Arıtılmış atık su ve yüzey (alıcı) suyu dahil olmak üzere su örneklerinin organik ekstraktlarında endokrin aktiviteyi taramak için bir protokol, ticari olarak temin edilebilen bölme tutuklu ("dondur ve çözdür") in vitro transaktivasyon biyotahlilleri kullanılarak uyarlanmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Su Kullanımı Endokrin Aktivitesi Tarama Piyasada satılan
Bu makalede
Özet
Özet
In vitro trans biyoanalizlere Bununla birlikte onların benimsenmesi ve yaygın uygulama nedeniyle standart yöntem ve sağlam, kullanıcı dostu teknoloji kullanılabilirlik eksikliği kısmen engellemiştir edilmiştir, su kalitesi izleme araçları olarak söz göstermiştir. Bu çalışmada, piyasada mevcut, bölünme-tutuklandı hücre hatları kantitatif çevresel kalite uzmanları ilgilendiren su örneklerinde bulunan kimyasalların endokrin faaliyeti taranması için kullanılmıştır. Kapsamlı kalite güvence / kalite kontrol dahil tek, standart bir protokol (QA / QC) denetler hücre tabanlı Floresan Rezonans Enerji Transferi (FRET) testi kullanılarak (sırasıyla, ER ve GR) Östrojen ve Glukokortikoid Reseptör aktivitesi için geliştirilmiştir. Kaliforniya (ABD) tatlı su sistemlerinden tedavi belediye atık suyun ve yüzey suyunun numuneleri, katı faz ekstraksiyon kullanılarak çıkarılan ve standardize proto kullanarak endokrin aktivitesi için analiz edildiCol. Arka plan ve bitiş noktası özgü referans kimyasallar için doz-yanıt güvenilir ölçümü için gerekli gördüğü QA / QC kurallarına araya geldi. Yüzey su örnekleri için biyoassay tarama yanıtı büyük ölçüde saptanabilir değildi. Bunun aksine, ikincil arıtma tesisleri atık örnekleri ER 392 ng deksametazon GR / L ve 17 ng 17β-estradiyol / L'ye kadar, tahmini biyo-analizi eşdeğer konsantrasyonlarda (BEQs) ile en yüksek ölçülebilir aktiviteye sahiptir. bir tersiyer atık su örneği için biyolojik yanıtın, tedaviden sonra endokrin aktif kimyasalların daha düşük bir bakiye gösteren ikincil atık için ölçülen daha düşüktü. Bu protokol, ticari olarak temin edilebilir kullanan nitro trans biyo-deneylerde, bölme durdurulmuş hücreli "setleri", su içinde endokrin aktivitesi için taranması için adapte edilebileceğini göstermiştir.
Giriş
Mevcut su kalitesi izleme doğru ve kesin yaban hayatı ve insanlar maruz kalma bir vekil olarak kimyasal kirleticilerin oluşumunu ölçmek için yeteneği esas alınmaktadır. Ancak, bu kimyasal-by-kimyasal izleme ve değerlendirme paradigma Karşı karşıya olduğumuz sürekli değişen kimyasal evren ayak uydurmak mümkün değil. Biz kader ve sentetik ve doğal kimyasalların etkileri hakkında daha fazla bilgi edinmek, biz biyolojik etkileri beklenen hitap eden ölçüm araçları aramaya devam, ve aynı zamanda bu kimyasal üretim, kullanım ve çevre girdi değişikliklere karşı bağışık bulunmaktadır. Bu tür araçlar bilinmeyen ya da yeni kimyasallar ve dönüşüm ürünleri, dikkatimizi hak edip a....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Toplama ve Proses Suyu Numune (Escher ve ark Modifiye. 9)
- Çevrede su numunesi ile en 1 g sodyum azid ve 50 mg askorbik asit ihtiva eden bir temizleme 1 L amber cam şişe doldurun. 72 saat sonra 4 ° C saklayınız numune ve proses.
NOT: Sodyum azit çok zehirlidir ve dikkatle ele alınması gerekir. koruyucu giysiler (göz / yüz, eldiven, giysi) kullanın ve düzgün işleyen bir duman başlığı içinde tartın. tartmak için metal bir spatula kullanmayın. - 1.6 uM cam elyaf filtre ile ve daha sonra 5-10 ml / dakika bir akış hızında, bir ön şartlandırılmış Katı Faz Ekstraksiyon (SPE) kartuşundan örnek geçirin. akış hızını kontrol etmek....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu çalışmada, tedavi belediye atiksuyun 4x 24 saat kompozit numuneler, Güney Kaliforniya'da tatlı su sistemlerinden yüzey sularının 6 kapmak örnekleri ve ultra saf su içeren bir alan boş bu protokolü göstermek için seçildi. 4 atık örneklerinin 3 konvansiyonel aktif çamur atıksu arıtma tesislerinde ( "ikincil atık"), ve kum / karbon filtrasyon eklendi sonrası biyolojik arıtma ( "üçüncül atık") ile gelişmiş atık su arıtma tesisi dördüncü birinden idi. Yüzey suyu num.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu 17β-estradiol (E2), ng / L konsantrasyonlarda 23,24 de, bu maddeler için garanti tarama çevresel estrojenler iyi belgelenmiş gücü. Bu çalışmada, atık su Pis su ER tepkisi (BEQ aralığı: 2,3-17 ng E2 / L) E2 / L ng 4 0.5 20 ikincil atık bildirilen biraz daha yüksek oldu ) E2 ng 11 / L) 16 yerde yüzey ve yağmur suyu (<1 için rapor aralığında idi. yüzey suyu numunelerinde ölçülen ER aktivitesinin düşük seviyelerde.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Finansman, Devlet Su Kaynakları Kontrol Kurulu tarafından sağlanmıştır (10-096-250 ve 14-090-270 sayılı Anlaşmalar). S. Abbasi, M. Connor, S. Engelage, K. North, J. Armstrong, S. Asato, M. Dojiri, D. Schlenk, S. Snyder, S. Westerheide, B. Escher, F. Leusch, G. Pelanek, K. Bi ve J. Printen'e teşekkür ederiz. Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmez ve ticari isimlere atıfta bulunulması onay anlamına gelmez.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| GeneBLAzer ER alfa DA test kiti | ThermoFisher | K1393 | Kiti, ER bölümü tutuklanmış (DA) hücreleri ve LiveBLAzer FRET yükleme kitini içerir. |
| GeneBLAzer GR DA test kiti | ThermoFisher | K1391 | Kiti, GR bölümü tutuklanmış (DA) hücreleri ve LiveBLAzer FRET yükleme kitini içerir. |
| PrestoBlue hücre canlılık reaktifi | ThermoFisher | A-13261 | |
| Tripan mavisi, PBS Sigma-Aldrich'te %0,4 | T8154 | ThermoFisher'da da mevcuttur | |
| Corning 96 kuyulu siyah duvar, şeffaf tabanlı plaka | Corning | 3603 | Ayrı ayrı sarılmış, kapaklı steril |
| Whatman cam elyaf filtreler, GF/A, 1.6 ve mikro; M | Sigma-Aldrich | ||
| Mikroplaka alüminyum sızdırmazlık filmi | E & K Scientific | T592100 | |
| Oasis HLB 6 cc kartuş, 200 mg sorbent | Suları | WAT106202 | |
| 17β Estradiol | Sigma-Aldrich | E2758 | CAS # 50-28-2 |
| Askorbik asit | Fisher Scientific | A61-100 | Ayrıca Sigma-Aldrich |
| Deksametazon 'de | Sigma-Aldrich | D4902 | CAS # 50-02-2 |
| Dimetil sülfoksit (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | Moleküler dereceli |
| Çözücüler (aseton, heksan, metanol) | Fisher Scientific | HPLC sınıfı | |
| Sodyum azid | Sigma-Aldrich & nbsp; | S2002 | Kimyasal oldukça toksiktir ve dikkatli kullanılmalıdır. Koruyucu giysi kullanın ve çeker ocak altında tartın. Ayrıca EMD Millipore'da da mevcuttur. |
| Otomatik hücre sayacı veya hemositometre | Çeşitli* | Tedarikçiler arasında Bio-Rad, Fisher Scientific, Sigma-Aldrich ve ThermoFisher bulunur. | |
| Sınıf II biyolojik güvenlik kabini | Çeşitli* | ||
| CO2 inkübatör | Çeşitli* | ||
| Kriyojenik dondurucu | Çeşitli* | Sıvı nitrojen depolama dewar önerilir. | |
| Floresan mikroplaka okuyucu | Çeşitli* | Okuyucunun alt okuma özelliklerine sahip olması gerekir. | |
| * Önerilen kaynak yoktur, bu ekipmanın seçimi bütçeye, kullanım sıklığına ve laboratuvar alanına bağlıdır. |
Kaynaklar
- Dix, D. J., Houck, K. A., Martin, M. T., Richard, M. A., Setzer, R. W., Kavlock, R. J. The ToxCast program for prioritizing toxicity testing of environmental chemicals. Toxicol. Sci. 95 (1), 5-12 (2007).
- Reif, D. M., et al. Endocrin....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
