Lipofilik doksorubisin ön-ilacın hazırlanması ve tanımlanması için bir protokol, 1,2-distearoil, sn -glisero-3-phosphoethanolamine- N yüklü - [amino (polietilen glikol) -2000] (DSPE-PEG) miseller anlatılmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Lipofilik Doksorubisin Pro-ilaç misellerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Miseller, antikanser ilaçlarının verilmesi için başarıyla kullanılmıştır. Amfifilik polimerler, kendi kendine montaj yoluyla sulu bir ortamda çekirdek-kabuk yapılı miseller oluşturur. Misellerin hidrofobik çekirdeği, bir ilaç rezervuarı olarak işlev görür ve hidrofobik ilaçları kapsüller. Hidrofilik kabuk, misellerin toplanmasını önler ve ayrıca in vivo olarak sistemik dolaşımlarını uzatır. Bu protokolde, misellere ilaç yüklemesini artıracak bir doksorubisin lipofilik pro-ilaç olan doksorubisin-palmitik asidi (DOX-PA) sentezlemek için bir yöntem tarif ediyoruz. Doksorubisin'i lipid ile konjuge etmek için pH'a duyarlı bir hidrazon bağlayıcı kullanıldı, bu da kanser hücreleri içinde serbest doksorubisin salınımını kolaylaştırır. Sentezlenen DOX-PA, eluent olarak diklorometan/metanol kullanılarak bir silika jel kolonu ile saflaştırıldı. Saflaştırılmış DOX-PA, ince tabaka kromatografisi (TLC) ve 1H-Nükleer Manyetik Rezonans Spektroskopisi (1H-NMR) ile analiz edildi. DOX-PA yüklü DSPE-PEG misellerini hazırlamak için bir film dispersiyon yöntemi kullanıldı. Ek olarak, DOX-PA konsantrasyonunun ve kapsülleme verimliliğinin belirlenmesi, partikül boyutunun ve dağılımının ölçülmesi ve in vitro antikanser aktivitelerinin değerlendirilmesi dahil olmak üzere misel formülasyonlarını karakterize etmek için çeşitli yöntemler açıklanmaktadır. Bu protokol, ilaç yüklü misellerin hazırlanması ve karakterizasyonu ile ilgili yararlı bilgiler sağlar ve böylece yeni misel bazlı kanser nanoilaçlarının araştırılmasını ve geliştirilmesini kolaylaştıracaktır.
Giriş
Kemoterapi genellikle çeşitli kanser tiplerini tedavi etmek için kullanılır. hepsi değilse de çoğu, kemoterapi ilaçları daha fazla yaşamı tehdit eden koşullara, bulantı ve ishal gibi yönetilebilir küçük koşullar değişebilir toksik yan etkileri vardır. En antikanser ilaçların toksik olduğundan, normal dokuya bu ilaçların seçici olmayan maruz kaçınılmaz toksisiteye neden olur. Bu nedenle, seçici bir şekilde kanser hücrelerine ilaç teslim bir terapötik yaklaşım için büyük bir ihtiyaç vardır. antikanser ilaçların verilmesi ile diğer zorluk da kötü su çözünürlüğü olduğunu. Genellikle, çözündürücü maddeler, bu az çözünen ilaçların formüle edilmesi gereklidir. Bununla birli....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
DOX-PA 1. Sentezi
- Doksorubisinin 390 mg ve palmitik asit hidrazid 243 mg ağırlığında ve yuvarlak dipli bir şişeye aktarın.
- cam şırınga ile şişeye susuz metanol 150 ml ekleyin. bir pipet ile trifloroasetik asit (TFA) 39 ul ekle. Manyetik bir karıştırıcı kullanarak, karanlıkta, oda sıcaklığında 18 saat boyunca reaksiyon karışımının karıştırın.
NOT: Reaksiyon malzemelerin miktarları kadar ölçeklendirilebilir veya aşağı DOX-PA farklı miktarlarda elde etmek için. reaktiflerin oranı, aynı oranlarda muhafaza edilmelidir. 78 mg 1.170 mg aralığında DOX miktarlar kullanılarak reaksiyonlar düzenli kimya laboratuvar gerçekleştirilebil....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1, DOX-PS sentez şemasını göstermektedir. DOX-PA pH'a duyarlı hidrazon bağ yoluyla doksorubisin palmitik asit konjügasyonu sentezlendi. palmitik asit hidrazid hafif bir fazlalığı reaksiyon tamamlanmasını sağlamak için kullanılmıştır. Bu reaksiyon yöntemi çok yüksek bir etkinliğe sahip ve doksorubisinin sadece küçük bir miktar, bir 18 saat sonra (Şekil 2) ile gösterilmektedir. Verim yaklaşık% 88 idi. Reaksiyonun sonunda, DOX-PA, bir silika jel k.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışmada, miseller hazırlanması için basit ve hızlı bir film-dispersiyon bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, bir amfifilik polimerin kendinden montaj özelliklerinden istifade (örneğin, DSPE-PEG) sulu bir ortamda çekirdek-kabuk yapılı miseller oluşturmak için. Bu misel hazırlama yöntemi birçok avantaja sahiptir. 1. Genellikle lipozom, nanopartiküller ve nanoemülsiyonlar. 19 2 hazırlanmasında kullanılan (örneğin, haddeleme ya da homojenizasyon gibi) karışık büyüklük azaltma adımlarının kullanımı.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma aşağıdaki hibelerle desteklenmiştir: NIH-SC3 hibesi, NSF-PREM hibesi, Hampton Üniversitesi Fakülte Araştırma Bursu. Virginia Deniz Bilimleri Enstitüsü'nden (VIMS) Bayan Michele A. Cochran'a partikül boyutu analiz cihazının kullanımı için teşekkür ederiz. Makaleyi incelediği için Bayan Corinne R. Ramaley'e de teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| DSPE-PEG2K | Cordenpharm | LP-R4-039> | 95 |
| % Doksorubisin | LC Laboratuvarları | D-4000 | % >99 |
| Palmitik Asit Hidrazid | TCI AMERİKA | P000425G | >98.0 |
| Metanol | ACROS Organics | 610981000 | Susuz |
| Metilen klorür | BALIKÇI | D151-4 | %99,90 |
| Metil sülfoksit-d<>sub6 | ACROS Organics | AC320760075 | NMR çözücü |
| Trifloroasetik Asit | ACROS Organics | AC293811000 | %99,50 |
| Silika Jel | FISHER | L-7446 | 230-400 mesh |
| Baker Flex TLC Plakalar | FISHER | ||
| DPBS | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| DU 145 Prostat Kanseri Hücreleri | ATCC | HTB-81 | |
| MTT | ACROS Organikler | 158990050 | %98 |
| RPMI 1640 Orta | MEDIATECH INC | 10041CV | |
| Antibiyotik-Antimikotik | YAŞAM TEKNOLOJİLERİ | 15240062 | 100x stok solüsyonu |
| Fetal Sığır Serumu | YAŞAM TEKNOLOJİLERİ | ||
| Nükleer Manyetik Rezonans Spektroskopisi | Varian, Inc | 300 NMR | |
| Bü chi R-3 Rotavapor | Buchi | 1103022V1 | Döner evaporatör |
| Ultrasonik Banyo | BRANSON ULTRASONICS CORPORATION | ||
| UV-VIS spektrometresi Biomate 3 | Thermo Spectronic | ||
| Zetasizer Nano ZS90 | Malvern Instruments | Partikül Boyutu Analyer Mikroplaka | |
| Spektrofotometresi & nbsp; | Rio-Rad | Benchmark Plus | |
| Hücre Kültürü İnkübatörü | Napco | CO2 6000 | |
| Biyolojik Güvenlik Kabini | Nuaire | ||
| SigmaPlot | Systat Yazılım A.Ş. | Analitik Yazılım | |
| 96 Kuyulu Hücre Kültürü Plakası | Becton Dickinson | 353072 | |
| Tripsin % 0.25 | Corning Cellgro | 25-053-CI |
Kaynaklar
- Hennenfent, K. L., Govindan, R. Novel formulations of taxanes: a review. Old wine in a new bottle? ESMO. 17 (5), 735-749 (2006).
- Paliwal, S. R., Paliwal, R., Agrawal, G. P., Vyas, S. P. Liposomal nanomedicine for breast cancer therapy. Nanomedicine. 6 (6), 1085-1100 (2011).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
