Yöntem makalesi

İnsanlardaki Sağlıklı ve Patolojik Beyin Koşulları Eğitim için Kesme Simetrik Bihemispheric Postmortem Beyin

DOI:

10.3791/54602

⸱

18 Aralık 2016

 ,  ,  , 
1Neuropathology Research, Biomedical Research Institute of New Jersey (BRInj), 2Department of Pathology, Atlantic Health System (AHS), Overlook Medical Center

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Organize beyin kesme prosedürleri kesin nöropatolojik tanıları ile belirli nöropsikiyatrik olayları ilişkilendirmek için gereklidir. Beyin kesimler çeşitli klinik-akademik beklenmedik göre farklı yapılır. Bu protokol, insan beyni patolojilerinde hemisferik farklılıkların araştırılması ve mevcut ve gelecekteki biomoleküler / beyin teknikleri en üst düzeye çıkarmak için bir simetrik bihemispheric beyin kesme prosedürü anlatılmaktadır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nöropatologlar, zaman zaman, bir beyin otopsi talep edildi kimin için bu hastalarda tanımlanan karmaşık nöropsikiyatrik olaylar için kesin tanı üretmek için gerekli olan bilginin miktarına göre çekinmeye. biyomedikal bilimler ve beyin görüntüleme gelişmeler nöropsikiyatrik alanında devrim olmasına rağmen, aynı zamanda beyin otopsi sadece bir doğrulayıcı bir değere sahip olduğunu yanıltıcı fikrini yarattı. Bu yanlış bir düşüncedir dolayısıyla bir azalma olasılığı insan beyninin henüz bilinmeyen sayısız normal ve patolojik yönlerini kavramak için gerekli olan daha detaylı ve kapsamlı nöropatolojik araştırmalar gerçekleştirmek için, otopsi oranları ciddi bir azalma yarattı ve. Gözlenen nöropsikiyatrik olaylar ve bunların olası neurohistological ögelerinden gelen yerelleştirme / karakterizasyonu arasındaki korelasyonun geleneksel çıkarımsal yöntem yadsınamaz bir değere sahip olmaya devam etmektedir. neuropsychi bağlamındabeyin dokularının doğrudan fiziksel değerlendirilmesi üzerine özellikle dayanır çünkü atric hastalıklar, geleneksel klinikopatolojik yöntem, hala bunlara karşılık gelen nöropatolojik yüzeylere benzersiz nöropsikiyatrik özellikleri bağlamak mümkün olan en iyi yöntem (ve genellikle sadece mevcut) 'dir. postmortem beyin değerlendirme beyin farklı nöropatoloji merkezleri arasında değişir kesme işlemleri dayanmaktadır. Beyin kesimler her kurumda mevcut çeşitli klinik ve akademik şarta dayalı nispeten geniş ve sistematik bir şekilde yapılmaktadır. Daha anatomik kapsayıcı ve simetrik iki hemisfer beyin kesme yöntemi en azından derinliği, belirli insan beyninin (yani, hemisferik özelleşme ve lateralizasyon özellikleri ile normal ve patolojik durumlarda, tutarlı araştırmak için insan nöropatoloji araştırma amaçlı kullanılması gerektiğini fonksiyonlar). daha kapsamlı bir colle sağlayacak bu gibi bir yöntem olupmevcut ve gelecekteki biyoteknolojik ve beyin görüntüleme teknikleri kullanılabilir nöropatolojik iyi karakterize beyinlerin ction. Biz insan beyninin patolojilerinde hemisferik farklılıkların incelenmesi için ve akım kullanımının yanı sıra gelecekte biomoleküler / beyin teknikleri simetrik iki hemisfer beyin kesme prosedürü açıklar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nöropatologlar insan beyni değerlendirmek için bilimsel ayrıcalık, entelektüel şeref ve teşhis yükümlülüğü vardır. Uzun yıllardır, beyin hastalıkları ve önemli çabaların ayrıntılı klinik açıklamaları insan postmortem beyinlerinde olası neurohistological karşılıkları üstlenilmiştir bireyselleşmek için. Tarihsel olarak, bu çabaların özellikle tıp bilimleri ve nöroloji, modern çağın gelişmiş olan en verimli modalite temsil etti. önceki seçkin nöropatolog ve onların özveri, kararlılık, burs ve şaşırtıcı kapasitesi sayesinde (genelde çok rudimental araçları kullanarak) normal ve anormal beyin dokularında arasında ayrım, şimdi araştırmak ve Alzheimer-Perusini hastalığı gibi hedef hastalıkları (haksız sadece adlandırılan Alzheimer hastalığı, APD / MS) 1, Parkinson hastalığı (PD) 2, Creutzfeldt-Jakob hastalığı (CJD) 3, Lou-Gehrig hastalığı / Amyotrofık Lateral sclerosis (ALS) 4, ve Guam hastalığı 5, birkaç söz.

Fonksiyonel ve morfolojik manyetik rezonans görüntüleme (yani, fMRI, difüzyon MR, traktografi-MR, vb), Pozitron Emisyon Tomografisi, bu tür yüksek çözünürlüklü bilgisayarlı tomografi (BT anjiyografi, yani multisection spiral CT taraması) olarak nörogörüntülemenin ileri teknikleri, (PET), ultrason tabanlı görüntüleme ve diğerleri, kesinlikle teşhis ve nörolojik ve psikiyatrik hastaların tedavisi için nasıl bizim genel yaklaşım değiştirdiniz. Bununla birlikte, beyin teknikleri canlı, doğrudan nöronlar gibi hücrelerin son derece karmaşık hücresel ve hücre içi yapılarını analiz etmek, ortaya çıkan şu anda, fırsat sunmuyoruz zaman bir kişinin beyni görselleştirme yeteneğine sahip olmasına rağmen; veya, mark görselleştirmek ve hücre içi lezyonların belirli türde ölçmek için; ya da tam circuital ile alt onların nöroanatomik veya alt bölgesel lokalizasyonu belirtmek içincircuital anatomik seviyeleri. Örneğin, beyin görüntüleme teknikleri, entorinal kortekste AD klasik özelliği Substansiya Nigra (SN), PD ile ilişkili patolojik bir özellik ya da nörofibrular düğüm (NFT) pigmente nöronlarda Lewy Kuruluşları (LB) tanımlamak veya lokalize edemez ve diğer beyin patolojileri. gelişmiş dijital mikroskobu ile birlikte nöropatolojik araştırmalar kesin tanı için, böylece yine detaylı klinikopatolojik korelasyon unreplaceable ve.

Nedeniyle insan beyninin kendine özgü anatomo fonksiyonel özellikleri ve özellikle anatomik lokalizasyonu (yani, kafatası, içeriği doğrudan muayene izin vermez doğal bir koruyucu sistem içinde), in vivo beyin görüntüleme tekniklerinin tanıtımı bu karmaşık doku gizemleri bazı ilk yanıtlarını bulmak için olağanüstü yardımcı klinisyen ve araştırmacılar var. Bununla birlikte, herhangi bir klinik veya neuroimagi oradadoğrudan bir otopsi sırasında beyin dokusunun analiz için eşsiz bir fırsat yerini alabilir ng metodolojisi. Sadece organize toplanması, korunması ve insan beyni sınıflandırılması nöronal ve nöronal olmayan hücreler, onların hücre içi bileşenleri, hücre içi ve hücre dışı patolojik lezyonların doğrudan ve sistematik araştırmalar izin verebilir ve beynin içinde anormallik her türlü, onaylamak, değiştirmek ya da klinik tanı yeniden tanımlamak ve yeni klinikopatolojik korelasyon keşfetmek için. Otopside beyin değerlendirilmesine ilişkin belirgin kısıtlamalar biri bu işlem bir kesit yöntem olması olmuştur. Her zaman devam eden bir nöropatolojik süreç (klinik olarak tezahür ya da değil) ve neurohistological düzeyde tanımlamak şansı varsa, arasında bir gecikme olur. Bu kendini yenilemesi insan beyninin göremezlik kaynaklanmaktadır. Pe yaratmadan in vivo beyin dokusu elde etmek mümkün değilrmanent hasar. Sonuç olarak, uzunlamasına ve nöropatolojik aynı beyin / kişi değerlendirmek mümkün değildir. Ancak, standart beyin bankacılık işlemleri ve genel halk arasında beyin bağışı için artan bir farkındalık büyük ölçüde tutarlı toplamak ve analiz etmek için vaka sayısını artırarak beyin otopsi zamanlama sorunların çözümüne katkıda bulunabilir. Bu şekilde, ölüm sonrası beyin daha yeterli sayıda, her bir insan beyin hastalığı ile bağlantılı beyin lezyonu her bir özel tipte patolojik Kalkış ve ilerlemesi sabit desen tanımlamak için elde edilebilir. Bu her yaştan genelinde bağış ve mümkün olduğunca çok sayıda beyin koleksiyonu herhangi bir nöropsikiyatrik bozukluk etkilenen hastaların yanı sıra sağlıklı kontrol grubu gerektirecektir. Bir olası bir yöntem standart rutin olarak genel ve özel tıp merkezlerinden mümkün olduğunca çok sayıda postmortem beyin toplama olabilir. Beyin bağış ihtiyacı son zamanlarda ifade edilmiştirdemans ve normal yaşlanma 6 çalışma olanlar tarafından. Aynı zorunluluk bütün olarak nöropsikiyatrik alanı tarafından ifade edilmelidir.

diğer nedenlerle yukarıda belirtilen ve için, devam etmekte olan beyin kesme prosedürlerinin bir güncelleştirme gereklidir. Ayrıca, kesme işlemleri beyin evrensel da daha kesin nedenleri ve beyin hastalıklarının mekanizmaları, anlamak için, umarım, araştırmak ve mevcut ve gelecekteki biyoteknolojik teknikler istihdam imkanı hesabında alarak, dünya çapında farklı nöropatoloji araştırma merkezleri arasında standardize edilmelidir insanlar.

Burada, esas olarak araştırma amaçları için, ölüm sonrası beyin insanlarda kesme simetrik bir yöntem tarif eder. Bu prosedür normalde yapmaktan daha hem serebral ve serebellar hemisferde daha serebral bölgeleri toplama önermektedir. Bir simetrik iki hemisfer beyin kesme işlemi insan mevcut bilgi ile daha iyi uyacakNöroanatomi, nörokimyasal ve nörofizyoloji. Bu yöntem aynı zamanda olasılık nöropatolojik gibi yüksek bilişsel ve non-bilişsel işlevler, tipik veya münhasıran mevcut bizim türlerde ile ilişkili hemisferik uzmanlaşma ve lateralizasyon olarak insan beyninin benzersiz özellikleri, analiz etmeyi sağlar. hemisferik uzmanlık / lateralizasyonun ve beyin lezyonlarının belirli türleri arasındaki özel patogenetik ilişkiler var olsun, ya da bir tuhaf nöropsikiyatrik patogenetik olay olup olmadığını başlangıçta, yaygın, ya da sadece belirli bir yarımkürenin ile ilişkili ve işlev henüz bilinmemektedir. Bu simetrik beyin kesme işlemini anlatarak, daha iyi bir derece uzmanlaşmış dokusunda normal ve patolojik durumları, beyni anlamak için yardımcı olabilir insan beyni diseksiyon güncelleştirilmiş bir yöntem önermektir hedefliyoruz. Bu yöntem aynı zamanda dikkate sadece insanlarda var olan morfo-fonksiyonel hemisferik yönlerini alır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

postmortem insan dokuları içeren Prosedürler kurumsal inceleme kurulu tarafından incelenir ve 45 CFR (Federal Düzenlemeler Kanunu) kapsamında muaf edilmiştir.

NOT: protokol insanlarda nöropatolojik çalışmalar için kesinleşmiş postmortem beyin değerlendirmesi için bir simetrik bihemispheric beyin kesme prosedürü anlatılmaktadır. İnsan beyni kesim gerçekleştirmek için gerekli aparatlar, enstrümanlar, malzeme ve sarf malzemelerinin ayrıntılı açıklamalar hariç tutulacaktır. Beyin diseksiyonlarının malzemeleri ve gereçleri tek araştırmacı takdirine seçilir ve izin verilen veya her araştırma kurumunda onaylı otopsi araçları dayanmaktadır. Bu prosedür için gerekli araç ve malzemenin en az set Malzeme / Ekipman Tablo açıklanmaktadır. Spesifik kesme işlemleri ve insan CJD olarak şüpheli bulaşıcı beyin hastalıkları için önlemler, bu yazının amaçları dışında ve diğer kaynaklardan 7 edinilebilir.

1. Simetrik Bihemisferik Beyin Kesme

Not: iki ya da üç haftalık bir süre için periagonal, metabolik bağlı olarak (örneğin, Ph), ve doku korunması ((nötr tamponlu% 10 formalin örneğin kullanılarak), beyin, gerekli doku fiksasyon aldığı sağlamak örneğin, sıcaklık) şartları. Ancak, görüntüleme-patoloji korelasyon çalışmaları, fiksasyon uzun bir süre için (> 5.4 hafta) 8 ileri sürülmüştür.

  1. araştırmacıya göre ters yönde yönlendirilmiş ön direkleri ile, araştırmacı bakan düz bir yüzeye beyin yerleştirin.
  2. Tüm kortikal girus ve tüm beyin (Şekil 1a) sulkuslar tam ve net görselleştirme izin için böyle bir şekilde beyin yerleştirin.
  3. Meningeal anomaliler için ilk bakış, makroskopik hemisferik asimetriler (fokal, lober veya atrofi genelleştirilmiş hemisferik olayların olası göstergeler), makroskopik tissutal lezyonları (örn tumors veya herniasyon), konjenital malformasyonlar, damar anormallikleri ve diğer olası anormallikler veya serebral yüzeyinin alışılmadık sunumları.
    NOT: insan beyni nasıl değerlendirileceğine ilişkin ayrıntılı açıklamalar için, ticari olarak mevcut nöropatoloji ders kitapları ve otopsi kılavuzları 9,10 bakın.

2. Protokol Sıra

  1. araştırmacı bakan hemisfer (telencephalon) yüzeysel yönleri ile, uzak araştırmacı gelen ön direkleri karşı karşıyadır. Olası makro-anomalileri belgelemek ve olası klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraflar çekin. Araştırma görevlisi tüm kortikal yüzey yakalamak için beyne dik dijital fotoğraf çekmek var (Şekil 1a - c).
  2. Mark öncesi ve beyin kesmeden önce mürekkep veya renkli iğneler kullanılarak postsentral kortikal giruslar (Şekil 1b ).
    Not: Bu yordam, motor ve kesme sonra somatosensoriyel birincil korteks daha yakın tanıma kolaylaştırır.
  3. Aynı yöne bakan tutarken 180 derece beyin döndürün (yani, araştırmacı uzağa bakan ön direkleri). Dikkatle beyin tabanını kontrol edin. Serebrovasküler sistem koşulları (yani, baziler ve vertebral arterler ve Willis poligonunun) kendi beyin çıkış / giriş seviyesinde ve kranial sinirlerin özel dikkat gösterin. nedeniyle aşırı kırılganlık için, tissutal laserasyon önlemek için özel bakım ile koku ampuller ve risaleler yönetin.
    1. Olası makro-anomalileri belgelemek ve olası klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraflar çekin. araştırma görevlisi kortikal ve beyin sapı yüzeylerinin bütününü yakalamak için dik beyne dijital fotoğraf çekmek var.
  4. beynin tabanına bakan ve bir neşter kullanarak, (beyin tabanına mümkün olduğunca yakın) pons üst kısmının seviyesinde beyin sapı enine olarak kesildi. Dikkatle 11 (solukluk için yani) SN incelemek ve diğer komşu yapılar 12. Muhtemelen normal bir beyne 13 oranla beynin herhangi bir olağandışı görünüm, bir ses kaydedici cihazı kullanılarak, not alın.
  5. Yine medial longitudinal fissür aracılığıyla merkezi korpus kallosum kesme ve fronto-oksipital yönünü takip ederek iki hemisfer ayırmak, keskin bir bıçak kullanarak, 180 derece beyin döndürmek ve. Mümkün (örneğin, ventriküler büyütmeler, malformasyonlar, doku yumuşatma, tümörler, vb) anomaliler 13 her yarımkürenin her tarafını kontrol edin. Şekil 2a bakın.
    1. Olası makro-anomalileri belgelemek için her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraf çekmek veMümkün klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba. araştırma görevlisi tüm kortikal yüzey yakalamak için dik beyne dijital fotoğraf çekmek var. Normal bir beyinde göre beynin herhangi bir olağandışı özelliği dikkate alınız.
  6. Şekil 2b gösterildiği gibi frontal lob, uzak araştırmacı dan bakacak, onların medial yönleri üzerinde yatarken, iki hemisfer düz yerleştirin. onların merkezleri (işaretli hemisferik asimetri durumunda da) temas şekilde koyun.
  7. Keskin bir bıçak kullanarak, elle ön kutuplarda başlayan ve hemisferlerin tüm uzunluğu boyunca oksipital kutuplara doğru hareket, hem serebral hemisfer kesti. (Her yarım küre 18 slab civarında) beyin dokusu 1 cm kalınlığında iki dizi blok elde edilir.
  8. Ayrı bir düz bir yüzey üzerinde anatomik düzenlenen (fronto-oksipital yönü) sırayla beyin döşeme yerleştirin. beyaz bir taşlama kullanınfotoğrafını çekerken daha iyi kontrast için üzerine basılmış bir cetvel ile ce. Onların koronal yüzeyler doğrudan göz muayene ve dijital fotoğrafçılık (Şekil 3a) görebilir emin, anatomik simetrik bir şekilde (fronto-oksipital yönü) serebral plaka iki dizi görüntüler. daha doğru bir şekilde beyin yapıları, boyutları ve olası anormallikleri lokalize her iki tarafta basılı milimetrik ızgaraları ile kesim yüzeyleri kullanın.
    1. Olası makro-anomalileri belgelemek ve olası klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraflar çekin. araştırma görevlisi tüm kortikal yüzey yakalamak için dik beyne dijital fotoğraf çekmek var. Normal bir beyinde göre beynin herhangi bir olağandışı yönü, (muhtemelen bir ses kaydedici cihazı kullanılarak) notlar alın.
  9. keskin bir neşter kullanılarak, elle küçük dikdörtgen bloklar teşrihHer kurulan serebral bölge için beyin dokusu. Tablo 1'de açıklanan önerilen serebral bölge toplama düzeni takip edin.
    1. ayrı bir şekilde etiketlenmiştir histocassettes her doku bloğu koyun.
      Not: beyin dokusunun her blok mümkün olduğu kadar, uygun olarak kesilmesi gereken standart histocassette maksimal hacim (30 x 20 x 4 mm3).
    2. Her iki durum için bir de tanımlama kodu kullanarak ve belirli nöroanatomik tanımlayıcıları kullanarak histocassettes etiket (farklı beyinleri için rasgele harf veya rakam kullanmayın; Tablo 1'de görüldüğü gibi daha ziyade, her zaman, anatomik isimleri veya ilgili numaralar aynı bölgesel kullanın). Oluşturma de tanımlayıcı kodları, örneğin, örneğin, BRC 130 B beyin kalır burada, R, kaynak için kalır, Cı Center kalır ve 130 ilerleyici katılım ya AD160001 (her durum için rastgele ya da yarı-rastgele sayılar ile AD için nerede durduğunu "Alzheimer hastalığı çalışmasında," 16yıl otopsi ilerici katılım örnek numarası (2016) gerçekleştirilen ve 0001 ne zaman).
      NOT: Bu adım ileride araştırmacılar için çok yararlı olduğunu; Bir efsane tutmak ve yarımkürede (L = sol yarımküre, R = sağ hemisfer) belirtin. Her yarımkürede için özel bir renk kuran histocassettes iki farklı renkler kullanın.
    3. Mümkün macroanomalies belgelemek ve olası klinik-Nöroanatomik ve post-kesme hususlar hesaba her özel durumda gerektiği kadar dijital fotoğraflar çekin. araştırma görevlisi tüm kortikal yüzey yakalamak için dik beyne dijital fotoğraf çekmek var. Normal bir beyinde göre beynin herhangi bir olağandışı özelliği dikkate alınız.
  10. dijital fotoğraf çekin, tüm kesim beyin ve ilişkili histocassettes ve (gerekirse veya istenen birçok gibi).
  11. (Accu-zımba ile örneğin) Punch, DNA ekstraksiyon ve genetik analizler için küçük doku parçaları. kullanımçapı 5 mm - 2 bir zımba.
    NOT: Genomik malzeme yüksek içerik için, beyincik tercih ediliyor; Ancak, herhangi bir başka bölge gayet iyi.
  12. Daha önce doku işleme sonraki adıma kadar kullanıldığı gibi fiksatif solüsyonu (örneğin,% 10 nötr tamponlu formalin) aynı tip beyin dokusu blokları içeren tüm histocassettes yeniden sokmak.
  13. İnsan formalin ile fikse doku işleme 14 standart prosedürleri uygulayın.

3. Özel Bir Yaklaşım: Alternatif Dondurulmuş ve Sabit Simetrik Bihemispheric Kesme

Not: Bölüm 2'de açıklanan simetrik bihemispheric beyin kesme protokolü aynı sistematik ve simetrik bir şekilde sabitlenmemiş, taze beyinleri doku döşeme kesme olasılığı (mevcut) sunmaktadır.

  1. Bir 10 dakika -80 ° C derin dondurucuda beyin dokusunun sertleşmesine ezelî - ters (tercihen yarı küresel kase gibi plastik yüzey üzerinde) 8 tüm taze beyin yerleştirint biyokimyasal hasar kışkırtan ve manuel kesim kolaylaştırmak için.
  2. Keskin bir bıçak kullanarak, Bölüm 2'de anlatılan beyin kesme protokol izlenerek, alternatif ve peş peşe iki yarımkürede kesti, ama donma ve (bir fronto-oksipital anatomik yönden her iki yarımkürede gelen ve birlikte) her levha düzeltmek.
    1. Bu noktada, Tablo 1 'de tarif edildiği gibi, her bir serebral bölge kesmek için çalışma. Acil RNA veya protein ekstraksiyon (yani, genomik veya proteomik çalışmalar için) 15 için gerekli sadece belirli taze beyin bölgeleri kesin.
  3. kestikten sonra, hemen her taze doku, etiket dondurmak ve sayısı. Tüm döşeme serisi dijital fotoğraf çekin; Tek bir plastik torba içinde her döşemeyi paketi; Ayrı bir tek beyin tek kapta döşeme toplamak; ve özel bir -80 ° C derin dondurucuda kabı saklayın.
    NOT: dondurucu, insan beyin dokusunun sadece adanmış olmalıdır. Ancak daha sonra şarkı söyleyecekher özel deney için gerekli olan le dondurulmuş beyin bölgelerinin kesilebilir.
  4. Yeterli fiksatif hacmini (sabitleyici / doku blok oranı 3/1 hacim) içeren ayrı torbalarda tespit (% 10 nötr tamponlu formalin ya da başka bir sabitleştirici) için seçilen her doku levha daldırın. ardışık bir fronto-oksipital dizisi aşağıdaki onları numaralandırma her torbayı etiketleyin. Her torbanın ağzını sıkıca kapatın dijital fotoğraf çekmek ve bir plastik kapta saklayın.
  5. Doku tespitin 2 hafta sonra sabitleştirici içeren çanta açın ve Tablo 1'de açıklandığı gibi, her serebral bölgeyi kesti.

4. Histostain ve İmmünohistokimya

NOT: Serebral bölgelerin kümesi önerilen sisteme dayalı kesmek (Tablo 1) AD 16 için en, hepsi değilse de, şu anda kurulmuş uzlaşmaya dayalı patolojik kriterleri karşılamak için yeterli, PD 17, Lewy Bodies (LCD) 18 Demans, frontotemporal Demans (FTD / MND) 19, Progressive Suprabulbar Palsy (PSP) 20, Çoklu Sistem Atrofi (MSA) 21, vb Kronik Travmatik Ensefalopati (CTE) 22.

  1. Her beyin bölgesi için ve her iki yarımkürede için, histostains aşağıdaki asgari kümesi gerçekleştirin: Hematoksilen ve Eosin (H & E), cresyl menekşe (CV; nicel morfometrik çalışmalar, örneğin planlanan varsa), ve gümüş boyama (eğer "keşif" analizler vardır gerekli).
  2. Her beyin bölgesi için ve her iki yarımkürede için, immünhistokimya protokolleri aşağıdaki minimum setini gerçekleştirin: (β A) fosforile-Tau (pTau'nun), fosforile α-sinüklein (pα-sin) amiloid BETA ve fosforile-TDP43 (pTDP43) olarak 14 tanımlanan.
    NOT: (her iki yarımkürede tüm beyin bölgeleri varsa) bu protokol sonrasında her beyin değerlendirmek için doku kesitlerinde toplam sayısı 46 olduğunu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

protokol uzunluğu

Tek bir simetrik bihemispheric sabit beyin kesme işlemi için harcanan zaman 1 saat olarak tahmin ediliyor (; etiketleme, yüzeyler diseksiyon tablo, araçlar kurma ve kesme harcanan zaman hariç. Vs). dondurulmuş ve prosedürü kesme beyin sabit tek bir simetrik iki hemisferik alternatif için gereken süre 2 saat alacağı tahmin ediliyor. Tek bir insan beyni / konu için kesin histolojik tanı elde etmek için 6 ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu beyin kesme yöntemi hala ana özelliklerinden biri olarak bihemispheric simetrik kesme işlemi korurken (örneğin, her yarımkürede değerlendirmek için beyin bölgelerinin sayısını azaltarak) her nöropatoloji laboratuarında özel ihtiyaçlarına göre adapte edilebilir. Bu önerilen protokol rutin işlemler (araştırma odaklı nöropatolojik merkezler) veya sadece gerektiğinde (özel klinik odaklı çalışmaları) için kullanılabilir. Bu seçici olarak yalnızca araştırmalar belirli türleri (örneğin, immünohistokimya) veya molek...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Son iki yüzyıl boyunca cömert yetenekleri ve entelektüel çabalarıyla insan beyninin nasıl çalıştığını keşfetmeye, yıkıcı beyin hastalıklarını anlamaya ve bunların tedavilerini geliştirmeye yardımcı olan dünyanın dört bir yanındaki binlerce beyin bağışçısına, hastaya, aileye ve sinirbilimciye teşekkür ediyoruz. Bu el yazmasını hazırladığı ve gözden geçirdiği için Bayan Cecilia V. Feltis'e özellikle teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Araştırma kullanımı için otopsi ve beyin bağışına izin veren imzalı bilgilendirilmiş onayın kopyası.
Herhangi bir nörolojik ve psikiyatrik semptom ve belirtinin ayrıntılı bir tanımını içermesi gereken konunun ayrıntılı klinik öyküsü.
Mümkün olduğunda tıbbi veya tıbbi olmayan video kayıtları (özellikle hareket bozuklukları alanında kullanışlıdır). Yakın akraba 'ın onayı gereklidir.
Nörogörüntüleme, nörofizyoloji, nöropsikiyatrik ve değerlendirme veya klinikometrik ölçekler.
Genetik ve aile geçmişi verileri. Genetik raporlar, nörogenetik hastalıklar teşhis edilip edilmediğini gözden geçirir.
Histoloji KabıELEKTRON MİKROSKOPİSİ BİLİMLERİ64233-24
Histoloji KasetleriVWR18000-142 (turuncu)
Histoloji KasetleriVWR18000-132 (donanma)
Bıçak Sapları ve Tek Kullanımlık BıçaklarELEKTRON MİKROSKOPİSİ BİLİMLERİ62560-04
Uzun BıçaklarELEKTRON MİKROSKOPİSİ SCIENCES62561-20
Tek Kullanımlık Bıçak SaplarıELEKTRON MİKROSKOPİSİ BİLİMLERİ72040-08
Neşter BıçaklarıELEKTRON MİKROSKOBU BİLİMLERİ72049-22
Accu-Punch 2 mmELEKTRON MİKROSKOPİSİ BİLİMLERİ69038-02 
Polistiren Kaplar – SterilELEKTRON MİKROSKOPİSİ BİLİMLERİ64240-12
Diseksiyon TahtasıELEKTRON MİKROSKOPİSİ BİLİMLERİ63307-30
Formalin çözeltisi, nötr tamponlu,% 10Sigma-AldrichHT501128 SIGMA
Hematoksilen Çözeltisi, Gill No. 2Sigma-AldrichGHS280 ve nbsp; SIGMA
Eozin Y çözeltisi, suluSigma-AldrichHT1102128  SIGMA
anti-beta-amiloidCovance, Princeton, NJSIG-392201:500
anti-tauThermo Fisher ScientificMN10201:500
anti-alfa-sinükleinAbcamab277661:500
anti-fosfo-TDP43Cosmo Bio Co.TIP-PTD-P021:2000
Dijital KameraHerhangi Bir Kafa Darbesi
Yapıştırma makinesi Tahıl makinesi5ZZ35

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Braun, B., Stadlober-Degwerth, M., Hajak, G., Klunemann, H. H. 100th anniversary of Perusini's second case: patient RM and his kindred. Am. J. Alzheimers Dis. Other Demen. 25, 189-192 (2010).
  2. Jellinger, K. A. Neuropathology of sporadic Parkinson's disease: evaluation and changes of concepts. Mov Disord. 27, 8-30 (2012).
  3. Head, M. W. Human prion diseases: molecular, cellular and population biology. Neuropathology. 33, 221-236 (2013).
  4. Hirano, A. Neuropathology of ALS: an overview. Neurology. 47, S63-S66 (1996).
  5. Oyanagi, K., Wada, M. Neuropathology of parkinsonism-dementia complex and amyotrophic lateral sclerosis of Guam: an update. J. Neurol. 246 (Suppl 2), 19-27 (1999).
  6. Montine, T. J., et al. Recommendations of the Alzheimer's disease-related dementias conference. Neurology. 83, 851-860 (2014).
  7. Procedures for Brain Autopsy in Prion Diseases. , http://case.edu/med/pathology/centers/npdpsc/protocols-autopsy.html (2010).
  8. Yong-Hing, C. J., Obenaus, A., Stryker, R., Tong, K., Sarty, G. E. Magnetic resonance imaging and mathematical modeling of progressive formalin fixation of the human brain. Magn Reson Med. 54, 324-332 (2005).
  9. Love, S., Perry, A., Ironside, I., Budka, H. Greenfield's Neuropathology. , Ninth Edition - Two Volume Set, CRC Press. (2015).
  10. Davis, R. L., Robertson, D. M. Textbook of Neuropathology. , Third, Lippincott Williams and Wilkins. (1996).
  11. Dickson, D. W., et al. Neuropathological assessment of Parkinson's disease: refining the diagnostic criteria. Lancet Neurol. 8 (12), 1150-1157 (2009).
  12. Nieuwenhuys, R., Voogd, J., van Huijzen, C. The Human Central Nervous System: A Synopsis and Atlas. , 4th, Springer. (2008).
  13. Netter, F. H. Atlas of Human Anatomy. , Professional Edition, 6th Edition, Elsevier. (2005).
  14. Brown, R. W. Histologic Preparations: Common Problems and Their Solutions. , CAP Press. Northfield, Illinois. (2009).
  15. Durrenberger, P. F., et al. Effects of antemortem and postmortem variables on human brain mRNA quality: a BrainNet Europe study. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 69, 70-81 (2010).
  16. Hyman, B. T., et al. National Institute on Aging-Alzheimer's Association guidelines for the neuropathologic assessment of Alzheimer's disease. Alzheimers Dement. 8, 1-13 (2012).
  17. Gelb, D. J., Oliver, E., Gilman, S. Diagnostic criteria for Parkinson disease. Arch Neurol. 56, 33-39 (1999).
  18. McKeith, I. G., et al. Diagnosis and management of dementia with Lewy bodies: third report of the DLB Consortium. Neurology. 65, 1863-1872 (2005).
  19. Cairns, N. J., et al. Neuropathologic diagnostic and nosologic criteria for frontotemporal lobar degeneration: consensus of the Consortium for Frontotemporal Lobar Degeneration. Acta Neuropathol. 114, 5-22 (2007).
  20. Litvan, I., et al. Validity and reliability of the preliminary NINDS neuropathologic criteria for progressive supranuclear palsy and related disorders. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 55, 97-105 (1996).
  21. Gilman, S., et al. Second consensus statement on the diagnosis of multiple system atrophy. Neurology. 71, 670-676 (2008).
  22. McKee, A. C., et al. The first NINDS/NIBIB consensus meeting to define neuropathological criteria for the diagnosis of chronic traumatic encephalopathy. Acta Neuropathol. 131, 75-86 (2016).
  23. Rahimi, J., Kovacs, G. G. Prevalence of mixed pathologies in the aging brain. Alzheimer's Res Ther. 6, 82(2014).
  24. Jellinger, K. A., Attems, J. Challenges of multimorbidity of the aging brain: a critical update. J. Neural. Transm. (Vienna). 122, 505-521 (2015).
  25. Crary, J. F., et al. Primary age-related tauopathy (PART): a common pathology associated with human aging. Acta Neuropathol. 128, 755-766 (2014).
  26. Kovacs, G. G., et al. Aging-related tau astrogliopathy (ARTAG): harmonized evaluation strategy. Acta Neuropathol. 131, 87-102 (2016).
  27. Nelson, P. T., et al. 34;New Old Pathologies": AD, PART, and Cerebral Age-Related TDP-43 With Sclerosis (CARTS). J Neuropathol Exp Neurol. 75 (6), 82-98 (2016).
  28. Tomlinson, B. E., Blessed, G., Roth, M. Observations on the brains of non-demented old people. J. Neurol. Sci. 7, 331-356 (1968).
  29. Katzman, R., et al. Clinical, pathological, and neurochemical changes in dementia: A subgroup with preserved mental status and numerous neocortical plaques. Ann. Neurol. 23, 138-144 (1988).
  30. Crystal, H., et al. Clinicopathologic studies in dementia: Nondemented subjects with pathologically confirmed Alzheimer's disease. Neurology. 38, 1682-1687 (1988).
  31. Knopman, D. S., et al. Neuropathology of cognitively normal elderly. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 62, 1087(2003).
  32. Troncoso, J. C., et al. Neuropathology in controls and demented subjects from the Baltimore Longitudinal Study of Aging. Neurobiol. Aging. 17, 365-371 (1996).
  33. Mirra, S. S., et al. The Consortium to Establish a Registry for Alzheimer's Disease (CERAD). Part II. Standardization of the neuropathologic assessment of Alzheimer's disease. Neurology. 41 (4), 479-486 (1991).
  34. Braak, H., Braak, E. Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neuropathol. 82 (4), 239-259 (1991).
  35. Frings, L., et al. Asymmetries of amyloid-β burden and neuronal dysfunction are positively correlated in Alzheimer's disease. Brain. 138 (Pt 10), 3089-3099 (2015).
  36. Leroy, F., et al. New human-specific brain landmark: the depth asymmetry of superior temporal sulcus. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 112 (4), 1208-1213 (2015).
  37. Fink, M., et al. Lateralization of the serotonin-1A receptor distribution in language areas revealed by PET. Neuroimage. 45 (2), 598-605 (2009).
  38. Miller, A. K. H., Alston, R. L., Mountjoy, C. Q., Corsellis, J. A. N. Automated differential cell counting on a sector of the normal human hippocampus: the influence of age. Neuropathol. Appl. Neurobiol. 10, 123-142 (1984).
  39. Brettschneider, J., Del Tredici, K., Lee, V. M., Trojanowski, J. Q. Spreading of pathology in neurodegenerative diseases: a focus on human studies. Nat. Rev. Neurosci. 16 (2), 109-120 (2015).
  40. Nolan, M., Troakes, C., King, A., Bodi, I., Al-Sarraj, S. Control tissue in brain banking: the importance of thorough neuropathological assessment. J. Neural. Transm. (Vienna). 12, (2015).
  41. Wilcock, G. K., Esiri, M. M. Asymmetry of pathology in Alzheimer's disease. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 50 (10), 1384-1386 (1987).
  42. Janota, I., Mountjoy, C. Q. Asymmetry of pathology in Alzheimer's disease. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 51 (7), 1011-1012 (1988).
  43. Stefanits, H., Budka, H., Kovacs, G. G. Asymmetry of neurodegenerative disease related pathologies: a cautionary note. Acta Neuropathol. 123 (3), 449-452 (2012).
  44. King, A., Bodi, I., Nolan, M., Troakes, C., Al-Sarraj, S. Assessment of the degree of asymmetry of pathological features in neurodegenerative diseases. What is the significance for brain banks? J Neural Transm. (Vienna). 122 (10), 1499-1508 (2015).
  45. Schmitz, C., Hof, P. R. Design-based stereology in neuroscience. Neuroscience. 130, 813-831 (2005).
  46. Kristiansen, S. L., Nyengaard, J. R. Digital stereology in neuropathology. APMIS. 120, 327-340 (2012).
  47. Erskine, D., Khundakar, A. A. Stereological approaches to dementia research using human brain tissue. J Chem Neuroanat. , (2016).
  48. Lees, A. J. Unresolved issues relating to the shaking palsy on the celebration of James Parkinson's 250th birthday. Mov. Disord. 22 (Suppl 17), S327-S334 (2007).
  49. Iacono, D., et al. Parkinson disease and incidental Lewy body disease: Just a question of time? Neurology. 85, 1670-1679 (2015).
  50. Geuna, S., Herrera-Rincon, C. Update on stereology for light microscopy. Cell Tissue Res. 360 (1), 5-12 (2015).
  51. Drummond, E. S., Nayak, S., Ueberheide, B., Wisniewski, T. Proteomic analysis of neurons microdissected from formalin-fixed, paraffin-embedded Alzheimer's disease brain tissue. Sci. Rep. 5, 15456(2015).
  52. Brickell, K. L., et al. Clinicopathological concordance and discordance in three monozygotic twin pairs with familial Alzheimer's disease. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 78 (10), 1050-1055 (2007).
  53. Xiromerisiou, G., et al. Identical twins with Leucine rich repeat kinase type 2 mutations discordant for Parkinson's disease. Mov. Disord. 27 (10), 1323(2012).
  54. Iacono, D., et al. Neuropathologic assessment of dementia markers in identical and fraternal twins. Brain Pathol. 24 (4), 317-333 (2014).
  55. Iacono, D., et al. Same Ages, Same Genes: Same Brains, Same Pathologies?: Dementia Timings, Co-Occurring Brain Pathologies ApoE Genotypes in Identical and Fraternal Age-matched Twins at Autopsy. Alzheimer Dis. Assoc. Disord. , (2015).
  56. Rentería, M. E. Cerebral asymmetry: a quantitative, multifactorial, and plastic brain phenotype. Twin Res. Hum. Genet. 15 (3), 401-413 (2012).
  57. Bishop, D. V. Cerebral asymmetry and language development: cause, correlate, or consequence? Science. 340 (6138), (2013).
  58. Mendez, M. F., et al. Observation of social behavior in frontotemporal dementia. Am. J. Alzheimers Dis. Other Demen. 29 (3), 215-221 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Bihemisferik Beyin KesimiPostmortem Beyin AnaliziHemisferik zelle meN ropatolojik ncelemeSerebral B lge ToplamaBeyin Dokusu DiseksiyonuKlinik Patolojik KorelasyonN rog r nt leme TeknikleriBeyin Sap TransseksiyonuKorpus Kallozum Ayr m

İlgili makaleler