Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Kadın Küçük Kemirgenler Sinir koruyucu Orta üretral Tıkanıklığı (Nemo)

9.3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/55288

⸱

25 Nisan 2017

 ,  ,  , 
1Developmental and Stem Cell Biology, Research Institute, The Hospital for Sick Children, 2Institute of Medical Science, University of Toronto, 3Pediatric Urology, The Hospital for Sick Children, 4Molecular Structure and Function, Research Institute, The Hospital for Sick Children

Bu makalede

Özet

kemirgenlerde kısmi mesane çıkışı tıkanıklığı geleneksel modelleme hayvan ölüm ile doludur. Proksimal üretra ve mesane boynuna diseksiyon A denervasyon yaralanması büyük sorun oluşturmaktadır. Biz geleneksel modelin eksiklikleri kaçınarak, gelişmiş ve güvenli ve güvenilir bir orta üretral tıkanma modelini değerlendirdi.

Özet

Kısmi mesane çıkışı tıkanması (pBOO), oldukça yaygın olarak görülen önemli hasta yükünü ve muazzam sağlık maliyetlerini de beraberinde getirmektedir. pBOO içinde mesane yenileme araştırmak için en yaygın hayvan modeli proksimal üretra kısmi tıkanıklık geçiren kadın kemirgenler. tıkanıklığı ve hayvan ölüm derecesindeki Değişkenlik proksimal tıkanıklığı ile önemli sorunlardır. Ayrıca, proksimal üretra ve mesane boynunda kesme mesane inervasyonu tehlikeye atar.

Biz geleneksel modelin dezavantajları kaçınarak pBOO için sinir koruyucu orta üretral tıkanma (Nemo) model geliştirdi. Biz laparotomi yanı sıra bu alanda nasıl tedavi edilmesi gerektiği obviated pubis eklemi, sadece alt üretra yaklaştı; Ayrıca, çizgili üretral sfinkter bakir kalmıştır. Bu dişi Sprague-Dawley farelerinde (12 engel, 6 sahte hayvanlar) ve aynı zamanda dişi C57 / BL6 fareleri NEMO gerçekleştirildi (20 tıkanıklığıs, 18 sahte hayvanlar). İki hafta sonra, mesane fonksiyonu, mesane kitlesi ve vücut kitle değerlendirdi.

Biz obstructed- veya yapay olarak ameliyat dişi sıçanların arasında hiçbir ölümlerinin vardı; Geleneksel yakın pBOO-yöntemi için tarif edildiği gibi, biz idrar yoluna dikiş bağlı ve bir geçici 0.9 mm delikli metal çubuk yerleştirilir. NEMO iki hafta sonra, mesane kütlesinde% 85'lik bir artışa neden ortalama rezidüel idrar hacmi, sadece 0.03 mL iken plasebo hayvanlarda kısmen tıkanmış sıçanlarda 0.4 ml idi. farelerde, dikiş bağlama biz üretra boyunca yerleştirilmiş kanüller 3 boyutları test edilmiştir. Bir 27-gauge kanül kullanılarak% 50 hayvan üzerinde mortalite sonuçlandığını tespit; artan mesane kütlesinde istenen yanıtı sağlamak değil, 25-gauge bir kanül yerleştirilmesi; 26 numara bir kanül kullanılarak en az bir hayvan ölüm (1/8) henüz mesane kitlesinde önemli bir 2-kat bir artış ile olumlu sonuçlar vermiştir.

Giriş

Kısmi mesane çıkışı tıkanması (pBOO) yüksek oranda bulunur ve şiddetli mesane fonksiyon bozukluğu 1 neden olabilir; tayfı, iyi huylu prostat hiperplazisi için alınan üretral striktür fazla posterior üretral valfleri veya hipospadyas gibi konjenital malformasyonlar, arasında değişmektedir. Erkekler altmış yıldan fazla% 30 ve 2 eski etkileyen ikincisi. Büyük hasta yükü ve pBOO taşıdığı büyük sağlık masrafları artan dış akış direnci 3 cevaben okuyan mesane yeniden koymak önemli araştırma çaba garanti. 2006 yılından itibaren 2015 yılına kadar 220 üzerinde PubMed makaleleri idrar kesesi üzerinde pBOO etkisiyle ilgili yayımlandı endekslendi.

PBOO için hayvan modelleri, örneğin sıçan 5, tavşan 6, domuz 7 ve Mous gibi çeşitli türler 4 üzere tasarımlanmış olmakla berabere 8, 9, ancak proksimal üretra kısmi engelleme uygulanan dişi fareler burada en yaygın olarak kullanılan bir hayvan modelidir; Mesane boynuna hayvanların karın erişim, mesanenin exteriorizing ve diseksiyon bu geleneksel proksimal üretral tıkanıklığı tekniği ile kaçınılmazdır. Tıkanıklığı ve hayvan ölüm derecesinde değişkenlik sadece 11 Bu prosedür 10 ile ilişkili endişelerden bazılarını; Biz sahte ameliyat hayvanlarda, idrar yoluna diseksiyon mesane boynu 12, sinir liflerinin kaybı ile ilişkili fizyolojik değişikliklere neden olduğunu göstermiştir. Bu bulgu, bir kadın kemirgenlerde yakın üretra erişmek kapsar en yaygın olarak kullanılan pBOO hayvan modeli, etki, mesane bağlantılı bir yapısal ve işlevsel değişiklikler ile denervasyon hasara yol açtığını, göstermektedirsahte ve tıkalı hayvanlar. Bu nedenle, alternatif bir yaklaşım kaçınarak denervasyon yaralanması ihtiyaç vardı. Bizim laboratuvar geliştirilmiş ve sham ameliyat edilen hayvanlar ameliyat edilmemiş kontrol hayvanları ayırt iken, bu, organ kütlesini ve rezidüel idrar artış olarak mesanede beklenen tıkanıklığı ile uyumlu değişiklikler indüklenmesinde etkili olan bir sinir-koruyucu Orta üretral tıkanıklık (NEMO) yaklaşımı değerlendirildi . Bu diseksiyon seviyesine yakınlığında uzandığına olarak da, çizgili üretral sfinkter bakir kalmıştır. Bundan başka, mesane kütlesi içinde tıkanma ile uyarılmış değişkenlik geleneksel Üretra tıkanıklığında önemli ölçüde daha düşük olduğu ve hayvan ölüm olmamıştır.

Bugüne kadar tarif edilmiş fareler için tüm pBOO modelleri 50 yaklaşık% mortalite ile ilişkili ise de başarılı bir tıkanmış hayvanlarda% 10'dan az mortalite ile dişi farelerde NEMO uygulanır. Farelerde pBOO bağlamında mesane yenileme incelenmesi applicabil yararlanacaktırTransgenik modifikasyonların bütün spektrum üretebilir.

Kadın kemirgenlerde orta idrar yoluna Kesme geleneksel yakın obstrüksiyon modelinde gözlenen idrar kesesi, istenmeyen ve karıştırıcı yapısal veya fonksiyonel değişiklikler indüklemez. Bununla birlikte, orta üretral düzeyinde bir kısmi engelleme indükleyici hala mesane hipertrofi indükler ve pBOO için bir hayvan modeli beklendiği gibi, artık idrar artmıştır. Önemli olarak, farelerde NEMO performans büyük kemirgenlerde neredeyse kullanılamaz transgenik yöntemlere pBOO mesane biçimlenme soruşturma açar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Aşağıdaki deneysel protokol kurumun hayvan bakımı komitesi tarafından onaylandı.

Dişi sıçanlarda 1. NEMO

  1. Hazırlık
    1. Yaklaşık 200 g 3 altında% izofluran anestezisi ağırlığında dişi Sprague-Dawley sıçan yerleştirin hayvan tartmak ve tıraş ve bir iyot cerrahi yıkama kullanılarak prepubik parkı 3 kez dezenfekte.
    2. aşağı bir ısıtma yastığı, şerit arka bacak ve kuyruk üzerinde ve ayrıca yumuşak, kaymasını önlemek üzere aşağı bantlanmış 20-gauge anjiyokateterinden ile mesaneye kateter.
  2. teşrih
    1. üretra deliğine doğru aşikar pubis eklemi bir 8 mm uzunlamasına bir deri yarığı gerçekleştirmek için bir neşter kullanarak. Daha sonra yara kapanmasını kolaylaştırmak için her iki tarafta derisini kaldırın.
    2. uzunlamasına ince makasla yayarak stentli üretra tanımlamak için açık açık teşrih. Açıklığı artırmak için ince kendini tutan deri kancaları yerleştirinüretra.
    3. Gerçekleştirmek bazı yumuşak uzunlamasına üretra ve vajina arasında düzlemi geliştirmek için kavisli bir makas üretraya dorsal kullanarak yayılma. Sonra, açık açık üretra arkasında 4-0 ipek sütür geçmek ve bir cerrahın düğüm çift atış hazırlayın.
  3. Kısmi üretral tıkanıklığı
    1. , Angiocatheter kaldırma üretra 0.9 mm'lik bir metal çubuk paralel yerleştirin ve ikinci hala kolayca sonra kayarak ve böylece daha sonra, üretra ve metal çubuk çevresinde bir düğüm sıkın.
    2. 3 daha çubuk çıkarmadan önce nazik gerginliği kullanarak atış ile düğüm sabitleyin. sütür uzun yaklaşık 3 mm veya tıkanıklık sonradan serbest bırakma deney parçası ise 4 mm biter kesin.
  4. Yara kapatma
    1. emilebilen örgülü sütür 4-0 gömülü tek dikişle paraüretral bezleri yaklaşmaktadır.
    2. Aynı emilebilen SUT kullanarak gömülü yatay yatak dikiş ile cilt kapatınobilyaları. Not: Bir cilt-delici dikiş için emilebilir dikiş kullanmak alışılmamış görünse de, bu tür yara enfeksiyonları gibi komplikasyonlar karşılaşmak yoktu ve bu dikiş alınması önlenebilir.
  5. bakım sonrası
    1. Enjekte buprenorfin 0.1 mg / kg deri altından, bir kurtarma kafeste sıçan yerleştirmeden önce.
    2. Tek Housed fareye ilk 24 saat bazı yumuşak kurtarma diyet sunun. Bu süre geçtikten sonra, prosedür önce olduğu gibi aynı ikili tekrar ev hayvanların daha iyi olması ve aynı bakım grubuna aittir sağladı.
    3. mesane büyüklüğü ve genel iyi sağlık için günlük sıçanlar kontrol; en azından haftada kendi ağırlığı kaydedin.

Kadın Farelerde 2. NEMO

  1. Hazırlık
    1. yaklaşık 18 g ağırlığında dişi C57BL / 6 fare ve aşama 1.1.1 detaylı devam edin.
    2. 24 ayar ang kullanmak dışında adım 1.1.2 deki gibi detaylı Devamiocatheter.
  2. teşrih
    1. üretra deliğine doğru aşikar pubis eklemi 6 mm uzunlamasına cilt insizyonu gerçekleştirmek için bir neşter kullanarak.
    2. uzunlamasına ince makasla yayarak stentli üretra tanımlamak için açık açık teşrih. benzer künt diseksiyon ile üretra üzerinde ventral çalışan nöro-vasküler demet kaldırın.
    3. Gerçekleştirmek bazı yumuşak uzunlamasına üretra ve vajina arasında düzlemi geliştirmek için kavisli bir makas üretraya dorsal kullanarak yayılma. Sonra, açık açık üretra arkasında 5-0 emilemeyen örgülü sütür geçmek ve bir cerrahın düğüm çift atış hazırlayın.
  3. Kısmi üretral tıkanıklığı
    1. 1 ml şırınga ile angiocatheter bağlayın ve mesane içine, normal tuzlu su, 0.1 mL enjekte edilir.
    2. üretraya 26 numara bir kanül paralel yerleştirin. angioca geri çekerken yavaşça üretra ve kanül etrafında düğüm sıkıninci.
    3. 3 daha kanül çıkarmadan önce nazik gerginliği kullanarak atış ile düğüm sabitleyin.
    4. hayvanın mesane hafif basınç uygulanması üzerine meatusta görünen idrar için test; idrar ifade edemeyen eğer kravat gevşetin. Aksi takdirde, ameliyat dikiş ipliği, yaklaşık 3 mm long uçları kesilmiş.
  4. Yara kapatma
    1. 5-0 örgülü emilebilir sütür kullanarak gömülü yatay yatak dikiş ile cilt kapatın.
  5. bakım sonrası
    1. Kurtarma kafes içinde fare yerleştirmeden önce 0.1 mg / kg deri altından buprenorfın enjekte edilir.
    2. Tek Housed fareye ilk 48 saat bazı yumuşak kurtarma diyet sunun. Bu dönemden sonra, işlem öncesi aynı grupta yine ev hayvanları onlar iyi yapıyor ve aynı tedavi grubuna ait koşuluyla.
      NOT: Aşırı engellendiği ele zaman geçersiz yoktur ve n içinde ölecektir işlemden sonra ele gelen şişmiş mesane 24 saat ile Farelerengelleyici ligature çıkarılması için anestezi altında geri alınmıştır 2 gün sürece 1 - dahili.
    3. mesane büyüklüğü ve genel iyi sağlık için günlük fareler kontrol; en azından haftada kendi ağırlığı kaydedin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Dişi sıçanlarda sinir-koruyucu Orta üretral tıkanması (NEMO)

ölümlülük

Şu ana kadar 40'ın üzerinde dişi fareler üzerinde bir orta üretral tıkanma gerçekleştirilen ve hiçbir ölümlerinin vardı.

mesane kütlesi

tı...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Hayvan ölümleri Birçok raporda 10, 11, 13% 15 veya daha fazlasında proksimal üretra de pBOO geleneksel modelin önemli sorunlardan biridir. NEMO dişi sıçanlarda uygulandığında çok az ölüm oranı gibi görünmektedir. Farelerde proksimal üretral tıkanma teknik olarak daha zor sıçanlarda daha ve böylece daha meyilli komplikasyonlar etmektir. Bizim orta üretral yaklaşım için yer tutucu olarak 26 numara bir kanül kulla...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Çalışma bir CHIR işletme hibesi (DJB) tarafından finanse edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Dişi sıçan Charles-River KanadaSprague Dawley Sıçan (Crl:SD); Suş Kodu: 400yaklaşık 200 g
İzofloran buharlaştırıcıBenson medikal sanayi a.ş.TEC III İzofluran; Ürün Kodu: 53-T3ISO 
IsofloraneFresenius Kabi Hayvan SağlığıIsoflorane; Ürün Kodu CP0406V2  250 mL şişe
Tek kullanımlık neşterTed Pella, Inc.#15 Steril, Paslanmaz Çelik Neşterler; katalog numarası 549-9-15S Mikroskopi
forsepsTed Pella, Inc.Aesculap Mikroskopi Forseps, Finepoint, 115mm; Ürün Kodu 5443
Adson forsepsTed Pella, Inc.Aesculap Adson Diseksiyon Forseps, Kavisli, 120mm; Ürün Kodu 5002-9
Kavisli cerrahi makasTed Pella, Inc.Cerrahi makas, Kavisli, S/S, 105mm; katalog numarası 1376
0.9 mm inox metal çubukgoodfellow.comPaslanmaz Çelik - AISI 316L Tel Çapı: 0.9mm; Sipariş Kodu 911-684-65
Cilt kancaları - kendinden inox çelikten yapılmıştırgoodfellow.comPaslanmaz Çelik - AISI 316L Tel Çapı: 0.9mm; Sipariş Kodu 911-684-65
4-0 İpek sütüresutures.com4-0 Sofsilk siyah 98" tel; ürün numarası: LS640
5-0 Vicry sütüresutures.com5-0 Vicryl boyasız 27" RB-1 konik; ürün numarası: J213H
İğne tutucuMedsupplier.comIntegra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner İğne Tutucu - 5 1/2"; Ürün Kodu SKU NEE4484-8-40TC
SKU NEE4484-8-40TC
SKU NEE4484-8-40TC 
Temgesic (Buprenorfin)ilk veteriner malzemesiBuprenex 0.3MG / ml inj amper; ürün #075701
27 G iğneli 1 mL şırıngaFisher ScientificBD  Tüberkülin Şırıngası, BD 309623
20 G AngiocathFisher ScientificAndwin Scientific  ANGIOCATH 20 GA; Katalog No.
İyileşme diyeticlearh2oDietGel 31M; 72-08-5022
C57Bl/6 dişi farelerCharles-River CanadaC57BL/6 Fare (C57BL/6NCrI); Suş Kodu: 027yaklaşık 18 g
24 G anjiyokathFisher ScientificHanna İlaç Tedarik A.Ş. IV CATH ANJIYOKAT 24GX3/4IN; Katalog No.
5-0 Ethibondesutures.com5-0 Ethibond yeşili 30" RB-1 konik; ürün numarası: X550H
26 G şırınga iğnesiSigma-AldrichBD Precisionglide şırınga iğnesi, Ölçer 26; z192392
Normal TuzluBaxter% 0.9 Sodyum Klorür Enjeksiyonu, USP, 100 mL MİNİ ÇANTA; ürün kodu 2B0043
NC9561906NC9814340

Kaynaklar

  1. Andersson, K. E. Storage and voiding symptoms: pathophysiologic aspects. Urology. 62 (5), 3-10 (2003).
  2. Boyle, P., et al. The prevalence of lower urinary tract symptoms in men and women in four centres. The UrEpik study. BJU Int. 92 (4), 409-414 (2003).
  3. Coyne, K. S., Wein, A., Nicholson, S., Kvasz, M., Chen, C. I., Milsom, I. Economic burden of urgency urinary incontinence in the United States: a systematic review. J Manag Care Pharm. 20 (2), 130-140 (2014).
  4. Buttyan, R., Chen, M. W., Levin, R. M. Animal models of bladder outlet obstruction and molecular insights into the basis for the development of bladder dysfunction. Eur. Urol. 32 (Suppl 1), 32-39 (1997).
  5. Mattiasson, A., Uvelius, B. Changes in contractile properties in hypertrophic rat urinary bladder. J Urol. 128 (6), 1340-1342 (1982).
  6. Chang, S., et al. Alteration of the PKC-mediated signaling pathway for smooth muscle contraction in obstruction-induced hypertrophy of the urinary bladder. Lab Invest. 89 (7), 823-832 (2009).
  7. Moore, J. A., Brading, A. F. A porcine model of bladder outlet obstruction incorporating radio-telemetered cystometry. BJU Int. 100 (5), 1192-1193 (2007).
  8. Beamon, C. R., Mazar, C., Salkini, M. W., Phull, H. S., Comiter, C. V. The effect of sildenafil citrate on bladder outlet obstruction: a mouse model. BJU Inte. 104 (2), 252-256 (2009).
  9. Pandita, R. K., Fujiwara, M., Alm, P., Andersson, K. E. Cystometric evaluation of bladder function in non-anesthetized mice with and without bladder outlet obstruction. J Urol. 164 (4), 1385-1389 (2000).
  10. Kang, Y. J., et al. Early Sequential Changes in Bladder Function after Partial Bladder Outlet Obstruction in Awake Sprague-Dawley Rats: Focus on the Decompensated Bladder. Korean J Urol. 52 (12), 835-837 (2011).
  11. Schroeder, A., et al. Protective effect of an oral endothelin converting enzyme inhibitor on rat detrusor function after outlet obstruction. J Urol. 172 (3), 1171-1174 (2004).
  12. Sidler, M., Aitken, K., Jiang, J., Bijos, D., Bägli, D. "sometimes a sham is just a sham" - why the rodent model of partial bladder outlet obstruction needs adjustment. J Urol. 195 (4), e379(2016).
  13. Jin, L. H., et al. Persistent detrusor overactivity in rats after relief of partial urethral obstruction. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 301 (4), R896-R904 (2011).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Kısmi Mesane Çıkış TıkanıklığıDişi Kemirgen ModeliMesane Çıkış İnnervasyonuÜretral Kanül YerleştirmeMesane Kütlesinde ArtışRezidüel İdrar HacmiSprague-Dawley SıçanlarC57BL/6 FarelerCerrahi Teknik
Kadın Küçük Kemirgenler Sinir koruyucu Orta üretral Tıkanıklığı (Nemo)
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.