Yöntem makalesi

3D Hücre Kültürü için Pulmoner Ekstrasellüler Matrix Ayarlanabilir Hidrojellerinin

DOI:

10.3791/55094

⸱

17 Ocak 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, Virginia Commonwealth University, 2Department of Physiology and Biophysics, Virginia Commonwealth University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu akciğer hücre dışı matristen 3 boyutlu hücre kültürü iskele oluşturmak için bir yöntemdir. Bozulmamış akciğer üç boyutlu hücrelerin büyümesini destekleyen hidrojeller olarak işlenir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, in vitro akciğer hücre kültürü için çok bileşenli hücre kültürü hidrojeller oluşturulması için bir yöntem sunulmaktadır. Domuz, sıçan veya fare bloğun akciğer dokusunda en sağlıklı ile başlayarak, doku perfüze selüler artığın ayrılması için, daha sonraki kimyasal deterjanlar içinde kalmasını sağlar. işlem öncesi ve sonrası dokunun histolojik karşılaştırma çift sarmallı DNA ve alfa galaktosidaz boyama% 95'in üzerinde kaldırılmasını teyit hücresel enkaz çoğunluğu kaldırılır göstermektedir. Decellularization sonra, doku liyofılize edildi ve sonra toz haline cryomilled olup. Matris toz, bir asidik pepsin sindirim çözeltisi içinde 48 saat boyunca sindirilir ve daha sonra PREGEL çözelti oluşturmak için nötralize edilir. PREGEL çözeltisinin jelasyon, 37 ° C'de inkübe edilerek uyarılabilir ve hemen ardından nötralizasyon kullanılabilir veya iki haftaya kadar 4 ° C 'de muhafaza edilebilir. Kaplama C için muamele edilmemiş plaka PREGEL çözeltisi kullanılarak oluşturulabilirarşın eki. Hücreler, hücreleri iskele boyunca göç veya kaplamalar üzerinde kaplama sağlayan bir oluşturulmuş jelin yüzeyi üzerine kaplanmış, bir 3D kültür elde etmek için kendiliğinden montaj öncesinde PREGEL, içinde süspanse edilebilir. stratejiye değişiklikler jelasyon sıcaklığının, kuvvet ya da protein parçası boyutları etkileyebilir sunulmaktadır. hidrojel oluşumu ötesinde, hidrojel sertlik genipin kullanılarak arttırılabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

in vitro sonuçların kliniğe çevrilmesi, biyomedikal araştırmacıların karşılaştığı en zorlu konulardan biridir. Doku kültürü plastiği üzerine in vitro araştırmalar daha kolay, daha kullanışlıdır ve yüksek hücre canlılığını korur. 1 Bu yaklaşım makul bir başlangıç noktasıdır, ancak sonuçlar sınırlı klinik çeviriye sahiptir. Giderek artan bir şekilde, laboratuvarlar geleneksel iki boyutlu yöntemlerin yerini almak için üç boyutlu yapıları birleştiriyor. Biyolojik iskelelerden polimerik iskelelere kadar birçok üç boyutlu ortam için incelemeler mevcuttur. 2,3

Biyolojik çerçeveler, doğal matrisin birçok protein ve glikozaminoglikan bileşenini içerdikleri ve hücrelerin bağlanması ve tanıması için tanıdık bağlanma bölgeleri sağladıkları için in vivo ortamların özelliklerini taklit edebilir. Hücre dışı matriks (ECM) türevi materyallerin, hücre bağlanması ve çoğalması için yetenekli iskeleler olduğu gösterilmiştir. 4 ECM hidrojel platformlarının uygulanmasını sınırlayan bir zorluk, jelleşmeyi takiben doğası gereği zayıf mekanik özelliklerinden kaynaklanmaktadır. Doğal doku genellikle hidrojellerden daha yüksek büyüklükte mekanik özelliklere sahiptir. Toksik olmayan çapraz bağlama maddeleri, doğal doku ortamını daha iyi taklit etmek için hidrojellerin mekanik özelliklerini artırabilir. Genipin, Gardenya bitkilerinden elde edilen, ECM'nin mekanik özelliklerini genipin konsantrasyonundaki değişikliklerle yakından uyarlama yeteneğine sahip, toksik olmayan, doğal bir çapraz bağlayıcıdır5,6.

Vücuttaki hemen hemen tüm hücreler, ürettikleri ya da sürdürdükleri ECM'de bulunur ve bu ECM üzerinde organize olurlar. ECM'nin her organ veya sistemdeki organizasyon, durum ve işlevdeki evrensel önemine yeni odaklanma, in vitro araştırma için matris tabanlı platformların üretimini ateşledi. Domuz ince bağırsak submukozası, en kapsamlı olarak çalışılan doğal olarak türetilmiş iskeledir ve tendonları, bağları, iskelet kasını4 ve hatta kemik7'yi yenilemek için kullanılmıştır. Diğer organlardan ve donör türlerden elde edilen matrisler de iyi doku rejenerasyon potansiyeli göstermiştir. Yabancı ECM bileşenlerinin kullanımı, immünomodülasyon ile ilgili minimum sorunlara neden olur. Konak hücresel maddenin eliminasyonundan sonra, kalan ECM, amino asit içeriği ve organizasyonu açısından diğer tüm memeli türlerinebenzer olacaktır 8. Hücre-ECM etkileşimlerini in vitro olarak incelemenin en iyi yolunun organa özgü ECM iskelelerini kullanmak olduğuna dair artan bir düşünce çizgisi var. Her organ, hücresel nişler oluşturmak için benzersiz bir protein ve proteoglikan bileşimi sağlar. Nişler, biyofiziksel sinyalleşmeye katkıda bulunan hücre dışı matrisin yapısal, işlevsel ve hatta enzimatik parçalanmasını sağlar. İn vivo mikroçevreye en çok benzeyen bir in vitro mikroçevre elde etmek için, dokuya özgü ECM'nin kullanılması, araştırma için hücresel nişleri optimize edecektir.

Bu protokolün amacı, akciğer ECM'sine özgü bir hidrojel iskelesi kurmak için bir yöntem sağlamaktır. Bu yöntem, akciğer hücresi-ECM etkileşimleri üzerine in vitro araştırmalar için bir platform sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Çözüm Steril Filtresi Yol
Dihidro 2 O Evet Dihidro 2 O; Steril süzüldü
% 0.1 Triton X-100 Çözüm Evet Davlumbaz altında dihidroksi 2 O 100 ml, 100 ul, Triton-X 100 çözüm ekleyin ve çözülene kadar ajite;
steril filtre.
% 2 Deoksikolat Çözelti Evet davlumbaz altında 2 gr Sodyum Deoksikolat çözüm ekleyin
100 mi dihidro 2 O ve eriyinceye kadar ajitasyon başı; steril filtre
1 M NaCl Evet Dihidro 2 O 1 L 58.44 g NaCI ekleyin; çözülene kadar ajite;
steril filtre
DNaz çözümü Evet 12,000 eklebirimleri DNaz 1 L DIH 2 O; 0.156 gr MgSO 4 ekleme
(Susuz) ve 0.222 g CaCl2; çözülene kadar ajite; steril filtre
PBS Evet , 27.2 g Na 2 HPO 4 · 7H 2 O (dibazik heptahidrat) birleştirin
80 g NaCI ve 10 L dihidroksi 2 O 2 g KCI; çözülene kadar ajite; 7.4 pH ayarlamak; steril filtre

Tablo 1: Doku Decellularization için gerekli çözümler. decellularization işlemi için yukarıdaki çözümler olun. 4 ° C'de saklayın. Yaklaşık 2.5 L bir domuz akciğer için gerekli olacaktır.

1. Hidrojel Oluşumu

  1. (Referanslar 9,10 uyarlanmıştır) Domuz Akciğer Decellularization
    1. Kalp ve Vasc ile, bir mezbahadan, bir bloğun en normal bir domuz akciğer eldeulature bozulmamış.
    2. kalp mümkün olduğunca yakın damarsal kesim, kalbi uzak incelemek için doku makas veya neşter kullanın, kalan damar perfüzyon için daha sonraki adımlarda kullanılacaktır.
    3. Dikkatli bir neşter veya makas kullanarak trakea, bronşlar ve damarsal çevreleyen bağ dokusu uzak teşrih.
      NOT: decellularization sürecinin etkinliğini engelleyebilir büyük kesikler veya delikler plevra yoluyla ve atelektazi veya damar tıkanıklığına büyük miktarlarda olmadan bir akciğer seçerek prosedürün geri kalanı için kullanılacak en iyi akciğer belirleyin.
    4. (Atılabilir kalp, bağ dokusu ve kaldırılan akciğer lobları) mümkün olduğunca trakea bağlı olduğu kadar bronşu bırakarak bırakıyorsa akciğer kesip. tek akciğer trakea ve damarsal bağlı kalan olmalıdır.
      NOT: İsterseniz histoloji için bölümleri saklayın. 9
    5. p kelepçeler veya sütür ile bağlantısız bronşlar kapatınRevent fazla geri tepme.
    1. (Tablo 1), gerekli olana kadar, 4 ° C de decellularization çözümleri ve buzdolabında hazırlayın.
    2. , Pulmoner arter uyum pulmoner arter ve trakea hem aracılığıyla akciğer dokusunda DI suyla 3 kez serpmek için kanüle bir el pompası kullanılarak. ilk her seferinde damarsal serpmek. damar sistemine yaklaşık 1 L ve her perfüzyon için trakea içine 1.5 L ile başlayın, ama hücresel enkaz kaldırıldıktan olarak daha likit sistemi ile perfüze edilebilir.
    3. Triton X-100 çözeltisi, her iki damar ve trakea serpmek.
    4. 4 ° C'de 24 saat boyunca, Triton X-100 çözeltisi akciğer dokusu daldırın.
    5. DI su ile perfuse damarsal ve trakea 3 kez durulayın.
    6. deoksikolat çözeltisi ile iki damar ve trakea serpmek.
    7. 4 ° C'de 24 saat boyunca deoksikolat doku bölümleri daldırın.
    8. DI su ile perfuse damarsal ve trakea 3 kez durulayın.
    9. NaCl çözeltisi ile iki damar ve trakea serpmek.
    10. 4 ° C'de 1 saat boyunca, filtre NaCI çözeltisi doku daldırın.
    11. DI su ile perfuse damarsal ve trakea 3 kez durulayın.
    12. DNaz çözeltisi ile iki damar ve trakea serpmek.
    13. 4 ° C'de 1 saat boyunca, filtre DNase solüsyon içerisinde dokuyu daldırın.
    14. damar ve trakea 5 kez PBS ile iki serpmek.
    15. fark kıkırdaklı dokuyu, trakea ve sadece solunum bölgeleri (öncelikle periferal alanlar) bırakarak, solunum yollarını yapmasına (öncelikle hilusun ve akciğerlerin medial kısımları çevresinde bulunan) çapında tüm tübüller 2 mm veya daha büyük parçalara ayır.
    16. 1 inç bölümleri veya daha küçük içine doku teşrih. doku Oryantasyon Bu aşama için önemli değil.
    17. 50 ml konik tüpler aşırı sıvı ve yer dokusu dökün. -80 ° C'de doku dondurun.
      Not: histolojik hücre ve hücre debri çıkarılmasını sağlamak için bölümler saklayıns, arzu edildiği takdirde. Biz H & E kullanımı, α-galaktosidaz, Picogreen, hidroksiprolin, ninhidrin, alcian blue, SDS-PAGE ve kütle spektrometresi karakterize etmek. 9
  2. akciğer İşleme
    1. Decellularized akciğer dokusu içeren dondurulmuş tüplerin kapaklarını çıkarın.
    2. Tüp deliğinin üzerine filtre kağıdı yerleştirin ve lastik bant ile sabitleyin.
      NOT: Tüp ve içeriği hala donmuş kadar aksi -80 ° C yerleştirmek dondurulmuş olmalıdır.
    3. Tüm aşırı sıvı üretici talimatlarına göre bir dondurma kurutma kullanılarak, bitene kadar doku liyofilize. değirmen hazır olana kadar -80 ° C'de saklayın.
    4. çalışma koşullarına yalıtımı ve iç bileşenlerin soğutulması için dondurucu değirmene sıvı azot eklemek başlamadan önce.
    5. değirmen tüpten manyetik değirmen çubuğunu çıkarın ve alt kapak doku ekleyin.
    6. değirmen çubuğunu değiştirin ve gevşek paketlenmiş doku ekleyin. değirmen bar hala serbestçe hareket etmelidir.
    7. değirmen tüpü ve pla kapatındondurucu değirmende ce.
    8. maksimum doldurma çizgisine kadar sıvı azot doldurun.
    9. Dondurucu değirmen ince toz haline tüm doku (yaklaşık 5 dakika, ~ 600 dakika çarpma hızı -1) bir paslanmaz çelik bir çarpma polikarbonat silindir hem de üretici talimatlarına göre dondurucu değirmen kullanılarak, paslanmaz çelik uç fişler. Kullanıma hazır olana kadar -80 ° C'de saklayın.
  3. Mikro-gözenekli bir jel formasyonu (8 mg / ml) (referans uyarlanmıştır 9,11)
    1. % 1 ekleyin (a / h) hücresizleştirilmiş tozu ve% 0.1 (ağırlık / hacim), 0.01 M HCI pepsin sürekli ajitasyon altında, oda sıcaklığında, (sıvı üst düzeyde akış görmek gerekir) 48 saat.
      NOT: Toz statik toz tüp duvarlardan aşırı yıkamak için fırsat tanıyor sonra çok HCl ekleyerek tahsil edilir.
    2. 48 saat boyunca sindirimden sonra, 5 dakika boyunca buz üzerinde solüsyonu ve reaktifleri.
    3. Sıcaklık 10 olarak% (h / h), 0.1 M NaOH, birD 11.11% (h / h) 10 x PBS, 7.4 fizyolojik pH sindirilmiş protein çözeltisi getirmek (konsantrasyon 1x tüm çözüm getirmek için).
      NOT: Çözelti hemen bir haftaya kadar 4 ° C 'de muhafaza edilebilir. Istenirse reometre 9 kullanarak jelleşme kinetik gerçekleştirin.

2. Mekanik Gücü Artırmak İçin hidrojellerin Çapraz bağlama

  1. 1,% 0.1 ve% v genipin çapraz bağlama çözeltisi w /% 0.01 solüsyonları,% 10 DMSO içinde genipin tozun gerekli miktarda çözülmesiyle hazırlanmıştır.
  2. 1 saat çözüme her 15 dakika karıştırın.
  3. Daha önce kısmen 1.3.4 monte edilmiştir ECM hidrojeller (96 çukurlu bir levhanın her bölmesine 100 ul) kapsayacak şekilde genipin solüsyonu ekleyin.
  4. 37 ° C'de 24 saat boyunca çapraz bağlanması için her ECM hidrojel bırakın.
  5. yıkama solüsyonu artık mavi olana kadar ECM hidrojel PBS ile 3 kez durulayın. çapraz hidrojeller daha sonra karakterizasyon ve ce için hazır olacakll kültürü çalışmaları.

Mikro Jel ile 3. Hücre Kültürü

  1. İki boyutlu kaplama
    1. 1.3.3 solüsyonun kullanılarak, 96 çukurlu bir muamele edilmemiş doku kültür plakasının her bir oyuğuna PREGEL çözeltisinin 20 ul ekle.
    2. 4 ° C'de bir gece buzdolabında protein adsorpsiyon plaka izin vermek.
    3. Aspire Pregel çözümü ve PBS ile durulayın.
    4. Geçiş hücre, 9.
    5. Kuyulara 10.000 hücre / cm 2 ekleyin.
    6. oyuk başına 100 ul ortam artırmak ve 37 ° C'de inkübe edin.
  2. Üç boyutlu hücre kültürü 9
    1. 1.3.3 solüsyonun kullanarak, PREGEL çözeltisi 1.000.000 hücre / ml 'lik bir konsantrasyona kadar pelet hücreleri yeniden süspanse edin.
    2. Hızlı 3D hücre kültürü için ~ 500 um kalınlığında bir hidrojel oluşturmak üzere, 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna PREGEL hücre süspansiyonu 16 ul dağıtmak.
    3. 30 dakika süre ile 37 ° C'de inkübe edinjel dakika oluşturulması için.
    4. oluşturulan hidroj en medya 100 ul ilave edin ve 37 ° C'de inkübe edin.
  3. Değişken sertlik jeller Üç boyutlu hücre kültürü
    1. 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna pipetle, 1.3.3 gelen PREGEL çözeltisi 100 ul çözelti kullanılması.
    2. Jel oluşturmak için 30 dakika boyunca 37 ° C'de inkübe edin.
      Not: Burada kullanılan kısmı 2 adım Çapraz bağlama.
    3. Geçiş hücre, 9.
    4. Kuyulara 10.000 hücre / cm 2 ekleyin.
    5. oyuk başına 100 ul ortam artırmak ve 37 ° C'de inkübe edin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yöntem kullanılarak, normal domuz, sıçan ve fare akciğer (Şekil 1) gelen hidrojeller üretmişlerdir. İşlenmiş akciğerler bir sırası ile, 5 mg, 40 mg ve ECM tozun 10 g tahmin sağlar. Işlemin bir genel görünüşü Şekil 2 'de gösterilmiştir. sürecinde kilit görselleştirme şunlardır: deoksikolat durulama sonra akciğerlerin beyaz bir görünüm; PREGEL oluşumundan sonra, çözelti, opak olmalı ve 4 ° C'de muhafaza edildiğinde çözelti ay homojen görünmelidir. Biz s...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

biyoloji ayrılmaz yönlerinden biri belirli bir görevi gerçekleştirmek hiyerarşik yapıların içine moleküllerin öz-örgütlenme olduğunu. Laboratuarda 13, kendinden montaj gibi tuz konsantrasyonu, pH ve sindirim süresi gibi pek çok faktöre bağlıdır. Gösterildiği gibi, bir kendi kendini düzenleyen hidrojel çözünür proteinler fizyolojik sıcaklığında tekrar. Oluşan hidrojel in vitro hücresel yapışma ve canlılık geliştirme kapasitesine sahiptir.

ECM'den biyofiziksel sinyaller...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz sağlam domuz akciğer dokusu bağış için Smithfield çiftlikleri teşekkür etmek istiyorum. Biz de bize kendi ekipman kullanmak için izin Dr. Hu Yang, Dr. Christina Tang ve VCU Plastik Cerrahi Bölümü'ne teşekkür etmek istiyorum. Hidrojel ve doku örnekleri finansman formu NIH-NCI Kanser Merkezi Destek Grant, kısmen, NIH-NINDS Merkezi Çekirdek Grant 5 P30 NS047463 dan fon tarafından, kısmen desteklenen Anatomi ve Nörobiyoloji Mikroskopi Tesisi VCU Bölümü'nde SEM için hazırlandı P30 CA016059. VCU Nanoteknoloji Çekirdek Karakterizasyonu Tesisi (KKK) numunelerin SEM görüntüleme. Bu çalışma, Ulusal Bilim Vakfı, CMMI 1351162 tarafından finanse edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Triton X-100 Fisher ScientificBP151-100Çeker ocakta göz koruması ve eldiven ile kullanın.
Sodyum DeoksikolatSigma-AldrichD6750-100gGöz koruması ve eldiven ile kapüşonda kullanın.
Magnezyum SülfatSigma-AldrichM7506-500gYok
Kalsiyum KlorürSigma-AldrichC1016-500gYok
DNaseSigma-AldrichD5025-150KUYok
HClSigma-Aldrich258148-500MLGöz koruması ve eldivenle kullanın.
PepsinSigma-AldrichP6887-5GÇeker ocakta göz koruması ve eldivenle kullanın.
Sodyum HidroksitFisher ScientificBP359-500Göz koruması ve eldivenlerle kullanın.
GenipinWako Chemicals078-03021Çeker ocakta göz koruması ve eldivenle kullanın.
PBS 10xKalite Biyolojik119-069-151Yok
PBSVWR45000-448Yok
Filtre KağıdıWhatman8519N/A
El pompasıFisher Scientific10-239-1N/A
Mezun BeherVitLab445941N/A
CryomillSPEX6700Kriyoeldiven ve göz kullanın koruma.
LiyofilizatörFTS FlexiDryEldiven kullanın.
ReometreKeşfiHR-2Eldiven ve göz koruması kullanın.

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lee, J., Cuddihy, M., Kotov, N. Three-Dimensional Cell Culture Matrices: State of the Art. 14, (2008).
  2. Haycock, J. W. 3D Cell Culture. , Humana Press. (2011).
  3. Walker, J. M., Ed, Epithelial cell culture protocols. , Humana Press: Springer. New York: New York. (2012).
  4. Badylak, S. F., Freytes, D. O., Gilbert, T. W. Extracellular matrix as a biological scaffold material: Structure and function. Acta Biomater. 5 (1), 1-13 (2009).
  5. Koo, H. -J., Lim, K. -H., Jung, H. -J., Park, E. -H. Anti-inflammatory evaluation of gardenia extract, geniposide and genipin. J. Ethnopharmacol. 103 (3), 496-500 (2006).
  6. Jeffords, M. E., Wu, J., Shah, M., Hong, Y., Zhang, G. Tailoring Material Properties of Cardiac Matrix Hydrogels to Induce Endothelial Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells. ACS Appl. Mater. Interfaces. 7 (20), 11053-11061 (2015).
  7. Suckow, M. A., Voytik-Harbin, S. L., Terril, L. A., Badylak, S. F. Enhanced bone regeneration using porcine small intestinal submucosa. J. Invest. Surg. 12 (5), 277-287 (1998).
  8. Brown, B. N., Badylak, S. F. Extracellular matrix as an inductive scaffold for functional tissue reconstruction. Transl. Res. J. Lab. Clin. Med. 163 (4), 268-285 (2014).
  9. Pouliot, R. A., et al. Development and characterization of a naturally derived lung extracellular matrix hydrogel. J.Biomed.Mater.Res.A. , (2016).
  10. Price, A. P., England, K. A., Matson, A. M., Blazar, B. R., Panoskaltsis-Mortari, A. Development of a decellularized lung bioreactor system for bioengineering the lung: the matrix reloaded. Tissue Eng. Part A. 16 (8), 2581-2591 (2010).
  11. Freytes, D. O., Martin, J., Velankar, S. S., Lee, A. S., Badylak, S. F. Preparation and rheological characterization of a gel form of the porcine urinary bladder matrix. Biomaterials. 29 (11), 1630-1637 (2008).
  12. Tilghman, R. W., et al. Matrix rigidity regulates cancer cell growth and cellular phenotype. PloS One. 5 (9), e12905(2010).
  13. Ratner, B. D., Bryant, S. J. Biomaterials: where we have been and where we are going. Annu. Rev. Biomed. Eng. 6, 41-75 (2004).
  14. Fridman, R., Benton, G., Aranoutova, I., Kleinman, H. K., Bonfil, R. D. Increased initiation and growth of tumor cell lines, cancer stem cells and biopsy material in mice using basement membrane matrix protein (Cultrex or Matrigel) co-injection. Nat Protoc. 7 (6), 1138-1144 (2012).
  15. Zhang, W. -J., et al. The reconstruction of lung alveolus-like structure in collagen-matrigel/microcapsules scaffolds in vitro. J. Cell. Mol. Med. 15 (9), 1878-1886 (2011).
  16. Booth, A. J., et al. Acellular Normal and Fibrotic Human Lung Matrices as a Culture System for In Vitro Investigation. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 186 (9), 866-876 (2016).
  17. Matsuda, A., et al. Evidence for human lung stem cells. N. Engl. J. Med. 364 (19), 1795-1806 (2011).
  18. Zuo, W., et al. p63+Krt5+ distal airway stem cells are essential for lung regeneration. Nature. 517 (7536), 616-620 (2015).
  19. Keane, T. J., Londono, R., Turner, N. J., Badylak, S. F. Consequences of ineffective decellularization of biologic scaffolds on the host response. Biomaterials. 33 (6), 1771-1781 (2012).
  20. Neill, J. D., et al. Decellularization of human and porcine lung tissues for pulmonary tissue engineering. Ann Thorac Surg. 96 (3), 1046-1055 (2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Hidrojel Olu umuDesel larizasyon Tekni i3D H cre K lt rPepsin SindirimiGenipin apraz Ba lamaReolojik TestlerH cre Tutunma DeneyiDondurarak Kurutma ProtokolKriyomilling lemi

İlgili makaleler