Bu yazının serbest uçan arılar için basit non-invaziv yöntemler yanı sıra ölçülü arıların kesin lokalize tedavi izin daha invaziv varyantları da dahil olmak üzere, bal arıları için farmakolojik ajanların uygulanması için çeşitli protokoller açıklanır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Ölçülü ve Serbest uçan Bal Arısı Nörofarmakolojik Manipülasyon,
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Bal arıları şaşırtıcı öğrenme yeteneklerini ve gelişmiş sosyal davranış ve iletişimi göstermektedir. Buna ek olarak, beyin, küçük görselleştirmek için ve çalışma kolaydır. Bu nedenle, arılar uzun, sosyal ve doğal davranış nöral temelini çalışmak için Nörobiyologlar ve neuroethologists arasında bir tercih modeli olmuştur. Bu davranışlar karışmaz arıları incelemek için kullanılan deneysel teknikler çalışılan ki, çok önemlidir. Bu nedenle, bal arılarının farmakolojik manipülasyon teknikleri, bir dizi geliştirmek gerekli olmuştur. Bu yazıda farmakolojik ajanların geniş bir yelpazede ile ölçülü veya serbest uçan bal arılarının tedavi etme yöntemlerini ortaya koymaktadır. Bunlar ya sistemik ya da lokal bir şekilde hassas ilaç verilmesi için izin hem örneğin oral ve topikal tedavisinde olarak, invaziv olmayan yöntemler, hem de daha invazif yöntemler bulunmaktadır. Son olarak, her yöntemin avantajları ve dezavantajları tartışmak ve açıklamakOrtak engeller ve en iyi nasıl bunların üstesinden. Biz biyolojik sorular yerine başka bir yol deneysel yöntemi adapte önemi üzerine bir tartışma yer almaktadır.
Giriş
Karl von Frisch kendi dans dilini 1 açıklanamamıştır beri, bal arıları hayvan davranışları ve nörobiyoloji araştırmacılar için popüler bir çalışma türlerini kalmıştır. Son yıllarda yeni disiplinlerin sayısız bu iki alan, ve onlarla birlikte ortaya çıkan birçok diğer disiplinler (örneğin, moleküler biyoloji, genomik ve bilgisayar bilimi) kesiştiği noktada ortaya çıkmıştır. Bu davranış, sinir sistemi içinde faaliyet kaynaklanır nasıl anlamak için yeni teoriler ve modeller hızla gelişmesine yol açmıştır. Çünkü benzersiz bir yaşam tarzı, zengin davranış repertuarı, deneysel ve farmakolojik manipülasyon kolaylığı, arılar bu devrimin ön planda kalmıştır.
Bal arıları gibi bu temel öğrenme ve hafıza 2,3, karar verme 4, koku 5 veya görsel işleme 6 gibi temel nörobiyolojik soruları incelemek için kullanılmaktadır. Son yıllarda, Hon11, uyku 12 13 yaşlanma ya da mekanizmalar anestezi 14 altında yatan - ey arı bile böyle bağımlılık yapan maddelerin 7 etkileri genel olarak tıbbi araştırmalar için ayrılan konular, eğitim için bir model olarak kullanılmıştır.
Klasik bir genetik model organizmalar için farklı (örneğin, D. melanogaster, C. elegans, M. musculus), bu şu anda 15 değişiyor olsa da bal arıları sinir işlevlerini denetlemek için mevcut çok az genetik araçlar vardır. Bunun yerine, bal arısı çalışmaları öncelikle farmakolojik manipülasyonlar yararlanmıştır. Bu çok başarılı olmuştur; Bununla birlikte, Arı Araştırma çeşitliliği farmakolojik uygulama için bir dizi yöntem gerekli olacak şekildedir. bal arıları ile Araştırma, farklı disiplinlerden ve kökenden gelen araştırmacılar tarafından incelenmiştir, oldukça çeşitli soruları ele ve deneysel yaklaşımlar çeşitli kullanır. Birçok resekemer sorular özgürce kolonisi, ya da her ikisi de etkileşim, ya olacak serbest uçan arılar gerektirir. Bu zor bireysel deney hayvanlarında takip yapmak ve kısıtlama ya da kanül olanaksız kılar.
bal arısı araştırma çeşitliliğini yerleştirmek için, ilaç verme çeşitli yöntemler farmakokinetik ve farmakodinamik profilleri, yöntemin invaziv ve güvenilirliğini, söz konusu paradigma uygun sağlarken sağlam ve esnek uygulama için izin gereklidir. Çünkü bu farklı ihtiyaçların çoğu araştırma grupları kendi benzersiz ilaç uygulama yöntemleri geliştirmişlerdir. Şimdiye kadar, bu arı araştırma topluluğunun bir güç olmuştur; farklı durumlarda aynı ilacın uygulanması için izin yöntem dizilerinin geliştirilmesine yol açmıştır. Burada amacımız arıların farmakolojik manipülasyonlar için tek standart bir yöntem geliştirmek için değil, yöntemleri vurgulamak için olmadığınıözellikle başarılı olduğu kanıtlanmış ve yardım araştırmacılar bu benimsemek var. Biz temel nasıl çalıştıklarını ilkelerini yanı sıra kendi avantajları ve dezavantajları tartışılmıştır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Harnessed Arılar 1. İlaç İdaresi
- Oral tedavi
- 500 ml su ile sükroz 257 g karıştırılarak 1.5 M sukroz çözeltisi hazırlayın (kaynar su içinde sükroz bu miktar erimesi daha kolaydır). kullanılana kadar 4 ° C 'de sükroz solüsyonu saklayın.
NOT: Sakaroz çözüm bazı mikroorganizmalar için çok misafirperver bir ortam sağlar ve böylece kolayca kontamine ve arılar için tatsız hale gelir. Toplu sukroz çözeltisi bölünüp kullanana kadar -20 ° C'de muhafaza edilebilir. - Uygun bir ilaç dozuna karar (aşağıdaki tartışma bölümünde ele alınmıştır nasıl elde) ve örneğin, 20 ug sunmak için (tercih edilen ilaç dozu 20 uL içinde eritildi şekilde sükroz solüsyon bir çözelti hazırlanmıştır, bir ilacı seyreltik 1 mg / ml oranında). Kablo demeti arı Felsenberg diğ göre yöntem. (2011) 16. O arılar artık vurguladı emin olmak için en az 12 saat önce ilaç tedavisine bu adımı yapmakİlaç çözüm sunulduğunda sokmak gelen ut.
NOT: Daha fazla tutarlı sonuçlar için, O / N (34 ° C ve% 70 nemde bir kuluçka harnessed arıların koyarak) arıları açlıktan en iyisidir. - bir mikropipet kullanarak, bir harnessed arı antenine 1.5 M sukroz bir damla su dokunun. hortum uzatıldığında, arı burnumun doğrudan ilaç içeren 1.5 M sukroz 20 ul damlacık dokunun. arı her şeyi tüketir emin olun. araç kontrolü olarak eklenen ilaçlar olmadan 1.5 M sükroz çözeltisi kullanın.
NOT: sakaroz solüsyonu miktarı deneysel planlarına dayanarak ayarlanması gerekebilir. iştah açıcı klima amaçlanan ise, eğitim hemen önce arıları beslemek arıların tepki engel olacaktır. - Atın veya sakkaroz tüm tüketmeyen arıları bir kenara koyun.
NOT: arıların çok sayıda sakaroz çözeltisini içmek için başarısız olursa, beslenme programı ayarlanması gerekebilir.
- 500 ml su ile sükroz 257 g karıştırılarak 1.5 M sukroz çözeltisi hazırlayın (kaynar su içinde sükroz bu miktar erimesi daha kolaydır). kullanılana kadar 4 ° C 'de sükroz solüsyonu saklayın.
- Toraks içine enjeksiyon
- Aşağıdaki gibi bal arısı Ringer'a 17 ilaç hazırlayın:
- Karıştırın ve otoklav 7.45 gr NaCl, 0.448 g KCI, 0.812 g MgCI2, 0.735 g CaCl2, 54.72 g sakroz, 4.95 g D-glikoz, su ve 1000 ml 2.48 g HEPES. kolayca kontamine olarak Zil saklarken dikkatli olun. kullanılana kadar -20 ° C'de kısım ve mağaza Ringer.
- Ringer çözeltisi içinde ilaç çözülür ve daha sonra istenen miktarda 5 ul içinde mevcut olacak şekilde seyreltin. 1 ug / ml bir nihai çözelti Ringer 1000: arı bir ilacın 5 ug ile muamele edilmesi durumunda, bir örnek olarak, 1 gr, ilk 1 seyreltilmeden önce Ringer 1 ml çözündürülebilir.
Not: Alternatif olarak, ticari olarak temin edilebilir, PBS (fosfat tamponlu Salin) kullanılarak Ringer çözeltisi kullanılabilir.
- iki ucu keskin jilet köşesini kopuşarak Microscalpel yapınBir bıçak tutucu. keskin bir bitiş noktası ile güzel bir bıçak yapar, böylece bir bıçak tutucu bıçak parçası takın.
- Bir stereomikroskop altında, dikkatle yanında bir arı toraks arka kanat sürecine, sadece skutelumdan üzerinde 2 mm delik için Microscalpel kullanın. Bu uçuş kasları zarar edebileceğiniz gibi çok derin kesme kaçının ve kanat menteşeleri önlemek için dikkatli olun. kütikül kanadı daha sonra yaralanma sitesi kapatmak için katlanabilir, böylece İdeal olarak, sadece, üç tarafı kesin.
- toraks deliğin üstünde ilaç içeren bir mikropipet, mevduat 5 μlL Ringer (veya PBS) kullanarak. Dikkatle tüm damla hemolimf emilir sağlamak için mikroskop altında monitör. bir taşıt kontrolü olarak Zil (veya PBS) kullanın.
- Mümkünse, delik üzerine manikür kanadı hareket ettirin. 5-10 saat sonra yeniden bağlayın ve mühür olacak.
NOT: Bu tekniğin bir alternatif olarak, daha küçük, açıldıktan sonra bir cam şırınga kullanılarak toraksa ul doğrudan 1 enjektebir şırınga iğnesi ile frenum (scutellum arka bölgesinde enine çizgi) ortasına LL deliği (çap: 0.6 mm, G: 23). Bu ilk neşter ve enjeksiyon yerinde küçük ile toraks kesmek için gereğini circumvents, ancak bu yöntem maruz enjeksiyon yerinde bırakacaktır.
- Aşağıdaki gibi bal arısı Ringer'a 17 ilaç hazırlayın:
- ocellus enjeksiyon
NOT: Bu hemolimf içine, baş kapsül boyunca moleküllerini vermek için uygun olan bir yöntemdir.- 1.2.1'deki gibi ilaçların hazırlanması, ancak istenen doz Ringer veya PBS ile 1 ul içinde ihtiva edilecek şekilde ilaç konsantrasyonları ayarlayın (daha az hacimli toraks yoluyla daha basit göz delikten absorbe edilebilir).
- 1.2.2 gibi Microscalpel hazırlayın. Bir stereomikroskop altında, balmumu ile boyun çatlak doldurarak yerinde bir harnessed arı başını kilitleyin. Zarar anten koku reseptörleri veya i tabi tutulabilen diğer hücreler önlemek için düşük sıcaklıkta eriyen bir balmumu (örn diş balmumu) kullanarakdavranış (örneğin, koku öğrenme) değerlendirilmesi için mportant. Sonra dikkatlice mercek altında microscalpel ucu sokarak medyan ocellus lensini çıkarıp hafifçe baş kapsülü serbest lensi bölünürler.
NOT: hareketini önlemek için anten üzerinde dikkatle balmumu yerleştirmek de mümkündür. - Dikkatle ocellus delik üzerine ilaç pipetle. Tüm kafa kapsül alınır kadar bekleyin. antenlerden diş balmumu çıkarın ve arı deneysel prosedür devam etmeden önce bir süre dinlenmeye bırakın. bir taşıt kontrolü olarak Zil (veya PBS) kullanın.
- Ocellar yolu içine enjeksiyon
NOT: ocellar yolu büyük lifler içeren, merkezi beynin 18 en bölgelerine bağlayan. Bu tedavi yöntemi, yalnızca beyin bileşiklerin uygulanması, ancak beynin belirli alt bölgelerini hedef değil kılar.- 1.3.2 gibi arı hazırlayın. ve t medyan ocellus lensini çıkarın1.3.3 gibi microscalpel ip.
NOT: Bu enjeksiyon öncesinde 2 saat kadar yapılabilir. bizim deneyime dayalı, beslenen arılar açlıktan arılar daha bu ameliyatı ile başa çıkmak için daha iyi edebiliyoruz - Küçük bir göstergesi ile teçhiz edilmiş 10 ul bir cam şırınga doldurun (örneğin, 33, çap: 210 um) bir ilaç solüsyonu ile iğne 1.3.1 gibi hazırlanmıştır.
- Manuel bir mikromanipülatör kullanarak, 50 um bir derinliğe kadar kafa kapsüle ocellar retina boyunca şırınga ucu yerleştirin ve solüsyonun 250 NL enjekte edilir.
- Kullanımdan sonra, daha sonra damıtılmış su şırınga% 75 etanol ile 3 kez 3 kez yıkayın.
- 1.3.2 gibi arı hazırlayın. ve t medyan ocellus lensini çıkarın1.3.3 gibi microscalpel ip.
- Özellikle beyin yapıları mikroenjeksiyon
Not: Yukarıda belirtilen sistematik tedavilere ek olarak, belirli bir beyin yapılarına microinjections gerçekleştirmek mümkündür. etkilenmeyen diğerleri bırakarak bu bir veya daha fazla beyin bölgelerinde farmakolojik müdahale edilebilmesini sağlar. bu çalışırBeyin ön beyin yüzeyinin (örneğin, antennal lob, mantar vücut kalikslerin veya dikey lob veya optik lob) den tanımak kolaydır bölgelerde, ancak diğer bölgelerle iyi hedeflenmiştir. Oryantasyon (ön / arka, dorsal / ventral) Neuraxis 19 daha ziyade, vücut eksenine ifade ettiğini unutmayın.- Bir floresan ekleme 1.2.1'deki gibi aynı şekilde Ringer veya PBS ilacın hazırlanması (örneğin, 0.5 mg / ml dekstran, Alexa 546 veya 568 fluor) ya da nonfluorescent boya (örneğin, 1 mM metilen mavisi).
NOT: Deney (beyin diseksiyon sonrasında konfokal mikroskopi kullanılarak) bittikten sonra nonfluorescent boyalar deney sırasında doğrudan izlenmesine olanak ise floresan boya ilavesi, enjeksiyon yerinin doğrulama sağlayacaktır. - Standart tutuş için (bir elektrot çektirmenin sahibi kelepçelere 1.0 mm doğru çap cam kılcal damarları eklemek, enjeksiyon için cam pipetler yapmaker malzemeler listesinde belirtilen mikroenjektör) dahil. yaklaşık 0.5 cm uzunluğunda ucu üretmek için çekme ve ısı ayarlarını yapın (ayarlar aynı modeli kullanılsa bile, her çektirmesi için farklı olacaktır).
Not: İdeal olarak, iki pipetler hem de kullanılabilir, böylece, aynı uzunluğa ve şekle sahip olmalıdır, bir cam çıkardı. - Bir stereomikroskop altında, oküler sokulan bir mercek ağı ile ilgili bir ölçek kullanılarak görsel tahmin göre, yaklaşık 10-15 um bir dış çapa elde etmek için ipuçları bölünürler. ölçekte adımlar üreticisi tarafından tanımlanır ve kullanılan büyütme için düzeltilebilir.
- Ardından, enjekte etmek solüsyonu ile cam pipetler doldurun. filamentler cam kılcal damar kullanılması halinde, aksi Microloader ipuçlarını kullanarak ucu dolgu, ilaç çözeltisi içine arka tarafını yerleştirerek pipet doldurun.
- manuel veya elektronik mi tarafından kontrol edilen bir mikroenjektör kılcal tutucu içine doldurulmuş cam pipet yerleştirincromanipulator.
- (Hedeflenen beyin yapısı boyutuna bağlı olarak, 0.5-2 nl) istenen hacim enjekte Mikroenjektör kalibre. Bunun için, mineral yağ ihtiva eden küçük bir Petri kabı içine doğrudan enjekte etmek ve mercek ağı ile damlacığın çapı ölçülür. istenilen ses ulaşana kadar ayarlarını değiştirin.
- Üç kesim ile, Microscalpel kullanarak, baş kapsül ön kısmında bir açıklık kesilmeden önce, 1.3.2 gibi yumuşak diş mumu kullanarak harnessed arı başını düzeltmek: sadece medyan ocellus altında bir (ventral), bir de anten üzerinde sağ ya da sol gözü ve bir sınır (dorsal) kaynaklanıyor. yerinde açılan flep tutmak için diş balmumu bir parça kullanın.
- Dikkatle bezleri ve bir kenara ince forseps kullanarak beynin üstüne yalan trakea, daha sonra hedeflenen beyin yapısı üzerinde (beyin etrafında çok ince zar) neurilemma içine küçük bir kopma yapmak itin.
NOT: Birçok arılar bir kerede tedavi edilmesi durumunda, bu yordamıDaha önce gerçekleştirilebilir; beyinlerinin ayrılacak edebileceğiniz gibi, (en fazla 30 dakika) çok uzun bu durumda arılar bırakmayın için ancak dikkatli olun. - İstenilen beyin bölgeye ucu yerleştirin ve beyin yüzeye dik derinliğini ayarlamak (örn mantar vücut kalikslerin için 60 mikron). Önceden ayarlanmış hacim enjekte edilir. Lateral beyin bölgelerinde için (yani her yarımkürede bir enjeksiyon yapmak) bilateral enjekte edilir. Bir özelliğine sahip olmayan bir boya kullanıldığında, enjekte ederken gözlem üzerine doğru bölgede meydana enjeksiyon sağlar. bir flüoresan boya kullanılır Bir flüoresan görüntüleme sistemi ile bir stereomikroskop kullanılarak floresan ışığı altında aynı şeyi.
- Daha sonra, geri arı başının üzerinde açık flep yerleştirin. Mikro havya ucu etrafında sarılmış ince tel kullanarak, çapı yaklaşık 1 mm olan eicosane bir kristal, eriyik (erime sıcaklığı 35-37 ° C) ve kesim kapatın. Bu büyük ölçüde mortaliteyi azaltacaktır.
- bırakınörneğin, hortum uzatma refleksi (PER) 20 test - davranışsal analiz için koşum arı (ama tartışmaya bakınız) ya da ölçülü arılar üzerinde deneyler için koşum tutmak.
- Bir floresan boya kullanılmış ise, deney odaklı lazer tarama mikroskobu (Şekil. 1) kullanılarak bittikten sonra enjeksiyon ilgi alanı vurmak emin olun.
NOT: (enjeksiyon aşamasında nonfluorescent boya görmek zor olurdu) derin beyin alanları hedefleyen bu özellikle yararlıdır.
- Bir floresan ekleme 1.2.1'deki gibi aynı şekilde Ringer veya PBS ilacın hazırlanması (örneğin, 0.5 mg / ml dekstran, Alexa 546 veya 568 fluor) ya da nonfluorescent boya (örneğin, 1 mM metilen mavisi).
Serbest uçan Bees 2. İlaç İdaresi Yöntemleri
- Oral tedavi
- adımda aynı şekilde ilaç hazırlamak 1.1.1-1.1.2. Bir besleyici madde solüsyonu eklenir ve depolama için buzdolabında yerleştirin.
NOT: Herhangi bir besleyici böyle bir ters şişe kapağı veya doku kağıt üzerinde ters bir kavanoz gibi yapacağız. - 1 M veya 0.5 içeren bir yerçekimi besleyici arı yetiştirmekkovanı yakın bir besleyici koyarak M sukroz çözüm. arılar besleyici kazarak başladıktan sonra o (en az 5 m) sokulan önlemek için rahat bir mesafe kadar, yavaş yavaş uzaklaştırın.
- sırayla Boya işareti arılar bireysel bal arıları takip etmek. kullanılacak olan tüm renk kombinasyonları bir listesini yapın. besleyici bir arı toprakları, dikkatlice iki renk ile karın işaretleyin ve kombinasyon alınır listesinde bir not yaptığınızda.
- ilaç / sakaroz çözeltisi içeren bir besleyici için yerçekimi besleyici takas. besleyici ziyaret işaretli arıların not alın. arılar üretken İşverenler gibi besleyici ziyaret herhangi işaretsiz arı ve hızlı bir şekilde kontrolden çıktı alabilirsiniz uyuşturulmuş besleyici ziyaret arıların sayıları yakalamak. Aynı deney birbirini izleyen günlerde yapılması ise saf arılar, artık saf olabilir gibi bu özellikle sorunludur.
NOT: Bir besleyici bireysel arıları eğitim, bir önceki yazar bir alternatif olarak23 - s başarıyla tüm kovanı 21 ilaç-bağcıklı sakaroz su beslemiştir.
- adımda aynı şekilde ilaç hazırlamak 1.1.1-1.1.2. Bir besleyici madde solüsyonu eklenir ve depolama için buzdolabında yerleştirin.
- topikal tedavi
Not: Amaç mumsu böcek kütikül nüfuz bir çözücü içinde, ilgi konusu bileşiği çözmek için. Değişik çözücüler bu amaçla kullanılabilmektedir. En yaygın olarak kullanılan, aseton, dimetilformamid (DMF) ve dimetilsülfoksit (DMSO) yer alır.- Çözücü eldeki bileşik için en uygun hangi değerlendirin. Güçlü bir fenotip dikkatle farklı çözücülerin her ve içinde çözülmüş aşırı dozda (örn felç ya da ölüm), bir yüksek doz tedavi arılar (adım 2.2.2) (örneğin, 20 ug kokain 7) beklenen ise felç kadar zaman izlemek ya da ölüm.
- 1 uL mikrokapiler (veya mikroenjektör uygun bir tekrarlanan, dağıtıcının üzerine takılabilir) ve mikrokılcal tutucu kullanılarak ilaç çözeltisi 1 ul (örneğin, 3 çizmek81; kılcal içine kokain g / ul). damla sınırdışı ve dikkatle belirgin arının toraks üzerine boya. arı sonra onu damat muhtemel olduğu gibi, bir alanda oldukça sağlam bir damla bırakarak daha, çözüm ile olası bir kadar büyük kapsar. Bileşik kanat menteşeler, ya da bu toraks kapalı çizmek ve hemolimf içine emilmeden buharlaşır kanatları boyunca yapabilirsiniz temas etmesine izin vermemek için dikkatli olun.
NOT: Araştırma hedefe bağlı olarak, bu yöntem de arı karın ilaçlar yönetmek için kullanılabilir. Toraks 24 .Bu yönteme işleri uygulanan eşit derecede iyi olan serbest uçan arılar gibi harnessed Ancak, ilaçlar daha hızlı ve büyük miktarlarda MSS ulaşır.
- uçucu hale tedavi
- Ilaçlar çözülür% 100 etanol (daha önce bu yöntem bal arıları 10 kokain teslim etmek için kullanılmıştır). çözünürlüğe sağlamak için, bir hidroklorid ya da diğer tuz formları kullanmayınİlaç eğer mümkünse. miktarı arı teslim edilmesi için bir seyreltme hazırlamak yaparken 100 ul bulunmaktadır. bir taşıt kontrolü olarak saf etanol kullanımı.
- Bir filament oluşturmak için, McClung ve Hirsh 25 ile aynı prosedürü kullanın.
- Kısaca açıkladı: bir çivi etrafında sıkıca nikrom tel rüzgar ve iki elektrik telleri (filamanın her iki ucunda biri) ekleyin. çivi çıkarın. Kalan nikrom rulo filament olarak adlandırılır.
- Seçilen ısıya dayanıklı olması gereken bir 50 ml santrifüj tüpüne, kapağındaki dikkatle deliklerden geçirilerek iki kabloyu geçirin. Sıvı silikon ile yerine telleri Tutkal.
NOT: Bu tüp hava geçirmez yapacak. Bu deneyci ikincil maruz kalmasını önlemek ve arılar uygun doz ile tedavi edilir olmasını sağlamak için gereklidir.
- bir güç kaynağı filamanın giden kabloların takın. bir termokupl kullanarak sıcaklığını ölçmek içinFilament, ideal olarak, söz konusu ilaç için uygun bir sıcaklık profilinde sonuçlanır biri, ısıtma ya da daha az 10 saniye sağlar biri kadar farklı gerilim / akım kombinasyonları ile deney. Bu çok önemlidir, (en az 200 ° C'ye kadar ısıtılması gereken uçucu kokain sırayla örneğin, fakat 350 ° C'nin üzerindeki sıcaklıklarda bir sekonder bileşik 26 ayrılmıştır) ilgili literatüre bakınız.
- Dikkatle filaman üzerine etanol çözeltisi ihtiva eden bir ilaç, 100 ul pipetle. Bu buharlaştırma verimliliğini artıracaktır mümkün olduğu kadar filament yüzeyi üzerine sıvı yayın. Tüm etanol buharlaşana kadar oda sıcaklığında maruz filament bırakın.
Not: etanol yeterli buharlaştınldı değilse, arı seçim ve etanol ilaç hem de kabul edilecektir. Arılar etanol karşı son derece duyarlıdır ve bazı ilaçlar, hangi edecek önyargı eski etanol ile sinerjik etkileşimleri vardeneysel bir sonuçlanır. - Etanol tamamen (ilaç çökelti genellikle mikroskop altında kuru filaman üzerinde görülebilir) buharlaştıktan sonra, 50 ml bir tüp içinde bir serbest arasındaki arı yakalamak. Dikkatle filamanın içeren kapağını kapatın.
- 10 saniye boyunca gücünü açın güç kapatmak ve başka bir 50 saniye bekleyin (uçucu bileşik soğutmak ve böylece yoğunlaşmasına veya mevduat için izin). arı bırakın.
NOT: Bu tedavi yöntemi serbest uçan arılar için mükemmel bir performans sergiliyor olsa da, tıpkı etkili bir harnessed arılar ile kullanılabilir. Sadece 50 ml'lik bir tüp içinde harnessed arı takın. Arılar arasında 2.3.4 açıklandığı gibi filament yeniden yükleyin. daha yüksek verim için birkaç filamanlar paralel olarak kullanılabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Yukarıda açıklanan yöntemler için temsili sonuçların bir seçim öncelikle yöntemler farmakolojik ajanlar beyin ulaşmasına izin ve bal arısı davranışını etkileyen göstermek için gösterilir.
Beyin süreçleri belirli etkileri kolayca göğüs enjeksiyonu takiben elde edilebilir.
farmakolojik ajanlar vücutta birden fazla hedeflere hareket edebilir, ve beyin ulaşmadan önce vücud...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
yukarıda özetlenen yöntemler serbest uçan veya harnessed bal arılarının birinin basit, etkili ve sağlam bir tedavi sağlar. Bu yöntemler birçok deneysel paradigmalar ve biyolojik sorularınızı (Tablo 1) ile uyumludur. serbest uçan yöntemlerin hepsi kolay koşulmuş arılar için uygulanabilir. Geçici kısıtlama ve invaziv tedavi yöntemleri genellikle arıların uçan yeteneğini tehlikeye beri Ancak, bunun tersi daha az başarılı olur.
yöntemler beyin merkezli bir bakış açısıyla sunulmu...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu proje ARC hibe DP0986021 ve NHMRC hibe 585442 tarafından finanse edilmiştir. ABB, bir ARC Gelecek Bursu (FT140100452) tarafından desteklenmektedir. JAP, Macquarie Üniversitesi tarafından verilen bir iMQRES bursu ve Alman Akademik Değişim Servisi tarafından verilen bir DAAD-Doktorandenstipendium tarafından desteklenmektedir. JMD, CNRS ve Paul Sabatier Üniversitesi tarafından desteklenmektedir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sükroz | Sigma-Aldrich | S8501 | Herhangi bir tedarikçi |
| Sodyum Klorür | Sigma-Aldrich | S7653 | |
| Potasyum Klorür | Sigma-Aldrich | P9333 & nbsp; | |
| Magnezyum Klorür hekzahidrat | Sigma-Aldrich | M2670 | |
| Kalsiyum Klorür dihidrat | Sigma-Aldrich | C8106 | |
| Dekstroz monohidrat | Sigma-Aldrich | 49159 | |
| Fosfat Tampon Salin (PBS) | Sigma-Aldrich | P4417 | |
| Koruma Balmumu | Dentaurum | 124-305-00 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| dimetilformamid | Sigma-Aldrich | D4551 | |
| %95 Etanol | Sigma-Aldrich | 493511 | |
| Cam kılcal WPI | 1B100F-3 | ||
| 23 G NanoFil iğne | WPI | NF33BV-2 | |
| Çok ince forsceps | Dumont | 0208-55-PO | |
| Elektrot çektirme | SRI | 2001 | |
| FemtoJet Mikroenjektör | Eppendorf | 5247 000.01 | |
| Eicosane | Sigma-Aldrich | 219274 | |
| manuel mikromanipülatör | Brinkmann Instrumentenbau | MM-33 | |
| elektronik mikromanipülatör | Luigs & Neumann Feinmechanik + Elektortechnik | Junior ünitesi XYZ | |
| stereomikroskop | Leica | M80 | |
| havya | Weller | WESD51 | |
| Dekstran, Alexa Fluor 546, 10.000 MW | ThermoFisher Scientific | D-22911 | |
| Dextran, Alexa Fluor 568, 10.000 MW | ThermoFisher Scientific | D-22912 | |
| küçük Petri kabı | Sigma-Aldrich | P5481 | |
| mineral yağ | Sigma-Aldrich | M5904 | |
| 50 ml Santrifüj tüpü | ThermoFisher Scientific | 339652 | |
| forseps | Avustralya Entomolojik Malzemeleri | ||
| Bıçak tutucu ve kırıcı | Avustralya Entomolojik Malzemeleri | E130 | |
| Tüy çift kenarlı tıraş bıçağı | ThermoFisher Scientific | 50-949-135 | |
| Nikrom tel | Herhangi bir tedarikçi yapacak | ||
| Elektrik telleri | Herhangi bir tedarikçi yapacak | ||
| Model boya | Tamiya ABD | Renge | |
| Tekrarlayan dağıtıcı | Hamilton şirketi | PB-600-1 | |
| Cam şırınga | WPI | NANOFIL | |
| floresan görüntüleme sistemi | Nightsea | SFR-GR | |
| ücretsiz | ProSciTech | S8014-24 | |
| tutuculu mikrokılcal | damar Drummond | 1-000-0010 | |
| Sıvı silikon | Herhangi bir tedarikçi yapacak | ||
| Termokupl | Digitech | QM-1324 | |
| Mikropipet | Eppendorf |
Kaynaklar
- Frisch, K. . von B. ees Their Vision, Chemical Senses, and Language. , Cornell University Press. Itacha, NY. (1971).
- Giurfa, M. The amazing mini-brain: lessons from a honey bee. Bee World. 84 (1), 5-18 (2003).
- Giurfa, M. Behavioral and neural analysis of associative learning in the honeybee: a taste from the magic well. J. Comp. Physiol. 193 (8), 801-824 (2007).
- Perry, C. J., Barron, A. B. Honey bees selectively avoid difficult choices. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110 (47), 19155-19159 (2013).
- Giurfa, M., Sandoz, J. -C. Invertebrate learning and memory: Fifty years of olfactory conditioning of the proboscis extension response in honeybees. Learn. Mem. 19 (2), 54-66 (2012).
- Srinivasan, M. V. Honey bees as a model for vision, perception, and cognition. Annu. Rev. Entomol. 55, 267-284 (2010).
- Søvik, E., Cornish, J. L., Barron, A. B. Cocaine tolerance in honey bees. PLoS One. 8 (5), e64920(2013).
- Søvik, E., Barron, A. B. Invertebrate models in addiction research. Brain. Behav. Evol. 82 (3), 153-165 (2013).
- Søvik, E. Reward processing and responses to drugs of abuse in the honey bee, Apis mellifera. , Macquarie University. Australia. November (2013).
- Søvik, E., Even, N., Radford, C. W., Barron, A. B. Cocaine affects foraging behaviour and biogenic amine modulated behavioural reflexes in honey bees. Peer J. 2, e662(2014).
- Abramson, C. I., Stone, S. M., et al. The development of an ethanol model using social insects I: behavior studies of the honey bee (Apis mellifera L.). Alcohol. Clin. Exp. Res. 24, 1153-1166 (2000).
- Sauer, S., Kinkelin, M., Herrmann, E., Kaiser, W. The dynamics of sleep-like behaviour in honey bees. J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sensory, Neural, Behav. Physiol. 189 (8), 599-607 (2003).
- Münch, D., Kreibich, C. D., Amdam, G. V. Aging and its modulation in a long-lived worker caste of the honey bee. J. Exp. Biol. 216 (Pt 9), 1638-1649 (2013).
- Cheeseman, J. F., Winnebeck, E. C., et al. General anesthesia alters time perception by phase shifting the circadian clock. Proc. Natl. Acad. Sci. , (2012).
- Schulte, C., Theilenberg, E., Müller-Borg, M., Gempe, T., Beye, M. Highly efficient integration and expression of piggyBac-derived cassettes in the honeybee (Apis mellifera). Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (24), 9003-9008 (2014).
- Felsenberg, J., Gehring, K. B., Antemann, V., Eisenhardt, D. Behavioural pharmacology in classical conditioning of the proboscis extension response in honeybees (Apis mellifera). J. Vis. Exp. (47), e2282(2011).
- Burger, H., Ayasse, M., Dötterl, S., Kreissl, S., Galizia, C. G. Perception of floral volatiles involved in host-plant finding behaviour: Comparison of a bee specialist and generalist. J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sensory, Neural, Behav. Physiol. 199 (9), 751-761 (2013).
- Pan, K. C., Goodman, L. J. Ocellar projections within the central nervous system of the worker honey bee, Apis mellifera. Cell Tissue Res. 176 (4), 505-527 (1977).
- Ito, K., Shinomiya, K., et al. A systematic nomenclature for the insect brain. Neuron. 81, 755-765 (2014).
- Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schäfer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera). J. Comp. Psychol. 97 (2), 107-119 (1983).
- Barron, A. B., Robinson, G. E. Selective modulation of task performance by octopamine in honey bee (Apis mellifera) division of labour. J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sens. Neural. Behav. Physiol. 191 (7), 659-668 (2005).
- Schulz, D. J., Sullivan, J. P., Robinson, G. E. Juvenile Hormone and Octopamine in the Regulation of Division of Labor in Honey Bee Colonies. Horm. Behav. 42 (2), 222-231 (2002).
- Schulz, D. J., Elekonich, M. M., Robinson, G. E. Biogenic amines in the antennal lobes and the initiation and maintenance of foraging behavior in honey bees. J. Neurobiol. 54 (2), 406-416 (2003).
- Barron, A. B., Vander Meer, R. K., Maleszka, J., Robinson, G. E., Maleszka, R. Comparing injection, feeding and topical application methods for treatment of honeybees with octopamine. J. Insect Physiol. 53 (2), 187-194 (2007).
- McClung, C., Hirsh, J. Stereotypic behavioral responses to free-base cocaine and the development of behavioral sensitization in Drosophila. Curr. Biol. 8 (2), 109-112 (1998).
- Martin, B. R., Lue, L. P., Boni, J. P. Pyrolysis and volatilization of cocaine. J. Anal. Toxicol. 13 (3), 158-162 (1989).
- Lefer, D., Perisse, E., Hourcade, B., Sandoz, J. -C., Devaud, J. -M. Two waves of transcription are required for long-term memory in the honeybee. Learn. Mem. 20 (1), 29-33 (2012).
- Urlacher, E., Soustelle, L., et al. Honey Bee Allatostatins Target Galanin/Somatostatin-Like Receptors and Modulate Learning: A Conserved Function? PLoS One. 11 (1), e0146248(2016).
- Stollhoff, N., Menzel, R., Eisenhardt, D. Spontaneous recovery from extinction depends on the reconsolidation of the acquisition memory in an appetitive learning paradigm in the honeybee (Apis mellifera). J. Neurosci. 25 (18), 4485-4492 (2005).
- Barron, A. B., Maleszka, R., Helliwell, P. G., Robinson, G. E. Effects of cocaine on honey bee dance behaviour. J. Exp. Biol. 212 (2), 163-168 (2009).
- Devaud, J. -M., Papouin, T., Carcaud, J., Sandoz, J. -C., Grünewald, B., Giurfa, M. Neural substrate for higher-order learning in an insect: Mushroom bodies are necessary for configural discriminations. Proc. Natl. Acad. Sci. , 1-9 (2015).
- Vergoz, V., Roussel, E., Sandoz, J. -C., Giurfa, M. Aversive learning in honeybees revealed by the olfactory conditioning of the sting extension reflex. PLoS One. 2 (3), e288(2007).
- Henry, M., Béguin, M., et al. A common pesticide decreases foraging success and survival in honey bees. Science. 336 (6079), 348-350 (2012).
- Søvik, E., Perry, C. J., LaMora, A., Barron, A. B., Ben-Shahar, Y. Negative impact of manganese on honeybee foraging. Biol. Lett. 11 (3), 20140989(2015).
- Farooqui, T., Vaessin, H., Smith, B. H. Octopamine receptors in the honeybee (Apis mellifera) brain and their disruption by RNA-mediated interference. J. Insect Physiol. 50 (8), 701-713 (2004).
- Guo, X., Su, S., et al. Recipe for a Busy Bee: MicroRNAs in Honey Bee Caste Determination. PLoS One. 8 (12), e81661(2013).
- Cristino, A. S., Barchuk, A. R., et al. Neuroligin-associated microRNA-932 targets actin and regulates memory in the honeybee. Nat. Commun. 5, 5529(2014).
- Vargaftig, B. B., Coignet, J. L., de Vos, C. J., Grijsen, H., Bonta, I. L. Mianserin hydrochloride: Peripheral and central effects in relation to antagonism against 5-hydroxytryptamine and tryptamine. Eur. J. Pharmacol. 16 (3), 336-346 (1971).
- Beggs, K. T., Tyndall, J. D. A., Mercer, A. R. Honey bee dopamine and octopamine receptors linked to intracellular calcium signaling have a close phylogenetic and pharmacological relationship. PLoS One. 6 (11), (2011).
- Matsumoto, Y., Menzel, R., Sandoz, J. -C., Giurfa, M. Revisiting olfactory classical conditioning of the proboscis extension response in honey bees: a step toward standardized procedures. J. Neurosci. Methods. 211 (1), 159-167 (2012).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
