerini 37 ° C'de sıcak tutun; C su banyosu; İlgili cerrahi masa esansiyel
GlikopirrolatAmdipharm Mercury Company Limitedn/a
İzofluran buharlaştırıcı sistemi ve akış ölçerBraintree ScientificVP ITıbbi sınıf oksijen kaynağı dahil
Doku makasıGüzel Bilim Araçları14173-12
İnce yaylı makasGüzel Bilim Araçları15006-09
Küçük pamuk uçlu aplikatörlerFisher Scientific23400100
İnce Düz ForsepsGüzel Bilim Araçları11254-20# 5, Dumont Biologie tarafından FST
Uçlu Açılı ForsepsGüzel Bilim Araçları11251-35# 5/45 FST Dumont tarafından
Küçük Emici MızraklarGüzel Bilim Araçları18105-03
ParafilmSigma AldrichBR701605  ALDRICH
Kwik-Sil 2 bileşenli Silikon PolimerDünya Hassas Aletler (WPI)KWIK-SILHealthcare'den ekstra özel ipuçları satın alın
n/a
6-0 İpek SütürBraintree ScientificSUT-S  104Deknatel marka, makara
Radyotelemetri ProbuVeri Bilimleri Uluslararası (DSI)TA11-PAC10
Radyotelemetri AlıcısıVeri Bilimleri Uluslararası (DSI)PhysioTel RPC-1
Ortam Basıncı ReferansıVeri Bilimleri Uluslararası (DSI)Nisan-01
Basınç Çıkış AdaptörüVeri Bilimleri Uluslararası (DSI)R11CPA
Rena Nabız TüpüBraintree ScientificRPT-040
İnfüzyon DönerInstech Solomon375/D/22
Döner Destek Kolu & InstechSolomon SMCLA
Polisülfon düğmesini monte edin Instech SolomonLW62S/6
Paslanmaz çelik yayInstech SolomonPS62
Vetbond cerrahi yapıştırıcı3Mn/a
Üçlü Antibiyotik MerhemFougeran/a
PowerLab 8 Kanallı Veri Toplama Sistemi & YazılımCihazlarıPowerLab 8/35
PVC İzoleli KabloBeldenPVC Ses Bağlantı Kablosu 32 AWG
Ön Amplifikasyon HeadstageDagan CorporationModel 4002
Diferansiyel AmplifikatörDagan CorporationEX4-400
Sodyum NitroprussidSigma Aldrich71778-25G
FenilefrinSigma AldrichP6126-5G
Steril Fizyolojik Salin% 0.9 NaClBeckton DickinsonYerel hastane tedarikçisi ile iletişime geçin
heksametonyumSigma AldrichH0879-5G
Paslanmaz Çelik üst titreşim önleyici masan/an/aÖzel olarak şirket içinde tasarlanmıştır; Bir tezgah üzerinde sağlam çelik levha da uygundur
Faraday kafesin/an/aÖzel tasarlanmış ve şirket içinde üretilmiştir
Küçük hayvan kılı düzelticin/an/aEczane, erkek sakal düzeltici uygun
Tüy Dökücü Kremn/an/aVeet marka, hassas cilt formülü
%10 Povidon İyotPurdue ÜrünleriBetadien
%70 Etanoln/an/a
Çelik mikro ekartörlern/an/aŞirket içinde üretilmiştir. Çelik bir ataşı bükün ve döngü 4-0 ipek bir ekartör oluşturmak için
HemostatlarGüzel Bilim Araçları13011-12
Isı TabancasıFisher Scientific09-201-27
ile WPI 5-0 Polysorb Suture Tyco

Kaynaklar

  1. Young, C. N., Davisson, R. L. In vivo assessment of neurocardiovascular regulation in the mouse: principles, progress, and prospects. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 301 (3), H654-H662 (2011).
  2. Kass, D. A., Hare, J. M., Georgakopoulos, D. Murine cardiac function: a cautionary tail. Circ Res. 82 (4), 519-522 (1998).
  3. Charkoudian, N., Wallin, B. G. Sympathetic neural activity to the cardiovascular system: integrator of systemic physiology and interindividual characteristics. Compr Physiol. 4 (2), 825-850 (2014).
  4. Guyenet, P. G. The sympathetic control of blood pressure. Nat Rev Neurosci. 7 (5), 335-346 (2006).
  5. Hamza, S. M., Hall, J. E. Direct recording of renal sympathetic nerve activity in unrestrained, conscious mice. Hypertension. 60 (3), 856-864 (2012).
  6. DeBeck, L. D., Petersen, S. R., Jones, K. E., Stickland, M. K. Heart rate variability and muscle sympathetic nerve activity response to acute stress: the effect of breathing. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 299 (1), R80-R91 (2010).
  7. Krowicki, Z. K., Kapusta, D. R. Microinjection of glycine into the hypothalamic paraventricular nucleus produces diuresis, natriuresis, and inhibition of central sympathetic outflow. J Pharmacol Exp Ther. 337 (1), 247-255 (2011).
  8. do Carmo, J. M., et al. Control of blood pressure, appetite, and glucose by leptin in mice lacking leptin receptors in proopiomelanocortin neurons. Hypertension. 57 (5), 918-926 (2011).
  9. Brockway, B. P., Mills, P. A., Azar, S. H. A new method for continuous chronic measurement and recording of blood pressure, heart rate and activity in the rat via radio-telemetry. Clin Exp Hypertens A. 13 (5), 885-895 (1991).
  10. Tallam, L. S., Silva, da, A, A., Hall, J. E. Melanocortin-4 receptor mediates chronic cardiovascular and metabolic actions of leptin. Hypertension. 48 (1), 58-64 (2006).
  11. Van Vliet, B. N., Chafe, L. L., Antic, V., Schnyder-Candrian, S., Montani, J. P. Direct and indirect methods used to study arterial blood pressure. J Pharmacol Toxicol Methods. 44 (2), 361-373 (2000).
  12. Zvara, P., et al. A non-anesthetized mouse model for recording sensory urinary bladder activity. Front Neurol. 1, 127(2010).
  13. Hagan, K. P., Bell, L. B., Mittelstadt, S. W., Clifford, P. S. Effect of dynamic exercise on renal sympathetic nerve activity in conscious rabbits. J Appl Physiol. 74 (5), 2099-2104 (1985).
  14. Matsukawa, K., Ninomiya, I. Changes in renal sympathetic nerve activity, heart rate and arterial blood pressure associated with eating in cats. J Physiol. 390, 229-242 (1987).
  15. Stocker, S. D., Muntzel, M. S. Recording sympathetic nerve activity chronically in rats: surgery techniques, assessment of nerve activity, and quantification. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 305 (10), 6(2013).
  16. Burke, S. L., Lambert, E., Head, G. A. New approaches to quantifying sympathetic nerve activity. Curr Hypertens Rep. 13 (3), 249-257 (2011).
  17. Smith, F. G. Techniques for recording renal sympathetic nerve activity in awake, freely moving animals. Methods. 30 (2), 122-126 (2003).
  18. Miki, K., Kosho, A., Hayashida, Y. Method for continuous measurements of renal sympathetic nerve activity and cardiovascular function during exercise in rats. Exp Physiol. 87 (1), 33-39 (2002).
  19. Yoshimoto, M., Miki, K. Measurement of renal sympathetic nerve activity in freely moving mice. J Physiol. 560, (2004).
  20. Yoshimoto, M., Miki, K., Fink, G. D., King, A., Osborn, J. W. Chronic angiotensin II infusion causes differential responses in regional sympathetic nerve activity in rats. Hypertension. 55 (3), 644-651 (2010).
  21. Salman, I. M., Sarma Kandukuri,, Harrison, D., L, J., Hildreth, C. M., Phillips, J. K. Direct conscious telemetry recordings demonstrate increased renal sympathetic nerve activity in rats with chronic kidney disease. Front Physiol. 6, 218(2015).
  22. Morgan, D. A., Despas, F., Rahmouni, K. Effects of leptin on sympathetic nerve activity in conscious mice. Physiol Rep. 3 (9), (2015).
  23. Alfie, M. E., Sigmon, D. H., Pomposiello, S. I., Carretero, O. A. Effect of high salt intake in mutant mice lacking bradykinin-B2 receptors. Hypertension. 29 (1 Pt 2), 483-487 (1997).
  24. Dietz, J. R., Landon, C. S., Nazian, S. J., Vesely, D. L., Gower, W. R. Effects of cardiac hormones on arterial pressure and sodium excretion in NPRA knockout mice. Exp Biol Med (Maywood). 229 (8), 813-818 (2004).
  25. Zhang, W., et al. Cyclosporine A-induced hypertension involves synapsin in renal sensory nerve endings. Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (17), 9765-9770 (2000).
  26. Szczesny, G., Veihelmann, A., Massberg, S., Nolte, D., Messmer, K. Long-term anaesthesia using inhalatory isoflurane in different strains of mice-the haemodynamic effects. Lab Anim. 38 (1), 64-69 (2004).
  27. Tank, J., et al. Sympathetic nerve traffic and circulating norepinephrine levels in RGS2-deficient mice. Auton Neurosci. 136 (1-2), 52-57 (2007).
  28. Schwarte, L. A., Zuurbier, C. J., Ince, C. Mechanical ventilation of mice. Basic Res Cardiol. 95 (6), 510-520 (2000).
  29. Zuurbier, C. J., Emons, V. M., Ince, C. Hemodynamics of anesthetized ventilated mouse models: aspects of anesthetics, fluid support, and strain. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 282 (6), H2099-H2105 (2002).
  30. Farnham, M. M., O'Connor, E. T., Wilson, R. J., Pilowsky, P. M. Surgical preparation of mice for recording cardiorespiratory parameters in vivo. J Neurosci Methods. 248, 41-45 (2015).
  31. Cuellar, J. M., Antognini, J. F., Carstens, E. An in vivo method for recording single unit activity in lumbar spinal cord in mice anesthetized with a volatile anesthetic. Brain Res Brain Res Protoc. 13 (2), 126-134 (2004).
  32. Carruba, M. O., Bondiolotti, G., Picotti, G. B., Catteruccia, N., Da Prada, M. Effects of diethyl ether, halothane, ketamine and urethane on sympathetic activity in the rat. Eur J Pharmacol. 134 (1), 15-24 (1987).
  33. Wang, G. F., Mao, X. J., Chen, Z. J. Urethane suppresses renal sympathetic nerve activity in Wistar rats. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 18 (10), 1454-1457 (2014).
  34. Xu, H., et al. Effects of induced hypothermia on renal sympathetic nerve activity and baroreceptor reflex in urethane-anesthetized rabbits. Crit Care Med. 28 (12), 3854-3860 (2000).
  35. Shimokawa, A., Kunitake, T., Takasaki, M., Kannan, H. Differential effects of anesthetics on sympathetic nerve activity and arterial baroreceptor reflex in chronically instrumented rats. J Auton Nerv Syst. 72 (1), 46-54 (1998).
  36. Janssen, B. J., Smits, J. F. Autonomic control of blood pressure in mice: basic physiology and effects of genetic modification. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 282 (6), R1545-R1564 (2002).
  37. Nunn, N., Feetham, C. H., Martin, J., Barrett-Jolley, R., Plagge, A. Elevated blood pressure, heart rate and body temperature in mice lacking the XLalphas protein of the Gnas locus is due to increased sympathetic tone. Exp Physiol. 98 (10), 1432-1445 (2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Kan Bas nc zlemeBilin li FarelerJuguler Ven z KateterBipolar ElektrotRadyo TelemetriCerrahi Enstr mantasyonGanglionik BlokajFizyolojik Kay tOtonom Tonus De erlendirmesi
Böbrek sempatik sinir etkinliği ve kan basıncı bilinçli, intravenöz infüzyon ile aynı anda kayıt için yeni yaklaşımın kontrolsüz fareler.
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.