Yararlı bakterilerle oral ön tedavi ile sıçanlarda ısı stresi etkilerinin önlenmesi için bir protokol tanımladık. Bu protokol, çeşitli uygulama yolları ve farklı bileşiklerin analizi için değiştirilebilir ve kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Yararlı bakterilerle oral ön tedavi ile sıçanlarda ısı stresi etkilerinin önlenmesi için bir protokol tanımladık. Bu protokol, çeşitli uygulama yolları ve farklı bileşiklerin analizi için değiştirilebilir ve kullanılabilir.
Bu çalışma, sıcak stresine bağlı komplikasyonlar karşı Bacillus subtilis suşu koruyucu etkisini değerlendirmek için tasarlanmıştır. Otuz iki Sprague-Dawley fareleri, bu çalışmada kullanılmıştır. Hayvanlar oral B ile iki gün süreyle günde iki kez uygulandı subtilis BSB3 zorlanma veya PBS. Ertesi gün, son tedaviden sonra, her bir grup bölündü ve iki deney grubu (bir PBS ile muamele edilmiş ve bir B. subtilis ile muamele) 25 dakika süreyle 45 ° C de yerleştirildi. İki kontrol grubu, oda sıcaklığında 25 dakika süreyle kaldı. Tüm sıçanlara ötenazi yapıldı ve farklı parametrelerin tüm gruplarda analiz edildi. Isı stresinin olumsuz etkileri villus yüksekliği ve bağırsak epiteli toplam mukozal kalınlığının azalması ile kayıtlı; lümenden bakteri translokasyonu; Kandaki (LPS) seviyesi lipopolisakkaridinin ait eritrositlerin vezikülasyon ve yükseklik arttı. tedavinin koruyucu etkinliği ön tarafından değerlendirilirBu yan etkilerin giriflim. Protokol ısı stresi komplikasyonların önlenmesi için bakterilerle sıçanların oral tedavi için ayarlanmış, ancak bu protokol değiştirilebilir ve diğer uygulama yolları için ve farklı bileşiklerin analizi için kullanılabilir.
Farklı stres faktörleri insan ve hayvan sağlığını etkiler. Sıcaklık, kronik, akut ve hatta ölümcül hastalıklara neden olan en stresli faktörlerden biridir1. Bağırsak morfolojisindeki değişiklikler ve ısı stresinden sonra bağırsak bariyeri bütünlüğünün kaybı birçok durumda belgelenmiştir2,3. Bu koruyucu bariyer, bağırsak bakterilerinin ve toksinlerinin, özellikle lipopolisakkaritlerin (LPS) lümenden iç dolaşıma4,5 translokasyonuna karşı savunmadan sorumludur. Bağırsak mikrobiyotasının stabilitesi, bağırsak bariyer fonksiyonunu, konağın bağışıklık tepkisini ve stres koşullarına toleransı önemli ölçüde etkiler6. Bu nedenle, bağırsak mikrobiyotasının modülasyonu, strese bağlı olumsuz etkilerin önlenmesi için yeni bir yaklaşım sağlayabilir.
Yararlı bakteriler, ishal, inflamatuar bağırsak hastalığı, atopik dermatit, metabolik bozukluklar gibi çeşitli klinik durumların başarılı yönetimi için bağırsak mikrobiyotasını değiştirmek için umut verici bir strateji olarak kullanılmıştır7-10. Yararlı bakterilerin probiyotik etkileri, bağırsak sağlığını desteklemek için temel metabolitlerin üretimini, bağışıklık sisteminin uyarılmasını, laktoz toleransının teşvik edilmesini, epitel disfonksiyonunun restorasyonunu içerir. Probiyotikler in vitro ve hayvan modellerinde strese bağlı komplikasyonların önlenmesinde etkili olmuştur11,12.
Araştırmacılar, Bacillus bakterilerine probiyotik olarak daha fazla dikkat ettiler çünkü bu bakteriler bağırsak homeostazınıdestekliyor 13 ve konakçı14 üzerinde faydalı etkileri var. Önceki verilerimiz, Bacillus probiyotiklerinin in vitro15,16 ve klinik çalışmalarda17,18 patojenlere karşı yüksek etkinliğini göstermiştir. Bu çalışmada, B. subtilis BSB3 suşunun ısı stresi sonrası komplikasyonlara karşı önleyici etkisini değerlendirmeyi amaçladık.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm deney prosedürleri Auburn Üniversitesi IACUC, Auburn, Alabama tarafından kabul edildi.
Kültür Medya, Yemekleri ve Bakteriyel Kültür 1. Hazırlık
2. Hayvanlar
3. Deney Tasarımı
4. Cerrahi Prosedür
Bakteriyel Translokasyon 5. Analiz
6. Histolojik analiz
7. Sitokin Deneyi
8. Lipopolisakkarit Deneyi
Kan 9. Yüksek Çözünürlüklü Işık Mikroskopi
10. İstatistikitikler
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Isı stresi önce ve hemen sonrasında hayvanların ortalama vücut ısısı sırasıyla 36.7 ± 0.07 o C ve 40.3 ± 0.17 o C, (p <0.05). Isı (Grup 3), maruziyeti villi yüksekliği önemli ölçüde inhibe toplam mukozal kalınlığı ile sonuçlanmıştır (Şekil 2, 3). ısı zararlı etkisinden stres korumalı bağırsak önce BSB3 suşu Oral uygulama.
bağırsaktan bakteri translokasyonu bakteriyolojik mezenterik len...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Ciddi sağlık koşullarında 29 yüksek sıcaklık sonuçlarına maruz kalmak. Önleme ve ısı stresi ile ilgili komplikasyonların erken teşhis hayati önem 30 taşımaktadır. sunulan protokol ısı stresi olumsuz etkilerin önlenmesi için çeşitli yaklaşımların etkinliğini değerlendirmek için kullanılabilir.
Bu protokol kapsamında kritik adımlar şunlardır: ısıl işlem prosedürü (45 o C, 25 dakika); toplama ve enterotoksin ile kirlenmesini önlemek için kan i...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.
Bu çalışma, Auburn Üniversitesi fonu FOP 101002-139294-2050 tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | P4417 | |
| Etil Alkol | Pharmco ürünleri A.Ş. Brookfield, CT, ABD | 64-17-5 | |
| Agar | VWR | 97064-334 | |
| MacConkey agar plakaları | VWR | 470180-742 | |
| %5 kanlı agar plakaları | VWR | 89405-024 | |
| VWR | 89405-032 | 'içeren Brucella kan agar plakası | |
| s Fiksatif Elektron | Mikroskobu Bilimleri, Hatfield, PA, ABD | 15990 | |
| IL-10 Sıçan ELISA kiti | Invitrogen, Camarillo, CA, ABD | KRC0101 | |
| IL-1beta Sıçan ELISA Kiti | Invitrogen, Camarillo, CA, ABD | KRC0011 | |
| IL-6 Sıçan ELISA Kiti | Invitrogen, Camarillo, CA, ABD | KRC0061 | |
| INF-gama Sıçan ELISA Kiti | Invitrogen, Camarillo, CA, ABD | ||
| TNF-alfa Sıçan ELISA Kiti | Invitrogen, Camarillo, CA, ABD | KRC3011 | |
| Sıçan LPS ELISA Kiti | NeoBioLab, MA, ABD | RL0275 | |
| Çevre Odası 6020-1 | Caron, Marietta, OH, ABD | 6020-1 | |
| Santrifüj ve nbsp; | Beckman Coulter, Indianapolis, IN, ABD | Optima L-90K | |
| Ultra Santrifüj | |||
| Işık mikroskobu optik sistem | CitoViva Technology Inc., Auburn, AL | ||
| Koloni sayacı | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, ABD | RE-3325 | |
| Dondurucu | Haier, Brooklyn, NY, ABD | HCMO50LA | |
| Ultra mikroplaka okuyucu | Bio-Tek Enstrüman, Winooski, VT, ABD | ELx 808 | |
| Otomatik Şerit Yıkayıcı | Bio-Tek Alet, Winooski, VT, ABD | ELx50 | |
| Pipetler | Gilson, Pipetman, Fransa | P100, P200, P1000 | |
| C24 İnkübatör Çalkalayıcı | New Brunswick Scientific, Enfield, CT, ABD | Klasik C24 | |
| Sallanan Çalkalayıcı | Güvenilir Bilimsel, Inc., Nesbit, MS, ABD | 55 | |
| Petri kabı | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, ABD | 875713 | 100 mm x 15 mm |
| SterilGard III Advance | The Baker Company, Sanford, ME, ABD | SG403 | |
| Kültür Yetiştirme Şişeleri | Corning Incorporated, Corning, NY, ABD | 4995 | PYREX 250 ml Erlenmeyer şişeleri |
| Optik Spektrometre Genesys 20 | Termo Bilimsel, Waltham, MA, ABD. | 4001 | |
| Sony DXC-33 Video kamera | Sony | ||
| Richardson test slaydı | Elektron Mikroskobu Bilimi, Hatfield, PA, ABD | 80303 | |
| Millipore su arıtma sistemi | Millipore | Direct-Q | |
| Image-Pro Plus yazılımı | Medya Sibernetik, MD, ABD | ||
| Üçlü Işın Dengesi | OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, ABD | ||
| Doku Homojenizatör, Dounce | VWR | 71000-518 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.