Yöntem makalesi

VacuSIP, bir Geliştirilmiş INEX Yöntemi için

10.7K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/54221

⸱

3 Ağustos 2016

 ,  ,  , 
1Department of Marine Ecology, Centre d’Estudis Avançats de Blanes (CEAB-CSIC), 2Department of Marine Biology and Oceanography, Institut de Ciències del Mar (ICM-CSIC), 3The School of Marine Science, Ruppin Academic Center

Bu makalede

Özet

Suyun temiz ve doğru noktadan örneklenmesi için basit, müdahaleci olmayan ve güvenilir bir yöntem olan VacuSIP'i tanıtıyoruz. Sistem, partikül ve çözünmüş bileşiklerin uzaklaştırılmasını ve atılımını temiz bir şekilde ölçmek için bentik süspansiyon besleyiciler tarafından solunan ve solunan suyun yerinde eşzamanlı olarak toplanması için geliştirilmiş ve değerlendirilmiştir.

Özet

Bentik süspansiyon besleyiciler, deniz ekosistemlerinin işleyişinde önemli roller oynamaktadır. Büyük hacimlerde suyu filtreleyerek, plankton ve döküntüleri uzaklaştırarak ve partikül ve çözünmüş bileşikleri dışarı çıkararak, bentik-pelajik eşleşme için önemli maddeler olarak işlev görürler. Süspansiyon besleyiciler (süngerler, ascidyenler, poliketler, çift kabuklular gibi) tarafından uzaklaştırılan ve atılan bileşiklerin doğru bir şekilde ölçülmesi, fizyolojilerinin, metabolizmalarının ve beslenme ekolojilerinin incelenmesi için çok önemlidir ve bu organizmaların aracılık ettiği besin akışlarının ekolojik uygunluğunu belirlemek için esastır. Bununla birlikte, süspansiyon besleyicilerin doğada partikül ve çözünmüş bileşikleri işleme hızının değerlendirilmesi, şu anda mevcut metodolojilerin sınırlamaları ile sınırlıdır. Amacımız, bentik süspansiyonlu besleyicilerin mevcut açıklığı gibi belirli bir noktadan yerinde temiz ve kontrollü su örneklemesine izin verecek basit, güvenilir ve müdahaleci olmayan bir yöntem geliştirmekti. Yöntemimiz, özel olarak üretilmiş bir manipülatör cihazına monte edilmiş ve örneklenen organizmanın ekshalant deliğinin içine dikkatlice yerleştirilmiş dakika tüpleri kullanarak, incelenen organizmanın solunan ve solunan suyunun aynı anda örneklenmesine izin verir. Her tüpün distal ucuna bağlı bir şırınga iğnesi ile toplama kabı üzerinde bir septumun delinmesi, dış basıncın, numune alınan suyu numune alma tüpünden kaba yavaşça zorlamasına izin verir. Yavaş ve kontrollü numune alma hızı, sudaki doğal yamalılığın entegre edilmesine izin verirken, kontaminasyonsuz numune alma sağlar. Farklı partikül ve çözünmüş bileşiklerin analizleri için en uygun filtreleme cihazları, toplama kabı ve depolama prosedürleri için öneriler sunuyoruz. VacuSIP sistemi, farklı ekosistemlerdeki filtre besleyicilerin fizyolojisini ve işlevsel rolünü değerlendirmek için ucuz ve öğrenmesi ve uygulaması kolay, doğal koşullarda bozulmamış süspansiyon besleyici metabolizmasının nicelleştirilmesi için güvenilir bir yöntem sunar.

Giriş

Bentik süspansiyon besleyiciler deniz ekosistemlerinin 1 işleyişinde temel rol oynamaktadır. Su 2,3 geniş hacimli filtreleyerek, onlar kaldırmak ve partiküler (plankton ve detritus) ve (burada ve referanslar) çözünmüş bileşikler 1 ifraz ve bentik-pelajik bağlantı 4,5 ve besin döngüsü 6,7 önemli ajan vardır. Doğru partikül ve çözünmüş bileşikler kaldırılır ve (örneğin, süngerler, Ascidians, polychaetesi, ve Bivalvlerden gibi) bentik süspansiyon besleyiciler tarafından atılır ölçme onların fizyolojisi, metabolizma ve beslenme ekoloji anlamak esastır. Birlikte hızı ölçümleri pompalama ile, aynı zamanda bu organizmalar ve su kalitesi yanı sıra ekosistem ölçekli süreçleri ekolojik etkisi aracılık ettiği besin akı bir miktarının sağlar.

kaldırma ve üretim partikül oranı ve çözünmüş com ölçme uygun yöntemi seçmeSüspansiyon filtre besleyiciler tarafından lira beslenme aktivitesini 8 ile ilgili güvenilir veriler elde etmek için çok önemlidir. Riisgård ve diğerleri, uygunsuz yöntemler önyargı sonuçları işaret ettiği gibi, deneysel koşullar deforme yenmesi ve bazı maddelerin atılımı yanlış tahminler üretmek ve bu organizmalar tarafından işlenen besin akı hatalı ölçümü yol açabilir.

iki en sık kullanılan yöntemler inkübasyon (dolaylı teknikler) ya da ortam eşzamanlı toplama ve üfledi su (doğrudan teknikleri) ya dahil filtre besleyiciler partikül ve çözünmüş besin akıları ölçmek için. İnkübasyon yöntemleri inkübe su içinde parçacık konsantrasyonu ve çözünmüş besin değişim oranını ölçmek ve yeterli kontrol 8 ile karşılaştırıldığında, üretim veya kaldırma hızları tahmin dayanmaktadır. Bununla birlikte, bir inkübasyon odası içinde bir organizma içine kendi Feedin değiştirebilirg nedeniyle ve / veya gıda konsantrasyonda nedeniyle ya da boşaltım kuluçka su 7,9 bileşiklerin (ve referanslar orada) birikimine oksijen bir düşüş nedeniyle doğal akış rejiminde değişiklikler davranışı pompalama. Kapatılma ve modifiye su etkilerine ek olarak, inkübasyon teknikleri büyük bir eğilim yeniden filtreleme etkileri (örnek 10 bakınız) kaynaklanmaktadır. Bu metodolojik sorunların bazıları inkübasyon kabına 11 sağ hacim ve şekil kullanarak veya yerinde 12 bir sirkülasyon çan kavanoz sisteminin getirilmesi ile üstesinden olmasına rağmen, bu tekniğin genellikle çıkarma ve üretim oranları göz ardı etmektedir. Bu çözünmüş organik azot (DON) ve karbon (DOC) ya da inorganik besin olarak çözünmüş bileşiklerin metabolizması miktarının, inkübasyon teknikleri 13 kaynaklanan önyargılar özellikle yatkın olduğu kanıtlanmıştır.

60'ların sonlarında ve 70'lerin başlarında Henry Reiswig içinde9,14,15 ayrı yerinde organizmalar tarafından inhale ve üfledi su örnekleme yoluyla, dev Karayip süngerler tarafından parçacık kaldırma ölçmek için doğrudan tekniklerin uygulanmasını öncülük etmiştir. Daha küçük süspansiyon besleyiciler ve daha zorlu sualtı koşullarda Reiswig tekniğini uygulamak için zorluk nedeniyle, bu alandaki araştırmaların toplu çoğunlukla dolaylı kuluçka teknikleri 16 kullanılarak (in vitro) laboratuvara sınırlandırılmıştır. Yahel ve arkadaşları küçük çaplı şartlarında çalışmak için in situ tekniği Reiswig doğrudan sığdırılmıştır. Bu yöntem, Inex 16 olarak adlandırılan, rahatsız organizmalar tarafından (Ex) (In) inhale ve ekshale su eşzamanlı sualtı örnekleme dayanmaktadır. Numunelerin bir çift (inex) arasında bir bir madde (örneğin, bakteri) farklı konsantrasyonlarda hayvan tarafından bu maddenin tutma (veya üretimi) bir ölçüsünü sağlar. INEX tekniği açık uçlu tüpler istihdam vepasif toplama tüpünde ortam su yerine çalışılan organizmanın pompalama faaliyeti tarafından üretilen excurrent jet dayanır. Yahel ve arkadaşları başarılı 15 farklı süspansiyon çalışmada bu tekniği uygulanmış olsa da takson besleyiciler (örneğin, 17), yöntem bazı excurrent menfezlerin ufacık büyüklüğüne göre gerekli uygulama ve deneyimi yüksek seviyede ile kısıtlı olup, tarafından deniz koşulları.

Bu engelleri aşmak için, biz dakika tüpleri ile örneklenmiş suyun kontrollü emme (dış çapı <1,6 mm) dayalı alternatif bir teknik geliştirdi. Amacımız bu tür bentik süspansiyon besleyiciler excurrent deliği gibi temiz ve çok özel bir noktada, in situ su örnekleme kontrol sağlayacak basit, güvenilir ve ucuz cihaz oluşturmak oldu. Etkili olabilmesi için, yöntem, ortam akış rejimini etkileyen veya b değiştirmek şekilde değil müdahaleci olmayan olmak zorundaçalışılan organizmaların ehavior. Burada yer alan cihaz, VacuSIP olarak adlandırılır. Bu Yahel ve arkadaşları tarafından geliştirilen SIP sisteminin bir basitleştirme olduğunu. Derin deniz ROV tabanlı noktası örnekleme (2007) 18. VacuSIP orijinal SIP çok daha ucuzdur ve SCUBA-bazlı çalışmalar için adapte edilmiştir. Sistem laboratuvar ortamlarında için Wright ve Stephens (1978) 19 ve Møhlenberg ve Riisgård (1978) 20 tarafından sunulan ve test edilmiş prensiplere göre dizayn edilmiştir.

VacuSIP sistemi bentik süspansiyon besleyiciler metabolizmasının in situ çalışmalar için tasarlanmış olsa da, aynı zamanda, laboratuar çalışmaları için kullanılabilir ve daha kontrollü ve temiz, nokta-kaynağı, su örneği yerde gereklidir. In situ filtrasyon veya uzun süreli (en az-saat) boyunca entegre gerekmektedir sistem özellikle yararlıdır. VacuSIP 2011 yılından bu yana YAHEL laboratuarda başarılı bir şekilde kullanılmıştır ve ayrıca sahiptirKarayipler ve Akdeniz sünger türlerinin 21 aracılı besin akı iki son yıllarda yapılan çalışmalarda istihdam edilmiştir (Morganti ve ark. sunulmuştur).

VacuSIP uygulandığı özel numune, uzun örnekleme süresi ve tarla koşullarında, kullanımı toplama filtre ve duyarlı analitler için numune depolamak için, standart protokoller Okyanusbilimsel bazı sapmalar gerektirir. VacuSIP sistemi veya toplama sonra bakteriyel aktivite ile alınan su numunelerinin modifikasyonu riski ile kontaminasyon riskini azaltmak için, biz yerinde filtrasyon ve depolama işlemlerinde çeşitli test edilmiştir. Farklı filtreleme cihazları, toplama gemiler ve depolama prosedürleri çözünmüş inorganik (PO 4 3-, NO x - NH 4 +, SiO 4) analizi için en uygun tekniği elde etmek için incelenmiş ve organik (DOC + DON) bileşikleri ve ultra plankton (<1081 m) ve partiküler organik (POC + PON) örnekleme. Diğer bir özellikle alan koşulları altında, kirlenme riskini azaltmak için, işleme adımlarının sayısı minimumda edildi. yöntem sunulduğu görsel biçim tekrarlanabilirliği kolaylaştırmak ve verimli tekniği uygulamak için gereken süreyi azaltmak için aydınlatmaktadır.

Sistem görünümü

2 mm kadar küçük exhalant deliklerle süspansiyon besleyiciler in situ pompalanan su içinde örnek için, her bir numunenin pompa etkinliği ilk aşağıdaki uçucu menfezi (ler) i ve excurrent açıklığı 16 akışını gözlemleyerek fluorescein boyalı deniz suyu, süzüldü salgılayarak görüntülenmiştir (18 şekil 2b de bakınız). Çalışma örneğinin (Cari Olmayan ve excurrent) tarafından inhale ve üfledi su, daha sonra eş zamanlı olarak özel olarak oluşturulmuş bir manipülatör yüklü dakika tüpler bir çift kullanımı ile ya da "ar ikisine örneklenirbaş aşağı esnek taşınabilir tripod ms "(Şekil 1 ve Ek Video 1). Çalışma organizma tarafından inhale su dikkatlice içinde veya çalışma organizmanın uçucu madde diyafram yakın bir tüpün proksimal ucunu yerleştirerek toplanır. Bir özdeş tüp daha sonra excurrent menfez içine yerleştirilir. Bu işlem tortu tabanda, örneğin kişi veya hayvanın bozukluğu, önlemek için iyi bir bakım gerektirir. örneklemeyi başlamak için, bir dalgıç bağlı bir şırınga iğnesi ile toplama kabında bir septumu delip örnekleme tüpü içinden kap içine alınan su numuneleri zorlamak için harici su basıncı sağlayan, her tüpün uzak ucu. emiş önce şişelere oluşturulan vakum ile ve dış su ve tahliye numune kabı arasındaki basınç farkı ile başlatılır .

üfledi su temiz bir koleksiyon sağlamak ve ambi yanlışlıkla emme önlemek içinent suyu 16, su örnekleme hızı excurrent akış oranı önemli ölçüde daha düşük bir hızda (<% 10) muhafaza edilmesi gerekmektedir. Emme hızı, borunun uzunluğu ve iç çapı (ID) ile kontrol edilir. küçük iç çapı da ihmal edilebilir bir ölü hacmi (yerinde filtrasyon bir hassas analitler için tavsiye edilir. Örnekleme gemiler, filtrasyon montaj ve boru seçimi çalışması organizmalar ve özel araştırma sorusu tarafından dikte edilir. Aşağıda açıklanan protokol tam metabolik profili (genel bir bakış için bakınız Şekil 2) ilgi olduğunu varsayar. Ancak, protokolün modüler yapısı f veriyorveya kolay değişiklik basit, hatta çok farklı örnekleme planları karşılamak için. Tam metabolik profil için örnekleme protokolü aşağıdaki adımları içermelidir: (1) Akış görselleştirme; (2) Örnekleme ultra plankton besleme (plankton <10 mikron); (3) (in-line filtreleri kullanarak) inorganik besin alımı ve atılımı Örnekleme; (4) Örnekleme organik alımı ve atılımı çözünmüş (in-line filtreleri kullanarak); (5) Partikül besleme ve atılımı (in-line filtreleri kullanarak); (6) 2. adımı tekrarlayın (kalite kontrol gibi ultra-plankton besleme); (7) görselleştirme akış.

Lojistik mümkün, metabolik profil ölçümleri hızı pompalama ile birlikte kullanılması tavsiye edilir (örn, boya ön hız yöntemi, 16) yanı sıra solunum ölçümleri. Bu ölçümler en iyi örnekleme oturumun başında ve sonunda alınır. solunum ölçümü için, sualtı optodes veya mikro-elektrotlar tercih edilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Hazırlık Adımları ve Temizlik İşlemleri

  1. Temizlik çözümü
    1. her zaman koruyucu giysiler, bir laboratuvar önlüğü ve eldiven giyin. toz ve duman ücretsiz temiz alanda bu hazırlık adımları uygulayın.
    2. Taze, yüksek kaliteli, iki kez distile su ile% 5-10 hidroklorik asit (HCl) çözeltisi hazırlayın.
    3. % 5 anyonik ve iyonik olmayan yüzey aktif madde çözeltisi, yüksek ölçüde çözünür bazik bir karışım hazırlayın, taze, yüksek kaliteli, iki kez distile su ile (Malzeme listesine bakınız).
    4. temiz tüm çözümleri saklayın, asit kapları yıkanır.
  2. Hazırlık aşamaları ve (laboratuvarda) temizleme prosedürleri
    NOT: fosfor bileşikleri ilgi değilseniz, HCI yıkama kaliteli fosforik asit (H 3 PO 4) yıkama (% 8 H 3 PO 4 nihai konsantrasyon) ile değiştirilebilir.
    1. her zaman koruyucu giysiler, bir laboratuvar önlüğü ve eldiven giyin.
    2. YıkamaYüksek saflıkta su bol miktarda (in-line paslanmaz Swinney filtre tutturucunun hariç) numûne alma düzeneğini göstermektedir. bir gecede% 5-10 HCl çözeltisi iliklerine aparatı bırakın. yüksek kaliteli çift distile su bol miktarda tekrar aparatı durulayın.
    3. yüksek saflıkta su bol miktarda in-line paslanmaz çelik Swinney filtre sahipleri yıkayın. gece boyunca,% 5 anyonik ve iyonik-olmayan yüzey aktif maddeler çözeltisi yüksek derecede çözünür bazik karışımı nemlendirici filtre tutturucuları bırakın. bol kaliteli çift distile su ile tekrar yıkayın.
    4. Tüm örnekleme cihazı kurutun alüminyum folyoya sarın ve kullanıma kadar temiz kutuda saklayın.
  3. Emiş hızı kontrolü
    1. uzunluğu ve planlı çalışma derinliği ve su sıcaklığına göre emme boru iç çapını ayarlayarak örnekleme hızını kontrol edin. Tam devel için kullanılan Hagen-Poiseuille denklemi türetilen aşağıdaki denklem (kullanınBir kılavuz olarak lanan laminer boru akışı): figure-protocol-1 F = akış hızı (cm 3 dk -1), Ap = diferansiyel basıncı (bar), r = giriş iç yarıçapı tüp (cm), K = 2.417 x 10 -9 (sn -2), L = boru uzunluğu (cm ), V = su viskozitesi (g cm-1 sn-1). Daha fazla bilgi için Tablo 1'e bakınız.
    2. çalışılan hayvan pompalama oranı% 1'in altına örnekleme oranı tutun.
      NOT: bilinmiyor vakum ile bazen, tahliye kapları kullanarak ek komplikasyonlar oluşturmaktadır. Bu nedenle, bir saha testi şiddetle tavsiye edilir. 10 m derinlikte ve ~ 22 ° C, deniz suyu (40 PSU) 'de, 254 um'lik bir iç çapı olan bir 50 cm giriş hortumunu 26 ul sn-1 (-1 1.56 mi dakika) ~ ortalama emme oranı sağlar.
  4. örnekleme gemiler
    1. Küçük hacimli numuneler (3-20 ml, örneğin, akış CYT ultra-plankton içinometry) Önceden Vakumlu steril plastik tüpler kullanın.
      NOT: Ön vakumlu steril plastik tüpler rutin insanlarda standart kan testleri için kullanılır; Hiçbir katkı maddeleri ile steril tüpler kullandığınızdan emin olun. Bu vakumlanmış steril plastik tüpler en iyi merkez dışı Luer ile steril, tek kullanımlık tüp tutucu kullanımı ile örneklenir. Bu en güvenli ve etkili örnekleme cihazı da, basit bir iğneye kıyasla biraz daha büyük bir ölü hacme sahiptir.
    2. Bu tür besinler ve çözünmüş organik olarak büyük su örnekleri için, uçucu organik analizler için Çevre Koruma Ajansı (EPA) kriterlerini karşılayan 40 veya 60 ml cam şişeleri kullanın. Bu şişeler, bir PTFE yüzlü silikon septum ile bir polipropilen kapak içerir.
    3. daha büyük hacimler için, kauçuk tapalar veya vakum şişeleri ile penisilin şişeleri kullanın.
    4. Silika örnekleri için yüksek yoğunluklu polietilen şişeleri (HDPE şişeler) kullanın.
    5. numune hacmi artırmak ve stoper çıkartılmasından riskini azaltmak içinçıkış sırasında, bir vakum pompası ile dalış öncesi (vakum) öğeleri 1.4.2-1.4.4 tahliye. Vakum manuel bir el vakum pompası ya da bir şırınga ile hava emerek kullanarak. Ancak en iyi sonuç için, iyi bir vakum pompası tavsiye edilir. Standart lyophilizers yüksek vakum içerir.
      NOT: Daha hızlı başlangıç ​​emme oranı üfledi su örnekleri kontamine olmaz emin olmak için büyük vakumlu şişeler kullanırken özel dikkat gösterin.
  5. Gemi temizleme prosedürleri
    1. Çözünmüş organik ve NH 4 + analiz için, yeni ön temizlenmiş EPA şişeleri kullanın.
    2. aşağıdaki gibi diğer besin analizi için şişeleri (cam ve HDPE) durulayın:
      1. şişeleri (cam ve HDPE) ve yüksek kaliteli çift distile su ile polipropilen kapakları durulayın. Yeni bir silikon septum takın.
      2. En az 3 gün boyunca HCl% 10 şişeleri (cam ve HDPE) ıslatın ve bol kaliteli çift distile su ile durulayın.
      3. 4 saat 450 ° C'de bir cam şişe yanma ve fırın içinde soğumaya bırakılırlar. kapağını takın ve kullanıma kadar alüminyum folyo ile sarın.
  6. Filtreler
    1. (Örneğin, DOC, DON) tüm çözünmüş organik örneklerin filtrasyon ve (örneğin, POC, PON) partikül organik maddelerin toplanması için bağlayıcı içermeyen cam elyaf filtreleri kullanın. Ayrı bir alüminyum folyo zarf içinde her cam filtre paketi. kullanılana kadar temiz ve kuru bir kap içinde, organik tortuları ve mağaza uçucu hale getirilmesi için 2 saat boyunca 400 ° C 'de yanma.
    2. Inorganik besin örnekleme için bağlayıcı içermeyen yukarıda cam elyaf filtreler, ya da 0.2 um polikarbonat membranlar ya kullanın (örneğin, PO 4 3-, NO x - NH 4 +). (1.7.3) aşağıda açıklandığı gibi bir kez filtre yuvasına monte ikincisi temizleyin.
    3. Silika örnekleme için 0.2 mikron polikarbonat membranlar filtreleri kullanın. bir kez Installe temizleyinizFiltre tutucuya d daha (1.7.3) aşağıda açıklanmıştır.
  7. Filtrasyon montaj hazırlanması
    1. Filtrasyon düzeneğinin temizlenmesi için kullanmadan önce, bir 0.2 mikron filtre içinden anyonik ve iyonik olmayan yüzey aktif madde çözeltisi ve yüksek kaliteli çift damıtılmış su yüksek ölçüde çözünür bazik karışımı filtre.
    2. besin ve silis dışındaki çözünmüş organikler için filtrasyon tertibatı:
      1. temizlenen in-line paslanmaz çelik Swinney filtre tutucu içinde yanmış bağlayıcı içermeyen cam elyaf filtreleri yerleştirin.
      2. Tüm düzenek arasından anyonik ve iyonik olmayan yüzey aktif madde çözeltisi,% 5 yüksek derecede çözünür bazik bir karışımı, 100 ml ve yüksek kaliteli çift damıtılmış su, sonra 100 ml çalıştırmak üzere bir asit-temizlenmiş şırınga kullanın.
    3. SiO 4 Filtreleme montaj:
      1. temizlenmiş polikarbonat filtre tutucu (PC filtre tutucusu) içindeki polikarbonat filtresi yerleştirin.
      2. r bir asit-temizlenmiş şırınga kullanınun% 5 HCI, 30 ml ve tüm montaj yoluyla yüksek kalitede iki kez damıtılmış 30 ml su.
  8. sistem montajı
    1. 1,6 mm dış çapı (OD) ve 254 mm veya 177 mikron iç çapı (ID) ile PEEK (Polieter Eter Keton) boru kullanılarak sualtı çalışmaları için sistemi monte edin.
    2. Gerekli uzunlukta tüpler kesmek için keskin bir bıçak veya PEEK kesici kullanın.
    3. distal ucunda (numune kabı tarafı) 'de, bir şırınga iğnesi bağlanmış bir erkek Luer konektörüne her tüp uygun. üreticinin talimatları izleyin ve yeşil somunu sıkma önce tüpün sonuna mavi flangeless halkasının düz tarafı hizaya emin olun.
    4. bir yalıtım bandı kullanarak tripod "silah" ya da özel yapım manipülatör için PEEK tüp takın.
    5. erkek Luer konektörüne bir tek kullanımlık şırınga iğnesi takın. yaralanmaları önlemek için koruyucu kapak ile iğne tutun.
    6. Açıkça örnekleme dişli ve renk kodunu etiket tüm inhale ve ekshale bileşenler (örneğin, = yeşil olarak kırmızı = Ex).
    7. Benzer renk kodu eşleştirilmiş örneklem gemilerin setleri ile örnekleme gemiler sırayla numaralandırılmış.

2. Çalışma Sualtı

  1. Şantiye hazırlığı
    1. Ön araştırma ve örneklerin seçimi
      NOT: nedeniyle sualtı örnekleme protokolü karmaşık doğası, verimli bir örnekleme dalış sağlayacak hazırlanması için gerekli zaman harcamaktadır.
      1. şantiye anket ve vaktinden gerekli hazırlıkları yapmak.
      2. Seçin ve nispeten kolay ulaşılabilir uygun hedef organizmaları işaretleyin. tüm organizmalar mutlaka örnekleme dalış anda etkin olabilir beri, örnek beklediğinizden daha fazla iş istasyonları hazırlamak.
    2. Baz dayanakların montajı
      1. when tesviye substrat üzerinde çalışıyor:
        1. 1 kg dalış ağırlıkları esnek tripod özgün tutuşunu klip monte edin ve sadece bir sonraki hedef hayvana konumlandırmak.
      2. dikey duvarlar üzerinde çalışırken:
        1. şantiye hazırlık aşamasında (2.1.1) sırasında tepsiyi taşıyan toplama kabı için Dağı taban desteği VacuSIP sistemi için levhalar, aksesuar dişli kancalar ve askıları.
        2. Esnek taşınabilir tripodlar kullanıldığı zaman, her bir hedef hayvanın yanına 10x10 cm PVC levhaları sabitlemek için cıvataları veya iki bileşenli epoksi reçine kullanın. Her plaka esnek taşınabilir tripod tutuşunu klipleri eklemek için bir delik olması gerekir.
        3. reçine kuruduğu ve taban plakaları sağlam duvara iliştirilmiş sonra, VacuSIP sistemi için esnek taşınabilir tripod için sağlam bir bağlanma noktası olarak hizmet veren, çabuk klipleri vidalayın.
  2. Va TakmaCUSIP
    1. Numune uçucu deliğinin yanında, süzüldü, fluoresein boyası bırakarak pompalama olup olmadığını kontrol edin ve Yahel diğerleri de tarif edildiği gibi, boya exhalent menfez içinden çıkan onaylamak. (2005) 16.
    2. VacuSIP aygıtı yüklemek ve ona (5 ~ içinde mm) hemen yanında uçucu deliği içinde uçucu madde (IN) örnekleme tüp yerleştirmek ya da. Uçucu madde tüpü başka exhalant ağzının yakınında olmadığından emin olun.
    3. Dikkatle osculum / exhalant sifon doğru exhalant (EX) örnekleme tüpünü yönlendirmek ve osculum / exhalant sifon (Şekil 1 ve Ek video 1'e bakınız) içinde 1-5 mm yerleştirilir kadar çok nazikçe onu eklemek. ile temas veya başka örneklenmiş organizmayı rahatsız etmemek için büyük özen.
    4. Önce ve örnekleme sırasında her iki tüplerin yerini çift kontrol edin.
    5. Örnekleme kontrolünden sonra numune hala des olarak pompalama olup olmadığınıYukarıdaki (2.2.1) açıklanan şekilde.
      NOT: oluşabilecek diğer işlenirken tripod bir kol hareketi, öncelikle daha hassas manipülasyon gerektiren uçucu örnekleme tüpü ve ikinci exhalant tüp, yere emin olun çünkü. exhalant örnekleme tüpünün manipülasyon uçucu madde tüpün hareketini neden olabilir bile, bu emri ardından, örnekleme etkilemez.
  3. Modüler sualtı numune alma prosedürü
    NOT: araştırma sorusu üzerine bekleyen, aşağıda deneysel adımların her biri tek başına bir deney olarak yapılabilir. Aşağıda açıklanan tam metabolik profil örnekleme protokolü örnek başına 8 saate kadar gerektiren uzun bir süreçtir (genel bir bakış için Şekil 2 ve Tablo 2). dalış koşulları ve yönetmelikler örnekleme siteleri, bölgeler ve kurumlar arasında farklılık gösterdiğinden, dalış planları bu protokol dahil değildir. Bununla birlikte, son derece dikkatli ve Meti adamakdalış planı culous planlama. doygunluk ve yoyo dalış profillerini önlemek için özel bakım ödemek. Mümkün olduğunda, deneyler, sığ derinliğe (<10 m) yürütmek tavsiye edilebilmektedir. Kapalı devre devridaimleri tür uzun süreli örnekleme planları için çok kullanışlı olabilir.
    1. Gerçek örnekleme başlamadan önce, floresein kalıntısının hiçbir görünür izleri kalır ve bu askıya sedimanlar yerleşmiş olan veya uzak wafted emin olun.
    2. Ultra plankton, (hiçbir filtre bu adımda yüklü!)
      1. (Ekzalasyon) IN (inhalasyon) ve EX steril plastik tüpler septa Vakumlu delmek için iğne kullanın. Suyun planlı oranda damlayan doğrulayın ve 2-6 ml su örnekleri toplamak.
      2. alma üzerine, buz üzerinde, soğuk kutu içinde örnekleri tutmak. Laboratuarda, 1 +% 0.05,% paraformaldehid EM notu glutaraldehid (nihai konsantrasyon) ya da% 0.2 EM derecesi glutaraldehid ile korunur. -80 & Sıvı azot ve mağaza cryovials dondurun# 176; analize kadar C.
    3. Silikat örnekleme ve saklama
      1. iğne ve borunun uzak ucunda Luer erkek konektör arasında 0.2 um polikarbonat membran ihtiva eden önceden temizlenmiş ve online paslanmaz bilgisayar Filtre haznesi takın.
      2. Pierce önceden temizlenmiş yüksek yoğunluklu polietilen şişeler (HDPE şişeler) arasında bölmeli kapak örnekleme başlatın. Her iki numune alma damlama emin olun ve her bir küçük şişe içinde 15 mL su toplanır.
      3. analize kadar soğutulmuş örnekleri (4 ° C) muhafaza edin. Analiz -20 ° C'de iki hafta, mağaza içinde başlaması mümkün değil. analizi için, numuneler, silika jel çözmek için en az 50 dakika boyunca 50 ° C'de eritildi emin olun.
        NOT: Gerektiğinde zar mikroskopi veya DNA analizi için muhafaza edilebilir.
    4. Çözünmüş inorganik (PO 4 3-, NO x - NH 4 +)
      1. t değiştirinÖnceden yakılır cam filtre içeren bir önceden temizlenmiş in-line paslanmaz çelik filtre tutucusu ile o PC filtre düzeneği.
      2. numune önce, deniz suyu örneklerinde, en az 20 mi emme başlatmak için EPA, HDPE şişeler veya diğer vakum kabı kullanarak, tüm filtrasyon sistemi üzerinden geçirildi emin olun. Onlar atılır önce toplanan suyun hacmini ölçmek.
      3. Pierce, örneklemeye başlamak hem numune damlayan emin olun ve nitrat ve fosfat analiz için 25-30 ml toplamak için uygun EPA cam şişelerin septum kapağı.
      4. Amonyak analizi için yeni EPA cam şişe geçmek hem numune damlayan emin olun ve her şişede 20 ml toplamak.
      5. analize kadar -20 ° C'de bir buz ve deposunda soğuk kutu içinde örnekleri tutun.
        NOT: Sadece Süzüntü ilgi ise, atılabilir şırınga filtreleri adımları 2.3.3 ve 2.3.4 için kullanılabilir.
    5. Çözünmüş organik (DOC + DON) örnekleme ve storing
      NOT: böylece Numune su silikon septa ile temas etmez taşıma boyunca olduğunca dik mümkün olduğunca örnekleri tutun.
      1. Paslanmaz çelik filtre tertibatı kullanılarak devam etmek ve yukarıda tarif edildiği gibi, yeni EPA cam şişelere deniz suyu numunelerinin 20 ml toplar.
      2. alma üzerine, buz üzerinde, soğuk kutu içinde örnekleri tutmak. Laboratuarda, ortofosforik asit ile örnekleri düzeltmek için bir ön-yakılır cam Pasteur pipet kullanın ya da hidroklorik asit (20 ml örnek, nihai konsantrasyon% 0.04 içine% 25 eser metal sınıf asit 5-6 damla) (2 damla eser metal derecesi 20 ml örnek, nihai konsantrasyon% 0.1) içine asit konsantre edildi ve frigorifik tutun.
      3. analize kadar soğutulmuş örnekleri (4 ° C) muhafaza edin. Numuneler analize kadar -20 ° C'de koleksiyonu, mağazanın bir hafta içinde analiz değilseniz.
    6. Partikül organik madde (POC, PON, POP)
      1. st kullanarak devamçelik filtre montajı ve filtre boşaltılmış 250 ml termos içine deniz suyu en az 500 ml ainless. Gerekirse şişeler değiştirin.
      2. alma üzerine, filtre sahibinden kalan tüm deniz suyunun tahliye alüminyum folyoya sarın ve buz üzerinde soğuk bir kutu içinde saklamak için bir hava ile dolu şırınga kullanın. Laboratuarda, filtre tutturucularda filtreleri çıkarın ve analize kadar -20 ° C'de saklayın.

figure-protocol-2
Şekil 1. VacuSIP doğru tesislerin bir örnek: inhale ve solunan su numuneleri için sarı (fotoğraf için yeşil kullanılan renk kodu ile özel bir dahili manipülatör kullanarak ascidian Polycarpa mytiligera (Akabe Körfezi, Kızıl Deniz) örnekleme (A) ) Tom Shelizenger ve Yuval Yacobi tarafından; (B) (NW Akdeniz sünger Agelas oroides örneklemeVacuSIP cihazı kullanılarak 3 mm osculum genişliği, Deniz). Kullanılan renk kodu solunan su örnekleri için inhale ve kırmızı için sarı. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

figure-protocol-3
Protokol bölümünde anlatılan VacuSIP tekniğinin 2. Genel Bakış Şekil. Laboratuvar çalışmaları sarı kutularda temsil edilir, mavi kutulara saha. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

figure-protocol-4
Tablo 1. genel ortalama örnekleme oranları (ml dk -1) farklı konteynerler ile elde edilenSu koleksiyonları ve farklı vakum seviyeleri için kullanılan: şişeler (yok) vakumlu değildi; EPA cam şişe ve HDPE şişeler kendi hacminin (½ hacim) yarısını Karyolalar; steril plastik tüpler zaten üretici tarafından vakumlu bulundu. 5-8 m derinliğinde, 18-22 ° C su sıcaklığında çalışan 79 cm uzunluğunda ve 25 mikron iç çapa PEEK tüpleri kullanılarak.

figure-protocol-5
Tablo 2. numune kabı, sabitleyici, in-line bir filtre tertibatının, depolama genel protokol bölümünde açıklanan analiz yöntemleri. Analiz bileşikler şunlardır: ultra-plankton bolluğu (plankton <10 mikron), silikat (SiO 4), fosfat (PO 4 3-), nitrit + nitrat (NO 2 - + NO 3 -), çözünmüş organik madde (DOM), amonyum (NH4 +) ve parçacık halinde organik madde(POM). Tüm örnekleme gemiler silikon septum kap ve örnekleme önce vakumlu. Fiksatif şunlardır: paraformaldehit + glutaraldehid (Glut + Parafor), ortofosforik asit (H3 PO 4) ve hidroklorik asit (HCI). kullanılan in-line filtre meclisleri vardır: polikarbonat filtre sahipleri ve polikarbonat membran 0.2 mikron filtre (PC filtre tutucu + PC membran) ve paslanmaz çelik filtre tutucular ve bağlayıcı içermeyen cam elyaf Gff filtreler.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Deniz suyu toplama yöntemleri optimizasyonu

Toplayıcı şişeleri ve temizlik prosedürü seçimi

VacuSIP uyumlu toplama hazneli numune bir şırınga iğnesi ile delinmesi ile başlatılabilir sağlayan bir septum olmalıdır. Onlar yüksek sualtı basıncı (derinlikleri çalışan tipik tüplü 2-3 bar) dayanıklı olmalıdır ve bir vakum tutmak g...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

hazırlık adımlar

DOM ve besin analizi için kolektör şişeler

Toplayıcı damarlar çözünmüş mikro bileşenleri ile etkileşime girebilir ve örnekleyici duvarları büyüme 30-34, DOM ve besin koleksiyonu için farklı şişeler test edildi bakteriler için bir substrat olabilir beri. Numuneler hızla 30 donmuş değilse cam şişe kadar iki kat silika ilk konsantrasyonunu artırabilir çünkü Borosilikat, silis miktarını...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Biz saha içinde yaptığı yardım için Manel Bolivar teşekkür ederiz. Biz araştırma ve örnekleme izinleri verdikleri destekten dolayı "Parc Natural del Montgri les Illes Medler i el Baix Ter" minnettarız. sualtı manipülatör Ayelet Dadon-Pilosof tarafından tasarlanan ve Sn Pilosof tarafından imal edilmiştir. Bu eser İspanyol Hükümeti projesi CSI-Mercan [RC ve MR hibe numarası CGL2013-43106-R] tarafından ve TM "Ministerio de Educación, Kültür y Deporte (• MECD)" bir FPU burs ile desteklenmiştir. Bu G. Yahel için Katalan Hükümeti [hibe sayısı 2014SGR1029] ve ISF hibe 1280-1213 ve BSF hibe 2012089 tarafından finanse edilen bir Deniz Biyojeokimya katkısı ve Küresel Değişim Araştırma grubudur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
GorillaPod, OrijinalJobyGP000001esnek taşınabilir tripod ve nbsp;
Flanşsız YüksükIDEX Sağlık & Bilim P-200X1/16" Mavi/pk
Erkek SomunIDEX Sağlık & BilimP-205X 1/16" Yeşil/10  pk
Kadından Kadına LuerIDEX Sağlık & Bilim P-658
Dişi-Erkek LuerIDEX Sağlık & Bilim P-655
Gözetleme Borusu (254  &mikro; m ID)IDEX Sağlık & Bilim 15311/16 "OD x 0.01  ID x 5  ft uzunluğunda. Alternatif kimlik kullanılabilir.
İki bileşenli reçine epoksiIVEGOR9257Kullanmadan önce iki bileşenli reçineyi iyice karıştırın
(TOC) EPA ŞişeleriCole -Parmer03756-2040 ml cam şişeler. Yine Thomas Scientific tarafından üretilmiştir (ref. numarası 9711F09).
HDPE ŞişelerWheaton986701 (E78620)20 ml yüksek yoğunluklu polietilen şişeler
Vacuette Z katkı maddesi içermezGreiner bio-one455001üretici tarafından ön vakum 
Septum Numune ŞişeleriThomas Scientific1755C01250 ml cam şişeler 
HDPE şişeler için Septum Cap 1WheatonW240844SP (E7865R)22-400 & nbsp;
Septum Cap 2WheatonW240846 (1078-5553)24-400 cam şişeler ve şişeler için. Ayrıca Thermo Scientific National tarafından üretilmiştir (ref. 03-377-42).
Sıralı paslanmaz çelik Swinney Filtre tutucularPall516-906713 mm çap
PTFE Conta YıkayıcıPall 516-8064paslanmaz çelik filtre tutucular için halka
TCLP Cam FiltrelerPall 516-9126Bağlayıcı İçermeyen Cam Elyaf Filtreler, 13  mm çap, gözenek boyutu 0.7  &mikro; m
Polikarbonat FiltreTutucular Cole -Parmer1729513 mm çaplı
İzopore Membran FiltrelerMillipore GTTP0130013  mm çapında, gözenek boyutu 0.2  &mikro; m
Contrad 70 Solüsyonu Decon Labs1002anyonik ve iyonik olmayan yüzey aktif madde çözeltisinin yüksek çözünür temel karışımı 
Steril Şırınga Filtreleri VWRInternational Eurolab S.L.514-0061P25  mm çapında, gözenek boyutu 0.2  &mikro; m
FloreseinSigma-Aldrich(eski ref.28802) 46955-100G100  g
Holdex, tek kullanımlık, sterilGreiner bio-one450263steril, Vacuette Steril İğneler için merkez dışı luerli tek kullanımlık tüp tutucu
IcoGammaPlus51600.7  mm x 30  mm
Kriyovialler NalgeneNalgeneV5007 (Kat. No.5000-0020)2  ml
Cryobox karton ve nbsp;RubilaborM-600145x145x55  mm p / mikrotüp 1.5 & nbsp; ml
Ortofosforik AsitSigma79617 veya Alternatif olarak Ultra Saf Hidroklorik asit, son konserasyon% 0.1
ParaformaldehitSigmaP6148500 & nbsp; g
GlutaraldehitMerck8,206,031,000%25, 1 L
El Vakum Pompası Bü rkle 5620-2181 veya Alternatif olarak standart laboratuvar vakum pompası
kullanın

Kaynaklar

  1. Gili, J. M., Coma, R. Benthic suspension feeders: their paramount role in littoral marine food webs. Trends. Ecol. Evol. 13 (8), 316-321 (1998).
  2. Reiswig, H. In situ pumping activities of tropical Demospongiae. Mar. Bio. 9, 38-50 (1971).
  3. McMurray, S., Pawlik, J., Finelli, C. Trait-mediated ecosystem impacts: how morphology and size affect pumping rates of the Caribbean giant barrel sponge. Aquat. Bio. 23 (1), 1-13 (2014).
  4. Pile, A. J., Young, C. M. The natural diet of a hexactinellid sponge: benthic-pelagic coupling in a deep-sea microbial food web. Deep-Sea Res. Pt. I. 53 (7), 1148-1156 (2006).
  5. Nielsen, T., Maar, M. Effects of a blue mussel Mytilus edulis bed on vertical distribution and composition of the pelagic food web. Mar. Ecol. Prog. Ser. 339, 185-198 (2007).
  6. De Goeij, J. M., et al. Surviving in a marine desert: the sponge loop retains resources within coral reefs. Science. 342, 108-110 (2013).
  7. Maldonado, M., Ribes, M., van Duyl, F. C. Nutrient Fluxes Through Sponges. Biology, Budgets, and Ecological Implications. Advances in Marine Biology. 62, (2012).
  8. Riisgård, H. U. On measurement of filtration rates in bivalves - the stony road to reliable data: review and interpretation. Mar. Ecol. Prog. Ser. 211, 275-291 (2001).
  9. Reiswig, H. M. Water transport, respiration and energetics of three tropical marine sponges. J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 14, 231-249 (1974).
  10. Jiménez, E., Ribes, M. Sponges as a source of dissolved inorganic nitrogen: nitrification mediated by temperate sponges. Limnol. Oceanogr. 52 (3), 948-958 (2007).
  11. Diaz, M. C., Ward, B. Sponge-mediated nitrification in tropical benthic communities. Mar. Ecol. Prog. Ser. 156, 97-107 (1997).
  12. Ribes, M., Coma, R., Gili, J. Natural diet and grazing rate of the temperate sponge Dysidea avara (Demospongiae, Dendroceratida) throughout an annual cycle. Mar. Ecol. Prog. Ser. 176, 179-190 (1999).
  13. Jiménez, E. Nutrient fluxes in marine sponges: methodology, geographical variability and the role of associated microorganisms. , Universitat Politècnica de Catalunya. Barcelona. PhD thesis (2011).
  14. Reiswig, H. M. Particle feeding in natural populations of three marine demosponges. Biol. Bull. 141 (3), 568-591 (1971).
  15. Reiswig, H. M. In situ pumping activities of tropical Demospongiae. Mar. Biol. 9 (1), 38-50 (1971).
  16. Yahel, G., Marie, D., Genin, A. InEx - a direct in situ method to measure filtration rates, nutrition, and metabolism of active suspension feeders. Limnol. Oceanogr-meth. 3, 46-58 (2005).
  17. Genin, A., Monismith, S. S. G., Reidenbach, M. A., Yahel, G., Koseff, J. R. Intense benthic grazing of phytoplankton in a coral reef. Limnol. Oceanogr. 54 (2), 938-951 (2009).
  18. Yahel, G., Whitney, F., Reiswig, H. M., Leys, S. P. In situ feeding and metabolism of glass sponges (Hexactinellida , Porifera) studied in a deep temperate fjord with a remotely operated submersible. Limnol. Oceanogr. 52 (1), 428-440 (2007).
  19. Wright, S. H., Stephens, G. C. Removal of amino acid during a single passage of water across the gill of marine mussels. J. Exp. Zool. 205, 337-352 (1978).
  20. Møhlenberg, F., Riisgård, H. U. Efficiency of particle retention in 13 species of suspension feeding bivalves. Ophelia. 17 (2), 239-246 (1978).
  21. Mueller, B., et al. Natural diet of coral-excavating sponges consists mainly of dissolved organic carbon (DOC). PLoS ONE. 9 (2), e90152(2014).
  22. Gasol, J. M., Moran, X. A. G. Effects of filtration on bacterial activity and picoplankton community structure as assessed by flow cytometry. Aquat. Microb. Ecol. 16 (3), 251-264 (1999).
  23. Koroleff, F. Determination of reactive silicate. New Baltic Manual, Cooperative Research Report Series A. 29, 87-90 (1972).
  24. Murphy, J., Riley, J. P. A. Modified single solution method for the determination of phosphate in in natural waters. Anal. Chim. Acta. 27, 31-36 (1962).
  25. Shin, M. B. Colorimetric method for determination of nitrite. Ind.Eng.Chem. 13 (1), 33-35 (1941).
  26. Wood, E. D., Armstrong, F. A. J., Richards, F. A. Determination of nitrate in sea water by cadmium-copper reduction to nitrite. J. Mar. Biol. Assoc. U. K. 47 (1), 23-31 (1967).
  27. Sharp, J. H., et al. A preliminary methods comparison for measurement of dissolved organic nitrogen in seawater. Mar. Chem. 78 (4), 171-184 (2002).
  28. Sharp, J. H. Marine dissolved organic carbon: Are the older values correct. Mar. Chem. 56 (3-4), 265-277 (1997).
  29. Holmes, R. M., Aminot, A., Kerouel, R., Hooker, B. A., Peterson, B. J. A simple and precise method for measuring ammonium in marine and freshwater ecosystems. Can. J. Fish. Aquat. Sci. 56 (10), 1801-1808 (1999).
  30. Degobbis, D. On the storage of seawater samples for ammonia determination. Limnol. Oceanogr. 18 (1), 146-150 (1973).
  31. Tupas, L. M., Popp, B. N., Karl, D. M. Dissolved organic carbon in oligotrophic waters: experiments on sample preservation, storage and analysis. Mar. Chem. 45, 207-216 (1994).
  32. Yoro, S. C., Panagiotopoulos, C., Sempéré, R. Dissolved organic carbon contamination induced by filters and storage bottles. Water Res. 33 (8), 1956-1959 (1999).
  33. Zhang, J. Z., Fischer, C. J., Ortner, P. B. Laboratory glassware as a contaminant in silicate analysis of natural water samples. Water Res. 33 (12), 2879-2883 (1999).
  34. Yoshimura, T. Appropriate bottles for storing seawater samples for dissolved organic phosphorus (DOP) analysis: a step toward the development of DOP reference materials. Limnol. Oceanogr-meth. 11 (4), 239-246 (2013).
  35. Strickland, J. D. H., Parsons, T. R. A practical handbook of seawater analysis. , Fisheries Research Board of Canada. Ottawa. (1968).
  36. Eaton, A. D., Grant, V. Freshwater sorption of ammonium by glass frits and filters: implications for analyses of brackish and freshwater. Limnol. Oceanogr. 24 (2), 397-399 (1979).
  37. Norrman, B. Filtration of water samples for DOC studies. Mar. Chem. 41 (1-3), 239-242 (1993).
  38. Carlson, C. A., Ducklow, H. W. Growth of bacterioplankton and consumption of dissolved organic carbon in the Sargasso Sea. Aquat. Microb. Ecol. 10 (1), 69-85 (1996).
  39. Grasshoff, K., Ehrhardt, M., Kremling, K. Methods of Seawater Analysis. Second, Revised and Extended Edition. , (1999).
  40. Perea-Blázquez, A., Davy, S. K., Bell, J. J. Nutrient utilisation by shallow water temperate sponges in New Zealand. Hydrobiologia. 687 (1), 237-250 (2012).
  41. Perea-Blázquez, A., Davy, S. K., Bell, J. J. Estimates of particulate organic carbon flowing from the pelagic environment to the benthos through sponge assemblages. PLoS ONE. 7 (1), e29569(2012).
  42. Pile, A. J., Patterson, M. R., Witman, J. D. In situ grazing on plankton <10 µm by the boreal sponge Mycale lingua. Mar. Ecol. Prog. Ser. 141, 95-102 (1996).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Bentik S spansiyon BeslenicileriPartik l Bile ikleriVacuSIP Y ntemiSu rneklemesiFiltre BeslenicileriAk SitometrisiEPA T pleriPEEK Borular

İlgili makaleler