Yöntem makalesi

Hipokampal disfonksiyon Fetal alkol spektrum bozuklukları, fare modeli değerlendirmek için izleme Eyeblink Klasik koşullanma kullanımı

9.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/55350

⸱

5 Ağustos 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Psychology, East Carolina University, 2Multidisciplinary Studies Program in Neuroscience, East Carolina University

Bu makalede

Özet

Değerlendirmek için kullanılan izleme eyeblink Klasik koşullanma (ECC) bağımlı Hipokampal ilişkisel öğrenme edildi yetişkin Sıçanlarda yönetilen yüksek yoğunlukta (% 11,9 v/v) alkol erken neonatal beyin gelişimi sırasında. Genel olarak beyin işlev bozukluğu birçok psikolojik ve Biyomedikal ayarlarını algılamak için ses tanılama araçları ECC işlemlerdir.

Özet

Yenidoğan fareler yönetilen etil alkol (% 11,9 v/v) nispeten yüksek bir konsantrasyon postnatal gün 4-9, insanlarda Üçüncü trimesterde oluşan beyin değişiklikleri ne zaman fetal beyin hızlı örgütsel değişim uğrar ve benzer bir zaman hızlandırılmış. Fetal alkol spektrum bozuklukları (FASDs) bu modelin ciddi beyin hasarı, miktarı ve desen tıkınırcasına içme bazı hamile alkollü anneler içinde oluşan taklit üretir. İzleme eyeblink Klasik koşullanma (ECC), ilişkisel öğrenme genellikle alkol maruz yetişkin yavru görülür uzun vadeli Hipokampal disfonksiyon değerlendirmek için Yüksek mertebeden türevi nasıl kullanılacağını açıklar. Yaş 90 gün, kemirgen cerrahi olarak kayıt ile hazırlanmıştır ve electromyographic (EMG) ölçülen uyarıcı elektrotlar, sol göz kapağı kası aktivitesinden göz kırpma ve hafif şokta sol göz için posterior sırasıyla teslim. 5 gün kurtarma süre sonra onlar izleme ilişkisel öğrenme farklılıkları alkol maruz kalan ve fareler kontrol belirlemek için ECC 6 seans uygulandı. ECC aynı donanım ve yazılım, kullanılarak kolayca değiştirilebilir, böylece farklı sinir sistemleri tespit edilebilir birçok olası ECC yordamlardan birini izidir. ECC yordamları genel olarak, farklı beyin sistemleri ve beyin hakaret farklı koşullarda sinir patoloji tespit için tanılama araçları olarak kullanılabilir.

Giriş

Günümüzde, sağlık hizmetlerinin ve bu hizmetlere erişimin iyileşmiş olmasına rağmen, alkol kötüye kullanımının küresel bir sağlık sorunu olmaya devam ettiğini hayal etmek oldukça zordur. Ne yazık ki, yüksek miktarda alkol tüketen hamile bir annenin, fetal alkol sendromundan (FAS) etkilenenlerde belirgin olduğu üzere, ömür boyu süren ağır beyin hasarı ve nörogelişimsel bozuklukları olan bir çocuğa sahip olabileceği gösterilmiştir1,2,3. Anne tarafından alkol kullanımı öyküsü doğrulanmış kadınlarda, gelişmekte olan fetüs, kan alkol konsantrasyonlarında farklı farklılıklar yaratan az miktardaki alkole veya farklı alkol tüketim modellerine karşı da hassastır. Bu ikinci durumda, çocuklar FAS'lılar kadar ağır morfolojik veya nörodavranışsal bozulmalar sergilemeyebilirler, ancak yine de hafiften ağıra kadar değişen ömür boyu süren bilişsel yetersizlikler ve duygusal bozukluklar gösterebilirler3,4. Topluca FAS ve prenatal alkol kaynaklı bozulmaların daha hafif formları, fetal alkol spektrum bozuklukları (FASDler) koleksiyonunu oluşturur. FASDlerin tamamen önlenebilir olması şaşırtıcı değildir, ancak şaşırtıcı bir şekilde, alkol kötüye kullanımının oldukça yaygın olduğu popülasyonlarda, bunların nöral ve bilişsel yetersizliğin birincil non-genetik nedeni olmaya devam ettiği ve ABD'deki genç çocukların yaklaşık %2 ila %5'ini ve Fransa ile İsveç gibi Avrupa ülkelerindekileri etkilediği tahmin edilmektedir. Yalnızca ABD'deki FAS insidansı ile ilgili olarak, yaygınlık 1.000 canlı doğum başına 2 ila 7'dir5; bu da FASDlerin genel insidansının FAS'tan çok daha yüksek olduğunu göstermektedir.

FASD'li çocuklarda yürütülen nörogörüntüleme çalışmaları; daha ince corpus callosum6, daha küçük anterior serebellar vermis7 ve daha küçük hipokampus8 gibi beyin anomalileri sergilediklerini göstermiştir. Bu beyin anomalileri, FASD'li çocuklarda gözlemlenen bazı uzun süreli nörobilişsel bozulmaların temelini oluşturur. Maternal alkol kaynaklı beyin değişikliklerindeki varyasyonlar ile belirli nörobilişsel bozuklukların profilindeki (yani tür ve kapsamındaki) varyasyonlar arasındaki kesin bağlantılar henüz net bir şekilde belirlenmemiştir. Ancak bir başlangıç noktası olarak hipokampus, prenatal alkol etkilerine karşı duyarlılığının belirlenmesi için mükemmel bir adaydır. Nitekim FASD'li çocuklar; yer öğrenimi9,10 ve gecikmeli nesne hatırlama11 gibi hipokampus aracılı davranışlarda eksiklikler göstermektedirler.

FASD kemirgen modellerinin, FASD'li çocuklarda görülen nörobilişsel bozulmalara yol açan mekanizmaların aydınlatılmasında paha biçilemez olduğu kanıtlanmıştır. Benimsediğimiz ve iyi yapılandırılmış bir binge-maruziyet modeli, sıçanlara postnatal 4-9. günler arasında alkol verilmesini içermektedir.12,13beynin, insan fetal 24. haftasına benzer şekilde hızlı sinaps ve dendritik temas oluşumuna uğradığı ve 3. haftaya kadar uzanan bir dönemSıkıntıya girdiğinde veya stres altındayken, vücut kortizol hormonu salgılar. Kortizol, "stres hormonu" olarak bilinir ve vücudun stresle başa çıkmasına yardımcı olur. Ancak, kortizol seviyelerinin uzun süre yüksek kalması, bağışıklık sisteminin zayıflamasına, uyku bozukluklarına ve kilo artışına yol açabilir. Kortizol seviyelerini dengelemek için düzenli egzersiz yapmak, sağlıklı beslenmek ve stres yönetimi tekniklerini uygulamak önemlidir. trimester14,15,16,17Bu özel model, hipokampal nöronlarda belirgin kayba yol açar.18,19 ve serebellum gibi diğer birçok beyin bölgesindeki nöronlar12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23ve farklı alanlara yayılan ciddi bilişsel fonksiyon bozuklukları ile birlikte seyreden21,24,25Sıçanlarda erken dönem alkol maruziyetine bağlı bilişsel bozulma, özellikle şu yöntemlerle olmak üzere, farklı yollarla değerlendirilebilir: göz kırpma klasik koşullanması (ECC). ECC, öğrenmenin temel dayanağını bilimsel olarak araştırmak için bir yüzyıldan fazla süredir kullanılan bir paradigmadır26,27 ve bu haliyle, fetal alkol maruziyetinden kaynaklanan olumsuz nörokognitif sonuçların daha iyi anlaşılması için yararlı bir yöntem sunmaktadır. Araştırmacıların çeşitli farklı ECC prosedürlerini kullanmalarına olanak tanıyan oldukça esnek bir paradigmadır; bu prosedürlerin her biri, filogenetik ölçekte yükselen birçok memeli türünde (farelerden insanlara kadar) ve beyin gelişiminin farklı süreçlerinde incelenebilir.28,29,30,31Ayrıca, bu paradigmada çağrışımsal öğrenmeyi yöneten temel nöral devreler, aynı türlerdeki deneysel ve nöropsikolojik raporlar tarafından desteklenmektedir.26,32,33,34,35,36,37.

ECC'nin bir formu olan iz ECC, bu makalede gösterilmektedir (Şekil 1). Bağlam sağlamak amacıyla, daha geleneksel bir form olan gecikmeli ECC ile karşılaştırılmıştır. ECC paradigması, Nobel ödüllü fizyolog Ivan Pavlov tarafından ilk kez köpeklerle gerçekleştirilen klasik koşullanma model alınarak oluşturulmuştur. Pavlov, tonlar gibi belirli uyaranların doğal olarak salyalanmayı tetiklemediğini, ancak yiyecek verilmesinden önce geldiğinde ve bununla örtüştüğünde, bu ton-yiyecek birlikteliğinin korunduğu varsayımıyla, ikisinin tekrarlanan sunumlarıyla salya yanıtının güçlendirilebileceğini keşfetmiştir. Bu, ilişkisel gücün iki uyaran arasındaki anlık zamansal yakınlıkla aracılık edildiği ve böylece öğrenme koşullarının hayvan için optimize edildiği gecikmeli ECC'ye bir örnektir. Pavlov ayrıca, tonu kapatıp yiyecek verilmeden önce bir "iz" süresi bırakmak gibi ton-yiyecek birlikteliğinin diğer varyasyonlarını da test etmiştir. Bu iki uyaran yeterince ayrıksı olduğunda, köpeklerin yiyecek verilmeden önce salyalanma yanıtları vermesi çok daha zor hale gelmiştir. Tonun kapatılması ile yiyeceğin verilmesi arasındaki bu ayrıksıklık, iz ECC'ye bir örnektir. Kemirgenler yiyeceğin varlığına doğal olarak salyalanmadıkları için, bunun yerine hafif şok gibi türe daha uygun uyaranlar kullanılır; ayrıca tonlara karşı doğal olarak savunmacı göz kırpma yanıtları vermezler. Bu arka planla, kemirgen ECC prosedürleri, belirli bir desibel seviyesinde bir ton sunmayı ve göz kırpma yanıtını tetiklemek için bunu göz kapağı kasıyla (orbicularis oculi) veya temporalis kasıyla belirli bir şekilde hafif şokla eşleştirmeyi içerir. Ton, koşullu uyaran (CS) olarak kabul edilirken, şok koşulsuz uyaran (US) olarak kabul edilir. Gecikmeli ECC'de, önce CS sunulur; bu uyaran belirli bir süre boyunca açık kalır. Ardından US verilir. Bu iki uyaran belirli bir süre boyunca örtüşür ve ardından her ikisi de eş zamanlı olarak sona erer; US nedeniyle verilen sonuç göz kırpma yanıtı, koşulsuz yanıt (UR) olarak kabul edilir. Bu prosedürde kemirgenler, bu itici uyaranı öngörmek için CS sunulduktan bir süre sonra ancak US'den hemen önce göz kırpma yanıtları vermeyi öğrenirler. Öğrenilen göz kırpma yanıtı, koşullu yanıt (CR) olarak adlandırılır. İz ECC'de, CS ve US, iz aralığı olarak bilinen ve uyaranların olmadığı bir zaman dilimiyle ayrılır; gecikmeli ECC'de olduğu gibi zaman içinde örtüşmezler. Bu aralıkta hayvan, uyaranlar arasındaki ilişkisel gereksinimleri çözmekle görevlidir. Gecikmeli ECC'ye benzer şekilde, hayvan CS kapandıktan sonra ancak US verilmeden hemen önce tutarlı bir şekilde kırpma yanıtı verdiğinde öğrenme gerçekleşir. Belirli bir miktar edinim eğitimiyle (CS'nin US ile eşleştirilmesi), öğrenme eğrileri (yani, farklı CR ölçümlerine dayalı olarak) gelişir. Lezyon ve nörogörüntüleme çalışmaları, gecikmeli ECC'de başarılı öğrenmenin sağlam serebeller-beyin sapı nöro-devrelerine bağlı olduğunu38,39,40 gösterirken; iz ECC'nin, hipokampustan41,42,43,44 ve diğer kortikal yapılardan45,46 ek nöral katılım gerektiren daha üst düzey bir prosedür olduğunu ortaya koymaktadır. İz CR'lerini başarıyla edinmek için gereken zamanlamayla ilgili gereksinimler nedeniyle, bu görevin öğrenilmesi (normal denekler için bile) daha zordur.

Klasik koşullanma grafiği; voltaj vs. zaman; ton, şok ve adaptif yanıt aralıklarını göstermektedir.
Şekil 1: İz bırakan göz kırpma klasik koşullanması. Tüpsüz kontrol (UC) grubundaki yetişkin bir sıçanı temsil eden gerçek bir dalga formu gösterilmiştir. İlk olarak ton CS (85 dB, 2.8 kHz) 380 ms boyunca sunulur. Ardından, herhangi bir stimulusun bulunmadığı 500 ms'lik bir iz aralığı gerçekleşir. Sonrasında 100 ms boyunca bir şok US (1.6 mA) verilir. Bu görevde başarılı öğrenme, koşullu yanıt (CR) zaman penceresindeki (Toplam CR dönemi) göz kırpmaların frekansının (%) veya genliğinin (volt cinsinden) birçok eğitim oturumu boyunca artmasıyla gerçekleşir. Özellikle, sağlam bir hipokampüse sahip kemirgenler genellikle şok US başlangıcından hemen önce (200-ms'lik bir pencere içinde) daha iyi zamanlanmış CR'ler (Adaptif CR'ler) verirler. Ton CS başlangıcından sonraki ilk 80 ms sırasındaki irkilme yanıtları (SR'ler) ve koşulmamış yanıtlar (UR'ler) da ölçülür. İyi eğitilmiş kemirgenlerde non-asosyatif SR'ler genellikle düşük veya mevcut değildir, UR'lerin ise frekans ve genlik açısından yüksek olması beklenir. Bu görev, kemirgenin CS bitişi ile US başlangıcı arasındaki ilişkiyi (iz aralığı sırasında) köprülemeyi öğrenmesini gerektirir, bu nedenle gecikmeli ECC'ye kıyasla edinilmesi doğası gereği daha zordur. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Burada, 380 ms boyunca süren 85 dB'lik bir ton koşullandırıcı uyaranın (CS) (2.8 kHz), ardından 500 ms'lik bir izleme süresi ve ardından 100 ms boyunca süren 1.6 mA'lik bir şok koşulsuz uyaranın (US) uygulandığı bir izlemeli (trace) ECC prosedürü ile değerlendirilen, binge tarzı uygulanan neonatal alkol maruziyetinin olumsuz fonksiyonel sonuçlarını gösteriyoruz. Neonatal alkol maruziyetinin etkilerini azaltmada kolin müdahalesi ve demir takviyesini inceleyen önceki çalışmalarda, bu davranışsal analiz yönteminin faydasını rapor etmiştik18,47. Nitekim, izlemeli ECC, neonatal alkol kaynaklı hipokampal patolojiyi değerlendirmek için bir tanı aracı olarak kullanılabilir. Gecikmeli (delay) ECC'ye göre avantajı, FASD'li insanlarda bozulan hipokampal fonksiyonlardaki bozulmaları tespit etmede daha hassas olmasıdır.

ECC'nin gösterimi, fetal alkol alanının çok ötesine uzanmaktadır. ECC'nin birçok varyantı (örneğin, geciktirme, izleme, bileşik, tersine çevirme), gelişim boyunca öğrenmedeki ontogenetik farklılıkları, normal memelilerde çağrışımlı öğrenmenin nörobiyolojik temelini ve ayrıca farklı beyin sistemlerinin teratojenler, çevresel toksinler, travmatik beyin hasarı, nörodejeneratif hastalıklar ve psikiyatrik durumlar dahil (ancak bunlarla sınırlı olmamak üzere) birçok zorluğa karşı hassasiyetlerini açıklığa kavuşturmak için kullanılabilir.

Protokol

NOT: Tüm prosedürler East Carolina Üniversitesi IACUC tarafından belirlenen politikalar uyarınca onaylanmış ve gerçekleştirilmiştir. Long-Evans sıçanlar, erkek damızlıklarla çiftleştirilen dişilerden elde edilmiştir. Üç tedavi grubuna (bkz. 1.1) ait yavrular, aynı anneden gelen bir batında üretilmiştir. Beş batın oluşturulmuş ve her batın doğum sonrası 3. günde (PD 3) 8 yavruya düşürülmüştür. Her batından kalan iki yavru, farklı deneylere atanmıştır. Çalışmaya hem erkek hem de dişi yavrular (her maruziyet grubu için birer tane) dahil edilmiştir. Bu çalışmada toplam N = 27 yetişkin yavru incelenmiştir; ECC eğitiminin 1. gününde onarılamayan kopuk 3T tel bağlantıları (bkz. 3.1.1) nedeniyle 3 sıçan çalışma dışı bırakılmıştır.

1. Grupların, Materyallerin ve Solüsyonların Hazırlanması

  1. PD 3'te, yavruları anneden ayırın ve sıcak tutmak için termo-regüle bir su ısıtma pedi üzerine yerleştirin. Sıçan yavrularını üç gruptan birine yerleştirmek için rastgele bir seçim prosedürü kullanın: (1) alkol-intübe (AI); (2) sham-intübe kontrol (SI); veya (3) intübe edilmemiş kontrol (UC). Bir numaralandırma şemasına uygun olarak, 30G x 1/2 in iğne ile patilerine [toksik olmayan] mürekkep dövmesi yapmak gibi onaylanmış tanımlama prosedürlerini uygulayın. Dövmeler bittiğinde yavruları anneye geri döndürün.
  2. Polietilen (PE) boyut 50 ve 10 kullanarak intragastrik intübasyon tüpü/tüpleri hazırlayın. Bu tüpün toplam uzunluğu kullanıcıya bağlıdır ve buna göre ayarlanabilir.
    1. 3 in uzunluğunda bir PE-50 tüp parçası ve 6 in uzunluğunda bir PE-10 tüp parçası kesmek için mikro disseksiyon makası kullanın.
    2. PE-50 tüpünü steril bir 22 G x 1 in hipodermik iğneye dikkatlice takın.
    3. PE-10 tüpünün bir ucunu PE-50 tüpünün açık ucuna yerleştirin. PE-10 tüpünü PE-50 tüpünün içine yönlendirmek için PE-10 tüpünün ucunda diyagonal bir kesik gerekebilir.
    4. Küçük bir PE-50 tüp parçası (yaklaşık 2-3 mm) kesin ve bunu PE-10 tüpünün açık ucuna yerleştirin. Bu, görsel bir durdurucu görevi görecektir.
    5. Tamamlanmış intragastrik intübasyon tüpünü steril tutmak için taze %70 izopropil alkol içinde saklayın.
  3. 50 mL'lik şişelerde stok süt solüsyonu hazırlamak için aseptik prosedürleri uygulayın. Stok süt solüsyonu, ilk olarak West ve ark. (1984)48 tarafından oluşturulan bir diyet formülüne dayanmaktadır. Şişeleri kullanım zamanına kadar -18 °C'de saklayın. Kullanımdan önce iki şişe sütü ılık su kullanarak çözdürün.
    1. Steril bir şırınga kullanarak 7,16 mL %95 etil alkol (USP) çekin ve bunu bir adet 50 mL'lik süt şişesine ekleyin. Bu, sıçan yavrularına günün ilk iki beslemesinde verilen %11,9 v/v alkol solüsyonunu oluşturur (bkz. 2.1.1); toplam günlük alkol dozu 5,25 g/kg/gün'dür. Alkolün zenginleştirilmiş süt solüsyonu içinde belirli bir hacimde (besleme başına 0,0278 mL/g) verilmesi için tasarlanmıştır.
      NOT: Bu miktar, batın büyüklüğüne ve 3-4 günlük beklenen kullanıma göre ayarlanabilir. %11,9 v/v solüsyon elde etmek için eklenen alkol miktarı da ayarlanmalıdır.
    2. Bu şişeyi iyice çalkalayın ve uygun şekilde etiketleyin (örn., Sütte %11,9 v/v Etil Alkol).
    3. İkinci süt şişesini (alkol eklenmemiş) uygun şekilde etiketleyin (örn., Sadece Süt) ve bunu 2.1.1'de belirtildiği gibi ek beslemeler için kullanın.
    4. Her iki süt şişesini de buzdolabında saklayın.

2. Neonatal Alkol Maruziyeti (Postnatal 4-9. Günler)

  1. PD 4'ten itibaren AI ve SI yavrularına günde toplam 4 intubasyon uygulayın. Her intubasyon arasında 2 sa. ara verin. AI yavruları gerçek bir solüsyonla intube edildiği için, her intubasyon besleme olarak kabul edilir.
    1. Gün içindeki ilk iki beslemede AI yavrularına %11.9 v/v Süt içinde Etil Alkol solüsyonu ile intubasyon yapın ve ardından büyümelerini desteklemek için günün son iki beslemesinde Süt-Sadece solüsyonu ile intubasyon uygulayın.
    2. SI yavrularına, AI yavrularının maruz kaldığı PE-10 tüp maruziyet süresinin aynını sağlamak amacıyla her iki saatte bir, herhangi bir solüsyon olmadan 4 kez intubasyon yapın. UC grubu herhangi bir intubasyon almaz.
  2. Yavruları anneden ayırın ve sıcak tutmak için termo-regüle bir su ısıtma pedine yerleştirin. Her yavruyu tartın ve vücut ağırlığını (g cinsinden) kaydedin. Her AI yavrusu için intubasyon hacmini belirlemek amacıyla önceden hazırlanmış bir besleme çizelgesine başvurun ve bunu bir kayıt sayfasına not edin.
    1. %11.9 v/v Süt içinde Etil Alkol solüsyonunu ılık bir su banyosuna yerleştirin ve iyice çalkalayın.
    2. İntragastrik intubasyon prosedürü:
      1. %70 izopropil alkolde saklanan intragastrik intubasyon tüpünü ılık suyla iyice yıkayın.
      2. Steril 1 mL şırınga kullanarak doğru miktarda solüsyon çekin.
      3. İntubasyon tüpünün ucunu (PE-10 ucu) taze mısır yağına batırın (bu işlem yerleştirmeyi kolaylaştırır).
      4. PE-10 tüpünün uzunluğunu yavrunun ağzından midesine kadar ölçün. Durdurma noktasına rehberlik etmesi için PE-50 tıpayı ayarlayın.
      5. PE-10 tüpünü dikkatlice yavrunun ağzına yerleştirin, özofagus boyunca ilerletin, gastroözofageal sfinkteri hafifçe geçerek mideye ulaştırın. Yavruyu inceleyin, sabitleyin ve solüsyonu iletmek için şırınga pistonunu itin. Bunu yavaş bir hızda gerçekleştirin.
        NOT: Tüpün yanlışlıkla trakeye yerleştirilmesini önlemek için, ileri ilerlemeden önce tüpü önce kıvrılacak ve yumuşak damağa temas edecek şekilde yönlendirin. Tüp doğal olarak bu bölgeden sapıp özofagusa yönlendirileceği için damağı bir kılavuz olarak kullanın. Aksi takdirde, ucun ventral yöne doğru herhangi bir belirgin sapması trakeye girmesine neden olabilir. Giriş konumundan emin olunmadığında tüpü çıkarmak ve intubasyona devam etmemek en iyisidir; tüpü bir sonraki denemede doğru şekilde yeniden yerleştirin.
      6. PE-10 tüpünü dikkatlice çıkarın ve yavruyu solüsyon geri kaçışı, kan veya fiziksel yaralanma açısından inceleyin. Yavru sağlıklıysa kardeşlerinin yanına yerleştirin. Tüm intubasyon prosedürü her yavru için yaklaşık 1 dk'dan kısa sürer ve her batındaki intubasyon uygulanan 4 yavru (2 AI, 2 SI) için toplamda yaklaşık 4 dk sürer.
      7. SI yavruları için intragastrik intubasyon prosedürü: AI yavruları için uygulanan PE-10 yerleştirme prosedürünün aynısını izleyin, ancak aynı süre boyunca (1 dk) herhangi bir solüsyon kullanmayın.
      8. Batındaki son yavru için prosedürleri tamamladıktan hemen sonra tüm yavruları anneye geri döndürün. Anneyi bir sonraki besleme seansına kadar (2 sa. sonra) vivaryuma geri götürün.
      9. İntragastrik intubasyon tüpünü sıcak steril suyla yıkayın ve saklamak üzere %70 izopropil alkole yerleştirin. Her besleme seansından önce tüpü suyla iyice yıkayın.
      10. İkinci besleme seansı için 2.2'den (yavruları tartma hariç) 2.2.2.9'a kadar olan adımları tekrarlayın. Son iki beslemede, AI yavrularına 2.2'de belirlenen intubasyon hacimlerini kullanarak Süt-Sadece solüsyonu ile intubasyon yapın.
  3. Temsili büyüme eğrileri elde etmek için sıçanları PD 15 (gözler açıldığında), PD 21 (sütten kesilme), PD 30, PD 60 ve PD 90 (cerrahi) gibi düzenli aralıklarla tartın.

3. Elektrotların Hazırlanması ve Modifikasyonu

  1. Her sıçan için bir elektromiyografik (EMG) "kafa ünitesi" (headstage) hazırlayın (Şekil 2). Kafa ünitesi, göz kırpma sistemi aracılığıyla göz kırpma yanıtlarının kaydedilmesine olanak tanır (Şekil 4).
    1. İki adet 3T boyutunda politetrafloroetilen (PTFE) kaplı paslanmaz çelik tel (her biri 5 cm), bir adet 10T boyutunda PTFE kaplı paslanmaz çelik tel (5 cm), üç adet erkek kontak pini ve 3 deliğe kadar kesilmiş bir mikro şerit soket izolatöründen oluşan bir kafa ünitesi oluşturun (bkz. 3.1.4).
    2. Serrated uçlu yüksek hassasiyetli bir cımbızla merkezini kavrayarak ve düz uçlu yüksek hassasiyetli cımbızla kaplamayı her iki yöne doğru çekerek 10T telindeki PTFE kaplamayı soyun. Bu teldeki tüm kaplama kalıntılarının temizlendiğinden emin olun.
      1. 10T telinin bir ucunu, tırtıklı platformlu bir dental pense ile bir kontak pinine kenetleyin; bu tel toprak hattı olarak hizmet edecektir. Bir 3T telini, düz uçlu yüksek hassasiyetli cımbızla bir uçtan 1 ila 1.5 mm uzaklıktan dikkatlice tutun. Kaplamanın geri kalanına dokunmadan 1 ila 1.5 mm'lik PTFE kaplamayı soyun. 3T telinin açığa çıkan ucuna bir kontak pini kenetleyin.
      2. Aynı işlemleri ikinci 3T teli için de gerçekleştirin. Her iki tel, EMG kayıt elektrotlarının pozitif ve negatif uçları olarak hizmet edecektir.
    3. Telllerin pinlere güvenli bir şekilde sabitlendiğinden emin olmak için tüm teller üzerinde çekme testleri yapın. Telleri bükmemeye veyale zarar vermemeye dikkat edin.
    4. Bir soket izolatör şeridinden, bir kablo soyucunun kesme bıçağı ile 3.5 deliğe kadar (dördüncü deliğin ortasından) bir segment kesin. Bu segmenti sadece 3 tam deliğe indirecek şekilde küçültün ve gerekirse her iki tarafını zımparalayın. Bu, 3 tam deliğin mevcut olmasını sağlamaya yardımcı olur. Pin-tel ünitelerini, kenetlenen uçlar izolatör segmentinin alt kenarıyla hizalanana kadar mikro şeridin üç deliğine yerleştirin. 10T düzeneği mikro şeridin orta deliğinde değil, dıştaki deliklerden birinde olmalıdır.
  2. Bipolar stimülasyon elektrotlarını modifiye edin (Şekil 2).
    1. Her sıçana bir bipolar stimülasyon elektrodu verin. Bu elektrot, ECC sırasında şok US olarak, bir stimulus izolatörü aracılığıyla (bkz. göz kırpma sistemi) küçük miktarda elektrik akımı uygular. Elektrotlar, bir üreticiden bükülmüş formda ve zırhlı olarak temin edilir.
    2. İki metal ucu, V-şekli oluşturmak için 2-3 kez çözün (5 mm açın) ve ardından her bir "dişleği" mümkün olduğunca düzeltmek için düz uçlu yüksek hassasiyetli cımbız kullanın. Bir jiletle her bir dişleğin ucundan 1 mm'lik zırhı (her yönden) kazıyın. Her bir dişleği düzensizlikler ve bükülmeler açısından inceleyin ve ek zırh kazımadan gerekirse düzeltin.
  3. EMG kafa ünitelerini ve bipolar elektrotları %95 etil alkol ile yıkayarak üretim yağlarını ve yabancı kalıntıları temizleyin. Kurumalarını bekleyin ve ardından otoklavlayın.

Pinler, yuvalar ve teller dahil olmak üzere konnektör montaj bileşenleri bir çalışma alanında.
Şekil 2: Elektromiyografik (EMG) kayıt elektrotları ve bipolar elektrot. Tamamlanmış EMG baş ünitesi (sağda, turuncu); üç erkek kontak pini, iki adet 3T boyutunda PTFE kaplı tel, bir adet 10T boyutunda PTFE kaplı tel ve modifiye edilmiş bir mikro şeritten oluşur. Üç telin her biri yaklaşık 5 cm uzunluğundadır ve kontak pinlere kenetlenmiştir. Tamamlanmış bipolar elektrot (sağda, beyaz) burkulmaları giderilmiş, yeniden düzeltilmiş ve V şeklinde (5 mm açılı) kalıplanmıştır. İki uçtaki koruyucu kılıflar uç kısımlardan çıkarılmıştır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

4. Göz Kapağı Cerrahi Prosedürü (Postnatal 90. Gün)

  1. Materyallerin (detaylı tedarik bilgileri için Materyaller bölümüne bakınız), hayvanların, cerrahi ve cerrahi olmayan alanların hazırlanması:
    1. Cerrahi aletleri ve malzemeleri otoklavlayın - parantez içindeki sayı ( ), yetişkin bir sıçan veya ölçüm başına yaklaşık ne kadar gerektiğini belirtir: cerrahi aletler (ECU IACUC tarafından onaylandığı üzere 4 sıçan başına 1 set), gazlı bezler (3-4), pamuklu çubuklar (5-6), 20 x 20 sargı bezi (cerrahi oturum başına 4 adet), porselen pota (1), paslanmaz çelik mikrospatula (1), %0,9 saline (1 yıkama şişesi), Petri kabı (1) ve 0-80 paslanmaz çelik vidalar (sıçan başına 3 adet).
    2. Gerekli diğer steril malzemeler: 10 numara cerrahi bistüri ucu (4 sıçan başına 1 adet), cerrahi örtü (sıçan başına 1 adet), veteriner oftalmik pomad, povidon-iyot (1 yıkama şişesi), 26G x 3/8" hipodermik iğne (2), #55 matkap ucu takılı nikel kaplı pin mengenesi, nikel kaplı düz uçlu kuyumcu tornavidası (1,8-2 mm uç).
    3. Onaylanmış araştırma/tıbbi sınıf bir dezenfektan kullanarak tüm cerrahi aletler ve malzemeler için steril bir bekleme alanı hazırlayın. Alan hazır olduğunda malzemeleri bu alana yerleştirin.
    4. Onaylanmış araştırma/tıbbi sınıf bir dezenfektan kullanarak steril bir cerrahi alan hazırlayın. Bu alan; termo-regüle bir su ısıtma pedi, sıçan anestezi maskesi takılı stereotaksik aparat, cam boncuk sterilizatörü ve (anestezi için) izofluran gaz buharlaştırıcısı içerir. Buharlaştırıcının, anestezi maskesine ve steril olmayan hayvan hazırlama prosedürleri için ayrı bir alanda bulunan indüksiyon haznesine giden tüpleri vardır; her tüp kendi valfi ile kontrol edilir.
    5. Elleri ve kolları antimikrobiyal sabunla iyice yıkayın. Sterilizasyon poşetleri veya sargılarla paketlenmiş öğeleri, iç kısmına dokunmadan önceden açın. Aseptik prosedürle steril eldivenleri giyin ve tüm ilgili öğeleri cerrahi alana aktarın. Matkap ucunu pin mengenesinde uygun derinliğe (~ 2 mm) ayarlayın ve tornavidayı hazırlayın. Cerrahi işlem başlayana kadar steril malzemeleri steril bir sargıyla örtün.
    6. Hassas terazi, elektrikli tüy düzeltici, 26G x 3/8 inç iğneli steril 1 mL şırıngalar (sıçan başına 1 adet), cerrahi kayıt defteri ve 0,1 mL/100 gram şeklinde uygulanacak buprenorfin (0,03 mg/mL konsantrasyon) içeren steril olmayan bir alan hazırlayın.
      UYARI: Buprenorfin, DEA çizelge III yarı sentetik bir opioiddir; uygun şekilde kilitlenmeli ve kaydedilmelidir.
    7. İzofluran buharlaştırıcısının uygun gaz seviyesini kontrol edin; düşükse gaz ekleyin. Gaz akış ve karışım düğmelerini şimdilik kapalı bırakın. O2 tankını açın ve tüm cerrahiler için yeterli gaz olduğunu kontrol edin.
    8. Her sıçanı tartın ve vücut ağırlığını cerrahi kayıt defterine kaydedin. Uygun enjeksiyon hacmini belirlemek için bir buprenorfin enjeksiyon çizelgesi kullanın.
    9. İndüksiyon haznesine giden buharlaştırıcı valfini açın ve cerrahi maske valfini kapalı bırakın. Karışımı 3'e ve akış hızını 3'e getirin (taşıyıcı gaz olarak %100 O2 ile 3 L/dk hacminde %3 izofluran).
    10. Bir sıçanı indüksiyon haznesine yerleştirin ve uygun anestezik düzeye (yavaş nefes alma, pedal refleks kaybı, göz kırpma refleks kaybı) ulaşmasını bekleyin. Anestezik düzeye ulaştığında sıçanı hazneden çıkarın.
    11. Tüy düzelticiyi kullanarak başını tıraş edin, kesi bölgesi ve sol göz kapağı için yeterli miktarda cildi açığa çıkarın. Gerekirse, tıraşa devam etmeden önce tekrar anestezik düzeye ulaşması için sıçanı indüksiyon haznesine geri yerleştirin.
    12. Açığa çıkan cildi, izopropil alkol ve povidon-iyodu sırayla üç kez sürerek dezenfekte edin. Gerekirse, cerrahi masaya aktarmadan önce tekrar anestezik düzeye ulaşması için indüksiyon haznesine geri yerleştirin.
  2. Cerrahi İşlem
    1. Anestezi maskesine giden buharlaştırıcı valfini açın ve indüksiyon haznesi valfini kapatın. Karışımı 2,5'e ve akış hızını 2'ye ayarlayın (taşıyıcı gaz olarak %100 O2 ile 2 L/dk hacminde %2,5 izofluran). Sıçanı stereotaksik aparata aktarın ve başını insizör barına ve kulak barlarına sabitlemek için standart prosedürleri izleyin (örnek için bkz. Geiger et al., 200849).
    2. Sıçana cerrahi öncesi buprenorfin (SC) enjeksiyonu yapın ve iğneyi (kapağı açık halde) dikkatlice tıbbi atık kutusuna atın. Sıçanın üzerine, sadece cerrahi alanı açığa çıkaran ve burayı vücudun geri kalanından izole eden steril bir cerrahi örtü yerleştirin.
    3. Cerrahi maske, cerrahi bone, cerrahi önlük, koruyucu gözlük ve IACUC tarafından gerekli görülen diğer tüm kişisel koruyucu donanımları giyin. Elleri ve kolları antimikrobiyal sabunla iyice yıkayın ve fırçalayın. Steril prosedürle steril eldivenleri giyin.
    4. Gözlerin kurumasını önlemek için her iki göze pamuklu bir çubuk yardımıyla az miktarda oftalmik pomad uygulayın.
    5. Sıçan uygun anestezik düzeyi sergilediğinde cerrahiye başlayın. Cerrahi boyunca sıçanı sürekli izleyin ve izofluran seviyesini periyodik olarak kontrol edin. Cerrahi sırasında sıçanın anesteziye verdiği yanıta göre akış ve karışım düğmelerini uygun şekilde ayarlayın.
    6. Bir bistüri ucuyla kranyumun orta hattından anterior-posterior bir kesi yapın. Bu kesi, gözlerin önünde (yani frontal kemiği açığa çıkaracak şekilde) ve lambdoid suturun biraz arkasında yeterli alanı açığa çıkarmalıdır.
    7. Aşırı kanamaya neden olmamaya dikkat ederek kranyumun üzerindeki periostu kazıyın. Fazla bağ dokusunu ve kanı pamuklu bir çubukla silin.
    8. Bir parietal kemikte, koronal suturun hemen arkasından başlayarak bir pin mengenesi yardımıyla matkap ucuyla bir delik açın. Herhangi bir kanı ve kemik kalıntısını pamuklu bir çubukla temizleyin. 0-80 vidayı dişlerinden splinter forsepsle kavrayın ve kuyumcu tornavidasıyla deliğe sabitleyin; vidayı, kortikal beyin dokusuna zarar vermeyecek kadar sıkın (genellikle 3-4 tam tur).
    9. Kafatasına iki adet daha 0-80 vida sabitlemek için 4.2.8'de açıklanan prosedürleri izleyin; biri karşı parietal kemiğin koronal suturunun hemen arkasına ve diğeri sağ lambdoid suturun hemen anterioruna. Dişlemesi (bkz. 4.2.18) kranyuma sabitlemek için 3 vidanın yeterli olduğu bulunmuştur, çünkü dördüncü bir vida (sol lambdoid suturun anterioruna) bipolar elektrodun yerleştirilmesini engelleyecektir.
    10. Petri kabından bir EMG headstage (kafa ünitesi) alın. Headstage'i 10T teli sıçanın sağ tarafına gelecek şekilde yönlendirin. 10T telini yukarı doğru bükerek mikro şeridin alt kenarına paralel hale getirin. Telin anterior ve posterior 0-80 vidaların etrafından dolanabilmesi için sağ tarafa doğru hafifçe bükün. Erişilebilecek kadar yakına, ancak kenara koyun.
    11. [Sağ elini kullananlar için] Sol ele 3 inçlik giyime uygun forseps, sağ ele ise 4 inçlik giyime uygun forseps alın. Sol gözündeki kesi bölgesinin üst derisini 4 inçlik forsepsle kavrayın ve 3 inçlik forsepsi bu gözün köşesine yönlendirip deriyi buradan kavrayın. 4 inçlik forsepsi bırakırken 3 inçlik forsepsle kavramayı sürdürün.
    12. Bir adet 26G x 3/8 inç iğne alın ve göz kapağının köşesinden içeri sokun; iğneyi, eğimli kısmı yukarı bakacak şekilde döndürün. Orta 3T telini iğne deliğinden içeri sokmak için platformlu mikro diseksiyon forsepsini kullanın. Teli tamamen aşağı indirmeden delikten birkaç santimetre içeri itin; bu tel negatif uca karşılık gelir.
    13. Dış 3T telini göz kapağının orta kısmına yerleştirmek için 4.2.11 ve 4.2.12'de açıklanan prosedürleri uygulayın; bu tel pozitif uca karşılık gelir.
    14. Bir elle her iki iğneyi, diğer elle (veya forsepsle) headstage'i kavrayın. Tek ve sürekli bir hareketle, headstage'i aynı yönde yönlendirirken iğneleri göz kapağından çekip çıkarın. Gerekirse headstage'i, 10T teli hayvanın sağ gözüne doğru bakacak şekilde döndürün; 3T tellerinin birbirinin üzerinden geçmesine izin vermeyin. Pozitif ucun göz kapağının ortasında olduğunu doğrulamak için ince uçlu forseps kullanın.
    15. Headstage'i gözlerin ortasına merkezlenecek ve frontal kemiğin üstünde, iki taraflı yerleştirilen vidaların anteriorunda optimal bir konumda olacak şekilde ayarlayın. Headstage'i bir elle, 3 inçlik giyime uygun forsepsi diğer elle tutun. 10T telini, 10T tarafındaki bir veya her iki vidanın etrafına sarın.
    16. Bir ele 3 inçlik, diğer ele 4 inçlik giyime uygun forseps alın. Sol şakağa doğru kesi bölgesindeki deriyi kavramak için 3 inçlik forsepsi kullanın. Deriyi (yani süperfisyal fasyayı) temporalis kasından ayırarak küçük bir "cep" oluşturmak için 4 inçlik forsepsi kullanın. Bu cebin boyutunu artırmak için, sol gözün köşesine doğru ilerleyerek iris makasıyla daha fazla bağ dokusunu kesin. Çok derine inmemeye veya herhangi bir kan damarını kesmemeye dikkat edin.
    17. Bir bipolar elektrot alın ve tel uçlarını temporalis kasının eğimine uygun şekilde şekillendirin; iki uç (dorsal ve ventral) sol gözün posteriorunda yer almalı (videoya bakınız) ve bipolar elektrodun alt ucu doğrudan kranyumun üzerine yerleşebilmelidir. Komütatör kablo fişlerinin (Şekil 3) engelsiz takılabilmesi için headstage ile bu elektrot arasında yeterli mesafe bırakın.
    18. Potalara dişlemesi tozunu dökün - potanın yaklaşık 1/3'ü ile başlayın ve ardından miktarı gerektiği gibi ölçeklendirin. Kıvamı sulu olana kadar sıvı bileşeni ekleyin ve bu bileşenleri spatula ile karıştırın. Çimentonun kıvamı daha vizkoz hale geldiğinde, tüm deri kenarlarını en az 1/8 inç sınırlarla kapatacak şekilde kesi bölgesine uygulayın.
      1. Sıçanın her iki gözünü kapatmasını engellemeden, headstage ve bipolar elektrodu sabitleyecek kadar çimento uygulayın. Sıçanın tüyünün istenmeyen bölgelerine damlayan çimentoyu hızla silin.
    19. Bipolar fişin çevrilerek takılabilmesi için bipolar elektrodun en az 4-5 dişinin çimentoyla kapatılmadığından emin olun (Şekil 3). Headstage üzerindeki fazla çimentoyu temizleyin - mikro şeridin üst kısmı ve üç kontak pini temiz olmalıdır. Çimento hızla sertleşir ve bu elektrotlardan herhangi birinin komütatör kablo fişlerine tam olarak bağlanmasını kolayca engelleyebilir. Kısmen kurumuş fazla çimentoyu temizlemek için splinter forseps kullanın.
    20. Çimentonun sertleşmesini bekleyin; sertleşince şeffaflaşır. İki 3T telinin fazla uzunluğunu, birkaç santimetrelik çalışma alanı bırakacak şekilde mikro diseksiyon makasıyla kesin.
    21. Sol elde platformlu mikro diseksiyon forsepsini, sağ elde ise ince uçlu mikro diseksiyon forsepsini tutun. Sol forsepsle, göz kapağının biraz önünden bir 3T telini kavrayın. Sağ forsepsle, daha fazla 3T telini açığa çıkarmak için göz kapağını yukarı itin ve orada tutun. Sol forsepsi bırakın ve sol elinizle headstage'i kavrayın (bu aşamada sabitlendiğinden emin olun). Telin orbicularis oculi kası ile temas etmesini sağlayacak olan bazı PTFE yalıtımını sıyırmak için sağ forsepsi kullanın.
      NOT: 3T telini çok sert çekmemeye dikkat edin, aksi takdirde kontak pininden ayrılabilir. Eğer bir tel ayrılırsa, sertleşmiş çimento kemik kırılmasına neden olmadan kranyumdan kolayca ayrılmayacağı için kontak pinini değiştirmek mümkün olmayacaktır.
    22. İkinci 3T telindeki fazla PTFE'yi sıyırmak için 4.2.21'deki adımları uygulayın.
    23. İki mikro diseksiyon forsepsini 4.2.21'de belirtildiği gibi tutun (solda platformlu, sağda ince uçlu). Sol forsepsi bir 3T telinin biraz önüne yerleştirirken, sağ forsepsin doğrudan göz kapağının önüne yerleşmesi için boşluk bırakın. Teli her iki forsepsle kavrayın.
      1. Sağ forsepsi sabit tutup sol forsepsi yukarı ve göz kapağına doğru döndürerek tek bir hareketle bir "kanca" oluşturun. Önce sağ forsepsi, ardından sol forsepsi dikkatlice bırakın.
        NOT: Elektrotların göz kapaklarına kancalanması, korneaya sürtünme olasılığını en aza indirmeye yardımcı olur. Bu aynı zamanda davranışsal test aşamasının herhangi bir noktasında tel kopması olasılığını da azaltır. Kancalama, tüm hayvanlar için telin korneaya sürtünmesini tamamen önlemese de, yüksek göz kırpma genlikleri (5.1.7'de dijital osiloskopla ölçülür) ve günlük cerrahi sonrası sağlık gözlemleriyle (aşırı gözyaşı, kısmi göz kapağı kapanması, göz hasarına bağlı hareket kaybı) yansıtıldığı üzere tipik olarak hiçbir göz hasarı belirtisi göstermezler. Eğer bir sıçan başlangıçta rahatsızlık belirtileri gösterirse, izofluranla anestezi altına alınır (bkz. 4.1.10) ve elektrotları yeniden incelenir ve/veya yeniden konumlandırılır. Korneanın kurumasını önlemek için oftalmik pomad uygulanır. Sıçan, işlem sonrası herhangi bir göz komplikasyonu için günlük olarak gözlemlenir ve komplikasyonlar devam ederse veteriner yardımı alınır. Elektrot yeniden konumlandırılması veya veteriner tedavisiyle düzeltilemeyen ciddi göz komplikasyonları sergileyen sıçanlar, ECU IACUC'nin standart çalışma prosedürlerine uygun olarak insancıl yöntemlerle ötanazi edilir.
    24. İkinci 3T teli için 4.2.23'teki adımları uygulayın. Fazla teli mikro diseksiyon makasıyla kesin.
    25. Bir elinizle vücudunu desteklerken diğer elinizle sıçanı kulak barlarından serbest bırakın. Başında kan veya kalıntı olup olmadığını kontrol edin, gerekirse temizleyin ve post-operatif buprenorfin enjeksiyonu yapın.
    26. Sıçanı, iyileşmeye yardımcı olması için bir ısı kaynağı (termo-regüle bir su ısıtma pedi gibi) bulunan bir iyileşme kutusuna yerleştirin. Cerrahi kayıt defterine cerrahi bitiş saatini ve cerrahi sırasında sıçanla ilgili pertinent notları kaydedin. Sıçanın solunumunu izleyin; sternal rekümbans (göğüs üzerine yatma) sergilediğinde veya hareket etmeye başladığında ana kafesine dönebilir.
    27. Aletleri (hasar görebileceği için mikro diseksiyon forsepsleri hariç) boncuk sterilizatörü kullanarak yeniden sterilize edin, cerrahi alanın aseptik kaldığından emin olun ve birden fazla göz kapağı cerrahisi gerçekleştirilecekse aseptik prosedürleri tekrarlayın.

5. İzleme Göz Kırpma Klasik Koşullanma Prosedürü

5 kanallı komütatör, EMG, web kamerası, akustik köpük ve ses analizi içeren davranışsal deney düzeneği.
Şekil 3: Göz kırpma koşullanması için modifiye edilmiş operant koşullanma kutusu. Sıçanlar serbestçe hareket eden memelilerdir, bu nedenle başa takılı olan EMG ve bipolar fişlerden gelen elektriksel sinyal temasını sürdürmek için döner bir komütatör kullanılır. Komütatör, sıçan üzerindeki baskıyı azaltmak için karşı ağırlıklı olan destek koluna sabitlenmiştir. Bir piezo tweeter (hoparlör), 85 dB seviyesinde 2.8 kHz tonu iletir ve bu değerler düzenli olarak kalibre edilir. Akustik köpük, çevresel gürültünün azaltılmasına yardımcı olur. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Sıçanlardan gelen EMG sinyalleri için osiloskoplar ve ön yükseltici içeren elektromiyografi düzeneği; deney.
Şekil 4: Göz kırpma koşullanma sistemi.Bu özel tasarım sistem; sıçanlardan gelen gelen sinyalleri filtreleyen ve yükselten bir EMG İntegratör ünitesi, tonlar ve şokların yanı sıra çeşitli uyaranlar veren bir Uyaran Kontrol ünitesi, EMG sinyal kazancını artırmak için her operant kutusu için bir ön yükseltici ve her operant kutusu için bir uyaran izolatöründen oluşmaktadır; sistem değişken şok seviyeleri (mA cinsinden) sağlar. Alıştırma ve veri toplama sırasında tanısal amaçlarla bir dijital osiloskop (standart göz kırpma sisteminin bir parçası değildir) kullanılır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

  1. Alıştırma ve edinim eğitimine ameliyattan 5 gün sonra başlayın. Her sıçana, daha büyük bir ses yalıtımlı oda içerisinde yer alan modifiye edilmiş bir operant koşullanma kutusundan oluşan eğitim düzeneğine karşı bir günlük tutma ve alıştırma süresi tanıyın.Şekil 3) - ve ardından 6 günlük edinim eğitimini takip edin. Alıştırma ve edinim oturumlarını, özel yapım bir göz kırpma sistemi (Şekil 4).
    1. Günlük kayıt tutmak için bir eğitim günlüğü dosyası oluşturun ve bunu yazdırın. Bu günlükte sıçan grubu, eğitim kutularına sözde rastgele (veya diğer bir randomizasyon yöntemiyle) önceden atanmış olmalıdır.
    2. Eyeblink sistemini ve bilgisayarı açın ve eyeblink yazılımını çalıştırın. Yazılımın bu versiyonu, bağımsız olarak çalışan farklı modüllere (veya uygulamalara) sahiptir. Denek bilgilerini (oturum numarası, hayvan kimliği, cinsiyet, ağırlık ve kutu numarası) içeren bir *.RAT dosyası oluşturmak için Animal modülünü çalıştırın. Tek bir RAT dosyası, deneklerden oluşan bir grubu temsil eden dört sıçana kadar yönetebilir. Değerleri uygun şekilde girin ve dosyayı kaydedin. Eğitilecek her sıçan grubu için ayrı bir RAT dosyası oluşturun.
    3. Sıçanları vivaryumdan test odasına taşıyın ve kapıyı kapatın. Her bir sıçanı 5 dakika boyunca tutun.
    4. Bir sıçanı belirlenmiş kutusuna aktarın ve komütatör kablosundaki EMG ve bipolar fişlerini, hayvanın başındaki ilgili EMG baş katmanına (headstage) ve bipolar elektroda bağlayın.
      NOT: Komütatör kablosuyla ilk karşılaştığında, sıçan zorlanabilir ve stres belirtileri gösterebilir. Sıçanı dikkatlice tutun ve stresini azaltmak için başarısız bağlantı denemeleri arasında aralar verin.
    5. Dönen bir komütatör kullanın 360° bir sıçan bir kutu içerisinde serbestçe hareket ederken elektriksel sinyal iletimini/alımını sürdürür. Cihaz, ham sinyali filtreleyen ve yükselten EMG İntegratör ünitesine giden 5 kanala (3'ü EMG elektrotları için, 2'si bipolar elektrotlar için) sahiptir.
    6. Sıçanın serbestçe hareket ettiğinden, komütatör kablo düzeneğinin veya destek kolunun ağırlığı nedeniyle engellenmediğinden emin olun. Gerekirse destek kolunun arkasındaki karşı ağırlığı ayarlayın. Tüm fişlerin güvenli bir şekilde takılı olduğunu kontrol edin ve ardından kutu kapağını kapatın. Tüm sıçanlar için aynı bağlantı ve kontrol prosedürünü uygulayın.
    7. Anormal sinyalleri (örneğin, yüksek frekanslı ve/veya yüksek genlikli elektriksel aktivite) gözlemlemek için bir osiloskop ve mevcutsa durumlarını (örneğin, motor aktivite, çevreye karşı hassasiyet, ağrı belirtileri) kontrol etmek için bir video gözetleme sistemi kullanın. Gözlemlenen tüm sorunları eğitim günlüğüne kaydedin.
    8. Sıçanların 10 dakika boyunca bölmelerine alışmalarına izin verin ve ardından onları kendi kafeslerine geri koyun.
    9. Operant kutularını temizleyin ve dezenfekte edin, yerleri süpürün ve masa(ları) temizleyin. Bu işlemleri her oturumdan sonra gerçekleştirin.
  2. Edinim eğitimi, birbirini takip eden 6 gün (oturum) boyunca gerçekleştirilir.
    1. 1. Gün: Bir sıçanı belirlenen kutusuna aktarın ve komütatör kablosundaki EMG ve bipolar fişleri, başındaki ilgili EMG kafa katına ve bipolar elektroda bağlayın. 5.1.6 ve 5.1.7 bölümlerinde belirtilen prosedürlerin aynısını uygulayın.
    2. Stimülasyon izolatörlerini açın ve verilecek akımı 0,4 mA (videoda gösterildiği üzere 10 mA'in %4'ü) olarak ayarlayın. İzolatörler, bipolar elektrotun dorsal ve ventral uçları arasında alternatif biçimde (yani denemeden denemeye) elektrik akımı iletir. Bu, tekrarlanan stimülasyon uygulamaları sırasında (her bir kas bölgesindeki) kas lifi yorgunluğunun azalmasına yardımcı olur.
    3. Tüm sıçanlar için her denemedeki tüm göz kırpma yanıtlarını ve sergilenen toleransları gözlemleyin. Her iki denemede bir, her sıçan için şok US şiddetini 1,6 mA'e ulaşana kadar (7. ve 8. denemelerde) 0,4 mA artırın. Tüm sıçanların kutularında normal şekilde yanıt verdiğini, tüm amplifikasyon ve kazanç ayarlarının sabit olduğunu ve onlardan gelen elektrik sinyallerinin uygun olduğunu (yani düşük/az EMG gürültüsü) tekrar kontrol edin. Edinme eğitiminin tüm günlerinde 1,6 mA şok US şiddeti kullanın.
      NOT: Eğer bir sıçan belirli bir şok seviyesine karşı ağrı belirtisi gösterirse (örneğin, yerden yükseğe sıçrama, duvarlara tırmanma, etrafta koşma), deneme duraklatılır ve sıçan iki deneme boyunca bir önceki mA ayarına (0,4 mA altı) geri döndürülür. Ardından, sıçana tolere edemediği daha yüksek şok değeri tekrar uygulanır ve eğer tolerans gösterilirse, 1,6 mA değerine ulaşana kadar artan değerler uygulanır. Eğer herhangi bir değeri tolere edemezse, eğitim boyunca tolere edebildiği bir alt değer (0,4'lük artışlarla) kullanılır.
    4. Anormal sinyalleri gözlemlemek için bir osiloskop kullanarak EMG aktivitelerini inceleyin (ör., yüksek frekanslı ve/veya yüksek genlikli elektriksel aktivite) ve durumlarını kontrol etmek için bir video gözlem sistemi (örn., motor aktivite, çevreye karşı hassasiyet, ağrı belirtileri).
      NOT: İz ECC Açıklaması: Yakalanmış EMG dalga formlarını içeren temsili bir deneme dönemi şurada gösterilmiştir: Şekil 1 ve iz şeklinde ECC prosedürü videoda ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. İz koşullama eğitim dosyası, her 10 denemede bir 100 deneme (90 eşli CS-US denemesi ve 10 sadece CS denemesi) sunacak şekilde ayarlanmıştır.th deneme) ve denemeler arası ortalama süre 30 saniyedir. Tüm eğitim seansı (duraklamalar olmadığı varsayıldığında) yaklaşık 52 dakika sürer. Tüm sıçanlar Seans 1'de deneyimsizdir ve birkaç günlük eğitim süreci boyunca (CR'lerin ekspresyonu ile belirlendiği üzere) farklılaşan öğrenme eğrileri geliştireceklerdir.
    5. Eğitimi başlatın: Blink yazılım modülünü çalıştırın. İstendiğinde, uygun RAT dosyasını ve "iz" (trace) göz kırpma koşullanması için eğitim dosyasını seçin.
    6. Eğitim günlüğüne başlangıç saatini ve deneycinin adını yazın. Bu aşamada tüm etkinlikleri izleyin: uygun EMG sinyalleri, şok US'ye verilen iyi göz kırpma yanıtları (yani yüksek/sık UR'ler), hayvanların sağlık durumu ve donanımın düzgün çalışması. Dikkat çekici tüm notları eğitim günlüğüne kaydedin.
    7. Veri toplama işlemi, yazılım tarafından otomatik olarak RAW dosyaları şeklinde (her sıçan için günde bir adet) kaydedilir. RAW dosyaları; irkilme tepkileri (SR'ler), koşulsuz tepkiler (UR'ler) ve koşullu tepkiler (CR'ler; toplam ve adaptif) için EMG genliğini (volt cinsinden), frekans sayılarını, latansı ve alan verilerini içerir. Şok artefaktı, UR döneminin ilk 100 ms'lik kısmını maskeler; bu nedenle UR döneminin yalnızca son 140 ms'lik kısmı UR verilerini içerir.
    8. Eğitim sonunda yazılım otomatik olarak kapanacaktır. Tüm sıçanları eğitim kutularından çıkarın ve vivaryuma geri götürün.
    9. Sonraki tüm eğitim günleri için 5.2.5 - 5.2.6 adımlarını tekrarlayın. Belirli bir günde Blink modülünü başlatmadan önce, RAT dosyası içindeki oturum numarasını güncelleyin. Bu işlem, o günkü tüm sıçanlar için yeni RAW dosyalarının oluşturulmasını sağlar. Eğitimden herhangi biri çıkarılmadığı varsayıldığında, her sıçanın 6 RAW dosyası olmalıdır.
  3. RAW dosyalarını işleyin ve istatistiksel analiz için filtrelenmiş bir dosya oluşturun.
    1. Analiz modülünü çalıştırın. Her sıçanın her bir oturumunu, sorunlu denemeler için deneme bazında gözden geçirin. Bu işlem, çeşitli nedenlerle bozulmuş olabilecek denemeleri ayıklamak için gerçekleştirilir (örneğin, aşırı pre-CS bazal aktivite, aşırı hareket, elektrot ayrılması, kablolama/tel sorunları). Yazılım, deneycinin "hatalı denemeleri" tespit etmesine ve bunların filtrelenmiş veri setinden çıkarılmasına yardımcı olan algoritmalara sahiptir.
    2. Filtrelenmiş verileri bir hesap tablosu programına aktarın ve ilgili istatistiksel analizleri gerçekleştirin.

Sonuçlar

Eyeblink yazılım ölçümleri birçok türleri için büyük ve kapsamlı bir veri kümesi sağlama yeteneğine sahiptir. Kısalık için biz bu çalışmada, raporu temsilcisi öğrenme hem de performans adaptif CR yüzde, adaptif CR genlik, UR yüzde ve UR genlik önlemler olur. Hippocampus izleme ECC50,51,52sırasında gelişmiş sinaptik plastisite bir sonucu olarak tekrarlanan eğitim üzerinde iyi zamanlanmış eyeblink yanıt edinimi temsil ettiği gibi uyarlamalı CR dönem seçildi. UR önlemler yenidoğan alkol kaynaklı öğrenme açıkları ECC ilişkisel öğrenme aksamalar veya şok yanıt aksamalar nedeniyle bize - hangi öğrenme farklılıkları tedavi grupları arasında yerine motivasyon veya motor farklılıklar gösterebilir edildi iz olup olmadığını aydınlatmak için seçilmiştir. Her ölçü birimi için veri ANOVAs, tekrarlanan ölçüler faktör olarak oturum ile karışık 2 (Sex) x 3 (yenidoğan grubu) x 6 (oturum) kullanarak analiz edildi. Neonatal tedavi için önemli ana etkileri Tukey'nın öğleden hoc testleri kullanarak analiz edildi ve önemli etkileşimler basit efektler testleri kullanarak analiz edildi. En az bir alpha düzeyi 0,05 kullanarak tüm istatistiksel analizleri yapılmıştır ve grafiklerde sonuçları ortalama ± SEM.

Adaptif CR yüzde ölçü ile başlayan, ANOVA yenidoğan grubu, F(2,21) önemli bir temel etkisi belirtilen 11,69, p = < 0,001 ama seks önemli ana etkisi (p = 0,71) veya bu faktörlerin arasında önemli bir etkileşim (p 0,20 =). Beklendiği gibi adaptif CR yüzde arttı eğitim, F(5, 105) altı seans 81.15, p = < 0,001 ve neonatal gruplar arasındaki farkları oturum, F(10, 105) bazı düzeyde bağımlı 4,58, p = < 0,001. Oturum faktör içeren hiçbir önemli diğer etkileşimler vardı. Aynı şekilde uyarlanabilir CR genlik için tekrar bir önemli ana etkisi vardı yenidoğan grubu, F(2,21) 22.32, p = < 0,001 ama önemli ana etkisi cinsiyet (p 0.21 =) veya bu faktörlerin arasında önemli bir etkileşim (p 0.48 =). CR genlik aynı zamanda eğitim, F(5, 105) altı seans içinde önemli ölçüde arttı 59.27, p = < 0,001 ve neonatal gruplar arasındaki farkları oturum, F(10, 105) bazı düzeyde bağımlı 4,31, p = < 0,001. Genel olarak, her iki CR önlemler grup anlamına gelir ve önemli ölçüde farklı eğitim oturumları sırasında ayrılmış bu yollar arasında önemli farklılıklar gösterdi. Hangi grupları önemli ölçüde farklılık onaylamak için alkol entübe (AI) fareler önemli ölçüde hem CR önlemler unintubated-control (UC) ve sham entübe (SI) fareler daha kötü yapılan Tukey'nın öğleden hoc testler gösterdi (p < 0,01 CR yüzdesi; p < 0,001 CR genlik için), hangi farklı değildir birbirinden (p> 0,05). Basit efektler testleri gerçekleştirilen önemli yenidoğan grubunda oturum etkileşimleri için AI fareler daha da önemlisi oturum 2'de başlayan ve oturum 6'dan taşıyan karşılaştırıldığında UC ve sı fareler için CRs edinme Engelli doğruladı hem CR önlemler x (tüm p< 0,05), hangi değil farklı--dan her diğer altı seans. SI fareler önemli ölçüde farklı AI sıçanlarından emir oturum 3 kadar başlamadı için tek özel durum adaptif CR genlik oldu. Bu sonuçlar şekil 5A, 5Bgösterilir.

UR önlemler seks, Yenidoğan grubu ya da bu faktörlerin oturum faktörle etkileşimler nedeniyle hiçbir önemli farklılıklar vardı. Bu negatif bulgular her grup şok eyeblink yanıt bize eşit yayarlar başardı ve AI fareler gözlenen öğrenme açıkları değildi (6A rakam, 6B) yanıp sönen motivasyon veya motor farklılıklar etkilediği göstermiştir.

figure-results-1
Şekil 5 : İzleme edinimi şartına yanıt veren (ortalama ± SEM). Erken alkol pozlama (grup AI) adaptif şartına yanıt (CR) yüzde (A) ve (B) genlik edinimi önemli ölçüde etkiledi. İzleme ECC doğal olarak elde etmek zordur, bu nedenle önlemler - gecikme ECC olan tüm gruplar için nispeten düşüktür, yüzde 80-%85 FASD21,53kemirgen modellerinde ulaşabilirsiniz. Yine de, ECC yordamı izleme erken beyin gelişimi sırasında alkol etkileri duyarlı olduğu Hipokampus üzerinde vergi değil. * p = < 0,05, ** p = < 0,01, *** = p < 0,001 arasında UC ve AI fareler; örneklerin boyutu parantez içinde verilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

figure-results-2
Şekil 6 : Unconditioned (ortalama ± SEM) yanıt edinimi. Eyeblink performans (UR yüzde ve UR genlik) gruplar arasında önemli ölçüde farklı değildi. Farklar olmaması edinme eğitim sırasında kullanılan şok yoğunluk motivasyon AI Sıçanlarda differentially alter değil veya yeteneklerini savunma üretmek için yanıp sönme (UC ve sı) her iki kontrol gruplarına göre şok, yanıtlarını gösterir. Örneklerin boyutu parantez içinde verilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Tartışma

Etil alkol alınan doğum sonrası gün boyunca 4-9 yenidoğan fare pups bozuklukları yetişkinlikte Klima izleme eyeblink sergiledi. Bu bulgular alkol ile Hipokampal işlevi üzerinde zararlı etkileri kalıcı bir teratogen olduğu fikri destekler. Genel olarak, klimalı izleme yordamda yanıt için fareler hem de kontrol grubu ile karşılaştırıldığında alkol maruz rats düşüktü. Alkol maruz Sıçanlarda ilişkisel öğrenme bozuklukları motivasyon veya motor farklılıkları akıttıkları (i.e., şok u.s. yoğunluğu için yanıp sönen bir farkı yok).

İzleme ECC elucidating meydan kaynaklı Hipokampal nevropatoloji için yararlı bir tanı aracı olmakla birlikte, bu yöntem sonuçları doğru bağlam yerleştirilmelidir. İlk olarak, temel yordam unsuru içinde bu gösteri sırasında gelişmekte olan beyin, electromyographic aktivite kayıt sağlayan ve şok, söz konusu donanım ve sonraki hayvan ilgi bir bilişsel işlev değerlendiriyor bir öğrenme paradigması kullanarak sınama cerrahi implantasyon elektrot donanım imalatı için güvenlik açığının bilinen bir pencere alkol hedeflenen teslimat dahil. İşleminin her aşamasında, kemirgen konular gereksiz/istenmeyen bir zarar değil ve onların sağlık işaretleri düzenli olarak izlemek için özen göstermelidir. Ne zaman alkol dozaj, donanım hataları veya cerrahi implantasyon kapsayan deneysel hataları tarafından sağlıklarını tehlikeye değil sadece doğru olduğunu bir psikolojik yapısı açıklanan, davranışsal sonuçları "pencere" biliş için sağlar. Böylece, araştırma süreci yordam her öğesinde ECC sonuçlarından bulgular insanlarda yaygınlaştırılması sağlamak için ses bir şekilde uygulanmalıdır. İkinci olarak, ECC paradigma Insight ilişkisel öğrenme niteliğine sağlar, ancak bir deneysel tasarım gereği bu etki alanları bir ECC çalışma içinde bazı faset dahil olan sürece değil bulgular bu yaklaşımı kullanarak genişletmek ve geniş onları çalışma belleğinde, kısa/uzun vadeli anılar ve bilinç - gibi - diğer bilişsel etki alanlarına atfetmek için özen göstermelidir. Örneğin, bu gösteri izleme ECC öğrenme Alım Aşaması incelendiğinde, ancak bellek saklama Sıçanlarda eğitim tamamlandıktan sonra incelemek değil. Bellek böylece öğrenme ek olarak değerlendirilen bir bağımsız psikolojik süreçtir. Tasarım gereği, bir ya da kısa vadeli veya uzun vadeli bellek yeteneği değerlendirmek için bir bellek tutma aralığı dahil olabilir. Üçüncü olarak, aynı anda davranış için katkıda motivasyon, deneysel ve hormonal faktörler birlikte çalışabilir paralel bellek sistemleri54 vardır tanıma birleşim (ECC sırasında) olduğunu anlama ama "iyi" veya "kötü" öğrenme hakkında ne ortaya birçok işlemlerden biri için gerekli olan. Diğer beyin bölgeleri CR bazı bileşeni aracılık gibi son olarak, izleme ECC tamamen Hipokampal bağımlı görev değildir. Böylece, bir anlayış farklı sinir devreleri ve/veya bir çalışmada kullanılmaktadır, ayrık sonuçlarına göre etkileri yaparken dikkate alınması gereken uyarıcı parametreleri türünü arasındaki etkileşimler. Beyincik, örneğin, Ayrıca izleme ECC, nerede CR ve zamanlama, özellikle ısı kısa süre içinde ne zaman CR topografik özelliklerini etkiler katkıda bulunmaktadır. İzleme ECC serebellar hasar ile bir uzun izleme aralığı (1000 ms) ile test insanlarda etkilenmez ancak olanlar daha kısa bir izleme aralığı (400 ms)34almak içinde değişir. Ayrıca, fare, anterior singulat ve medial agranular bölgelerde hedef iki taraflı lezyonlar dorsal medial prefrontal korteks (mPFC) önlemek izleme CRs55, edinimi süre benzer sonuçlar46tavşanların Kaudal mPFC imha üretmek. Bu bulgular da beyin serebellar prefrontal katkıları türler farklılıklar izleme ECC gibi tahrik ilişkisel öğrenme kök göz önünde bulundurarak önemini vurgulayın. Yenidoğan alkol pozlama sırasında PD 4-9 olumsuz etkilenen edinimi 500-ms izleme CRs yetişkin için bu çalışma ve diğerleri47,56fareler olsa da, bu ne zaman bile alkol (5 g/kg)57izleme bozukluğu alkol maruz Sıçanlarda izleme aralığı süresi üzerinde bağımlı olduğunu düşündüren, nispeten yüksek bir doz, meydan bir 300-ms izleme aralığı deneyim yenidoğan alkol maruz fareler için aynı durum böyle değil.

Hayati önem taşıyan izleme ECC arabuluculuk için ve ne zaman yenidoğan alkol poz tarafından meydan olmak ile ilgili sinirsel hasar izleme CRs edinimi bozuklukları yansıtır sergiler bu çalışmada, Hipokampus vurguladı. Bu gerekir uyardı, ancak, beyincik beyin kök devreleri, özellikle interpositus çekirdeği, ECC, satın alma, ifade ve izleme ECC36,40,55,58,59dahil olmak üzere ECC görev türüne bağlı olarak CR topografik özellikleri de dahil olmak üzere çok yönlü için esastır. Nitekim, bu sinir devre CRs ifade ECC, üst düzey formları izleme ECC60gibi sırasında sürüş için Hipokampus ile etkileşim kurar. Alkol pozlama erken beyin gelişimi sırasında özellikle Hipokampal işlev izleme ECC etkileyip tamamen açık değil. Birçok farklı beyin bölgelerini mPFC, beyincik ve Hipokampus18,19,23,47,61,62, gibi erken alkol hakaret savunmasız ve alkol bu yapıları değişen derecelerde ve değişen ama işlevsel olarak önemli farklılıklar işleyişi birçok ECC yordam bozan çok yüksektir. İle ilgili izleme ECC çalışmalar sonuçlarından yorum tuzaklar rağmen başarılı izleme CRs edinimi sağlam bir Hipokampus üzerinde en az güvenmeye hayvan lezyon çalışmalar42,44,63tarafından,64,65desteklenen olarak gösterilmiştir. Bu yordam, böylece gelişimsel alkol maruz kalma, altta yatan nöro çevrim daha iyi olduğundan yanıt şartına izleme arasındaki bağlantıları roman nesne tanıma, Morris su labirentteki yer öğrenme gibi diğer Hipokampal bağımlı görevleri daha anlaşılır gösteren için son derece değerli bir yaklaşım kalır ve bağlamsal ve klima korku izleme.

ECC davranış yöntemi olarak "biliş, tahlil için" yaygın uygulanabilirliği gelişimsel neuroteratology alanına sahiptir. Nitekim, son bizim laboratuvar bulgular gelişmekte olan Hipokampus farklı Girişimsel stratejileri18,47tarafından hafifletilmiş alkol etkileri son derece hassas kavramı destekler. Önemli yararı burada alkol kaynaklı izleme ECC öğrenme açıkları daha iyi bir anlayış ile bunların özellikle de aynı Hipokampal neurocircuitry tarafından aracılı bilinen akıllı Hipokampal tabanlı işlevleri dışında ilişkisel öğrenme - diğer sorunları olabilir olduğunu.

Uygulama izleme ECC ve diğer türevleri (örneğin, gecikme, ters, ayrımcılık, bileşik) nörobiyolojik mekanizmaları ve sinir sistemleri ilişkisel öğrenme, yer aydınlatmak için fetal alkol araştırma alanı uzatılabilir. Örneğin, bu paradigma insan durumlarda ve şizofreni66,67gibi psikiyatrik durumlar, nörodejeneratif hastalıklar Alzheimer hastalığı68,69gibi hayvan modelleri ve uyuşturucu bağımlılığı70,71,72çok ilgi aldı. Faydaları nörobilişsel işlevi ve fonksiyon bozukluğu değerlendirmek için bir araştırma yöntemi olarak böylece nörolojik bilimler de dahil olmak üzere birçok psikolojik ve Biyomedikal disiplinler arasında görülmektedir.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Bu eser alkol içecek tıbbi araştırma Vakfı (ABMRF üzerinden) TDT için bir hibe tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Yenidoğan Alkolüne Maruz Kalma
190 Kanıt Etil Alkol (USP)Pharmco-AAPER225-36000 [ECU Tıbbi Depo]İkame edilebilir; USP olmalıdır; kullanmaktan kaçının Yavrular için 200 geçirmez etil alkol
Konteyner / SepetHerhangi Bir
Mısır YağıbirGıda sınıfı
Isıtmalı Su Terapi Pompası w / PedlerGaymarTP-500Yavruları sıcak tutmak için; ikame edilebilir
Hipodermik İğneler 22G x 1 inç, SterilHerhangi Bir
Hipodermik İğne 30G x 1/2 inç, SterilHerhangi Bir
İzopropil Alkol %70EMD MilliporePX1840-4 [Fisher Scientific]İkame edilebilir; reaktif derecesi
www.fishersci.com
Long-Evans Sıçanları (Dişi ve Erkek Yetiştiriciler)Charles River LaboratoriesN/A [ECU Karşılaştırmalı Tıp Bölümü]Yaş ve kilonun belirtilmesi gerekir; fiyatlandırma şu faktörlere göre değişir
www.criver.com
Mikro Diseksiyon Makası, 3,5 inç, 23 mm BıçaklarBiyomedikal Araştırma Aletleri11-2200PE boruları kesmek için
brisurgical.com
Polietilen 10 Boru (0,011 inç. Kimlik; 0.024 inç Öğr.BD Teşhis Sistemleri22-204008 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
Polietilen 50 Boru (0,023 inç. Kimlik; 0.038 inç Öğr.BD Tanı Sistemleri22270835 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
ayarlı su ısıtıcısı veya biberon ısıtıcısıHerhangi biristeğe bağlı; soğuk süt çözeltilerinin ısınmasına yardımcı olur
Tüberkülin Şırıngaları, Steril, 1.0 mlHerhangi Bir
Tüberkülin Şırıngaları, Steril, 10 mlHerhangiEtil alkol çıkarmak veya uygun boyutta mikropipet kullanmak için kullanılabilir
Tartı ÖlçeğiHerhangi biriİyi çözünürlüğe sahip olmalı (gram birimi cinsinden)
İsim< / güçlü >< güçlü > Şirket< / güçlü >< güçlü > Katalog Numarası< / güçlü >< güçlü > Yorumlar< / güçlü >
< güçlü >EMG Sahne İmalatı ve Bipolar Elektrot Modifikasyon< / güçlü >
Bipolar Elektrot, 2 Kanal SS BükülmüşPlastikler One, Inc.MS303/2-B/SPC  ELECT SS  2C TW .008"Kaidenin altında 20 mm'lik özel uzunluk belirtilmelidir
www.plastics1.com
Centi-Loc Şerit Soket İzolatörü (diğer adıyla Mikro Şerit)ITT Cannon / ITT Ara Bağlantı ÇözümleriCTA4-IS-60* veya CTA4-1S-60**Satıcıya bağlıdır; bakınız www.onlinecomponents.com veya www.avnetexpress.avnet.com
Diş Pensesi, TırtıklıCMF Medicon390.20.05İkame edilebilir; kabloları erkek kontak pimlerine kıvırmak için kullanın
www.medicon.de
Mikro Diseksiyon Makası, 3,5 inç, 23 mm BıçaklarBiyomedikal Araştırma Aletleri11-2200Yalnızca 3T kabloları kesmek için kullanın; 10T telleri kesmek bıçağa zarar verir - bunun yerine tel sıyırıcının bıçağını kullanın
brisurgical.com
PTFE Kaplı Paslanmaz Çelik Tel, 10T (Çıplak Çap .010 inç)Sigmund Cohn-Medwire316SS10T
www.sigmundcohn.com
PTFE Kaplı Paslanmaz Çelik Tel, 3T (Çıplak Çap 0,003 inç)Sigmund Cohn-Medwire316SS3T
www.sigmundcohn.com
Tıraş BıçağıHerhangi Bipolarelektrotun uçlarından 1 mm sıyırmak için
Relia-Tac Soket Kontak Pimi, ErkekCooper Ara Bağlantısı220-P02-100Bkz. Müttefik Elektronik Kedi # 70144761
www.alliedelec.com
Cımbız, Yüksek Hassasiyetli, Tırtıklı,Elektron Mikroskobu Bilimlerinde78314-00DPTFE'yi düz cımbızla sıyırırken 10T teli sıkıca kavramak için
www.emsdiasum.com
Cımbız, Yüksek Hassasiyetli, Pürüzsüz, Elektron Mikroskobu Bilimlerinde 4 3/478313-00B
www.emsdiasum.com
Cımbız, Ultra İnce Uçlar, Elektron Mikroskobu Bilimlerinde 4 3/478510-03T telin bir ucundan 1 mm PTFE çıkarmak için; korumalı kısmı pürüzsüz cımbızla kavrayın
www.emsdiasum.com
Tel Sıyırıcı, 16-26 AWGHerhangi Mikroşeritleri kesmek için bıçak ucunu kullanın
AdıŞirketKatalog NumarasıYorumlar<>
güçlüGöz Kapağı Cerrahisi
Cerrahi Aletler (Yüksek Kaliteli Paslanmaz Çelik)
2 x Pansuman Forseps, 4 TırtıklıBiyomedikal Araştırma Aletleri30-1205İkame edilebilir; Ameliyat tepsisinin dışındaki elektrotları/vidaları kavramak için ekstra forseps
brisurgical.com
Pansuman Forsepsleri, 3 adet TırtıklıBiyomedikal Araştırma Aletleri30-1200Değiştirilebilir
brisurgical.com
Alet TepsisiBiyomedikal Araştırma Aletleri24-1355Değiştirilebilir
brisurgical.com
Biyomedikal Araştırma CihazlarındaBıçak Sapı No. 3, 526-1000Değiştirilebilir
brisurgical.com
Mikro Diseksiyon Forsepsleri, 3,5 inç, İnce NoktalarBiyomedikal Araştırma Aletleri10-1630Değiştirilebilir
brisurgical.com
Mikro Diseksiyon Forsepsleri, 3,5 inç, Pürüzsüz Platform (0,3 x 5 mm)Biyomedikal Araştırma Aletleri10-1720
brisurgical.com
Mikro Diseksiyon Makası, 3,5 inç, Son Derece Hassas, 15 mm BıçaklarBiyomedikal Araştırma Aletleri11-2000Değiştirilebilir
brisurgical.com
Düz Kıymık Forseps, 3,5 inç Biyomedikal Araştırma Cihazları30-1600< br / > < href = http://brisurgical.com/ "
ikame edilebilir, SterilHerhangi Paslanmaz
Çelik Vidalarda 0-80 x 0.125Plastics One, Inc.0-80 x 0.125İkame edilebilir
www.plastics1.com
Alkol Hazırlama Pedleri, SterilFisher Scientific22-363-750 [Fisher ScientificKullanılabilir
www.fishersci.com
Betadine Povidon-İyotPurdue Frederick Co.6761815101 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
Betadine Povidon-İyot Hazırlama PedleriMoore Medical19-898-946 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
Pamuk Uçlu Swablar, OtoklavlanabilirHerhangiTipik olarak 7,6 cm veya 15,2 cm uzunlukta
Pim Mengenesi için Matkap Ucu, # 55 (0,052 inç)Herhangi BirMetal paslanmaya ve korozyona karşı dayanıklı olmalıdır
Gazlı Bez Pedleri, 2 inç x 2 inçFisher Scientific22-362-178 [Fisher Scientific]ikame edilebilir
www.fishersci.com
Genel Amaçlı Lateks/Nitril/Vinil EldivenHerhangi
Cam Boncuk SterilizatörüAmeliyatlar arasında herhangi birSterilize aleti
Isıtmalı Su Terapi Pompası w / Pedler x 2GaymarTP-500İkame edilebilir; Ayrı pompalar önerilir - 1'i ameliyat için, 1'i iyileşme için
Hipodermik İğneler 26G x 3/8 inç, SterilHerhangi Bir
İzofluranVedcoNDC 50989-150-12Manfacturer ikame edilebilir; Veteriner onayı gerekebilir
İzofluran Buharlaştırıcı Sistemi, Masa Üstü, SolunmayanPark Alanı BilimselV3000PKDeğiştirilebilir
www.parklandscientific.com
1,8-2 mm Bıçaklı Kuyumcular TornavidaHerhangi birMetal paslanmaya ve korozyona karşı dayanıklı olmalıdır
Ortho-Jet BCA Paketi (Diş Çimentosu)Lang DentalB1334toz (1 lb) ve sıvı
www.langdental.com
Basınç Regülatörlü Oksijen Tankı, BüyükYerel tedarikçi
Porselen Pota, Yüksek Formlu, Sırlı, 10 mlCoorsTek, Inc. içerir.07-965C [Fisher Scientific]Fisher FB-965-I Geniş Formlu Pota
www.fishersci.com
Puralube Veteriner Oftalmik Merhem, SterilHenry Schein CompanyNC0144682 [Fisher Scientific]ile ikame edilebilir
www.fishersci.com
Quatricide PV-15PharmacalPV-15Antimikrobiyal dezenfektan; ikame edilebilir
www.pharmacal.com
Stereotaksik Cerrahi için Sıçan Gazlı Anestezi Maskeleri Stoelting Company51610
www.stoeltingco.com
Kulak Çubuklu Sıçan Stereotaksik Aparatı (45 Derece)Kulak zarlarına zarar vermemek içinherhangi bir
Roboz Cerrahi Alet SütüRoboz CerrahiNC9358575 [Fisher Scientific]İkame edilebilir; otoklavlama sırasında aletleri yağlamak için
www.fishersci.com
Kemirgen Saç DüzelticiHerhangi Bir
Sodyum KlorürFisher ScientificS641-500 [Fisher Scientific]% 0.9 tuzlu su yapmak için; reaktif sınıfı; USP
www.fishersci.com
Paslanmaz Çelik Mikro Spatula (Bıçak: 0,75 L x 0,18 inç. W)Fisher Scientific21-401-15 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
Starrett Pin Mengene, 0,000 inç - 0,055 inçPaslanmaya ve korozyona direnmesi için önerilenherhangi bir
Steril Cerrahi EldivenlerHerhangi Bir
Sterilizasyon Sargısı, 20 inç x 20 inç, OtoklavlanabilirPropper Manufacturing11-890-8C [Fisher Scientific]Otoklavlanabilir malzemeleri sarmak ve ameliyat sırasında steril sahada kullanışlıdır
www.fishersci.com
Cerrahi Örtü, Steril/OtoklavlanabilirHerhangi biriSıçanlar için boyuta göre kesilmesi gerekebilir
Cerrahi Önlük*Herhangi*IACUC tarafından gerekiyorsa
Cerrahi MaskeHerhangi bir
Tüberkülin Şırıngası, Steril, 1.0 mlHerhangi Bir
Tartıİyi çözünürlüğe sahip olmalı (gram birim olarak)
İsim< / güçlü > <güçlü > Şirket < / güçlü >< güçlü > Katalog Numarası < / güçlü >< güçlü > Yorumlar< / güçlü >
Eyeblink Sistemi ve Bileşenleri (4 kemirgen sistemi varsayarak)
5 Kanal Komütatörü x 4Plastics One, Inc.SL2 + 3C
www.plastics1.com
>Bipolar Elektrot Kablosu, Çift 305 x 4Plastics One, Inc.305-305 80CM TT2 (C)Sıçan üzerindeki bipolar elektroda ve komütatöre fiş ucu sağlar; değiştirilmelidir
www.plastics1.com
Kablo, 5 Kanallı, Ekranlı, 26 AWG x 4Tümü Komütatörkablosu imal etmek için; bu sıfırdan yapılmalıdır
Edimsel Test Kutusu Odası (İçinde: 24 Y x 23 G x 14 D inç) x 4Med-AssociatesDeğiştirilebilir; iç boyutlar, akustik köpük için yer olacak şekilde, edimsel test kutusuna rahatça sığmalıdır; fan ile uyumlu - 55-60 dB
www.med-associates.com
Göz Kırpma Sistemi ve YazılımıJSA TasarımlarıN/AAraştırma laboratuvarı
için tescilli ve özelleştirilmişIsıyla Daralan Makaron (3/16 inç, 1/4 inç, 3/8 inç, 1/2 inç Çaplar)Herhangi Modifiyekomütatör kablosunu korumak için lehimli uçları ve ekleri
Siyah Hypalon ile Melamin Üçlü Tepe Akustik Köpük (24 x 48 inç)McMaster-Carr9162T5İkame edilebilir; 4 muhafaza odasına uyacak şekilde kesin
www.mcmaster.com
Edimsel Test Kutusu (Dış 12,5 L x 10 G x 13,5 inç Y), Komple x 4Med-AssociatesENV-007 Özel PaketPaslanmaz çelik ızgara zeminli ve özel üst kısımlı (komütatör kablosu için merkezde 3 inç delik)
www.med-associates.com
Osiloskop (Opsiyonel)HerhangiÖnerilen minimum özellikler: 200 MHz analog bant genişliği, 1 GS/s gerçek zamanlı örnekleme, 4 kanal; bkz. www.picotech.com
/td>
Piezo Tweeter'lar (Hoparlörler) x 4 (7 x 3 inç)MCM Electronics53-805Göz kırpma sistemi (2500 Hz - 25 KHz) için frekans aralığı özelliklerine uygun olmalıdır
www.mcmelectronics.com
Lehimleme İstasyonu, Lehim, Akı,Kalay Herhangi26 AWG kabloları dişi soketlere (erkek relia-tac kontak pimlerine uyan) ve bipolar fişlere lehimlemek için
Uyarıcı İzolatörler x 4WPI UluslararasıA365Bu üniteler 16-9V alkalin pillerle çalışır; uygun bir şarj edilebilir versiyon (A365R) mevcuttur
www.wpiinc.com
SL3C Komütatör x 4 için TripolarElektrot Kablosu, Inc.335-335 80cm TT3 CSıçan üzerindeki EMG başlığına ve komütatöre fiş ucu sağlar; değiştirilmelidir
www.plastics1.com
USB LED Işıkları x 4birUSB tabanlı ışık, sıçanlardan gelen EMG sinyalleriyle elektriksel "gürültüye" neden olmaz
www.plastics1.com
Web Kameraları x 4, Gözetim YazılımıÇalıştıran Herhangi Bir
PC BilgisayarıHerhangi Bir
Herhangi 4 3/4 güçlü # 3 Sap için >brisurgical.com< / a> # 10 Paslanmaz Çelik Cerrahi Bıçak ikame edilebilir , 45 derecelik çubuk önerilir Nikel kaplama veya eşdeğeri Herhangi Bir Tartı Herhangi MS Windows İşletim Sistemi

Kaynaklar

  1. Jones, K. L., Smith, D. W. Recognition of the fetal alcohol syndrome in early infancy. Lancet. 2, 999-1001 (1973).
  2. Stratton, K. R., Howe, C. J., Battaglia, F. C. Fetal alcohol syndrome: Diagnosis, epidemiology, prevention, and treatment. , National Academy Press. (1996).
  3. Streissguth, A. P., Barr, H. M., Martin, D. C., Herman, C. S. Effects of maternal alcohol, nicotine, and caffeine use during pregnancy on infant mental and motor development at eight months. Alcohol Clin Exp Res. 4 (2), 152-164 (1980).
  4. Streissguth, A. P., O'Malley, K. Neuropsychiatric implications and long-term consequences of fetal alcohol spectrum disorders. Semin Clin Neuropsychiatry. 5 (3), 177-190 (2000).
  5. May, P. A., et al. Prevalence and epidemiologic characteristics of FASD from various research methods with an emphasis on recent in-school studies. Dev Disabil Res Rev. 15 (3), 176-192 (2009).
  6. Sowell, E. R., et al. Mapping callosal morphology and cognitive correlates: Effects of heavy prenatal alcohol exposure. Neurology. 57 (2), 235-244 (2001).
  7. Sowell, E. R., et al. Abnormal development of the cerebellar vermis in children prenatally exposed to alcohol: Size reduction in lobules I-V. Alcohol Clin Exp Res. 20 (1), 31-34 (1996).
  8. Autti-Ramo, I., et al. MRI findings in children with school problems who had been exposed prenatally to alcohol. Dev Med Child Neurol. 44 (2), 98-106 (2002).
  9. Hamilton, D. A., Kodituwakku, P., Sutherland, R. J., Savage, D. D. Children with Fetal Alcohol Syndrome are impaired at place learning but not cued-navigation in a virtual Morris water task. Behav Brain Res. 143 (1), 85-94 (2003).
  10. Uecker, A., Nadel, L. Spatial but not object memory impairments in children with fetal alcohol syndrome. Am J Ment Retard. 103 (1), 12-18 (1998).
  11. Uecker, A., Nadel, L. Spatial locations gone awry: object and spatial memory deficits in children with fetal alcohol syndrome. Neuropsychologia. 34 (3), 209-223 (1996).
  12. Goodlett, C. R., Lundahl, K. R. Temporal determinants of neonatal alcohol-induced cerebellar damage and motor performance deficits. Pharmacol Biochem Behav. 55 (4), 531-540 (1996).
  13. Goodlett, C. R., Kelly, S. J., West, J. R. Early postnatal alcohol exposure that produces high blood alcohol levels impairs development of spatial navigation learning. Psychobiol. 15, 64-74 (1987).
  14. Bayer, S. A., Altman, J., Russo, R. J., Zhang, X. Timetables of neurogenesis in the human brain based on experimentally determined patterns in the rat. Neurotoxicol. 14 (1), 83-144 (1993).
  15. Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch Dis Child. 48 (10), 757-767 (1973).
  16. West, J. R. Fetal alcohol-induced brain damage and the problem of determining temporal vulnerability: A review. Alcohol Drug Res. 7 (5-6), 423-441 (1987).
  17. Zecevic, N., Rakic, P. Differentiation of Purkinje cells and their relationship to other components of developing cerebellar cortex in man. J Comp Neurol. 167, 27-48 (1976).
  18. Rufer, E. S., et al. Adequacy of maternal iron status protects against behavioral, neuroanatomical, and growth deficits in fetal alcohol spectrum disorders. PLoS One. 7 (10), e47499(2012).
  19. Tran, T. D., Kelly, S. J. Critical periods for ethanol-induced cell loss in the hippocampal formation. Neurotoxicol Teratol. 25 (5), 519-528 (2003).
  20. Pierce, D. R., Goodlett, C. R., West, J. R. Differential neuronal loss following early postnatal alcohol exposure. Teratology. 40 (2), 113-126 (1989).
  21. Tran, T. D., Jackson, H. J., Horn, K. H., Goodlett, C. R. Vitamin E does not protect against neonatal ethanol-induced cerebellar damage or deficits in eyeblink classical conditioning in rats. Alcohol Clin Exp Res. 29 (1), 117-129 (2005).
  22. Goodlett, C. R., Peterson, S. D., Lundahl, K. R., Pearlman, A. D. Binge-like alcohol exposure of neonatal rats via intragastric intubation induces both Purkinje cell loss and cortical astrogliosis. Alcohol Clin Exp Res. 21 (6), 1010-1017 (1997).
  23. Green, J. T., Tran, T. D., Steinmetz, J. E., Goodlett, C. R. Neonatal ethanol produces cerebellar deep nuclear cell loss and correlated disruption of eyeblink conditioning in adult rats. Brain Res. 956, 302-311 (2002).
  24. Cronise, K., Marino, M. D., Tran, T. D., Kelly, S. J. Critical periods for the effects of alcohol exposure on learning in rats. Behav Neurosci. 115 (1), 138-145 (2001).
  25. Tran, T. D., Cronise, K., Marino, M. D., Jenkins, W. J., Kelly, S. J. Critical periods for the effects of alcohol exposure on brain weight, body weight, activity and investigation. Behav Brain Res. 116 (1), 99-110 (2000).
  26. Steinmetz, J. E. Brain substrates of classical eyeblink conditioning: A highly localized but also distributed system. Behav Brain Res. 110 (1-2), 13-24 (2000).
  27. Thompson, R. F. The neurobiology of learning and memory. Science. 233 (4767), 941-947 (1986).
  28. Ivkovich, D., Eckerman, C. O., Krasnegor, N. A., Stanton, M. E. Eyeblink classical conditioning: Vol. 1 Applications in humans. Woodruff-Pak, D. S., Steinmetz, J. E. , Kluwer Academic Publishers. 119-142 (2000).
  29. Woodruff-Pak, D. S., Steinmetz, J. E. Eyeblink classical conditioning: Volume I - Applications in humans. , Kluwer Academic Publishers. (2000).
  30. Woodruff-Pak, D. S., Steinmetz, J. E. Eyeblink classical conditioning: Volume II - Animal models. , Kluwer Academic Publishers. (2000).
  31. Kishimoto, Y., et al. Implicit Memory in Monkeys: Development of a Delay Eyeblink Conditioning System with Parallel Electromyographic and High-Speed Video Measurements. PLoS One. 10 (6), e0129828(2015).
  32. Chen, L., Bao, S., Lockard, J. M., Kim, J. K., Thompson, R. F. Impaired classical eyeblink conditioning in cerebellar-lesioned and Purkinje cell degeneration (pcd) mutant mice. J Neurosci. 16 (8), 2829-2838 (1996).
  33. Freeman, J. H. Jr, Carter, C. S., Stanton, M. E. Early cerebellar lesions impair eyeblink conditioning in developing rats: Differential effects of unilateral lesions on postnatal day 10 or 20. Behav Neurosci. 109 (5), 893-902 (1995).
  34. Gerwig, M., et al. Trace eyeblink conditioning in patients with cerebellar degeneration: Comparison of short and long trace intervals. Exp Brain Res. 187 (1), 85-96 (2008).
  35. LaBar, K. S., Disterhoft, J. F. Conditioning, awareness, and the hippocampus. Hippocampus. 8 (6), 620-626 (1998).
  36. McCormick, D. A., Steinmetz, J. E., Thompson, R. F. Lesions of the inferior olivary complex cause extinction of the classically conditioned eyeblink response. Brain Res. 359 (1-2), 120-130 (1985).
  37. Clark, R. E., Zola, S. Trace eyeblink classical conditioning in the monkey: a nonsurgical method and behavioral analysis. Behav Neurosci. 112 (5), 1062-1068 (1998).
  38. Anderson, B. J., Steinmetz, J. E. Cerebellar and brainstem circuits involved in classical eyeblink conditioning. Rev Neurosci. 5 (3), 251-273 (1994).
  39. Thompson, R. F., Krupa, D. J. Organization of memory traces in the mammalian brain. Annu Rev Neurosci. 17, 519-549 (1994).
  40. Miller, M. J., et al. fMRI of the conscious rabbit during unilateral classical eyeblink conditioning reveals bilateral cerebellar activation. J Neurosci. 23 (37), 11753-11758 (2003).
  41. Geinisman, Y., et al. Remodeling of hippocampal synapses after hippocampus-dependent associative learning. J Comp Neurol. 417 (1), 49-59 (2000).
  42. Ivkovich, D., Stanton, M. E. Effects of early hippocampal lesions on trace, delay, and long-delay eyeblink conditioning in developing rats. Neurobiol Learn Mem. 76 (3), 426-446 (2001).
  43. Moyer, J. R. Jr, Deyo, R. A., Disterhoft, J. F. Hippocampectomy disrupts trace eye-blink conditioning in rabbits. Behav Neurosci. 104 (2), 243-252 (1990).
  44. Solomon, P. R., Vander Schaaf, E. R., Thompson, R. F., Weisz, D. J. Hippocampus and trace conditioning of the rabbit's classically conditioned nictitating membrane response. Behav Neurosci. 100 (5), 729-744 (1986).
  45. Kronforst-Collins, M. A., Disterhoft, J. F. Lesions of the caudal area of rabbit medial prefrontal cortex impair trace eyeblink conditioning. Neurobiol Learn Mem. 69 (2), 147-162 (1998).
  46. Weible, A. P., McEchron, M. D., Disterhoft, J. F. Cortical involvement in acquisition and extinction of trace eyeblink conditioning. Behav Neurosci. 114 (6), 1058-1067 (2000).
  47. Thomas, J. D., Tran, T. D. Choline supplementation mitigates trace, but not delay, eyeblink conditioning deficits in rats exposed to alcohol during development. Hippocampus. 22 (3), 619-630 (2012).
  48. West, J. R., Hamre, K. M., Pierce, D. R. Delay in brain growth induced by alcohol in artificially reared rat pups. Alcohol. 1 (3), 213-222 (1984).
  49. Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. Survivable stereotaxic surgery in rodents. J Vis Exp. (20), e880(2008).
  50. Christian, K. M., Thompson, R. F. Neural substrates of eyeblink conditioning: acquisition and retention. Learn Mem. 10 (6), 427-455 (2003).
  51. Kishimoto, Y., Nakazawa, K., Tonegawa, S., Kirino, Y., Kano, M. Hippocampal CA3 NMDA receptors are crucial for adaptive timing of trace eyeblink conditioned response. J Neurosci. 26 (5), 1562-1570 (2006).
  52. Shors, T. J., et al. Neurogenesis in the adult is involved in the formation of trace memories. Nature. 410 (6826), 372-376 (2001).
  53. Tran, T. D., Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Binge-like ethanol exposure during the early postnatal period impairs eyeblink conditioning of short and long CS-US intervals in rats. Dev Psychobiol. 49 (6), 589-605 (2007).
  54. Mizumori, S. J., Yeshenko, O., Gill, K. M., Davis, D. M. Parallel processing across neural systems: Implications for a multiple memory system hypothesis. Neurobiol Learn Mem. 82 (3), 278-298 (2004).
  55. Siegel, J. J., et al. Trace Eyeblink Conditioning in Mice Is Dependent upon the Dorsal Medial Prefrontal Cortex, Cerebellum, and Amygdala: Behavioral Characterization and Functional Circuitry(1,2,3). eNeuro. 2 (4), (2015).
  56. Murawski, N. J., Jablonski, S. A., Brown, K. L., Stanton, M. E. Effects of neonatal alcohol dose and exposure window on long delay and trace eyeblink conditioning in juvenile rats. Behav Brain Res. 236 (1), 307-318 (2013).
  57. Lindquist, D. H. Hippocampal-dependent Pavlovian conditioning in adult rats exposed to binge-like doses of ethanol as neonates. Behav Brain Res. 242, 191-199 (2013).
  58. Ivarsson, M., Svensson, P. Conditioned eyeblink response consists of two distinct components. J Neurophysiol. 83 (2), 796-807 (2000).
  59. Woodruff-Pak, D. S., Lavond, D. G., Thompson, R. F. Trace conditioning: abolished by cerebellar nuclear lesions but not lateral cerebellar cortex aspirations. Brain Res. 348 (2), 249-260 (1985).
  60. Takehara-Nishiuchi, K. The Anatomy and Physiology of Eyeblink Classical Conditioning. Curr Top Behav Neurosci. , (2016).
  61. Mattson, S. N., Schoenfeld, A. M., Riley, E. P. Teratogenic effects of alcohol on brain and behavior. Alcohol Res Health. 25 (3), 185-191 (2001).
  62. Goodfellow, M. J., Abdulla, K. A., Lindquist, D. H. Neonatal Ethanol Exposure Impairs Trace Fear Conditioning and Alters NMDA Receptor Subunit Expression in Adult Male and Female Rats. Alcohol Clin Exp Res. 40 (2), 309-318 (2016).
  63. Beylin, A. V., et al. The role of the hippocampus in trace conditioning: Temporal discontinuity or task difficulty? Neurobiol Learn Mem. 76 (3), 447-461 (2001).
  64. Port, R. L., Romano, A. G., Steinmetz, J. E., Mikhail, A. A., Patterson, M. M. Retention and acquisition of classical trace conditioned responses by rabbits with hippocampal lesions. Behav Neurosci. 100 (5), 745-752 (1986).
  65. Weiss, C., Bouwmeester, H., Power, J. M., Disterhoft, J. F. Hippocampal lesions prevent trace eyeblink conditioning in the freely moving rat. Behav Brain Res. 99 (2), 123-132 (1999).
  66. Brown, S. M., et al. Eyeblink conditioning deficits indicate timing and cerebellar abnormalities in schizophrenia. Brain Cogn. 58 (1), 94-108 (2005).
  67. Sears, L. L., Steinmetz, J. E. Effects of haloperidol on sensory processing in the hippocampus during classical eyeblink conditioning. Psychopharmacology. 130 (3), 254-260 (1997).
  68. Kronforst-Collins, M. A., Moriearty, P. L., Schmidt, B., Disterhoft, J. F. Metrifonate improves associative learning and retention in aging rabbits. Behav Neurosci. 111 (5), 1031-1040 (1997).
  69. Woodruff-Pak, D. S., Finkbiner, R. G., Sasse, D. K. Eyeblink conditioning discriminates Alzheimer's patients from non-demented aged. Neuroreport. 1 (1), 45-48 (1990).
  70. Oristaglio, J., Romano, A. G., Harvey, J. A. Amphetamine influences conditioned response timing and laterality of anterior cingulate cortex activity during rabbit delay eyeblink conditioning. Neurobiol Learn Mem. 92 (1), 1-18 (2009).
  71. Scavio, M. J., Clift, P. S., Wills, J. C. Posttraining effects of amphetamine, chlorpromazine, ketamine, and scopolamine on the acquisition and extinction of the rabbit's conditioned nictitating membrane response. Behav Neurosci. 106 (6), 900-908 (1992).
  72. Fortier, C. B., et al. Delay discrimination and reversal eyeblink classical conditioning in abstinent chronic alcoholics. Neuropsychology. 22 (2), 196-208 (2008).

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlişkisel ÖğrenmeElektromiyografik Göz Kırpma Aktivitesiİz Sürme DönemiKoşullu YanıtKoşulsuz YanıtAdaptif Koşullu Yanıtlar
Hipokampal disfonksiyon Fetal alkol spektrum bozuklukları, fare modeli değerlendirmek için izleme Eyeblink Klasik koşullanma kullanımı
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.