Yöntem makalesi
Aşağıdaki protokol, izole edilmiş çalışan sıçan kalbinde glikoz ve yağ asidi oksidasyon oranlarının kantitatif ölçümü için tamponların hazırlanmasını ve kullanılmasını açıklar. Örneklem analizi ve verilerin yorumlanması için kullanılan yöntemler de tartışılmaktadır.
Memeli kalp ATP önemli bir tüketici ve daralma enerji substratların sabit bir kaynağı gerektirir. Şaşırtıcı olmayan bir şekilde, miyokard metabolizması değişiklikleri kasılma disfonksiyonu ve kalp yetmezliği gelişimine bağlantılı olmuştur. Bu nedenle, metabolizma ve daralma arasındaki bağlantıyı çözülüyor hastalık durumlarında kardiyak adaptasyon veya davranışsal sorunlar düzenleyen mekanizmaların bazıları da ışık tutmalıdır. çalışmakta olan sıçan kalbi hazırlığı aynı anda ve gerçek zamanda, kalp kasılma fonksiyonunun ve oksidatif metabolik yollar içinde alt-tabakaların temin enerji akı takip etmek için kullanılabilir. Mevcut protokol glikoz ve yağ asitleri, kalp substratlar sağlayan ana enerji oksidasyon oranları kantitatif ölçümü için tamponların hazırlanması ve kullanımında kullanılan yöntemlerin ayrıntılı bir açıklamasını sunmayı amaçlamaktadır. Örnek analizi ve veri yorumlama için kullanılan yöntemler de ele alınmıştır.Kısaca, bu teknik normotermik kristalloid perfüzyon yoluyla bir ex vivo dayak kalbe 14 arz C radyo-etiketli glukoz ve 3H-radyo-etiketli, uzun zincirli yağ asidi dayanır. 14 CO2 ile 3 H2O, son yan ürünleri bu enerji sağlayan alt-tabakaların kullanımına katılan enzimatik reaksiyonlar, ardından nicel koroner çıkış maddesinden geri kazanılır. kullanılan radyoaktif işaretli substratlar spesifik aktivitesi bilgisi ile, tek tek oksidasyon yolaklarında glükoz ve yağlı asit akışı ölçmek için mümkündür. izole edilmiş kalbin kasılma işlevi uygun kayıt cihazının paralel olarak belirlenir ve doğrudan metabolik akı değerleri ile ilişkili olabilir. teknik, öncesi ve yük ve iskemi, bir ilaç veya bir dolaşım sistemlerini sonra değişiklikler gibi çeşitli stres koşullarına cevaben metabolizma / daralma ilişkisini incelemek için son derece yararlıdırbir gen ürününün ekspresyonu değiştirilmesinden ting faktörü veya.
klinik Alaka
Memeli kalbinde, oksidatif metabolik yollar, ATP üretimi ve kalp işi 1 ile substratların akı arasında güçlü bir pozitif ilişki vardır. Son yirmi yılda, kalp metabolizması ve fonksiyon arasındaki karmaşık bağlantı soruşturma kalp metabolizmasında değişiklikler kalp hastalığının 2-4 farklı türde ortamında kasılma disfonksiyon ve patolojik yapısal yeniden bir nedeni olduğunu fark yol açmıştır. nedenle, stresli kalp metabolik biçimlenme düzenleyen mekanizmaların anlaşılması, kalp yetmezliği, 5-7 önlenmesi ya da tedavisi için bir terapötik hedeflerin tanımlanmasına yol açacağı beklenmektedir. "Kard....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
NOT: Tüm hayvan prosedürleri İnsan Hayvanların Bakım ve Kullanımına İlişkin NIH Halk Sağlığı Servisi Politikası göre yapıldı ve Mississippi Tıp Merkezi Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. radyoizotop kullanımını içeren tüm işlemler Mississippi Üniversitesi Tıp Merkezinin radyasyon güvenliği bürosu tarafından belirlenen esaslara göre onaylanmış ve gerçekleştirilmiştir.
Stok Tampon Çözümleri ve Reaktiflerin hazırlanması 1.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
İki Örnek deneyler aşağıdaki şekillerde tarif edilmektedir. Her iki durumda da, 16 haftalık erkek Sprague Dawley sıçan kalbi izole edilmiştir ve önceki protokole göre hazırlandı KH tamponu ile çalışma modunda perfüze. Her deneyde, kalp, kalp çalışma değiştirmek için bir stres durumu tabi tutulmuştur. Kalp kasılma fonksiyonu aort hattına bir basınç transdüktörünün yerleştirilmesi ile ve kalp gücünün belirlenmesi ile nabız basıncı sürekli kayıt ile değerlendirildi. Enerji veren substratlar.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
önceki protokol aynı zamanda izole çalışma sıçan kalbinde glukoz oksidasyonu ve yağ asidi oksidasyon yoluyla substratın akı ölçmek için yöntemler göstermektedir. Ölçümler daha sonra (... vb iş yükü değişimi, iskemi-reperfüzyon) taban ve stres koşullarında yüzeyler metabolizma ve kalp çalışma arasındaki ilişkiyi belirlemek için kaydedilen kardiyak fonksiyonel parametrelere yerleştirilebilir. Metabolizma / daralma ilişkisi, kalp yetmezliği ve diyabet gibi önceden var olan koşullar tarafından nasıl etkilendiğini d.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.
Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri Hibeleri R00 HL112952 (R.H.'ye), R01 HL108618 (JPG'ye), P01 HL051971 ve P20 GM104357 tarafından desteklenmiştir. İçerik yalnızca yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin resmi görüşlerini temsil etmek zorunda değildir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sodyum Klorür (NaCl) | Fisher Scientific | BP358 | |
| Potasyum Klorür (KCl) | Fisher Scientific | BP366 | |
| Potasyum Fosfat Monobazik (KH2PO4) | Fisher Scientific | P284 | |
| Magnezyum Sülfat Heptahidrat (MgSO4*7H2O) | Fisher Scientific | M63 | |
| Sodyum Bikarbonat (NaHCO3) | Fisher Scientific | S233 | |
| Kalsiyum Klorür (CaCl2) | Sigma-Aldrich | C5670 | |
| AG 1-X8 reçine, klorür formu, 100 - 200 kuru ağ boyutu, 500 g | Bio-Rad | 1401441 | Bu ürün doğrudan hidroksit formu satın alınarak değiştirilebilir (aşağıdaki referansa bakın), ancak bu neredeyse 8 kat daha pahalıya mal olacak |
| AG 1-X8 reçine, hidroksit formu, 100 - 200 kuru ağ boyutu, 100 g | Bio-Rad | 1432445 | Bu öğeyi satın almak, anyon değişim reçinesinin klorür formundan hidroksit formuna dönüşümünü atlamaya izin verir (Protokolün 1.2 bölümüne bakın) |
| Cam Mikroanaliz Vakum Filtre Tutucu | Fisher Scientific | 09-753-2 | |
| Sodyum Hidroksit (NaOH) | Fisher Scientific | S318 | Aşındırıcı. Uygun kullanım ve saklama için ürün MSDS'sine danışın. |
| Fritli Silindirli Gaz Dispersiyon Tüpü | Fisher Scientific | 11-138B | |
| Probumin Sığır Serumu Albümin Yağ Asidi İçermeyen, Toz | EMD Millipore | 820027 | Soğuk etanol fraksiyonlaması gibi diğer saflaştırma işlemleri kalp için toksik kalıntılar bırakabileceğinden, kömürle yağı alınmış bir BSA'nın kullanılmasını öneririz. |
| Sodyum Oleat | Sigma-Aldrich | O7501 | |
| Oleik Asit, [9,10-3H(N)]- | PerkinElmer | NET289005MC | Radyoaktif malzeme. Sipariş ve kullanım için Kurumunuzun radyasyon güvenliği ofisi yönergelerini izleyin. |
| Diyaliz Membran Hortumu, 29 mm çap | Fisher Scientific | 08-667E | |
| D-(+)-Glikoz | Sigma-Aldrich | G7021 | |
| Glikoz, D-[14C(U)]- | PerkinElmer | NEC042B005MC | Radyoaktif malzeme. Sipariş ve kullanım için Kurumunuzun radyasyon güvenliği ofisi yönergelerini izleyin. |
| Humulin R U-100 | Eli Lilly ve Şirket | NDC 0002-8215-01 (HI-210) | |
| İnaktin | Hidrat Sigma-Aldrich | T133 | USDEA Çizelge III'te Kontrollü madde |
| 3-0 İpek Siyah Örgü | Roboz Cerrahi | SUT-15-3 | |
| 10x Hiyamin Hidroksit | PerkinElmer | 6003005 | Son derece toksiktir ve ciddi yanıklara neden olur. Uygun kullanım ve saklama için MSDS ürününe danışın |
| 20 ml Cam Sintilasyon | Şişeleri Fisher Scientific | 03-341-25E | 14< / sup>CO2< / sub>20 ml HDPE Sintilasyon Şişelerinin kantitatif geri kazanımı için cam şişeler kullanın |
| Fisher Scientific | 03-337-23B | 3H2O Kırmızı'nın kantitatif geri kazanımı için HDPE şişeleri kullanın | |
| Kauçuk Kılıf Tıpaları | Fisher Scientific | 14-126DD | Fit 20 mL sintilasyon şişeleri; Yeniden |
| Kullanılabilir BD PrecisionGlide İğnesi 23G x 40 mm | BD | 305194 | CO2 tuzağının kauçuk manşon durdurucusundan perklorik asit enjekte etmek için kullanın |
| Perklorik Asit, %60 | Fisher Scientific | A228 | Son derece aşındırıcıdır ve oksitleyici görevi görebilir ve/veya patlama tehlikesine neden olabilir. Uygun kullanım ve saklama için ürün MSDS'sine danışın |
| Ultima Gold, Sintilasyon Kokteyli | PerkinElmer | 6013327 | |
| Cam Yünü | Fisher Scientific | AC38606 | |
| Decon Dri-Clean Deterjan Tozu | Fisher Scientific | 04-355 | Cam eşyaların, plastik parçaların ve boruların temizliği için |
| Alconox Tergazyme Enzim Aktif Enerjili Deterjan | Fisher Scientific | 16-000-115 | Yağ asidi-BSA kalıntısı ile kontamine olmuş "ulaşılması zor" yüzeylerin (borular, cam eşyalar) temizlenmesi için |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste