Subretinal Space erişim için bir alternatif ve Onaylı Enjeksiyon Yöntemi yoluyla Bir transkleral Posterior Yaklaşım

Summary

Subretinal enjeksiyonlar, proteinler ve viral vektörler gibi büyük terapötik ajanları fotoreseptörlere ve retina pigment epiteline iletmek için en yaygın tekniktir. Farelerde, minimum ikincil hasar ve hızlı iyileşme süreleri ile subretinal boşluğu başarılı bir şekilde hedefleyen alternatif bir yöntem burada açıklanmaktadır.

Abstract

Subretinal enjeksiyonları başarıyla doğrudan fotoreseptör maruz kalma ve retina pigment epitel (RPE) sahiptir interfotoreseptör / subretinal bölmeye proteinlerin terapötik girişimlerin viral ajanlar, ve hücreleri sunmak için insanlar ve kemirgenler hem de kullanılmıştır. plazminojen subretinal enjeksiyonları yanı sıra son klinik öncesi ve klinik çalışmalarda ileri retina hastalığı olan bireylerin viral vektörlerin ve kök hücreleri sunma güvenliğini ve / veya etkinliğini göstermiştir. retina hastalıkları, özellikle de kalıtsal retinal distrofilerin fare modelleri, bu tedavilerin test etmek için gereklidir. Kemirgenlerde en yaygın enjeksiyonundan retinaya bir anterior küçük transkorneal ya transkleral kesiler kullanmaktır. Bu yaklaşımla, enjeksiyon iğnesi altında yatan RPE ve yerleştirilmesine bozarak nörosensöriyel retina nüfuz kolayca nick lens, lens kesafeti ve non-invaziv IMAGI bozulmasını nedenng. Bir transkleral yoluyla subretinal alan erişme, posterior yaklaşım bu sorunları önler: iğne retina penetrasyon olmadan, optik sinir yaklaşık 0.5 mm sklerasına geçer ve vitrözü kesintiye önler. Tali hasar odak sklerotomili ve geçici, seröz retina dekolmanı etkileri ile bağlantılı olduğu sınırlıdır. yöntemin basitliği, göz yaralanması en aza indirir hızlı retina yatıştırıldı ve iyileşme sağlar ve düşük başarısızlık oranı vardır. retina ve RPE minimal hasar etkinliğinin net değerlendirme ve terapötik ajanların kendilerini doğrudan etkileri için izin verir. Bu yazıda, viral vektörler, farmakolojik ajanlar hedef yüksek etkinlik, en az hasar ve hızlı bir iyileşme ile farelerde retina altı alana hücreleri ya da uyarılmış pluripotent kök (IPS) kök hücreler için kullanılabilecek yeni bir retina altı enjeksiyon tekniği tarif etmektedir.

Introduction

Subretinal enjeksiyonları fotoreseptör ve altta yatan RPE ^1,2 üzerindeki etkilerini incelemek için farelerin retina hücresel ve viral ajanlar sunan birincil yolu vardır. Farelerde en subretinal enjeksiyon protokolleri transkorneal veya ekvatora bir transkleral enjeksiyon sitesi anterior (Şekil 1) kullanın. Bu yaklaşım nicklemek ve lens bileşke bulanıklığı, retinada ve iris, retina kanaması, önemli retina dekolmanı ve kalıcı subretinal ödem ^3-9 camsı, penetrasyon bütünlüğünün bozulması içeren doğal kollateral hasara neden olabilir. Deneysel manipülasyonlar terapötik girişimlerin ^3,7,10,11 etkilerini değerlendirmek amac....

Protocol

Hayvanlar: Los Angeles, California Üniversitesi (UCLA) yetiştirilen Yabani tip C57Bl / 6J fareler. 17 haftalık ve erkek ve dişi fareler dahil - Bütün hayvanlar 11 arasında idi. Tüm fareler grubu yerleştirilmiştir, yiyecek ve su ad libitum 12:12 aydınlık / karanlık döngüsünde tutuldu. Bütün deneyler Oftalmik ve Vision Research Hayvanların Kullanım UCLA ve Vizyon Araştırma Derneği ve Oftalmoloji Tablosu kurumsal kurallarına uygun olarak yapıldı.

NOT: Tüm ilaçlar ve enjekte ajanlar Amerika Birleşik Devletleri Farmakopesi (USP) notu bulunmaktadır.

1. Cerrahi Hazırlık

1. tuzlu karışımı 100 mg / kg ketamin ve 8 mg / kg ksilazin ve intraperi....

Results

yaklaşım transkleral subretinal enjeksiyonları 0.3 ul (n = 18), 0.5 ul (n = 8) ve% 0.01 fluoresein 1.0 ul (n = 5) enjekte 16 vahşi tip farelerden 31 sağlıklı gözler üzerinde gerçekleştirilmiştir posterior. Bir göz nedeniyle yapısal ve fonksiyonel analiz engelleyen önceden varolan korneal opasite enjeksiyon çıkarılmıştır. Her enjekte göz bu raporda yer almaktadır. Hiçbir istenmeyen retina dekolmanı, vitreus içine retinada veya sızıntı delikler tespit edildi ne de gözlenen herhangi gözlerd.......

Discussion

Subretinal enjeksiyonları viral vektörlerin teslimat için tercih edilen yöntem ve fotoreseptör ve temel araştırma ve klinik tedavisinde hem de RPE işlemek için hücre kökenli tedavisi kaynaklanıyor. hastalarda, subretinal enjeksiyonları genellikle doğrudan görselleştirme ile iğne ile, pars plana bir ön sklerotomili retinanın bir arka çekirdek vitrektomi ve penetrasyon yapılır. Göz Psödofakik zaten olmadıkça katarakt oluşumu erken gerçekleşmesi için en vitrektomi prosedürleri gibi, yaygındır. Farelerde, retina altı enjeks.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Hamilton Model 62 RN SYR	Hamilton	87942	Şırınga x 1
Hamilton İğne 33 G, 1.0", 20 DERECE, nokta 3 (304 paslanmaz çelik)	Hamilton	7803-05	İğneler x 6
Vannas Kavisli Makas	Ted Pella, INC.	1347	5 mm Bıçak
22.5 Derece Mikrocerrahi Bıçağı	Wilson Oftalmik A.Ş.	91204
Ketaj	Phoenix	NDC 57319-609-02	Ketamin
Anased	Lloyd Laboratories	NDC 61311-482-10	Ksilazin
Floresein %10 AK-Fluor	Akorn	NDC 17478-253-10	100 mg / ml
%0.9 Tuzlu USP	Hospira	NDC 0409-4888-50	%0.9 NaCl
Antibiyotik Merhem	Akorn	NDC 17478-235-35	Oftalmik
Su Sirkülasyon Pompası	Gaymar	TP-500 T/Pompa	P / N 07999-000
sd-OCT	Bioptigen	R-Serisi	Ticari
Fundus Kamera	Phoenix Araştırma Laboratuvarları	MICRON III
Cımbız Tip 3	Ted Pella, INC.	5385-3SU
% 2.5 Fenilefrin	Paragon BioTeck	NDC 42702-102-15	Oftalmik
IMARIS8	Bit Düzlemi		Sürüm 8.1.2
ImageJ	NIH		V1.8.0_77
Hypromellose  %2.5	Goniovisc	AX0401	Metilselüloz
Göz Damlası (Durulama)	Bausch & Lomb		Tuzlu Su
Çözeltisi Mikroskobu	Zeiss	Stemi 2000	Mikroskop
Işık kaynağı	Fostec	P/N 20520	Işık kaynağı