Method Article

Nöromüsküler kavşak işlevleri ölçme

DOI:

10.3791/55227

⸱

August 6th, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Mechanical and Aerospace Engineering, Sapienza University of Rome, 2Institute Pasteur Cenci-Bolognetti, DAHFMO-Unit of Histology and Medical Embryology, Sapienza University of Rome, 3Center for Life Nano Science@Sapienza, Istituto Italiano di Tecnologia

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nöromüsküler kavşak (NMJ) işlevsel bir değerlendirilmesi sinir ve kas arasındaki iletişimi ilgili gerekli bilgileri sağlar. Burada biz kapsamlı bir şekilde kullanarak iki farklı kas-sinir hazırlıklar, yani soleus siyatik ve diyafram frenik NMJ ve kas işlevselliğini değerlendirmek için bir protokol tanımlamak.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nöromüsküler kavşak (NMJ) işlevselliği motor nöron ve kas arasındaki iletişimi, yaşlanma ve amyotrofik lateral skleroz (ALS) gibi Engelli olduğu hastalıklar okurken çok önemli bir rol oynar. Burada iki tür elektriksel stimülasyon birleştirerek NMJ işlevselliği ölçmek için kullanılan bir deneysel protokol tarif: doğrudan kas zarı stimülasyon ve stimülasyon sinir aracılığıyla. Bu iki farklı elektrodlar kas cevaben karşılaştırılması işlev düzeyinde fonksiyonel kas düşüş yol olası değişiklikler NMJ içinde tanımlamak için yardımcı olabilir.

Ex vivo hazırlıkları iyi kontrollü çalışmalar için uygundur. Burada tarif biz kas ve NMJ işlevselliği soleus siyatik sinir hazırlık ve diyafram frenik sinir hazırlık birkaç parametrelerini ölçmek için yoğun bir iletişim kuralı. Protokol yaklaşık 60 dakika sürer ve kesintisiz bir ısmarlama aracılığıyla yapılır seğirme Kinetik özellikleri, sinir ve kas elektrodlar için güç frekanslı ilişki ve iki parametre NMJ işlevselliği için belirli Yani neurotransmission yetmezliği ve intratetanic yorgunluk ölçer yazılım. Bu metodoloji hasar soleus ve diyafram kas-sinir hazırlıkları SOD1G93A transgenik fare, ubiquitously mutant antioksidan enzim süperoksit dismutaz 1 (SOD1) overexpresses ALS deneysel bir model kullanarak bulmak için kullanıldı.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nöromüsküler kavşak (NMJ) kas fiber motor endplate ve motor nöron axon terminal arasında bağlantı oluşturduğu bir kimyasal synapse var. Kas ve sinir arasındaki iletişim, yaşlanma veya amyotrofik lateral skleroz (ALS) gerçekleştiği sırada bozulmuş olduğunda çok önemli bir rol oynamaya NMJ gösterilmiştir. Kas ve sinir bir çift yönlü yol1,2' olarak, NMJ kusurları kas defektleri dan ayrı olarak ölçmek için güçlü olmak onların Fizyopatolojik Interplay yeni görüşler sağlayabilir. Gerçekten de, bu işlevsel değerlendirme morfolojik ya da biyokimyasal değişiklikler işlevselliği sinyal neurotransmission azaltmak değerle....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan deneyleri, Roma La Sapienza Üniversitesi-Histoloji ve Tıbbi Embriyoloji Birimi etik kurulu tarafından onaylandı ve İtalyan Hayvanları Koruma Kanunu'nun güncel versiyonuna uygun olarak gerçekleştirildi.

1. Deney kurulumu

  1. 1 adet aktüatör/dönüştürücü, 2 adet stimülatör, 1 adet in-vitro kas aparatı, 1 adet hazırlık doku banyosu, 1 adet aspirasyon elektrodu, 1 adet dijital osiloskop, 1 adet stereomikroskop, 1 adet soğuk ışık aydınlatıcı, 1 adet kayıt kartı, 1 adet konektör bloğu ve bir adet kişisel bilgisayardan oluşan deney sisteminin kurulması.
    NOT: Burada komut yazılımı LabView'da programlanmıştır ve stimü....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz açıklanan protokol fonksiyonel denervation birkaç nöromüsküler hastalıklar veya yaşlanma-mücadele hakkında bilgiler sağlar. Bu iletişim kuralı olup olmadığını (ve eğer öyleyse, hangi düzeyde) belirlemek için kullanılan kas değişiklikler çoğu kas kendisi veya nöromuskuler iletim oluşan seçici değişiklikleri nedeniyle. Aşağıda gösterilen veri amyotrofik lateral skleroz hastalığı20son aşamasında SOD1G93A transgenik fare modeli üzerinde yapılan bizim gru.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yukarıda açıklanan deneysel protokol ölçme ve doğrudan kas veya meydana gelen herhangi bir işlevsel değişiklikler ayrımcılık dolaylı olarak nöromüsküler kavşak düzeyinde ideal bir yol sağlar. Bu teknik NMJ işlevselliği dolaylı bir ölçüm üzerinde dayalı olduğundan, herhangi bir kusur morfolojik değişiklikler veya biyokimyasal değişiklikler ile ilişkili Eğer kurmak için kullanılamaz. Buna karşılık, herhangi bir morfolojik ya da biyokimyasal değişiklikler işlevselliği sinyal neurotransmission azalttı olup olmadığını belirle.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların laboratuvar çalışmalarında Fondazione Roma ve televizyon dizisi tarafından (Hayır ver. desteklenmiştir GGP14066).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Çift Modlu Kol Sistemi Aurora Bilimsel A.Ş.300Baktüatör / dönüştürücü
Yüksek Güçlü İki Fazlı Stimülatör  Aurora Bilimsel A.Ş.701Bnabız stimülatörü (sinir)
Yüksek Güçlü Bi-Fazlı Stimülatör (nbsp;Aurora Bilimsel A.Ş.701Cnabız stimülatörü (kas)
In vitro Kas Aparatı Aurora Bilimsel A.Ş.800A
Hazırlık doku banyosuRadnoti158400
Monopolar Emme ElektroduA-M Sistemleri573000ev yapımı bir referans ile 
Osiloskop TektronixTDS2014
StereomikroskopNikonSMZ 800
Soğuk ışık aydınlatıcı Fotonik OptikPL 3000
Edinme kartıUlusal AletlerNI PCIe-6353
Konektör bloğuUlusal AletlerNI 2110
Kişisel bilgisayarAMD Phenom II x4 970İşlemci 3.50 Ghz Windows 7
LabView 2012 yazılımıUlusal Aletler
Bikarbonat Tampon Sigma-AldrichK4002 fizyolojik tampon
Sodyum bikarbonatSigma-AldrichS5761 
Kalsiyum klorür CaCl2Sigma-AldrichC4901susuz, toz vb; % 97
Tampon HEPESSigma-AldrichH3375& ge; %99,5 (titrasyon)
Bulaşıklar 60mm x 15mmFalcon353004Polistiren
SilikonSylgard 184 Silikon Elastomer Kiti & nbsp; 0.5Kg.
Akvaryumiçin Termostat DennerleDigitalDuomat 1200
PompaNewa MiniMN 606
Isı direnci TermocableŞanslı Sürüngen61403-150 / 60Hz 50W
Kovaherhangi bir 10 litrePolipropilen
O2< / sub> +% 5 CO2siadKarışım gazı
# 5 Forseps Güzel Bilim Aletleri11252-202 parça
Yaylı Makas - 8 mm BıçaklarGüzel Bilim Aletleri15024-10sinir eksizyonu
Keskin Makas Güzel Bilim Araçları 14059-11kas çıkarma
Narin MakasWagner02.06.32hayvanın dışı
Öğrenci Neşter Sapı #3Güzel Bilim Araçları 91003-12 
Neşter Bıçakları #10Güzel Bilim Araçları 10010-00
Neşter Bıçakları #11Güzel Bilim Aletleri 10011-00
naylon tel & Oslash; 0,16 mmherhangi biri
ile Krebs-Ringer

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dadon-Nachum, M., Melamed, E., Offen, D. The "dying-back" phenomenon of motor neurons in ALS. J Mol Neurosci. 43 (3), 470-477 (2011).
  2. Dobrowolny, G., et al. Skeletal Muscle Is a Primary Target of SOD1G93A-Mediated Toxicity. Cell Metab. 8

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Neuromuscular Junction FunctionalityElectrical StimulationEx Vivo PreparationSoleus Sciatic NerveDiaphragm Phrenic NerveForce Frequency RelationshipNeurotransmission FailureIntratetanic FatigueTwitch Kinetics PropertiesSOD1 G93A Mouse

Related Articles