Yöntem makalesi
İlaç konsantrasyonunu dinamik olarak ayarlayarak antibiyotik ilaç direncinin karakterizasyonunu sağlayan düşük maliyetli, yapılandırılabilir bir morbidostat tarif ediyoruz. Cihaz, çoğullanmış bir mikroakışkan platform ile entegre edilebilir. Yaklaşım, laboratuvar antibiyotik ilaç direnci çalışmaları için ölçeklendirilebilir.
Biz antibiyotik direnci evrimsel yolu tanımlamak için düşük maliyetli, yapılandırılabilir morbidostat açıklar. morbidostat sürekli bakteri gelişimini izler ve dinamik onlar ilaç direnci elde etmek için geliştikçe sürekli bakteri meydan okumak için ilaç konsantrasyonunu ayarlayan bakteriyel kültür cihazdır. Cihaz ~ 10 ml çalışma hacmi bulunmaktadır ve tam otomatik ve optik yoğunluk ölçümü ve orta ve ilaç dağıtımı için mikro pompalar ile donatılmıştır. Platformu doğrulamak için, biz 1655 Escherichia coli MG trimetoprim direncinin aşamalı satın ölçüldü ve hücre morfolojisi ve antibiyotik duyarlılıklarının araştırmak için multiplekslenmiş mikroakışkan platformu cihazı entegre edilmiştir. yaklaşım antibiyotik ilaç direncinin laboratuvar çalışmalarına ölçekli yukarı ve metabolik mühendislik ve diğer bakteri kültürü deneylerinde gerilme geliştirmeleri için evrimi adaptif uzatılabilir olabilir.
İlk antibiyotik ilaç penisilin tanıtılmasından bu yana, mikrobiyal antibiyotik direnci küresel bir sağlık sorunu 1 dönüşmüştür. Antibiyotik direnci elde edilmesi geriye in vivo olarak incelenebilir karşın, bu deneylerin koşulları genellikle bütün evrim 2 boyunca kontrol edilmez. Alternatif olarak, adaptif laboratuvar evrim bir antibiyotik ilaç 3'ten çevresel streslere veya seçim baskısı altında bir mikrobiyal türlerin moleküler evrim ortaya çıkarabilir. Son zamanlarda, antibiyotik ilaç direncinin çok iyi kontrol evrimsel deneyler antibiyotik ilaç direnci ortaya çıkmasını aydınlatmıştır. Örneğin, Austin'in grup düzgün ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Morbidostat Cihaz 1. Montaj ve Ön test
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yukarıda açıklanan morbidostat Şekil 1'de şematize edilmiştir. Deneysel evrim, antibiyotik duyarlılık testi ve hücre morfolojisi kontrolü dahil olmak üzere ortak morbidostat işlemleri, bir E. valide edildi (TMP) trimetoprimin maruz coli MG1655 kültürü, yaygın olarak kullanılan bir antibiyotik ilaç 5,6. TMP ilaç direnci çok belirgin adım adım artar uyarır ve mutasyonlar dihidrofolat redüktaz (DHFR) geni etrafında kümelenir. Bu nedenle, TMP.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
düşük maliyetli bileşenleri Düşük ayak izi morbidostat cihaz gösterilmiştir. Cihaz tarafından kayıtlı ilaç direnç seviyesi artar önceki raporlarda 5 ile tutarlıdır. ilaç direnci evrimsel çalışmalar için tasarlanan cihaz, diğer birçok deneylere potansiyel uygulanabilir. İlk olarak, ilaç kaynaklı mutasyon Ayrıntılı bir klinik açıdan önemli antibiyotik büyük bir set için kurulabilir. Örneğin, çoklu ilaç direncinin evrimsel yolun sadece deneyde kullanılan ilaç sayısını artırarak ele alınabilir. Burada bildirilen .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Yazarlar, teorik analiz ve sayısal simülasyonda yararlı tartışmalar ve yardımları için Prof. Sze-Bi Hsu ve Bayan Zhenzhen'e teşekkür eder. Y. T. Y., MOST 103-2220-E-007-026 ve MOST 104-2220-E-007-011 hibe numaraları altında Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan ve 103N2042E1 hibe numaraları altında Ulusal Tsing Hua Üniversitesi'nden fon desteğini kabul etmek ister, 104N2042E1 ve 105N518CE1.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Çevresel Çalkalayıcı İnkübatör | BioSan | ES-20 | |
| Arduino Leonardo kartı | Arduino | Leonardo | |
| 680 Ohm Karbon Direnç | Digikey | Önyargı direnci LED | |
| 100k Ohm için Karbon direnç | Fototransistör için | Digikey | |
| 940 nm ışık yayan diyot | Parlak LED Elektronik | BIR-BM13E4G-2 | Optik yoğunluk ölçümü |
| 940 nm fototransistör | Kodenshi | ST-2L2B | Optik yoğunluk ölçümü |
| Darlington çift IC Toshiba | Mouser | ULN2803APG | bu IC sürücüler mikro pompalar ve manyetik karıştırma ünitesi |
| 5 V DC fırçasız fan | ADDA | AD0405LX-G70 | özellikleri: 5 V besleme gerilimi ve 80 yüksek lisans; |
| Piezoelektrik mikro pompa | CurieJet | PS15I-FT-5L | Basınç > 3 kPa; Akış hızı >5 ml / dak |
| Tygon 3350 Saint | Gobain | ABW00001 | ID: 1/32 "OD: 3/32" L: 50' |
| Manyetik Karıştırma çubuğu | COWIE | konik şekil karartma: 10 mm x 4 mm | |
| Cam sintilasyon 20 ml flakon | DGS | Pyrex cam 28 mm (çap) x 61 mm (yükseklik) | |
| Kültür flakon tutucu | Özel olarak Poliformaldehitten yapılmıştır ve nbsp; | ||
| Cam şişeyi kapatmak için kullanılan | Silikon | Dow Corning | Sylgald 184 |
| Orta şişe | VWR | 66022-065 | |
| Difco M9 minimum tuz 5x | BD | Orta | |
| Cadamino Asit | BD | Orta | |
| glikoz | Sigma | ||
| Agar Bateriolojik | Oxoid | agar plakası için | |
| Luria Bertani ortamı | |||
| Ters mikroskop | Leica Microsystems | Leica DMI-LED | 40X objektif kullanın NA = 0.55 |
| Mikroskop İnkübatörü | Canlı Hücre Aleti | Mikroakışkan ölçümü için kullanılan | CU-109 |
| Solenoidal valfler | Pnömadin: | S10MM-31-12-3 | Normalde açık 1.3 Watt 12 Vdc |
| USB arabirim kartı | Hobby Mühendislik | USBIO24-R Dijital I/O Modülü | mikroakışkan ölçümü için |
| Hava kompresörü | Rocker Scientific | ROCKER 440 | Mikroakışkanlar için basınç kaynağı; Basınç 80 psi |
| Mikroakışkan kontrol için kullanılan | 1/8" diken ValuePlastics.com MTLL230-1'e kadar erkek luer kilit bağlantı parçaları | ||
| Mikroakışkan kontrol için kullanılan | B-1 | ValuePlastics.com | /8" diken - 10-32 dişli bağlantı noktası |
| 10-32 dişli bağlantı noktasına kadar dişi luer kilit bağlantı parçaları | ValuePlastics.com | Mikroakışkan kontrol için kullanılan | KFTL-1 |
| NPN darlington transistör 500 mA, 40 V (2N6427) | DigiKey.com | Mikroakışkan kontrol için kullanılan | 2N6427GOS-ND |
| 10 kOhm, karbon film direnci, mikroakışkan kontrol için kullanılan 0,25 W | DigiKey.com | P10KBACT-ND | |
| Tantal kondansatör, 10 μ F, 25 V, %10 | DigiKey.com | Mikroakışkan kontrol için kullanılan | 478-1841-ND |
| Andor CCD kamera | Andor | Zyla 4.2 Plus SCMOS | çip üzerinde mikroakışkan görüntüleme için kullanılır |
| ELISA plaka okuyucu | |||
| iki bileşenli Silikon | Mikroakışkan çip üretimi için kullanılan | Momentive | RTV 615 |
| SU-8 fotorezist | Mikroakışkan çip üretimi için kullanılan | Micrchem | SU8 2015 |
| AZ4620 fotorezist | Clariant | AZ 4620 | mikroakışkan çip üretimi için |
| kullanılır Mikroakışkan çip üretimi için kullanılan | plazma temizleyici | Harrick Plasma | PDC 32G |
| 20 Gauge Şırınga İğnesi | BD | mikroakışkan çip üretimi için kullanılır | |
| Labcycler | Sensoquest | Labcycler | PCR |
| DNA polimeraz | Toyobo | KDO Plus | PCR amplifikasyonu |
| Trimetoprim | Sigma | ||
| Plaka okuyucu | Biotek | Synergy H1 hibrit | Antibiyotik Direnç Ölçümü |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste