Burada, intraepitelyal gama delta T hücrelerinin analizi için insan endoservikal intraepitelyal lenfositlerini elde etmek için bir izolasyon yöntemini açıklıyoruz. Bu protokol, endoservikal gama delta T hücrelerinin manyetik boncuklar veya hücre sınıflandırması ile saflaştırılması için genişletilebilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İnsan Endoservikal Gamma Delta T Hücreleri İzolasyon ve Akım Sitometrisi Analizi
Bu makalede
Özet
Özet
kadın üreme yolları (FRT) mukozal bağışıklık sistemi ilk savunma hattı olarak hizmet vermektedir. Genital mukozanın daha iyi bilgi HIV dahil olmak üzere farklı patojenlerin patojenitesini anlamak için elzemdir. Gama ö (GD) T hücreleri 'alışılmamış' T hücrelerinin prototipi ve gamma ve delta zincirlerinden oluşan heterodimerik T hücre reseptörleri (TCR'ler) kendi ekspresyonu ile tanımlanan T hücrelerinin görece küçük alt grubunu temsil eder. Bu alfa-beta TCR ile tanımlanır klasik ve daha iyi bilinen CD4 + yardımcı T hücreleri ve CD8 + sitotoksik T hücreleri ayıran. GD T hücreleri genellikle dokuya özel dağılımını gösteren ve epitelde zenginleştirilmiştir. GD T hücreleri iltihap, tümör gözetimi, enfeksiyon hastalıkları ve otoimmünite immün yanıtları düzenlemişlerdir.
Burada, tekrarlanabilir izole ve insan endoservikal intraepitelyal GD T lenfositleri analiz etmek için bir yöntem mevcut. Biz haKadın Kurumlararası HIV enfeksiyonu Çalışması (WIHS) katılan kadınlardan kullanılan endoservikal cytobrush örnekleri ettik. vajinal mukoza hakaret var olduğu koşulları sırasında GD T hücreleri etkileşimleri hakkında bilgi vajinal microbicides.In ek geliştirilmesi dahil olmak üzere, mukozal açığı ele aldığı herhangi bir klinik çalışmada uygulanan olabilir, mukozal GD T hücre yanıtları hakkında bilgi vardır enfeksiyonlu hastalıkların tedavi edilmesi GD T hücre tabanlı immün terapinin uygulanması için potansiyeli.
Giriş
Biz intraepitelyal GD T hücrelerini değerlendirmek için endoservikal fırça örneklerini kullanarak metodolojisini geliştirdi. endoservikal kanal kolumnar epitel tek bir tabaka ile kaplı olduğu. İntraepitelyal lenfositler patojen mikropların 7, 8 karşılaşmak üzerine immün yanıtları hızla başlatabilir epitel tabakası içinde ikamet cephe lenfositler temsil etmektedir. endoservikal intraepitelyal bölmenin immünolojik olayların anlaşılması HIV de dahil olmak üzere hastalıklardan korunmak için etkili stratejiler tasarımı için önemlidir.
Önerilen yöntem, bundan başka, HIV enfeksiyonu ya d....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Çalışma faaliyetleri Miami Kadın HIV Kurumlararası Çalışması (WIHS) ve AIDS Araştırma Miami Merkezi (SYAO) .Institutional İnceleme Kurulu (Üniversitesi Tıp Miami Miller Okulu) onayı öncesinde elde edilmiştir işbirliği ile Miami HIV Araştırma Birimi Üniversitesi'nde gerçekleşti işe alma ve herhangi bir değerlendirme veya çalışma ile ilgili prosedürlere.
1. Endoservikal Fırça Örnek Toplama
NOT: Katılımcılar eğitim MD ya da jinekolog ve cytobrush takarak spekulum muayenesinde altında yapıldı intraepitelyal lenfositler toplanması tarafından gerçekleştirilen bir vajinal muayene yapıldı.
- katıl....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Son zamanlarda, endoservikal intraepitelyal GD T hücrelerini analiz ve HIV bulaşmış kadınların 9, 11 yılında endoservikal gama delta T hücrelerinin kaybı bildiren ilk sendin. Burada, biz izole etmek ve endoservikal gama delta T hücrelerinin alt kümesini analiz protokol açıklar. Şekil 1 'de gösterildiği gibi, GD T hücreleri hali hazırda insan endoservikal hücre örneklerinde tespit edilebilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
kadın alt genital sistem mukoza açığına değerlendirilmesi, HIV edinimi ve bulaşma riskini ele klinik çalışmaların önemli bir bileşenidir. Tipik haliyle, HIV enfeksiyonuna FGT güvenlik genital salgıları (sitokinler, kemokinler ve antimikrobiyal peptitler) 12, 13 içinde çözünür immün modülatörler ölçerek değerlendirilir. Ancak, bu biyobelirteçler, vajinal iltihap sadece göstergesidir fizyolojik ve patolojik olaylardan etkilenir ve her zaman doğrudan mukozal hasarı.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar bir çıkar çatışması doğurabilecek ticari veya başka ilişki yoktur (örneğin, ilaç hisse senedi sahipliği, danışmanlık, danışma kurulu üyeliği, ilgili patentler ya da araştırma fonu).
Teşekkürler
Biz bu çalışmalarına katılmak için istekli olduklarını Miami WIHS çalışma katılımcılara teşekkür ederiz. Bu yazıda veriler Miami Kadın Kurumlararası HIV Çalışması (WIHS) ile toplanmıştır. Bu yayının içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) resmi görüşlerini temsil etmemektedir. Bu çalışma İlerletme Allerji ve Enfeksiyon Hastalıkları Ulusal Enstitüsü ve Kadın Kurumlararası HIV enfeksiyonu Çalışması (WIHS) [hibe sayısı U01 AI103397], Ulusal Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Enstitüsü, Sağlık [hibe sayısı P30AI073961] National Institutes, Ulusal Merkezi tarafından desteklenen Sağlık translasyonel Bilimleri ve Azınlık Sağlığı ve Sağlık ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Cytobrush Plus GT | (CareFusion, San Diego, CA, ABD | ||
| IMDM, Iscove'un Modifiye Dulbecco'nun Medium | ThermoFisher Scientific | 12440061 | |
| Beckman Coulter otomatik hücre sayacı (Vi-CELL Serisi Hücre Canlılık Analizörü | Beckman Coulter | 496178 | |
| DMSO, Dimetil sülfoksit ve nbsp; | Sigma Aldrich | D2650 | |
| FBS, Fetal Sığır Serumu | İnvitrojeni, Gibco | 26140-079 | |
| PBS | Invitrogen, Gibco | 10010023 | |
| BSA Sigma Aldrich | A-9647 | ||
| CANLI/ÖLÜ Sabitlenebilir Sarı Ölü Hücre Lekesi kiti | Yaşam | Teknolojileri,L349S9 | |
| %1 paraformaldehit | Sigma Aldrich | D6148 | |
| Fortessa akış sitometresi | Becton Dickinson | ||
| UltraComp eBeads | eBioscience | 01-2222-42 | |
| ArC Amin Reaktif Kompanzasyon Boncukları (Yaşam Teknolojileri, Grand Island, NY, ABD) | Yaşam Teknolojileri | A10346 | |
| anti-TCR gama/delta Mikro Boncuk Kiti | Milteny Miltenyi Biyotec A.Ş. | 130-050-701 | |
| MS sütunu | 103-042-201 | ||
| MACS ayırıcı | 4124 |
Kaynaklar
- Kaul, R., et al. The genital tract immune milieu: an important determinant of HIV susceptibility and secondary transmission. J Reprod Immunol. 77, 32-40 (2008).
- Haase, A. T. Targeting early infection to prevent HIV-1 mucosal transmission.<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
