Kantitatif Uygulamalar için Homojen MALDI Örneklerin Hazırlanması

Yu-Meng Ou; Chien-Wei Tsao; Yin-Hung Lai; Hsun Lee; Huan-Tsung Chang; Yi-Sheng Wang

doi:10.3791/54409

Yöntem makalesi

Kantitatif Uygulamalar için Homojen MALDI Örneklerin Hazırlanması

DOI:

10.3791/54409

⸱

28 Ekim 2016

Yu-Meng Ou¹^,² , Chien-Wei Tsao¹^,³ , Yin-Hung Lai¹ , Hsun Lee¹ , Huan-Tsung Chang² , Yi-Sheng Wang¹

¹Genomic Research Center, Academia Sinica, ²Department of Chemistry, National Taiwan University, ³Department of Chemical Engineering and Biotechnology, National Taipei University of Technology

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Örnek Kurutma işlemleri esnasında alt-tabaka sıcaklığının ayarlanması sayesinde yöntemde MALDI kütle spektrometresi iyon sinyallerin uzaysal farklılıklarını azaltmak için bir kuralı gösterilmektedir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, matris destekli lazer desorpsiyon/iyonizasyon (MALDI) kütle spektrometresi sırasında iyon sinyallerindeki uzamsal heterojenliği azaltmak için basit bir numune hazırlığını gösterir. İyon sinyallerinin heterojenliği MALDI'de ciddi bir sorundur, bu da zayıf veri tekrarlanabilirliği ile sonuçlanır ve MALDI'yi kantitatif analiz için uygun hale getirmez. Numune hazırlama sırasında numune plakası sıcaklığını düzenleyerek, numune çözeltisi damlacıkları içindeki termal kaynaklı hidrodinamik akışlar, heterojenlik problemini azaltabilir. MALDI numune plakalarını tutan, sıcaklık ayarlı bir bakır taban bloğu ile donatılmış, oda sıcaklığında bir numune hazırlama odası, numune kurutma durumunun hassas kontrolünü kolaylaştırır. Numune damlacıklarının kurutulmasından sonra, numune plakalarının sıcaklığı oda sıcaklığına geri döndürülür ve müteakip kütle spektrometrik analizi için hazneden çıkarılır. Numunelerin alanları, numunedeki tüm bileşenlerin uzamsal dağılımını elde etmek için MALDI görüntüleme kütle spektrometresi ile incelenir. Numuneleri sıcaklık kontrolü olmadan ortam koşulları altında hazırlayan geleneksel kurutulmuş damlacık yöntemi ile karşılaştırıldığında, burada gösterilen yöntemle hazırlanan numuneler önemli ölçüde daha iyi uzamsal dağılım ve sinyal yoğunluğu göstermektedir. Karbonhidrat ve peptit numuneleri kullanılarak yapılan gözlemlere göre, kurutma işlemi sırasında çevreyi ortam sıcaklığında tutarken substrat sıcaklığının düşürülmesi, iyon sinyallerinin heterojenliğini etkili bir şekilde azaltabilir. Bu yöntem genellikle çeşitli numune ve matris kombinasyonlarına uygulanabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kütle spektrometresi (MS), karmaşık numunelerin moleküler bileşimlerini analiz etmek için en önemli analitik tekniklerden biridir. MS'de kullanılan tüm iyonizasyon yöntemleri arasında, matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonizasyon (MALDI), biyoanalitik uygulamalarda en hassas ve yaygın olarak kullanılan yöntemdir. ¹ Diğer iyonizasyon teknikleriyle karşılaştırıldığında, MALDI tuz kirleticilerine karşı en yüksek hassasiyete ve yüksek toleransa sahiptir. Bu tür analitik özellikler, MALDI'yi karbonhidrat analizi ve birçok proteomik uygulama için ilk tercih haline getirir. Bununla birlikte, numune hazırlama, MALDI-MS'de yüksek kaliteli veri elde etmek için çok önemli bir adımdır.

MALDI-MS için en yaygın kullanılan numune hazırlama yöntemi, numune damlacıklarının bir yüzey üzerinde biriktirildiği ve ortam koşulları altında kurutulduğu kurutulmuş damlacık yöntemidir. Bu kurutma yöntemi basit ve genellikle etkilidir. ^2-5 Bununla birlikte, kurutulmuş damlacık yönteminde yaygın bir sorun, elde edilen analit/matris kristallerinin normalde düzensiz dağılmasıdır. Çoğu durumda, kristaller numune alanlarının çevresinde toplanır ve bu da halka lekesi oluşumu olarak adlandırılan duruma neden olur. ^6-8 Heterojen kristal morfolojileri, analit moleküllerinin uzamsal dağılımını etkiler, bu da numune alanları üzerinde iyon sinyalinde ciddi dalgalanmalara neden olur. Bu tür ciddi sinyal dalgalanmaları ve zayıf veri tekrarlanabilirliği, MALDI-MS'deki "tatlı nokta" sorunu olarak bilinir. ⁹ Bu nedenle, MALDI-MS kurutulmuş damlacık uygulamalarında mekansal heterojenliklerin azaltılmasına büyük ihtiyaç vardır.

Kurutulmuş damlacık yöntemi ile hazırlanan numunelerin mekansal dağılımının belirlenmesinde numune damlacığındaki hidrodinamik akışlar önemli rol oynamaktadır. ^10-12 Çözücünün buharlaşmasının, halka lekesi oluşumundan sorumlu olan damlacıklar içinde dışa doğru kılcal akışlara neden olduğu bulunmuştur. ^7,10 Buna karşılık, teğetsel yüzey gerilimi gradyanları tarafından indüklenen devridaim akışları, dışa doğru kılcal akışlarını dengeleyebilir. ¹³ Devridaim akış hızları, dışa doğru kılcal akışlarınkinden daha yüksekse, heterojenlik sorununu azaltmak için numuneler verimli bir şekilde yeniden dağıtılabilir. ¹⁴

Bu çalışmada, damlacık kurutma işlemleri sırasında verimli devridaim akışları sağlamak için basit bir kurutma odası ile numunelerin hazırlanması için ayrıntılı bir protokol gösteriyoruz. Damlacık kurutma koşulları, numune plakasının ve çevresinin sıcaklıkları ve hazne içindeki bağıl nem dahil olmak üzere hassas bir şekilde kontrol edilir. Model analitler arasında maltotrioz ve bradikinin zinciri (1-7) bulunur. Gösteri için kullanılan matris 2,4,6-trihidroksiasetofenondur (THAP). Numuneler uçuş süresi (TOF) MS ile incelenir ve veriler heterojenliğin azaldığını göstermek için nicel olarak analiz edilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Bu protokol, kurutuldu-damlacık yöntemiyle hazırlanan maltotrioz ve bradikinin fragmanı (1-7) mekansal heterojen azaltmak için geliştirilmiştir. Protokol hazırlanması ve ön koşullandırma, örnek bırakma ve kurutma ve kütle spektrometrisi veri analizi de dahil olmak üzere, üç ana adımdan oluşur. prosedürleri tarif ve aşağıda daha ayrıntılı olarak tarif edilmiştir:

1. Hazırlık ve Önkoşullanma

Örnek Plate Temizleme
1. nitril eldiven giyin ve deterjan ve distile-deiyonize su (DDW) ile hafifçe örnek plaka el yıkayın.
2. metanol (MeOH) ve DDW ile örnek plaka durulayın.
3. 600 ml beher örnek plaka takın ve DDW ile doldurun.
4. ultrasonik banyoda (200 W, 40 kHz) 'de 15 dakika süre ile DDW içinde örnek plaka sonikasyon.
5. kaptan DDW çıkarın ve MeOH ile beher doldurun.
6. ultrasonik banyo (200 W, 40 kHz) 15 dakika boyunca MeOH içerisinde örnek plaka sonikasyon.
7. Azot gazı ile plaka üzerinde çözücü damla uçururum ve örnek birikimi önce kuru numune plaka tutun.
Düzenlenmesi Kurutma Odası Sıcaklığı
NOT:. Kurutma odası 35 x 20 x 45 cm ³ (W x D x Y) akrilik haznesi Şekil 1, bu kurutma sisteminin resmini gösterir. odası kurutma bölmesinin içine monte kalibre edilmiş bir higrometre ile gözlenmiş düşük nispi nem durumunu korumak için sabit bir akış oranında bir gaz akış ölçer ile oda sıcaklığında azot gazı ile temizlenmiştir. programlanmış sabit sıcaklık su sirkülatör sahip kurutma bölmesi bir bakır temel blok çelik örneği plakaları karşılamak için kullanılır. bakır taban bloğu 25 ° C 5 örnek plaka ısısını düzenlemek için yapabiliyor. hava, bakır taban bloğu ve numune plakasının sıcaklık K-tipi termokupllar ile kontrol edilir.
1. Kapıyı açın ve hızla bakır örnek plaka koymakBaz bloğu sonra kapağını kapatın.
2. El ile saatte 10 standart kübik feet (SCFH'dir) azot akış hızını ayarlamak için gaz debi ölçer ayarlayın.
3. bağıl nem her zaman% 25'in altına sağlamak için higrometre ve ince ayar gaz debimetre ile kurutma odasında bağıl nemi izleyin.
4. K-tipi termokupl tarafından numune plaka sıcaklığını izlemek ve örnek plakası deney ya da kontrol için oda sıcaklığında (25 ° C) 5 ° C ulaşana kadar manuel olarak su sirkülasyon sıcaklığını ayarlamak.
  NOT: tasarlanan sıcaklıkta örnek plaka stabilize etmek için, su sirkülasyon sıcaklığı tipik olarak tasarlanmış örnek daha düşük, 5 ° C ila 0 olarak ayarlanır. Örneğin, örnek plakasına 5 ° C tutmak için su sirkülatörün sıcaklık ayarı 2 ° C ila 0 aralığındadır; 25 ° C'de bir örnek plaka korumak için, suyun sirkülatörün sıcaklık ayarı 23-25 ° C aralığındadır.
5. Gerekli sıcaklık ve bağıl nem örnek birikimi önce (Tablo 1) ulaşılır emin olun.
  Not: farklı numune plakası sıcaklıkları kurutma işlemleri için tüm parametrelerin yanı sıra ayar değerleri Tablo 1 'de gösterilmiştir.
  NOT: oda kapısı uzun süre açık ise düşük örnek plaka sıcaklığında numune plaka üzerinde su yoğunlaşması oluşabilir. Su yoğunlaşması oluşursa kapıyı kapatın ve su yoğunlaşması kurumuş kadar üzerinde herhangi bir örnek yatırmak ETMEYİN.
Matris ve analit Çözümleri Hazırlanması
1. matris çözümleri hazırlanması
  1. % 50 DDW sulu solüsyon: 50% asetonitril (ACN) ile 0.1 M thap çözeltisi hazırlayın.
2. Analitlerin hazırlanması
  1. DDW ile 10 ^-4 M maltotriozdur çözeltisi hazırlayın.
  2. % 50 asetonitril, 10 ⁵ M bradikinin fragmanı hazırlandı (1-7) çözeltisi(ACN):% 50 DDW sulu çözelti.

2. Örnek Biriktirme ve Kurutma

Karışımlar 0.1M thap solüsyonu 0.25 | il 10 ⁴ M maltotrioz veya 10 ⁵ M bradikinin fragmanı (1-7), bir mikrosantrifüj tüpü içinde çözeltiler 0.25 ul.
3 sn karışık bir çözüm karıştırın.
santrifüj tüpünün dibinde çözüm toplamak için 2 sn (2000 xg) karışık bir çözüm santrifüjleyin.
dikkatle, kurutma odasının kapısını açın pipet ile örnek plaka üzerinde solüsyonun 0.1 ul yatırmak ve hemen kapıyı kapatın.
Örnek damlacık kurumasını bekleyin.
. NOT: Farklı numune plaka sıcaklıkları genellikle gözlenen kurutma süreleri Tablo 1'de listelenen 5 ° C örnek plaka sıcaklığı için, ortalama kuruma süresi 800 1000 sn; 25 ° C Örnek plakası sıcaklığı için ortalama kuruma süresi 100 ile 150 sec.
Kuruduktan sonra, kurutma odasının kapısını açın.
oda sıcaklığında (25 ° C) su sirkülasyon sıcaklığını ayarlamak.
NOT: Numune plaka kurutma işlemi sırasında, oda sıcaklığında (25 ° C) sürekli tutulursa, bu adımı atlayın.
Oda sıcaklığında (25 ° C) Örnek plaka sıcaklığı döndükten sonra, kurutma bölmesinin örnek plakasını çıkarın.
5X stereomikroskop altında örnek morfolojisi incelemek ve bir anlık parlak alan görüntü almak.
Not: kristal morfolojileri olarak beklenmemektedir, bu aynı prosedür ile yeni bir numune hazırlamak için gereklidir. Tipik bir kristal morfolojisi, Şekil 2'nin üst panel gösterilmiştir.
NOT: 5 ° C gibi düşük örnek plaka sıcaklığına sahip durumlarda, kurutma bölmesinin çıkarmadan önce oda sıcaklığına örnek plaka ısıtmak için önemlidir. Örnekleri yatırma yaparken, önceden karıştırılmış Solutio tutmak YAPMAYINn 10 sn boyunca pipet ucu. numuneleri yatırma sonra yeniden premix çözüm kullanmayan ETMEYİN. Şekil 2'nin üst panel farklı numune plakası sıcaklıkları ile hazırlanan numunelerin parlak alan görüntüleri gösterir.

3. Kütle Spektrometresi Veri Analizi

Kütle Spektrometre Veri Toplama
NOT: hazırlandıktan sonra, numune görüntüleme kütle spektrometresi kullanılarak analiz edilebilir. Bu çalışmada, görüntüleme MS deneyler laboratuar yönelik yapılmış senkronlaştırılmış çift kutup TOF kullanılarak gerçekleştirilir (DP-TOF) kütle spektrometresi görüntüleme. Görüntüleme yeteneği ile ¹⁵ ticari MALDI-TOF kütle spektrometre aynı zamanda, deneyler için de uygundur. kütle spektrometresi doğrusal ekstraksiyon ve optimize edilmiş emme gecikmeler ile pozitif iyon modunda çalıştırılır. iyonların kinetik enerjisi 20 kV. Lazer ışını boyutu örnek yüzeyinde çapı 35 mikron ve her nokta spektrum ave olduğunu5 lazer çekim öfke.
1. MALDI kütle spektrometresi içine örnek plaka yerleştirin.
2. adımlarda 2,1-2,9 hazırlanan örnek kütle spektrometresi analizi görüntüleme gerçekleştirin.
3. sonuç penceresinde gösterilen kitle listeden karakteristik kitle tepe seçin ve iki boyutlu iyon görüntü çizmek için "2D" tıklayın.
  Not: thap ile karıştırılır maltotrioz için, karakteristik tepe noktaları maltotrioz, protonlanmış thap sodiated ve thap sodiated edilir. Thap ile karıştırıldı bradikinin fragmanı (1-7) için, karakteristik tepe noktaları bradikinin fragmanını (1-7) protonlanmış thap protonlanmış ve thap sodiated içerir.
4. sinyal yoğunluğu üst ve alt limitlerini belirlemek için pop-up pencere ayar düğmelerini tıklatın ve "bir resmi kaydetmek" butonuna tıklayınız. Bu ayar, iyon resimlerin kontrastını tanımlar.
  NOT: veri her bireyin setinde, kırık bölgeler ve düşük parlaklığını gösteren boş noktalar ortadan kalkar.
5. Gözlemlemek ve iyon karşılaştırmakAdım 2.9 olarak alınmıştır parlak alan görüntü ile görüntü.
  Not: kütle spektrometrisi ve özellikle iyonlarının görüntülerin inşaat Görüntüleme ticari araçlar ile elde edilebilir. Nedeniyle veri toplama ve analiz yazılımı çeşitli kullanıcıların yüksek kaliteli görüntüler elde etmek için cihaz satıcısı tarafından sağlanan yazılım talimatları takip etmelidir.
Veri analizi
NOT: Numunelerin heterojen kantitatif analiz edilir. Bu gösteri, her numune iyonları dağılımını analiz etmek in-house geliştirilen yazılımın birden fazla eş merkezli bölüme ayrılmıştır. analiz, tek başına bir veri analiz yazılımı kullanılarak gerçekleştirilebilir.
1. önemsiz alanları kaldırmak için sonuç penceresinde gösterilen iyon görüntüde boş noktalar ve kırık bölgeleri tıklayın.
  NOT: Bu prosedür iyon görüntünün temel alanını tanımlar.
2. iyon görüntünün dıştaki katman bulmak için lütfen "kenar bulmak" tıklayın.
3. bir veritabanında dış tabakasında iyon bolluğu bilgileri kaydetmek ve aynı anda iyon görüntüden bu katmanı kaldırmak için "düşeriz" tıklayın. Bu dıştaki katman temsil eden bir onay kutusu sonucu penceresinin "çıkış verileri" listesinde görünür.
4. iyon görüntünün merkez tanımlanır yineleyerek 3.2.2 ve 3.2.3 adımları.
5. Tıklayın ve "çıkış verileri" listedeki tüm onay kutularını seçin ve verileri vermek için "ihracat" a tıklayın.
6. iyonların mekansal dağılımı bilgilerini elde etmek için her katmanın ortalama iyon bolluğu hesaplamak için tablo yazılımını kullanarak dışa aktarılan verileri açın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Parlak alan görüntüleri ve örnek plakası 5 sıcaklığı ve 25 ° C ile hazırlanan maltotrioz ve bradikinin fragmanı (1-7) MS Fotoğraflar, Şekil 1 'de gösterilmiştir. Sodiated maltotrioz, iyon sinyali esas olarak doldurulur halinde örnek alanın çevresine 25 ° C lik bir örnek plakası sıcaklığı hazırlandığında. 5 ° C'ye örnek plaka sıcaklığı düşürerek, sinyal homojen tüm numune alanı üzerinde doldurur. 5 ° C'nin altında örnekleri hazırlamak tek fark olumsuz 25 ° C&#...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

önceki teorik tahminlere dayanarak, damlacıklar içindeki sıcaklık kaynaklı hidrodinamik akışları dışa çözücü buharlaştırma yoluyla uyarılan kılcal akışları üstesinden gelebilir. sıcaklık damlacık artışı içinde gradyanlar zaman moleküllerin bu iç sirkülasyonu verimliliği artırılmıştır. çevre sıcaklığında çevresi muhafaza edilirken, 5 ° C'nin altında Örnek plaka sıcaklığı tutmak zaman tahmin edilen sonuçlara göre, damlacık içindeki sirkülasyon akımlarının ortalama hızı dışa kılcal akımlarının daha yaklaşık 4 kat daha ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar herhangi bir rakip mali çıkar beyan etmemektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Sinica Akademisi Genomik Araştırma Merkezi ve Çin Cumhuriyeti Tayvan Bilim ve Teknoloji Bakanlığı tarafından desteklenmektedir (Sözleşme No. 104-2119-M-001-014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Reaktif< / güçlü >
Deterjan tozu	Alconox	242985
Metanol	Merck	106009
Asetonitril	Merck	100003
2,4,6-trihidroksiasetofenon (THAP)	Sigma-Aldrich	T64602
Bradykinin fragmanı (1-7)	Sigma-Aldrich	B1651
Maltotriose	Sigma-Aldrich	47884
Pipet uçları	Mettler Toledo	17005091
Mikrosantrifüj tüpü	Axygen	MCT-150-C
Equipment
Milli-Q su arıtma sistem	Kırlangıç	ZMQS6VFT1
Pudrasız nitril eldiven	Microflex	SU-690
600 ml beher	Duran	2110648
Ultrasonik temizleyici	Delta	DC300H
Higrometre	Wisewind	5330
Azot gazı akış ölçer	Dwyer	RMA-6-SSV
K-tipi termokupllar	Digitron	311-1670
Santrifüj	Select BioProducts	Force Mini
Pipet	Rainin	pipet-lite XLS
Stereomikroskop	Olympus	SZX16
Sıcaklık kontrollü kurutma odası	bu laboratuvar
Senkronize çift kutuplu uçuş süresi görüntüleme kütle spektrometresi (DP-TOF IMS)	bu laboratuvar
MALDI-TOF paslanmaz çelik numune bu	laboratuvarı		hedefliyor

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Karas, M., Hillenkamp, F. Laser Desorption Ionization of Proteins with Molecular Masses Exceeding 10000 Daltons. Anal. Chem. 60, 2299-2301 (1988).
Beavis, R. C., Chait, B. T. Velocity Distributions of Intact High Mass Polypeptide Molecule Ions Produced by Matrix Assisted Laser Desorption. Chem. Phys. Lett. 181, 479-484 (1991).
Beavis, R. C., Chaudhary, T., Chait, B. T. Alpha-Cyano-4-Hydroxycinnamic Acid as a Matrix for Matrix-Assisted Laser Desorption Mass-Spectrometry. Org. Mass Spectrom. 27, 156-158 (1992).
Ehring, H., Karas, M., Hillenkamp, F. Role of Photoionization and Photochemistry in Ionization Processes of Organic-Molecules and Relevance for Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Mass-Spectrometry. Org. Mass Spectrom. 27, 472-480 (1992).
Strupat, K., Karas, M., Hillenkamp, F. 2,5-Dihydroxybenzoic Acid - a New Matrix for Laser Desorption Ionization Mass-Spectrometry. Int. J. Mass Spectrom. Ion Process. 111, 89-102 (1991).
Hu, H., Larson, R. G. Evaporation of a Sessile Droplet on a Substrate. J. Phys. Chem. B. 106, 1334-1344 (2002).
Deegan, R. D., et al. Capillary Flow as the Cause of Ring Stains from Dried Liquid Drops. Nature. 389, 827-829 (1997).
Hu, J. -B., Chen, Y. -C., Urban, P. L. Coffee-Ring Effects in Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry. Anal. Chim. Acta. 766, 77-82 (2013).
Schwartz, S. A., Reyzer, M. L., Caprioli, R. M. Direct Tissue Analysis Using Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry: Practical Aspects of Sample Preparation. J. Mass Spectrom. 38, 699-708 (2003).
Hu, H., Larson, R. G. Marangoni Effect Reverses Coffee-Ring Depositions. J. Phys. Chem. B. 110, 7090-7094 (2006).
Bhardwaj, R., Fang, X., Attinger, D. Pattern Formation During the Evaporation of a Colloidal Nanoliter Drop: A Numerical and Experimental Study. New J. Phys. 11, 075020(2009).
Savino, R., Paterna, D., Favaloro, N. Buoyancy and Marangoni Effects in an Evaporating Drop. J Thermophys Heat Tr. 16, 562-574 (2002).
Probstein, R. F. Surface Tension. in Physicochemical Hydrodynamics : An Introduction. , John Wiley & Sons. Ch. 10 305-361 (1994).
Lai, Y. -H., et al. Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 27, 1314-1321 (2016).
Hsiao, C. -H., et al. Comprehensive Molecular Imaging of Photolabile Surface Samples with Synchronized Dual-Polarity Time-of-Flight Mass Spectrometry. Rapid Commun. Mass Spectrom. 25, 834-842 (2011).
Vorm, O., Roepstorff, P., Mann, M. Improved Resolution and Very High-Sensitivity in MALDI TOF of Matrix Surfaces Made by Fast Evaporation. Anal. Chem. 66, 3281-3287 (1994).
Gabriel, S. J., Schwarzinger, C., Schwarzinger, B., Panne, U., Weidner, S. M. Matrix Segregation as the Major Cause for Sample Inhomogeneity in MALDI Dried Droplet Spots. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 25, 1356-1363 (2014).
Mampallil, D., Eral, H. B., van den Ende, D., Mugele, F. Control of Evaporating Complex Fluids through Electrowetting. Soft Matter. 8, 10614-10617 (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

MALDI rnek Haz rlama Uzamsal Heterojenli in Azalt lmas S cakl k Kontroll Kurutma Hidrodinamik Ak Reg lasyonu MALDI G r nt leme K tle Spektrometrisi Kurutulmu Damlac k Y ntemi Optimizasyonu Azot Ak Kontrol Ba l Nem zleme rnek Plakas So utma yon Sinyali Homojenizasyonu

Kantitatif Uygulamalar için Homojen MALDI Örneklerin Hazırlanması

Bu makalede

Özet

Özet

Giriş

Protokol

Sonuçlar

Tartışma

Açıklamalar

Teşekkürler

Malzemeler

Kaynaklar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler