Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Isı Önlenmesi ile Sıçanlarda Olumsuz Etkileri Stres

7K görüntülenme

DOI:

10.3791/54122

11 Temmuz 2016

Bu makalede

Özet

Yararlı bakterilerle oral ön tedavi ile sıçanlarda ısı stresi etkilerinin önlenmesi için bir protokol tanımladık. Bu protokol, çeşitli uygulama yolları ve farklı bileşiklerin analizi için değiştirilebilir ve kullanılabilir.

Özet

Bu çalışma, sıcak stresine bağlı komplikasyonlar karşı Bacillus subtilis suşu koruyucu etkisini değerlendirmek için tasarlanmıştır. Otuz iki Sprague-Dawley fareleri, bu çalışmada kullanılmıştır. Hayvanlar oral B ile iki gün süreyle günde iki kez uygulandı subtilis BSB3 zorlanma veya PBS. Ertesi gün, son tedaviden sonra, her bir grup bölündü ve iki deney grubu (bir PBS ile muamele edilmiş ve bir B. subtilis ile muamele) 25 dakika süreyle 45 ° C de yerleştirildi. İki kontrol grubu, oda sıcaklığında 25 dakika süreyle kaldı. Tüm sıçanlara ötenazi yapıldı ve farklı parametrelerin tüm gruplarda analiz edildi. Isı stresinin olumsuz etkileri villus yüksekliği ve bağırsak epiteli toplam mukozal kalınlığının azalması ile kayıtlı; lümenden bakteri translokasyonu; Kandaki (LPS) seviyesi lipopolisakkaridinin ait eritrositlerin vezikülasyon ve yükseklik arttı. tedavinin koruyucu etkinliği ön tarafından değerlendirilirBu yan etkilerin giriflim. Protokol ısı stresi komplikasyonların önlenmesi için bakterilerle sıçanların oral tedavi için ayarlanmış, ancak bu protokol değiştirilebilir ve diğer uygulama yolları için ve farklı bileşiklerin analizi için kullanılabilir.

Giriş

Farklı stres faktörleri insan ve hayvan sağlığını etkiler. Sıcaklık, kronik, akut ve hatta ölümcül hastalıklara neden olan en stresli faktörlerden biridir1. Bağırsak morfolojisindeki değişiklikler ve ısı stresinden sonra bağırsak bariyeri bütünlüğünün kaybı birçok durumda belgelenmiştir2,3. Bu koruyucu bariyer, bağırsak bakterilerinin ve toksinlerinin, özellikle lipopolisakkaritlerin (LPS) lümenden iç dolaşıma4,5 translokasyonuna karşı savunmadan sorumludur. Bağırsak mikrobiyotasının stabilitesi, bağırsak bariyer fonksiyonunu, konağın bağışıklık tepkisini ve stres koşullarına toleransı önemli ölçüde etkiler6. Bu nedenle, bağırsak mikrobiyotasının modülasyonu, strese bağlı olumsuz etkilerin önlenmesi için yeni bir yaklaşım sağlayabilir.

Yararlı bakteriler, ishal, inflamatuar bağırsak hastalığı, atopik dermatit, metabolik bozukluklar gibi çeşitli klinik durumların başarılı yönetimi için bağırsak mikrobiyotasını değiştirmek için umut verici bir strateji olarak kullanılmıştır7-10. Yararlı bakterilerin probiyotik etkileri, bağırsak sağlığını desteklemek için temel metabolitlerin üretimini, bağışıklık sisteminin uyarılmasını, laktoz toleransının teşvik edilmesini, epitel disfonksiyonunun restorasyonunu içerir. Probiyotikler in vitro ve hayvan modellerinde strese bağlı komplikasyonların önlenmesinde etkili olmuştur11,12.

Araştırmacılar, Bacillus bakterilerine probiyotik olarak daha fazla dikkat ettiler çünkü bu bakteriler bağırsak homeostazınıdestekliyor 13 ve konakçı14 üzerinde faydalı etkileri var. Önceki verilerimiz, Bacillus probiyotiklerinin in vitro15,16 ve klinik çalışmalarda17,18 patojenlere karşı yüksek etkinliğini göstermiştir. Bu çalışmada, B. subtilis BSB3 suşunun ısı stresi sonrası komplikasyonlara karşı önleyici etkisini değerlendirmeyi amaçladık.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deney prosedürleri Auburn Üniversitesi IACUC, Auburn, Alabama tarafından kabul edildi.

Kültür Medya, Yemekleri ve Bakteriyel Kültür 1. Hazırlık

  1. Bir besleyici agar plakası üzerinde bir gece büyütüldü Bacillus subtilis BSB3 kültürünün tek bir koloni ile bir şişe içinde besleyici sıvı 10 ml inoküle.
  2. Litre başına sporlaşma ortamının 19 (500 ml yapmak: Bacto besleyici Broth, 8 g,% 10 (ağ / hac) KCI, 10 mi,% 1.2 (h) 4 x 7H 2, O, 10 mi MgSO / a; ağar, 15 g) ve 20 dakika boyunca 121 o C'de otoklav. Aşağıdaki steril çözümleri 50 o C soğumasına ve eklemek için izin: 1 M Ca (NO 3) 2, 1 ml; 0.01 M MnCl2, 1 mi; 1 ila 4 mm, 1 ml FeSO.
  3. Oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 40 ° C'nin soğutun hazırlanan orta ve steril bir kabine 20 steril Petri kapları her birine 25 ml dökün. orta gecede katılaşmaya edelim.
  4. B gecelik kültürün 0.5 ml yayıldıacillus subtilis BSB3 Petri kutularına ortamın yüzeyi üzerine. % 90 Sporulationun kadar 5 gün boyunca 37 o C'de kültür inkübe. yüksek çözünürlüklü mikroskopi ile faz-parlak sporlar ortaya koymaktadır.
  5. levhaya steril fosfat tamponlu salin (PBS) 1 ml ekleme ve steril bir hücre dağıtıcı ile bir yüzeyden bakteriler, kazınarak Hasat bakteri. ihtiyaç kadar buzdolabında süspansiyon saklayın.
  6. 37 o C'de 24 saat - 18 kuluçkalandı sporlaşma ortamının plakaları üzerinde bakteri süspansiyonu uygun seyreltme (10 -5 -6 ila 10), 0.1 ml kaplama bakterilerin canlılığı teyit
  7. Bir koloni sayacı kullanılarak plakalar üzerinde bakteri kolonileri sayın ve test süspansiyon bakteri titresi hesaplamak. Nihai konsantrasyon 1 x 10 8 CFU / ml'lik son yoğunluğa seyreltildi bakteriyel süspansiyon hazırlayın.

2. Hayvanlar

  1. 300 gr - 32 erkek Sprague-Dawley sıçanları (250 kullanın). standart pelet yemi ve su ücretsiz erişim ile spesifik patojen free şartlarda hayvanları korumak. Ortalama sıcaklığı (21 ± 1 ° C), nem (% 50 ± 5) ve 12 saat ışık-karanlık döngüsü kurmak.

3. Deney Tasarımı

  1. Iklimlendirme 2 gün sonra, oral gavaj 11 hayvanların tedavisini başlatın. ağızdan sonda iğne ile şırınga kullanın. B. ile 16 sıçan tedavi subtilis BSB3 süspansiyonu (sıçan başına 1 mi), iki gün boyunca günde iki kez (B. subtilis grubu). PBS ile 16 sıçan (sıçan başına 1 mi), iki gün (PBS grubu) (Şekil 1) için günde iki kez tedavi edin.
  2. Grup 1- kontrolü (PBS / hiçbir stres), Grup 2- B: Tedaviden sonra, her gruba (grup başına 8 sıçan) subdivide subtilis (B. subtilis / hiçbir stres), Grup 3- stres (PBS / ısı stresi) ve Grup 4- B. subtilis + stres (B. subtilis / ısı stresi).
  3. Bir elec kullanarak her sıçanın rektal sıcaklığını ölçmekdijital termometre tronic. 25 dakika için oda sıcaklığında Grup 1 ve 2'nin sıçanları tutun. 45 o C'de iklim odasına gruplar 3 ve 4 ve bağıl nem 25 dakika boyunca% 55 yer hayvanları.
  4. Daha sonra, bir elektronik dijital bir termometre kullanılarak tüm gruplarda, her sıçanın rektum sıcaklığının ölçülmesi. 4 saat oda sıcaklığında tüm hayvanlar koyun.
  5. Bir yapışmalı anestezi kavanoza - (% 4 2) ve sıçanlar derinden (ayak tutam yanıt yokluğu) anestezi kadar dikkat izofluran ile sıçan anestezisi. Bir Giyotin ile hızlı dekapitasyon sıçan Euthanize.
  6. Serum elde ve hemen mikroskobik inceleme için bir pipet ile kan örnekleri (her sıçan 7 ul) almak için apirojen tüpler içine apirojen pipetler ile - (16 ml 15) her sıçan 20 gövde kan toplayın.
  7. pıhtılaşmayı izin vermek için en az 30 dakika boyunca bir soğutucuda kan Tüpleri koyun. 20 o C santrifüj tüpleri, 7000 xg 10 dakika ve hızlı bir şekildeBir pipet ile serum kaldırın. Tahlil kadar -20 o C'de her 50 ul birimlere sıçan ve mağazadan alınan Kısım serumu.

4. Cerrahi Prosedür

  1. Kes / elektrikli makas ile karkasın alt karın ve göğüs tüm kürk Döşeme. steril bir kabine karkas yerleştirin ve% 70 alkol ile karkas traş yüzeyi davranın.
  2. karın ortasındaki bir yarık oluşturmak için Steril bir bisturi bıçağını kullanarak. Steril cımbız kullanarak her sıçandan karaciğer, mezenterik lenf düğümleri, dalak ve ince bağırsak çıkarın.

Bakteriyel Translokasyon 5. Analiz

  1. önceden tartılmış steril tüplere karaciğer, mezenterik lenf düğümleri ve dalak her bir örnek yerleştirilir ve tartılır. Bir numune ile bir boru ve ağırlıkça boş borunun ağırlığı arasındaki fark olarak numunenin ağırlığı hesaplanır.
  2. 1:10 seyreltme elde etmek üzere tüpe steril PBS ekleyin (ağırlık / hacim) numune ve homojen birHomojen bir süspansiyon elde etmek için 21 steril bir cam doku homojenleştirici ile her bir örnek çer-.
  3. Steril PBS Her numunenin seri dilüsyonları (10 -1 -4 10) konur. Plaka hemin (0.005 g / L) ve Vitamin K1 (0.01 gr / lt) plakalı MacConkey en yüzeyi ve% 5, kan agar ve Brucella, kan agar üzerine her bir doku tüm seyreltileri, 0.1 mi.
  4. 37 o C 22, MacConkey en ve% 5 kanlı agar plakaları aerobik ve Brucella kan agar plakaları anaerobik koşullarda inkübe edin.
  5. 24 saat sonra aerobik bakteri kolonileri sayın ve inkübasyon 48 saat, bir koloni sayacı kullandıktan sonra anaerobik bakteri kolonileri. bir doku gramı koloni oluşturan birim (CFU) sayısı sonuçlarını ifade eder.

6. Histolojik analiz

  1. Cerrahi işlem her sıçan ince bağırsak örnekleri çıkarın (- 4.2 4.1 adımlar). , Parafin gömmek Bouin Sabitleme örnekleri, Fixhematoksilen ve eozin standart prosedürler 23 kullanılarak 6 mikron bölümleri ve leke kesitler hazırlamak.
  2. Her bir örnek (büyütme 100X) 24 intestinal villus ve toplam mukozal kalınlığı yüksekliğini ölçmek için yüksek çözünürlüklü mikroskop sistemi kullanın. Her bir sıçandan 4 örnekleri analiz eder ve her bir örnek, en az yirmi ölçümler yapmak. mikrometre sonuçları ifade edin.

7. Sitokin Deneyi

  1. IL-1 p ticari sıçan ELISA kitleri kullanın; IL-6; TNF-α, γ INF-, ve IL-10, üreticinin protokolüne uygun olarak, serum sitokin düzeylerinin ölçülmesi için.
  2. İlgili kiti için standartlar kullanılarak test numunelerin her set için standart eğrileri oluşturmak. uygun standart eğri ile deneysel verilerle karşılaştırılması ile her numunedeki sitokinlerin düzeyini tanımlayın.

8. Lipopolisakkarit Deneyi

  1. uygun bir sıçan LPS ELISA kiti kullanılarak serumda LPS seviyesini analizÜreticinin protokolü. Standart eğri değerleri ile elde edilen değerlerin karşılaştırılması ile örnekleri LPS konsantrasyonunun tahmin edilmesi.

Kan 9. Yüksek Çözünürlüklü Işık Mikroskopi

  1. Daha önce 25,26 açıklanan mikroskop sistemi kullanın. Canlı görüntüleri kaydetmek için bir mikroskop sistemi için taban ve video kamera ve bilgisayar 25 gibi titreşim izolasyonu platformu kullanın. Daha önce 27 açıklandığı gibi bir Richardson slayt kullanarak test görüntüleri kalibre edin.
  2. Bir cam slayt, lamel, fotoğrafta Her bir sıçanın taze çekilmiş kan 7 ul yerleştirin ve her bir örnek (büyütme 1,700X) 72 × 53,3 mm 2 on resim çerçeveleri kaydedin.
  3. gerçek zamanlı olarak yüksek çözünürlüklü direkt görüş optik görüntü sağlar yazılımı kullanarak veziküllerin konsantrasyonunu ölçün. Her deneysel koşul 28 20 görüntü kareleri minimum inceleyin.

10. İstatistikitikler

  1. ortalama ve standart sapma gibi tüm değerleri ifade eder. istatistiksel analiz ve grafik komplo gerçekleştirin. , Iki örnek t-testi ile analiz sonuçları istatistiksel anlamlılık tanımlamak için 0.05 anlamlılık düzeyini ayarlamak.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Isı stresi önce ve hemen sonrasında hayvanların ortalama vücut ısısı sırasıyla 36.7 ± 0.07 o C ve 40.3 ± 0.17 o C, (p <0.05). Isı (Grup 3), maruziyeti villi yüksekliği önemli ölçüde inhibe toplam mukozal kalınlığı ile sonuçlanmıştır (Şekil 2, 3). ısı zararlı etkisinden stres korumalı bağırsak önce BSB3 suşu Oral uygulama.

bağırsaktan bakteri translokasyonu bakteriyolojik mezenterik len...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Ciddi sağlık koşullarında 29 yüksek sıcaklık sonuçlarına maruz kalmak. Önleme ve ısı stresi ile ilgili komplikasyonların erken teşhis hayati önem 30 taşımaktadır. sunulan protokol ısı stresi olumsuz etkilerin önlenmesi için çeşitli yaklaşımların etkinliğini değerlendirmek için kullanılabilir.

Bu protokol kapsamında kritik adımlar şunlardır: ısıl işlem prosedürü (45 o C, 25 dakika); toplama ve enterotoksin ile kirlenmesini önlemek için kan i...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Teşekkürler

Bu çalışma, Auburn Üniversitesi fonu FOP 101002-139294-2050 tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS)Sigma-Aldrich,  St. Louis, MOP4417
Etil Alkol Pharmco ürünleri A.Ş. Brookfield, CT, ABD 64-17-5
AgarVWR97064-334
MacConkey agar plakalarıVWR470180-742
%5 kanlı agar plakalarıVWR89405-024
VWR89405-032'içeren Brucella kan agar plakası
s Fiksatif ElektronMikroskobu Bilimleri, Hatfield, PA, ABD15990
IL-10 Sıçan ELISA kitiInvitrogen, Camarillo, CA, ABDKRC0101
IL-1beta Sıçan ELISA KitiInvitrogen, Camarillo, CA, ABDKRC0011
IL-6 Sıçan ELISA KitiInvitrogen, Camarillo, CA, ABDKRC0061
INF-gama Sıçan ELISA KitiInvitrogen, Camarillo, CA, ABD
TNF-alfa Sıçan ELISA KitiInvitrogen, Camarillo, CA, ABDKRC3011
Sıçan LPS ELISA KitiNeoBioLab, MA, ABDRL0275
Çevre Odası 6020-1Caron, Marietta, OH, ABD6020-1
Santrifüj ve nbsp;Beckman Coulter, Indianapolis, IN, ABDOptima L-90K
Ultra Santrifüj
Işık mikroskobu optik sistemCitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Koloni sayacıFisher Scientific, Pittsburgh, PA, ABDRE-3325
DondurucuHaier, Brooklyn, NY, ABDHCMO50LA
Ultra mikroplaka okuyucuBio-Tek Enstrüman, Winooski, VT, ABDELx 808
Otomatik Şerit YıkayıcıBio-Tek Alet, Winooski, VT, ABDELx50
PipetlerGilson, Pipetman, FransaP100, P200, P1000
C24 İnkübatör ÇalkalayıcıNew Brunswick Scientific, Enfield, CT, ABDKlasik C24
Sallanan Çalkalayıcı Güvenilir Bilimsel, Inc., Nesbit, MS, ABD55
Petri kabıFisher Scientific, Pittsburgh, PA, ABD875713100 mm x 15 mm
SterilGard III AdvanceThe Baker Company, Sanford, ME, ABDSG403
Kültür Yetiştirme ŞişeleriCorning Incorporated, Corning, NY, ABD4995PYREX 250 ml Erlenmeyer şişeleri
Optik Spektrometre Genesys 20Termo Bilimsel, Waltham, MA, ABD.4001
Sony DXC-33 Video kameraSony
Richardson test slaydıElektron Mikroskobu Bilimi, Hatfield, PA, ABD80303
Millipore su arıtma sistemiMilliporeDirect-Q
Image-Pro Plus yazılımıMedya Sibernetik, MD, ABD
Üçlü Işın DengesiOHAUS Corporation, Parsippany, NJ, ABD
Doku Homojenizatör, DounceVWR71000-518
Hemin ve K Vitamini BouinKRC4021

Kaynaklar

  1. Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J. Cardiovascular function in the heat-stressed human. Acta Physiol. 199, 407-423 (2010).
  2. Lambert, G. P. Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke. Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).
  3. Yu, J., et al. Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study. Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).
  4. Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. New Frontiers in Thermoregulation and Exercise. Sports Med. 16, 163-167 (1993).
  5. Lambert, G. P. Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects. J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).
  6. Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance. Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).
  7. Khan, M. W., et al. Microbes, intestinal inflammation and probiotics. Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).
  8. Quigley, E. M. M. Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults. Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).
  9. Gore, C., et al. Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years. Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).
  10. Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. Gut microbiota, probiotics and diabetes. Nutr. J. 13, (2014).
  11. Eutamene, H., et al. Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats. J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).
  12. Ait-Belgnaoui, A., et al. Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats. Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).
  13. Fujiya, M., et al. The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter. Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).
  14. Cutting, S. M. Bacillus probiotics. Food Microbiol. 28, 214-220 (2011).
  15. Pinchuk, I. V., et al. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics. Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).
  16. Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V. Probiotics against Campylobacter pathogens. J. Travel Med. 4, 167-170 (1997).
  17. Gracheva, N. M., et al. The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).
  18. Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. JMM Case Report. 1, (2014).
  19. Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores. Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).
  20. Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. eds H.G. Vogel & W.H. Vogel. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).
  21. Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice. J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).
  22. Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell. 118, 229-241 (2004).
  23. Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery. J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).
  24. Ribeiro, S. R., et al. Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet. Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).
  25. Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser. Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).
  26. Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats. J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).
  27. Richardson, T. M. Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at. Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).
  28. Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures. J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).
  29. Leon, L. R., Helwig, B. G. Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response. J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).
  30. Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit. Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Oral GavageSpor lasyon BesiyeriBakteriyel TranslokasyonVilli Y ksekli iLPS SeviyeleriMezenterik Lenf NodlarY ksek z n rl kl MikroskopiKoloni Olu turan Birimler