Method Article

Sıçan Cremaster'ın Muscle arteriyollerde Hücre-serbest Katman Görselleştirme ve

DOI:

10.3791/54550

⸱

October 19th, 2016

 ,  ,  ,  , 
1NUS Graduate School for Integrative Sciences and Engineering, National University of Singapore, 2Department of Biomedical Engineering, National University of Singapore, 3Department of Surgery, National University of Singapore

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, in vivo hücresiz tabakanın görselleştirilmesi için sıçan kremaster kasının cerrahi hazırlığını göstermektedir. Bu çalışmada, hücresiz katman genişliği ölçümünün doğruluğunu etkileyen önemli faktörler tartışılmıştır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücresiz tabaka, mikrodamar akışında kırmızı kan hücrelerinden yoksun olan parietal plazma tabakası olarak tanımlanır. İn vivo hücresiz tabaka genişliğinin ve uzay-zamansal varyasyonlarının ölçümü, mikrosirkülasyondaki hemodinamiğin kapsamlı bir şekilde anlaşılmasını sağlayabilir. Bu çalışmada, in vivo olarak arteriyollerdeki hücresiz katman genişliklerini ölçmek için yüksek hızlı bir video kamera ile birleştirilmiş intravital mikroskobik bir sistem kullandık. Sprague-Dawley sıçanlarının kremaster kası, kan akışını görselleştirmek için cerrahi olarak dıştan çıkarıldı. Görüntü işlemeyi ve hücresiz katman genişliğinin analizini otomatikleştirmek için özel olarak oluşturulmuş bir görüntüleme komut dosyası da geliştirildi. Bu yaklaşım, uzay-zamansal varyasyonların önceki manuel ölçümlerden daha tutarlı bir şekilde ölçülmesini sağlar. Bununla birlikte, ölçümün doğruluğu kısmen mavi bir filtrenin kullanılmasına ve uygun bir eşikleme algoritmasının seçilmesine bağlıdır. Özellikle, mavi filtre kullanılarak ve kullanılmadan elde edilen görüntülerin kontrastını ve kalitesini değerlendirdik. Ek olarak, beş farklı görüntü histogram tabanlı eşikleme algoritmasını (Otsu, minimum, modlar arası, yinelemeli seçim ve bulanık entropik eşikleme) karşılaştırdık ve hücresiz katman genişliğinin belirlenmesindeki farklılıkları gösterdik.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İn vivo hayvan çalışmaları, insan fizyolojisini ve patolojisini anlamak için temel bilime alet olur. Özellikle, in vivo mikrohemodinamik çalışmalar, kanın anormal reolojik koşulları tarafından değiştirilen mikro dolaşım fonksiyonlarının potansiyel bozulmasını aydınlatabilir. Daha önce yapılan bir dizi mikrohemodinamik çalışma1, mikrovasküler kan akışını görselleştirmek için sıçan cremaster kas modelini kullanmıştır. Cremaster kası, testisleri çevreleyen ince bir çizgili kas tabakasıdır. Böylece, kastaki kan akışı, cerrahi maruziyet yoluyla trans-aydınlatma mikroskobu ile görüntülenebilir. Bu, herhangi bir floresan veya kontrast madde kulla....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Singapur Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (onaylanan protokole hayır. R15-0225) Ulusal Üniversitesi ile uyumludur.

Hayvan Modeli 1. Cerrahi Hazırlık

  1. Gemi kanülasyonlar
    1. Erkek bir Sprague-Dawley sıçanları anestezi - ağırlığında (6 7 haftalık), (203 ± 20) intraperitonal yoluyla ketamin (37.5 mg / ml) ve ksilazin (5 mg / ml) kokteyli ile gr (ip) enjeksiyonu (2 ml / kg) . İğneyi tekrarlamak ya da enjeksiyondan sonra şırınga çıkarmayın.
    2. hayvana anestezi yapıldıktan sonra (kıstırma ayak ile teyit), 37 ° C de vücut ısısını korumak için bir ısıtma pedi üzerine yerleştirin. Yavaş....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In vivo CFL görselleştirme hayvanın cerrahi hazırlıkları büyük ölçüde bağlıdır. Aşırı kan kaybı ya da genişletilmiş cerrahi süresi şok ve kan akımı sapmaları hayvan tabi olabilir. bir ısıtma yastığı yanı sıra cerrahi ve deney sırasında özelleştirilmiş bir platformu kullanarak doku sıcaklığı bakım da sıçan fizyolojik koşulları sağlamak için önemlidir. mikroskop sistemi bir 100 W halojen lamba kullanarak, hiç bir farkedilebilir doku hasarı da deneyin sonunda gözlemlenmiştir.

Ş.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CFL genişlik ölçüm mikrosirkülasyonun hemodinamik daha iyi anlaşılması için önemlidir. Özel olarak, flüoresan genişlikleri ölçümü mezenterik 6'da gerçekleştirilmiştir, 24 ve serebral 25 mikrodolaşımını spinotrapezius. In vivo flüoresan genişlikleri geleneksel ölçüm kaydedilen video çerçevelerinin elle muayene ile tahminlerine sınırlandırılmıştır. Manuel ölçümler görsel RBC çekirdek ve damar duvarlarının 15,16 sınırlarını belirleme önce birkaç ardışık video kareler.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar herhangi bir rakip mali çıkar beyan etmemektedir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Ulusal Tıbbi Araştırma Konseyi (NMRC)/Kooperatif Temel Araştırma Hibesi (CBRG)/0078/2014 tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
İntravital mikroskopOlympusBX51WIEkipmanları
Yüksek hızlı kameraPhotron1024PCIEkipmanları
Mavi filtreHOYAB390
Ekipmanları Basınç sensörü ve biopac sistemiBiopac sistemiTSD104A, MP100Ekipmanı
Sıcaklık kontrolörüShimadenSR 1Ekipmanları
Plazma Lyte ABaxterNDC: 0338-022137 ° C'de sıcak; Kullanmadan önce C su banyosu
Tuzlu Suya %0.9Braun
Heparin (5.000 IU/ml)LEO
PE-10 polietilen tüpBecton Dickinson427400.024"OD x .011" ID 
PE-50 polietilen tüpBecton Dickinson427411.038" OD x .023" ID
PE-205 polietilen tüpBecton Dickinson427446.082" OD x .062" ID
2-0 emilmeyen ipek sütürDeknatel113-S
5-0 emilmeyen ipek sütürDeknatel106-S
Su sirkülasyonlu ısıtma yastığıGaymar
Su banyosuFisher Scientific Isotemp205
Ekipmanları Steril Pamuklu Gazlı Bez ve nbsp;Fisher Scientific22-415-468
Pamuk uçlu aplikatörlerFisher Scientific23-400-124
Dumont ForsepsKent ScientificINS14188Cerrahi alet
Mikro Diseksiyon forsepsKent ScientificINS15915Cerrahi alet
İris forseps 1 x 2 dişKent ScientificINS15917Cerrahi
Enstrüman Damar kanülasyon forsepsKent ScientificINS500377Cerrahi alet
Mikro makasKent ScientificINS14177Cerrahi alet
İris makasKent ScientificINS14225Cerrahi alet
Damar klipsiKent ScientificINS14120Cerrahi alet
İkizler koter sistemiBraintree ScientificGEM 5917Cerrahi alet

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kim, S., Kong, R. L., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. Temporal and spatial variations of cell-free layer width in arterioles. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 293 (3), H1526-H1535 (2007).
  2. Ong, P. K., Namgung, B., Johnson, P. C., Kim, S.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell free LayerArteriolesRat Cremaster MuscleIntravital MicroscopyHigh speed Video CameraImage ThresholdingBlue FilterTemporal VariationSpatial VariationMedian Filter

Related Articles