Yöntem makalesi

Basit Bir adım Yetişkin Tüm montaj Hazırlama Diseksiyon Protokolü Drosophila Brain

DOI:

10.3791/55128

⸱

1 Aralık 2016

 ,  ,  , 
1Center for Metabolic and Degenerative Diseases, The Brown Foundation Institute of Molecular Medicine, Programs in Human and Molecular Genetics and Neuroscience, The Graduate School of Biomedical Sciences at Houston, The University of Texas Health Science Center at Houston, 2Department of Natural Sciences, University of Houston - Downtown, 3Department of Neurobiology and Anatomy, McGovern Medical School, The University of Texas Health Science Center at Houston

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yetişkin Drosophila beyin nöronal devreleri, yüksek beyin fonksiyonları ve karmaşık bozuklukları çalışmak için değerli bir sistemdir. Etkin bir yöntem, beyin temelli çalışmalar kolaylaştıracak küçük sinek kafasından tüm beyin dokusu incelemek için. Burada iyi korunmuş morfolojisi ile yetişkin beyinlerinde basit, tek adımlı diseksiyon protokol açıklar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İnsan beyni dejeneratif hastalıkların modeli yetişkin beyinlerinde nöronal devreler harita ve yüksek beyin fonksiyonlarının moleküler ve hücresel temelini incelemek için Drosophila kullanarak artan bir ilgi vardır. iyi korunmuş morfolojisi erişkin beyinlerinin bir bütün montaj hazırlığı gibi tüm beyin temelli çalışmalar için kritik, ama teknik olarak oldukça zor ve zaman alıcı olabilir. takip eden işlem aşamalarını kolaylaştırmak için vücudun geri kalan bağlı bozulmamış beyin tutarken Bu protokol, en az 10 s bir yetişkin sinek kafasının kolay öğrenmek için, tek-aşamalı bir diseksiyon yaklaşımı tarif eder. prosedür normalde daha sonra görüntüleme adımla engelleyebilir beyin ile ilişkili göz ve trakea dokuların en temizlenmesine yardımcı olur ve aynı zamanda diseksiyon forseps kalitesine daha az talep yerleştirir. Buna ek olarak, B her iki tarafına görüntüleme için önemli olan bir lamel üzerine monte edilmiş, beyin örnekleri uygun bir çevirme sağlayan basit bir yöntem tarifbenzer sinyal yoğunluğu ve kalitesi ile yağmurlar. Protokolün bir örneği olarak, biz WT yetişkin beyinlerinde dopaminerjik (DA) nöronların ilişkin bir analizi sunması (1118 w) uçar. Diseksiyon yöntemi yüksek etkinlik Drosophila büyük ölçekli yetişkin beyin temelli çalışmalar için özellikle yararlı hale getirir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yaygın meyve sineği olarak bilinen model organizma Drosophila, uzun zarif genetik araçlar, kısa üreme kez değerlemeye tabi tutulmuştur ve son derece moleküler ve hücresel yollar korunmuş bulunmaktadır. Meyve sineği başarıyla temel sinyal yollarını, çok hücreli organizmaların desenlendirme mekanizmaları yanı sıra nöronal gelişimi, işlevleri altında yatan mekanizmaları ve hastalıkları 1,2 teşrih istihdam edilmiştir. Hücre etiketleme ve görüntüleme teknolojilerindeki son gelişmelerle birlikte, meyve sineği beyin, nöronal devrenin ince haritalama ve öğrenme ve hafıza ve sirkadiyen ritim 1,3 gibi yüksek beyin fonksiyonları, moleküler ve hücresel temelini diseksiyon özellikle güçlü hale geldi 4,5,6,7,8.

Drosophila sisteminin bir avantajı normal bir bileşik veya konfokal mikroskop kullanılarak beyin tüm montaj hazırlanması ve incelenmesini sağlayan nispeten küçük bir boyutudur. This özelliği dolayısıyla bütünün içinde bir çalışılan konu bütüncül bakış ve onun tam geometri hem sağlayarak, tüm beyin dokusunda bağlamında, hücresel ve hücre içi düzeyde nöronal devrenin detaylı anatomik ve fonksiyonel analiz, hatta tek bir nöronu mümkün kılar beyin. Ancak, beynin oldukça minyatür boyutu göz önüne alındığında, aynı zamanda verimli bir yetişkin sinek koruyucu dış iskelet kafa davanın dışında sağlam bir beyin dokusunu diseksiyon teknik bir meydan okuma sunuyor. Çeşitli etkili ve nispeten basit diseksiyon yöntemleri genellikle dikkatli içerir ve adım adım kafa durumda kaldırılmasını ve gözler dahil ilişkili dokuları, trakea ve yağ 9, 10. Bunlar mikrocerrahi diseksiyon yöntemlerinin doğru beyin, hangi detaylı bir şekilde tarif edilmiştir genellikle kolayca zarar görebilir ince iyi hizalanmış ipuçları forseps dayanarak, diseksiyon forseps kalitesi oldukça sıkı talepleri yerleştirin. Dahası, disseke beyinler genellikle separat vardırvücudun geri kalan ed, beyinleri nedeniyle kolayca, küçük boyutları ve işlem tampon maddesi içinde şeffaflığının daha sonra boyanması ve yıkama işlemleri sırasında kaybolabilir. Burada, gövde bağlı disseke beyinleri tutan yetişkin beyinlerinde için, nispeten basit ve kolay öğrenilebilen bir adım diseksiyon protokol açıklar. Diseksiyon işlemi genellikle kolay gibi göz ve trakea gibi beyin ilişkili dokuların en uzak temizler ve kaliteli diseksiyonu forseps ihtiyacını azaltır.

floresan bileşik mikroskop veya konfokal mikroskop altında beyin görüntüleme, ayrıca, uzak floresan ışık kaynağından beynin yan nedeniyle genellikle tüm montaj beyin kalınlığı zayıf bir sinyal ve daha az net görüntüler üretir. Burada, biz de benzer sinyal intensi ile beynin her iki tarafın uygun görüntüleme sağlayan, beyin numunelerinin kolay saygısız sağlayan basit bir montaj yöntemi açıklarty ve kalite.

Bir kanıtı-of-concept yetişkin beyin incelemek için bu yöntemin uygulanması için, biz daha 1118 sinekler w beyinlerinde DA nöronların varlığını incelendiğinde; genellikle transgenik sinekler ve birçok Drosophila çalışmalarında vahşi tipli denetimi oluşturmak için ebeveyn hattı olarak kullanılan bir genotip.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyin Diseksiyon ve Immunofluorescent Boyama için kullanılır 1. Çözümler

  1. Yetişkin yapay serebral spinal sıvı içinde beyinleri sinek teşrih (CSF): 119 mM NaCl, 26.2 mM NaHCO 3, 2.5 mM KCI, 1 mM NaH 2 PO 4, 1.3 mM MgCl2, 10 mM glükoz. Kullanmadan önce, gaz% 5 CO 2/95 10% O 2 ile aCSF - 2.5 mM CaCl2 ile 15 dakika ve başak. 0.22 um'lik bir membran filtresinden süzülerek ACSF çözüm sterilize edin.
    Not: Mağaza aCSF 4 ° C'de bakteri bulaşmasını önlemek için. parçalara beyinleri nihai görüntü kalitesi iki diseksiyon çözeltilerinin etkileri ayrıntılı karşılaştırmalar yapılmamıştır, ancak Fly beyinleri Ayrıca, fosfat tamponlu tuz (PBS) çözeltisinde kesildi edilebilir.
  2. Normalde bölünüp -20 ° C'de saklanır sabitleyici çözelti olarak 1 x PBS içinde hazırlanmış% 4 paraformaldehit (PFA) kullanın.
    Caution: PFA toksik ve korozif ve dikkatle ele alınmalıdır.
  3. parçalara beyinleri immünofloresan boyama sırasında, beyinlerinden son yıkama aşamasından sonra PFA durulama 1x PBS kullanın. 10x PBS stok solüsyonu 1x PBS hazırlayın (1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Na 2 HPO 4, ve 18 mM KH 2 PO 4).
  4. parçalara beyinleri immünofloresan boyama esnasında sonraki tüm yıkama adımları için 1x PBS (1 x PBT)% 0.3 Tween-20 kullanımı.

Yetişkin Fly Başkanları 2. Mikrocerrahi Diseksiyon

Not: diseksiyon işlemi, Şekil 1 'de gösterilmiştir.

  1. CO 2 ile yetişkin sinekler uyutmak. 5 s - Forseps kullanarak, bir sinek pick up ve kısaca 3% 70 etanol içinde batırarak kendi manikür Dewax. Bu aCSF veya 1X PBS diseksiyon çözeltisi batırılır zaman hiçbir kabarcıklar sinek manikür uymasını sağlar.
  2. Altındaeller tarafından bloke olmayacak bir açıda bir ışık kaynağı ile diseksiyon mikroskobu, sinek (1.2x büyütme) net bir görüş elde etmek objektif lens ayarlayın. Hayvan hareketsiz ve Şekil 1A gösterildiği gibi karın, yukarı bakacak şekilde soğuk diseksiyon çözüm içine sinek batırmak için dominant olmayan el ile forseps kullanabilir.
  3. 160 forseps tutmak - anında karın üzerine küçük bir kuvvet uygularken, diseksiyon levhasına göre 170 ° bir açı (Şekil 1A oklar olarak gösterilmiştir). Bu adım sinek hareketsiz ve 15 geriye doğru başını hareket ettirmek için zorlar - 25 ° yukarı burnumun uzatırken. Bu süreçte, manikür yumuşak ve saydam bölge, burnumun altında, belirgin hale gelmelidir. Büyütme artırmak ve bu bölgede üzerine odak düzlemi ayarlayın.
    Not: çok sıkı forseps tutmayın, ama yeterince yerine sadece firma stabilize etmekSinek. Çok fazla kuvvet iç organlar solüsyon içine yırtılmasına neden olur.
  4. tutma elden basınç bırakıldığında forseps açık bahar böylece, forseps ipuçları hafif dirençli kuvvet üretecek olan ipuçları kapalı böylece diseksiyon forseps, basın baskın elinizi kullanın. Şekil 1B gösterildiği gibi, sinek tutan forseps dik forseps yerleştirin.
    1. Pierce Şekil 1B kırmızı okla gösterildiği gibi burnumun altında manikür yumuşak ve saydam bölgeye diseksiyon forseps kapalı ipuçları. Çok derinden beyni değecek forseps nüfuz önemlidir. Doğru beyin görünür hale gelmelidir. dominant olmayan el ile sinek istikrarlı bir şekilde tutun.
  5. Çabuk ama sürekli t kendi kuvveti ile diseksiyon forseps ipuçları bırakın ve koparmak için bu sürümden ivme güveniyorO Exoskeleton sinek kafasını çevreleyen. Görünür hale gelmelidir uygun sağlam bir beyin (hemen Şekil 1C alt forsepsi ucu yukarıda beyaz doku) (Şekil 1C gösterilen dışa kırmızı oklar olarak gösterilmiştir) yayımlanan forcep ipuçları ivme rehberlik etmek için bir hayali çizgiyi takip edin. Bu hafifçe Exoskeleton kaldırmak ve beyin beyin ilişkili göz ve trakea en olacaktır. Doğru zamanlama ve kuvvet dış iskelet araştırmacının deneyimine bağlı olacaktır açmak için başvurdu.
    Not: Bu Diseksiyon sırasında en kritik adımdır. Açık beyin bırakarak vücudun geri kalanına bağlı kalırken Exoskeleton kaldırmak için açılış forseps ivme oluşturulan doğal kuvvet güvenmek önemlidir.
  6. dikkatle, beyaz elyaf yapıları gibi görünen trakea olarak kalan aksesuar dokuları, kaldırmak için baskın el forseps kullanın remaining beyin bağlı. çekin veya uygun beyin zarar vermemek için dikkatli olun.

Brain 3. Immunofluorescent Boyama

  1. 60 dakika - 40% 4 PFA yaklaşık 1 mL ilişkili gövdeleri olan parçalara beyin örnekleri saptamak.
    Not: Bu ve sonraki adımlar için düzgün çözelti örnekleri karıştırmak için bir nutator örnekleri ile tüpler veya plakalar tutun.
  2. 3 kez aşağı çözümü yukarı pipetleme 1x 1 mL PBS ile durulayın. uzak beynini aspire için dikkatli olun.
  3. 5 dakika her biri için 1x PBT ile 5 kez yıkayın. inkübasyon sırasında nutator örnekleri tutun.
  4. 4 ° C'de / uygun seyreltme O'da primer antikorlar ile N inkübe edin.
  5. Ertesi gün, birincil antikorlar kaldırmak ve 1x PBT numuneleri 5 kez yıkayın. Her yıkama arasında 1x PBT çözeltisi içinde 10 dakika - 5 için örnek bırakın. inkübasyon sırasında nutator örnekleri tutun.
  6. yıkanmış inkübeÖnerilen seyreltme ve kuluçkalama süresi ile uygun bir ikincil antikorlar örnekler.
  7. Her yıkama arasında 10 dakika inkübasyon ile 1x PBT numuneleri altı kez yıkayın.
    Bu aşama, spesifik olmayan bir örnek bağlanmış ikinci antikorun çıkarılması için kritiktir.
  8. 30 dakika süre ile 1x PBT çözeltisi içinde 1 mg / ml 4 ', 6'-diamidino-2-fenilindol (DAPI) 10,000 seyreltme: 1 içinde inkübe edin. DAPI DNA'nın en bölgelerine bağlanır ve beynin genel morfolojisi ortaya çıkarmak için kullanılabilir bir DNA boyadır.
  9. 1x PBS ile üç kez yıkayın.
  10. Transfer diseksiyon çanak örnekler ve forseps kullanarak bir diseksiyon çanak kurumlardan beyinleri ayırın.
  11. boyama ve yıkama adımlarından sonra, ikisi arasında lamelleri içinde beyinleri montaj ve montaj slayt üstüne lamelleri yerleştirin. Beynin her iki taraf da benzer bir sinyal yoğunluğu ile görüntülenebilir böylece bu yolla, beyin numuneleri kolayca saygısız olabilir.
    Not: yerine doğrudan montaj slayt üzerinde bir lamel beyin Montaj serbestçe numunenin yönelim çevirme sağlar. Montaj işlemi, aşağıda daha ayrıntılı bir şekilde açıklanmıştır.
    1. bir montaj slayt üstüne bir 18 x 18 mm'lik bir örtücü cam yerleştirin. Bir bıçak ile bir pipet açılmasını genişletmek ve 18 x 18 mm lamel üzerine 1x PBS çözüm beyinleri aktarmak için kullanabilirsiniz.
    2. anti-solmaya montaj orta 40 uL (% 0.2 (99.5 w / v) n-propil galat - Başka 20, lamel ortasında beynini koyun ince pipet ile beyinleri etrafında sıvı kaldırmak ve sonra da eklemek beyinleri üzerinde% ACS derecesi gliserol).
      Not: orta eklenen montaj miktarı incelendiğinde beyinleri sayısına bağlıdır.
    3. dışa viskoz montaj orta yerinden hafifçe beynini yayıldı. Bu temas edinceye kadar ilk taraftan slayt düşürerek beyin üzerine ikinci bir 18 x 18 mm'lik bir örtücü cam yerleştirinMontaj kayma yüzeyi ve sonra yavaş yavaş hava kabarcıkları ile beyin temasını en aza indirmek için diğer tarafı düşürücü.
      Not: montaj orta hacmi iki lamelleri arasındaki bir ara parçası kullanmak ve beyinleri, iki lamelleri ayırmak için yeterli bir alan sağlamak için hiçbir gerek yoktur.
    4. slaytlar yerleşmek için izin verin. Bir laboratuvar doku ile makbuzları taraftan çıkıp aşırı sıvı çıkarın.
    5. taşıma sırasında montaj slayt düşmesini monte beyinleri ile lamelleri önlemek için, montaj slayt lamelleri eklemek için bant küçük bir parça kullanın.
      Not: Brain monte slaytlar hemen görüntülü veya slaytları mühür herhangi bir dolgu macunu kullanmak için bir gerek olmadan, floresan sinyalinin önemli bir kayıp olmadan en fazla bir hafta boyunca 4 ° C de muhafaza edilebilir arasındadır. lekeli beyinleri uzun vadeli korunması için, iki slip yan w kapalı olabiliri tırnak içinde lehçe ve depolanan -20 ° C derin dondurucuda, lekeli beyinleri zamanla sinyallerini kaybedebilirsiniz rağmen. Bu tavsiye edilmez.
  12. görüntü beyinleri uygun bir bileşik floresan mikroskop veya konfokal mikroskop kullanın.
    1. İlk olarak, hedefe daha yakın beynin yan görüntü elde ve daha sonra dikkatlice ortasında sıkışmış örnekleri var lamelleri çevirin. Bu adım aynı beynin diğer tarafında görüntü elde kolaylaştırır.
    2. (Örnek olarak, bir dik bir bileşik floresan mikroskobu ve görüntü 20X objektif lens tüm beyin (Şekil 2'de örnekler) ve bu Eşleştirilmiş anterior medial (PAM), küme bölgesinde DA nöronlar gibi beyin görüntü küçük bölgeler, bir 40x objektif kullanarak Şekil 3'te).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yukarıda tarif edildiği gibi Şekil 1, yetişkin beyin diseksiyonu için ana prosedürleri gösterir 2 Şekiller ve 3 3 günlük bir WT temsilcisi görüntüler. (Genotip: 1118 w) yetişkin tirozin hidroksilaz karşı bir antikor ile costained edildi beyinleri, sinek (TH Şekil 2'de, kırmızı renkli ve Şekil 3) beyaz bir belirteç, genellikle tüm farklılaşmış nöronların seyahati hücre çekirdekleri ve ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İnsan beyni hastalıkları, nöronal devreleri, ve yüksek beyin fonksiyonlarını incelemek için yetişkin Drosophila beyin kullanarak artan bir ilgi ile, orta serili için özellikle önemlidir tam montaj analizleri, bozulmadan sinek beyinleri elde etmek basit ve hızlı yöntemler geliştirilmesi gerekmektedir beyin temelli ekranlar ölçek. Bizim yöntem basit ve kolay öğrenirler bir sinek kafası dışarı incelemek için bir yaklaşım (genellikle tecrübesi ile en az 10 s) iyi korunmuş morfolojisi ile büyük ölçüde ilişkili dokul...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz projeye büyük destek Sayın Enes Mehmet, Bayan Kiara Andrade, Bayan Pilar Rodriguez, Chris Kwok ve Bayan Danna Mü'min kabul.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
w*;   park ve Delta; 21/TM3,  P{GAL4-Kr.C}DC2,  P{UAS-GFP. S65T}DC10,  Sb1Bloomington Drosophila Stok Merkezi51652Dengeleyici
Harvard Tıp Okulu'ndaTM6B PBac{WH}parkf01950f01950Dengeleyici TM6C
NaClFisher ScientificS640-500
Sodyum Bikarbonat (NaHCO3) Fisher Scientific02-003-990
Potasyum Klorür (KCl)Fisher ScientificBP366-500
Sodyum fosfat, monobazik monohidrat (NaHCO3)Fisher Scientific02-004-198
Magnezyum Klorür (MgCl2)Fisher Scientific02-003-265
D-SorbitolSigma-AldrichS1876-500GGlikoz
Kalsiyum klorür dihidratın yerini alır (CaCl2)Sigma-AldrichC5670-500G
EMD Millipore  Durapore PVDF Membran Filtreleri: Hidrofilik: 0.22 & m Gözenek BoyutuFisher ScientificGVWP14250
Formalin Çözeltisi, %10 (Histolojik)Fisher ScientificSF98-20
Potasyum Fosfat, Dibazik, Toz, Ultra Saf BiyoreaktifFisher Scientific02-003-823
Tween-20Fisher ScientificBP337-500
Excelta Çok İnce Noktalı Hassas CımbızFisher Scientific17-456-055Protokol çok ince puanlar gerektirmez.
Anti-Tirozin Hidroksilaz AntikoruPel-Freez BiyolojiklerP40101
Sıçan-Elav-7E8A10 anti-elavGelişimsel Çalışmalar Hibridoma BankasıKlonu 7E8A10
Keçi anti-sıçan IgG (H + L) İkincil Antikor, Alexa Fluor 647 konjugeThermoFisher ScientificA-21247
Keçi anti-Tavşan IgG (H + L) İkincil Antikor, Alexa Fluor 594 konjugeThermoFisher ScientificA-11037
DAPI Çözeltisi (1 mg / mL)ThermoFisher Scientific62248
Propil gallat tozuSigma-AldrichP3130-100G
Gliserol ACS reaktifi, > %99,5Sigma-AldrichG7893-500ML
Zeiss Axioimager Z1ZeissAlıntı
ZeissAlıntı
Zen lite yazılımıAlıntı
, Exelixis olarak değiştirildi Zeiss Apotome.2

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wangler, M. F., Yamamoto, S., Bellen, H. J. Fruit flies in biomedical research. Genetics. 199, 639-653 (2015).
  2. Bellen, H. J., Yamamoto, S. Morgan's legacy: fruit flies and the functional annotation of conserved genes. Cell. 163, 12-14 (2015).
  3. Aso, Y., et al. The neuronal architecture of the mushroom body provides a logic for associative learning. Elife. 3, 04577(2014).
  4. Reiter, L. T., Potocki, L., Chien, S., Gribskov, M., Bier, E. A systematic analysis of human disease-associated gene sequences in Drosophila melanogaster. Genome Res. 11, 1114-1125 (2001).
  5. Yamagata, N., et al. Distinct dopamine neurons mediate reward signals for short- and long-term memories. Proc Natl Acad Sci U S A. 112, 578-583 (2015).
  6. Nern, A., Pfeiffer, B. D., Rubin, G. M. Optimized tools for multicolor stochastic labeling reveal diverse stereotyped cell arrangements in the fly visual system. Proc Natl Acad Sci U S A. 112, 2967-2976 (2015).
  7. Waddell, S. Neural Plasticity: Dopamine Tunes the Mushroom Body Output Network. Curr Biol. 26, 109-112 (2016).
  8. Wolff, T., Iyer, N. A., Rubin, G. M. Neuroarchitecture and neuroanatomy of the Drosophila central complex: A GAL4-based dissection of protocerebral bridge neurons and circuits. J Comp Neurol. 523, 997-1037 (2015).
  9. Sweeney, S. T., Hidalgo, A., de Belle, J. S., Keshishian, H. Dissection of adult Drosophila brains. Cold Spring Harb Protoc. 2011, 1472-1474 (2011).
  10. Wu, J. S., Luo, L. A protocol for dissecting Drosophila melanogaster brains for live imaging or immunostaining. Nat Protoc. 1, 2110-2115 (2006).
  11. Mao, Z., Davis, R. L. Eight different types of dopaminergic neurons innervate the Drosophila mushroom body neuropil: anatomical and physiological heterogeneity. Front Neural Circuits. 3, 5(2009).
  12. White, K. E., Humphrey, D. M., Hirth, F. The dopaminergic system in the aging brain of Drosophila. Front Neurosci. 4, 205(2010).
  13. Yang, Y., et al. Mitochondrial pathology and muscle and dopaminergic neuron degeneration caused by inactivation of Drosophila Pink1 is rescued by Parkin. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 10793-10798 (2006).
  14. Greene, J. C., et al. Mitochondrial pathology and apoptotic muscle degeneration in Drosophila parkin mutants. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 4078-4083 (2003).
  15. Whitworth, A. J., et al. Increased glutathione S-transferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 8024-8029 (2005).
  16. Pesah, Y., et al. Drosophila parkin mutants have decreased mass and cell size and increased sensitivity to oxygen radical stress. Development. 131, 2183-2194 (2004).
  17. Trinh, K., et al. Decaffeinated coffee and nicotine-free tobacco provide neuroprotection in Drosophila models of Parkinson's disease through an NRF2-dependent mechanism. J Neurosci. 30, 5525-5532 (2010).
  18. Kim, K., Kim, S. H., Kim, J., Kim, H., Yim, J. Glutathione s-transferase omega 1 activity is sufficient to suppress neurodegeneration in a Drosophila model of Parkinson disease. J Biol Chem. 287, 6628-6641 (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Drosophila Brain DissectionWhole Mount PreparationAdult Fly BrainDissection ProtocolBrain Morphology PreservationImmunohistochemistry StainingDopaminergic Neuron AnalysisConfocal Microscopy ImagingParaformaldehyde FixationAnti fade Mounting Medium

İlgili makaleler