Yöntem makalesi

Hipokampal disfonksiyon Fetal alkol spektrum bozuklukları, fare modeli değerlendirmek için izleme Eyeblink Klasik koşullanma kullanımı

9.4K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/55350

⸱

5 Ağustos 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Psychology, East Carolina University, 2Multidisciplinary Studies Program in Neuroscience, East Carolina University

Bu makalede

Özet

Değerlendirmek için kullanılan izleme eyeblink Klasik koşullanma (ECC) bağımlı Hipokampal ilişkisel öğrenme edildi yetişkin Sıçanlarda yönetilen yüksek yoğunlukta (% 11,9 v/v) alkol erken neonatal beyin gelişimi sırasında. Genel olarak beyin işlev bozukluğu birçok psikolojik ve Biyomedikal ayarlarını algılamak için ses tanılama araçları ECC işlemlerdir.

Özet

Yenidoğan fareler yönetilen etil alkol (% 11,9 v/v) nispeten yüksek bir konsantrasyon postnatal gün 4-9, insanlarda Üçüncü trimesterde oluşan beyin değişiklikleri ne zaman fetal beyin hızlı örgütsel değişim uğrar ve benzer bir zaman hızlandırılmış. Fetal alkol spektrum bozuklukları (FASDs) bu modelin ciddi beyin hasarı, miktarı ve desen tıkınırcasına içme bazı hamile alkollü anneler içinde oluşan taklit üretir. İzleme eyeblink Klasik koşullanma (ECC), ilişkisel öğrenme genellikle alkol maruz yetişkin yavru görülür uzun vadeli Hipokampal disfonksiyon değerlendirmek için Yüksek mertebeden türevi nasıl kullanılacağını açıklar. Yaş 90 gün, kemirgen cerrahi olarak kayıt ile hazırlanmıştır ve electromyographic (EMG) ölçülen uyarıcı elektrotlar, sol göz kapağı kası aktivitesinden göz kırpma ve hafif şokta sol göz için posterior sırasıyla teslim. 5 gün kurtarma süre sonra onlar izleme ilişkisel öğrenme farklılıkları alkol maruz kalan ve fareler kontrol belirlemek için ECC 6 seans uygulandı. ECC aynı donanım ve yazılım, kullanılarak kolayca değiştirilebilir, böylece farklı sinir sistemleri tespit edilebilir birçok olası ECC yordamlardan birini izidir. ECC yordamları genel olarak, farklı beyin sistemleri ve beyin hakaret farklı koşullarda sinir patoloji tespit için tanılama araçları olarak kullanılabilir.

Giriş

Günümüzde sağlık hizmetlerinin ve bu hizmetlere erişimin iyileşmiş olduğu bir dönemde, alkol kötüye kullanımının küresel ölçekte önemli bir sağlık sorunu olmaya devam ettiğini hayal etmek oldukça güçtür. Ne yazık ki, yüksek miktarda alkol tüketen hamile bir annenin, fetal alkol sendromuna (FAS) maruz kalanlarda görüldüğü üzere, ömür boyu süren ciddi beyin hasarı ve nörogelişimsel bozukluklara sahip bir çocuk dünyaya getirebileceği gösterilmiştir1,2,3. Maternal alkol kullanım öyküsü kesinleşmiş kadınlarda, gelişmekte olan fetüs, kan alkol konsantrasyonlarında farklı farklı değişimler meydana getiren düşük miktardaki alkole veya farklı alkol tüketim modellerine karşı da hassastır. Bu ikinci durumda, çocuklar FAS olanlar kadar ciddi morfolojik veya nörodavranışsal bozulmalar sergilemese de, hafiften ağıra kadar değişen, yaşam boyu süren bilişsel yetersizlikler ve duygusal bozukluklar gösterebilirler3,4. Toplamda, FAS ve prenatal alkol kaynaklı bozulmaların daha hafif formları, fetal alkol spektrum bozuklukları (FASD) koleksiyonunu oluşturur. FASD'lerin tamamen önlenebilir olması şaşırtıcı değildir; ancak şaşırtıcı olan, alkol kötüye kullanımının oldukça yaygın olduğu popülasyonlarda, bu durumun sinirsel ve bilişsel yetersizliğin temel non-genetik nedeni olmaya devam ettiği ve ABD'deki genç çocukların yaklaşık %2 ila %5'ini ve Fransa ile İsveç gibi Avrupa ülkelerindekileri etkilediğidir. Sadece ABD'deki FAS insidansına bakıldığında, yaygınlık 1.000 canlı doğum başına 2 ila 7'dir5; bu da FASD'lerin genel insidansının FAS'a göre çok daha yüksek olduğu anlamına gelir.

FASD'li çocuklarda gerçekleştirilen nörogörüntüleme çalışmaları, daha ince bir corpus callosum6, daha küçük bir anterior cerebellar vermis7 ve daha küçük bir hippocampus8 gibi beyin anomalileri sergilediklerini göstermiştir. Bu beyin anomalileri, FASD'li çocuklarda gözlemlenen bazı uzun vadeli nörokognitif bozulmaların temelini oluşturmaktadır. Maternal alkol kaynaklı beyin değişikliklerindeki varyasyonlar ile belirli nörokognitif bozulmaların profilindeki (yani türü, kapsamı) varyasyonlar arasındaki kesin bağlantılar henüz net bir şekilde belirlenmemiştir. Ancak bir başlangıç noktası olarak hippocampus, prenatal alkol etkilerine karşı duyarlılığının belirlenmesi için mükemmel bir adaydır. Nitekim, FASD'li çocuklar yer öğrenimi9,10 ve gecikmeli nesne hatırlama11 gibi hippocampus aracılı davranışlarda eksiklikler göstermektedir.

FASD kemirgen modelleri, FASD'li çocuklarda görülen nörobilişsel bozulmalara yol açan mekanizmaların aydınlatılmasında paha biçilemez olduklarını kanıtlamıştır. Benimsemiş olduğumuz ve iyi yapılandırılmış bir binge-maruziyet modeli, sıçanlara postnatal 4-9. günler arasında alkol verilmesini içermektedir.12,13beynin, insan fötal 24. haftasına kıyaslanabilen ve 3. haftaya kadar uzanan, hızlı sinaps ve dendritik temas oluşumunun gerçekleştiği bir dönem olanrd trimester14,15,16,17Bu özel model, hipokampal nöronlarda belirgin kayba yol açmaktadır.18,19 ve serebellum gibi diğer birçok beyin bölgesindeki nöronlar12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23farklı alanlara yayılan ağır bilişsel fonksiyon bozuklukları eşlik eden21,24,25Sıçanlarda erken dönem alkol maruziyetinden kaynaklanan bilişsel bozulmalar farklı yollarla, özellikle de şu yöntemlerle değerlendirilebilir: göz kırpma klasik koşullanması (ECC). ECC, öğrenmenin temel mekanizmalarını bilimsel olarak araştırmak için bir yüzyılı aşkın süredir kullanılan bir paradigmadır26,27 ve bu haliyle, fetal alkol maruziyeti sonucunda ortaya çıkan olumsuz nörobilişsel sonuçların daha iyi anlaşılması için faydalı bir yöntem sunmaktadır. Araştırmacıların çeşitli farklı ECC prosedürlerini kullanmasına olanak tanıyan oldukça esnek bir paradigm olan bu yöntem, filogenetik ölçek boyunca birçok memeli türünde (farelerden insanlara kadar) ve beyin gelişiminin farklı aşamalarında incelenebilir.28,29,30,31Ayrıca, bu paradigmada çağrışımsal öğrenmeyi aracılık eden temel nöral devreler, aynı türler üzerindeki deneysel ve nöropsikolojik raporlarla desteklenmektedir.26,32,33,34,35,36,37.

ECC'nin bir formu olan iz ECC (trace ECC), bu makalede gösterilmiştir (Şekil 1). Bağlam sağlamak amacıyla, daha geleneksel bir form olan gecikmeli ECC (delay ECC) ile karşılaştırılmıştır. ECC paradigması, Nobel ödüllü fizyolog Ivan Pavlov tarafından ilk kez gerçekleştirilen, köpeklerle yapılan klasik koşullanma modeline göre oluşturulmuştur. Pavlov, tonlar gibi belirli uyaranların doğal olarak salyalanmaya yol açmadığını, ancak tonun yiyecek sunumundan önce gelmesi ve onunla örtüşmesi durumunda, ton-yiyecek ilişkisinin korunduğu şartla, bu ikisinin tekrarlanan sunumlarıyla salya tepkisinin güçlendirilebileceğini keşfetmiştir. Bu, ilişkisel gücün iki uyaran arasındaki anlık zamansal yakınlıkla aracılık edildiği ve böylece hayvan için öğrenme koşullarının optimize edildiği gecikmeli ECC'ye bir örnektir. Pavlov ayrıca, tonu kapatıp yiyeceği vermeden önce bir "iz" (trace) süresi bırakmak gibi ton-yiyecek ilişkisinin diğer varyasyonlarını da test etmiştir. Bu iki uyaran yeterince ayrı olduğunda, köpeklerin yiyecek verilmeden önce salyalama tepkileri vermesi çok daha zor hale gelmiştir. Tonun kapatılması ile yiyeceğin verilmesi arasındaki bu kopukluk, iz ECC'ye bir örnektir. Kemirgenler yiyeceğin varlığına doğal olarak salyalanmadıkları için bunun yerine hafif şok gibi türe daha uygun uyaranlar kullanılır; ayrıca tonlara karşı doğal olarak savunmacı göz kırpma tepkileri de vermezler. Bu arka planla, kemirgen ECC prosedürleri, belirli bir desibel seviyesinde bir ton sunmayı ve göz kırpma tepkisi uyandırmak için bu tonu göz kapağı kası (orbicularis oculi) veya temporalis kasına verilen hafif şokla belirli bir şekilde eşleştirmeyi içerir. Ton bir koşullu uyaran (CS), şok ise bir koşulsuz uyaran (US) olarak kabul edilir. Gecikmeli ECC'de önce CS sunulur; bu uyaran belirli bir süre boyunca açık kalır. Ardından US verilir. Bu iki uyaran belirli bir süre boyunca örtüşür ve ardından her ikisi de eş zamanlı olarak sona erer; US nedeniyle ortaya çıkan göz kırpma tepkisi bir koşulsuz tepki (UR) olarak kabul edilir. Bu prosedürde kemirgenler, bu itici uyaranı beklemek amacıyla, CS sunulduktan bir süre sonra ancak US'den hemen önce göz kırpma tepkisi vermeyi öğrenirler. Öğrenilen göz kırpma tepkisine koşullu tepki (CR) denir. İz ECC'de, CS ve US, iz aralığı olarak bilinen uyaran içermeyen bir zaman dilimiyle ayrılır; gecikmeli ECC'de olduğu gibi zamanla örtüşmezler. Bu aralık boyunca hayvanın, uyaranlar arasındaki ilişkisel gereksinimleri çözmesi beklenir. Gecikmeli ECC'ye benzer şekilde, hayvan CS kapandıktan sonra ancak US verilmeden hemen önce tutarlı bir şekilde kırpma tepkisi verdiğinde öğrenme gerçekleşir. Belirli bir miktar edinim eğitimiyle (CS'nin US ile eşleştirilmesi), öğrenme eğrileri (örneğin, farklı CR ölçümlerine dayalı olarak) gelişir. Lezyon ve nörogörüntüleme çalışmaları, gecikmeli ECC'de başarılı öğrenmenin sağlam serebellar-beyin sapı nöro-devrelerine bağlı olduğunu38,39,40 gösterirken; iz ECC, hipokampustan41,42,43,44 ve diğer kortikal yapılardan45,46 ek nöral katılım gerektiren daha yüksek düzeyli bir prosedürdür. İz CR'lerini başarıyla edinmek için gereken zamanlama ile ilgili gereksinimler nedeniyle, bu görevin öğrenilmesi (normal denekler için bile) daha zordur.

figure-introduction-1
Şekil 1: İzleme tipi göz kırpma klasik koşullanması. Tüpsüz kontrol (UC) grubundaki yetişkin bir sıçanı temsil eden gerçek bir dalga formu gösterilmektedir. İlk olarak ton CS (85 dB, 2.8 kHz) 380 ms boyunca sunulur. Ardından, herhangi bir uyaranın bulunmadığı 500 ms'lik bir izleme aralığı geçer. Sonrasında 100 ms boyunca şok US (1.6 mA) uygulanır. Bu görevde başarılı öğrenme, koşullu yanıt (CR) zaman penceresi (Toplam CR dönemi) sırasındaki göz kırpmaların frekansının (%) veya genliğinin (volt cinsinden) birçok eğitim oturumu boyunca artmasıyla gerçekleşir. Özellikle, sağlam bir hipokampusa sahip olan kemirgenler, genellikle şok US başlangıcından hemen önce (200-ms'lik bir pencere içinde) zamanlaması daha iyi olan CR'ler (Adaptif CR'ler) verirler. Ton CS başlangıcından sonraki ilk 80 ms içindeki irkilme yanıtları (SR'ler) ve koşulsuz yanıtlar (UR'ler) da ölçülür. İyi eğitilmiş kemirgenlerde ilişkisel olmayan SR'ler tipik olarak düşük veya yokken, UR'lerin frekans ve genlik açısından yüksek olması beklenir. Bu görev, kemirgenin CS bitişi ile US başlangıcı arasındaki ilişkiyi (izleme aralığı sırasında) köprülemeyi öğrenmesini gerektirir, bu nedenle gecikmeli ECC'ye kıyasla edinilmesi doğası gereği daha zordur. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Burada, 85 dB'lik bir ton CS'nin (2,8 kHz) 380 ms boyunca verildiği, ardından 1,6 mA'lik bir şok US'nin 100 ms boyunca uygulandığı ve bu stimülasyonların 500 ms'lik bir izleme süresiyle ayrıldığı bir izleme ECC prosedürü ile değerlendirilen, binge tarzında uygulanan neonatal alkol maruziyetinin olumsuz fonksiyonel sonuçlarını gösteriyoruz. Neonatal alkol maruziyetinin etkilerini hafifletmede kolin müdahalesi ve demir takviyesini inceleyen önceki çalışmalarda bu davranışsal analiz yönteminin faydasını rapor etmiştik18,47. Gerçekten de, izleme ECC, neonatal alkol kaynaklı hipokampal patolojiyi değerlendirmek için bir tanı aracı olarak kullanılabilir. Gecikmeli ECC'ye göre avantajı, FASD'li insanlarda bozulmuş olan hipokampal fonksiyonlardaki aksaklıkları tespit etmede daha hassas olmasıdır.

ECC'nin gösterimi, fetal alkol alanının çok ötesine uzanmaktadır. ECC'nin birçok varyantı (örneğin, geciktirme, izleme, bileşik, tersine çevirme); gelişim boyunca öğrenmedeki ontogenetik farklar, normal memelilerde çağrışımsal öğrenmenin nörobiyolojik temeli ve ayrıca teratojenler, çevresel toksinler, travmatik beyin hasarı, nörodejeneratif hastalıklar ve psikiyatrik durumlar dahil olmak üzere (bunlarla sınırlı olmamak kaydıyla) birçok zorluğa karşı farklı beyin sistemlerinin hassasiyetlerini aydınlatmak için kullanılabilir.

Protokol

NOT: Tüm prosedürler East Carolina Üniversitesi IACUC tarafından belirlenen politikalar uyarınca onaylanmış ve gerçekleştirilmiştir. Long-Evans sıçanlar, erkek damızlıklarla çiftleştirilen dişilerden üretilmiştir. Her üç tedavi grubuna ait yavrular (bkz. 1.1), aynı anneden olan bir batında üretilmiştir. Beş batın oluşturulmuş ve her batın doğum sonrası 3. günde (PD 3) 8 yavruya indirilmiştir. Her batından kalan iki yavru, ayrı deneylere atanmıştır. Çalışmaya hem erkek hem de dişi yavrular (maruz kalma grubu başına bir adet) dahil edilmiştir. Bu çalışmada toplam N = 27 yetişkin yavru incelenmiş; ECC eğitiminin 1. gününde onarılamayan kopuk 3T tel iletkenleri nedeniyle (bkz. 3.1.1) 3 sıçan çalışma dışı bırakılmıştır.

1. Grupların, Materyallerin ve Çözeltilerin Hazırlanması

  1. PD 3'te yavruları anneden ayırın ve sıcak tutmak için termo-regüle bir su ısıtma pedi üzerine yerleştirin. Rastgele bir seçim prosedürü kullanarak sıçan yavrularını şu üç gruptan birine yerleştirin: (1) alkol-intübe (AI); (2) şam-intübe kontrol (SI); veya (3) intübe edilmemiş kontrol (UC). Bir numaralandırma şemasına uygun olarak, 30G x 1/2 in iğne ile patilerini [toksik olmayan] mürekkeple dövmelemek gibi onaylanmış tanımlama prosedürlerini gerçekleştirin. Dövme işlemi bittiğinde yavruları anneye geri döndürün.
  2. 50 ve 10 boyutlarında polietilen (PE) kullanarak bir intragastrik intübasyon tüpü hazırlayın. Bu tüpün toplam uzunluğu kullanıcıya bağlıdır ve buna göre ayarlanabilir.
    1. Mikro disseksiyon makası kullanarak 3 in PE-50 tüp ve 6 in PE-10 tüp parçası kesin.
    2. PE-50 tüpü, steril 22 G x 1 in hipodermik iğneye dikkatlice takın.
    3. PE-10 tüpünün bir ucunu, PE-50 tüpünün açık ucuna yerleştirin. PE-10 tüpünü PE-50 tüpünün içine yönlendirmek için PE-10 tüpünün ucunda diyagonal bir kesik gerekebilir.
    4. Küçük bir PE-50 tüp parçası (yaklaşık 2-3 mm) kesin ve bunu PE-10 tüpünün açık ucuna yerleştirin. Bu parça görsel bir durdurucu görevi görecektir.
    5. Tamamlanmış intragastrik intübasyon tüpünü steril tutmak için taze %70 izopropil alkol içinde saklayın.
  3. 50 mL'lik şişelerde stok süt solüsyonu hazırlamak için aseptik prosedürleri uygulayın. Stok süt solüsyonu, ilk olarak West ve ark. (1984)48 tarafından oluşturulan bir diyet formülüne dayanmaktadır. Şişeleri kullanım zamanına kadar -18 °C'de saklayın. Kullanımdan önce iki şişe sütü ılık su kullanarak çözdürün.
    1. Steril bir şırınga kullanarak 7,16 mL %95 etil alkol (USP) çekin ve bunu bir adet 50 mL'lik süt şişesine ekleyin. Bu, günün ilk iki beslemesi boyunca sıçan yavrularına verilen %11,9 v/v alkol solüsyonu oluşturur (bkz. 2.1.1); toplam günlük alkol dozu 5,25 g/kg/gün'dür. Alkolün, zenginleştirilmiş süt solüsyonu içinde belirli bir hacimde (besleme başına 0,0278 mL/g) verilmesi için tasarlanmıştır.
      NOT: Bu miktar, batın boyutuna ve 3-4 günlük beklenen kullanıma göre ayarlanabilir. %11,9 v/v solüsyon elde etmek için eklenen alkol miktarı da ayarlanmalıdır.
    2. Bu şişeyi iyice çalkalayın ve uygun şekilde etiketleyin (örn., Sütte %11,9 v/v Etil Alkol).
    3. İkinci süt şişesini (alkol eklenmemiş olanı) uygun şekilde etiketleyin (örn., Sadece Süt) ve 2.1.1'de belirtilen ek beslemeler için kullanın.
    4. Her iki süt şişesini de buzdolabında saklayın.

2. Neonatal Alkol Maruziyeti (Postnatal Günler 4-9)

  1. PD 4'ten başlayarak AI ve SI yavrularına günde toplam 4 intubasyon yapın. Her intubasyon arasında 2 saat ara verin. AI yavrularına gerçek bir solüsyonla intubasyon yapıldığından, her intubasyon bir besleme olarak kabul edilir.
    1. Günün ilk iki beslemesinde AI yavrularına %11,9 v/v Sütte Etil Alkol solüsyonu ile intubasyon yapın ve ardından büyümelerini desteklemek için günün son iki beslemesinde Sadece Süt solüsyonu ile intubasyon yapın.
    2. SI yavrularına, AI yavrularının maruz kaldığı PE-10 tüp maruziyet süresinin aynını sağlamak için her iki saatte bir, herhangi bir solüsyon kullanmadan 4 kez intubasyon yapın. UC grubu herhangi bir intubasyon almaz.
  2. Yavruları damdan ayırın ve sıcak tutmak için termo-regüle bir su ısıtma pedine yerleştirin. Her yavruyu tartın ve vücut ağırlığını (g cinsinden) kaydedin. Her bir AI yavrusu için intubasyon hacmini belirlemek için önceden hazırlanmış besleme tablosuna bakın ve bunu bir kayıt formuna not edin.
    1. %11,9 v/v Sütte Etil Alkol solüsyonunu ılık bir su banyosuna yerleştirin ve iyice çalkalayın.
    2. Intragastrik intubasyon prosedürü:
      1. %70 izopropil alkolde saklanan intragastrik intubasyon tüpünü ılık suyla iyice yıkayın.
      2. Steril 1 mL'lik bir şırınga kullanarak doğru miktarda solüsyon çekin.
      3. İntubasyon tüpünün ucunu (PE-10 ucu) taze mısır yağına batırın (bu işlem yerleştirmeyi kolaylaştırır).
      4. PE-10 tüpünün uzunluğunu yavrunun ağzından midesine kadar ölçün. Durdurma noktasına rehberlik etmesi için PE-50 tıkacını ayarlayın.
      5. PE-10 tüpünü dikkatlice yavrunun ağzına yerleştirin, özofagus boyunca ilerletin, gastroözofageal sfinkteri hafifçe geçerek mideye ulaştırın. Yavruyu inceleyin, sabitleyin ve solüsyonu iletmek için şırınga pistonunu itin. Bunu düşük bir hızda gerçekleştirin.
        NOT: Tüpün yanlışlıkla trakeaya yerleştirilmesini önlemek için, ileri doğru ilerlemeden önce tüpü kıvrılacak ve yumuşak damağa temas edecek şekilde yönlendirin. Damak rehber olarak kullanılmalıdır; çünkü tüp doğal olarak bu bölgeden sapacak ve özofagusa doğru yönlendirilecektir. Aksi takdirde, ucun ventral yönde herhangi bir önemli sapması trakeaya girmesine neden olabilir. Giriş konumundan emin olunmadığı durumlarda tüpü çıkarmak ve intubasyona devam etmemek en iyisidir - bir sonraki denemede tüpü doğru şekilde tekrar yerleştirin.
      6. PE-10 tüpünü dikkatlice çıkarın ve yavruyu solüsyon geri kaçışı, kan veya fiziksel yaralanma açısından inceleyin. Eğer yavru sağlıklıysa, onu kardeşlerinin yanına yerleştirin. Tüm intubasyon prosedürü her bir yavru için yaklaşık 1 dakikadan kısa sürer ve her batındaki intubasyon uygulanan 4 yavru (2 AI, 2 SI) için toplamda yaklaşık 4 dakika sürer.
      7. SI yavruları için intragastrik intubasyon prosedürü: AI yavruları için uygulanan aynı PE-10 yerleştirme prosedürünü izleyin, ancak aynı süre boyunca (1 dk) herhangi bir solüsyon kullanmayın.
      8. Batındaki son yavru için prosedürler tamamlandıktan hemen sonra tüm yavruları damın yanına geri döndürün. Damı, bir sonraki besleme oturumuna kadar (2 saat sonra) vivaryuma geri götürün.
      9. İntragastrik intubasyon tüpünü ılık steril suyla yıkayın ve saklama için %70 izopropil alkol içerisine yerleştirin. Her besleme oturumundan önce tüpü suyla iyice yıkayın.
      10. İkinci besleme oturumu için 2.2'den (yavruların tartılması hariç) 2.2.2.9'a kadar olan adımları tekrarlayın. Son iki beslemede, AI yavrularına 2.2'de belirlenen aynı intubasyon hacimlerini kullanarak Sadece Süt solüsyonu ile intubasyon yapın.
  3. Temsili büyüme eğrileri elde etmek için sıçanları PD 15 (gözler açıldığında), PD 21 (sütten kesilme), PD 30, PD 60 ve PD 90 (cerrahi) gibi düzenli aralıklarla tartın.

3. Elektrotların Hazırlanması ve Modifikasyonu

  1. Her sıçan için bir adet elektromiyografik (EMG) "kafa ünitesi" (headstage) hazırlayın (Şekil 2). Kafa ünitesi, göz kırpma sistemi aracılığıyla göz kırpma yanıtlarının kaydedilmesine olanak tanır (Şekil 4).
    1. İki adet 3T boyutunda politetrafloroetilen (PTFE) kaplı paslanmaz çelik tel (her biri 5 cm), bir adet 10T boyutunda PTFE kaplı paslanmaz çelik tel (5 cm), üç adet erkek kontak pini ve 3 deliğe kadar kesilmiş bir adet mikro şerit soket izolatöründen oluşan bir kafa ünitesi oluşturun (bkz. 3.1.4).
    2. 10T telin ortasını tırtıklı yüksek hassasiyetli bir cımbızla kavrayarak ve kaplamayı pürüzsüz yüksek hassasiyetli cımbızla her iki yöne doğru çekerek PTFE kaplamayı soyun. Bu tel üzerindeki tüm kaplama kalıntılarının temizlendiğinden emin olun.
      1. 10T telin bir ucunu tırtıklı platformlu bir diş hekimi penseyle bir kontak pinine kenetleyin; bu tel toprak hattı olarak hizmet edecektir. Bir 3T teli, pürüzsüz yüksek hassasiyetli cımbızla bir uçtan 1 ila 1,5 mm mesafeden dikkatlice tutun. Kaplamanın geri kalanını bozmadan 1 ila 1,5 mm'lik PTFE kaplamayı soyun. Bir kontak pini, 3T telinin açıkta kalan ucuna kenetleyin.
      2. Aynı işlemleri ikinci 3T tel için de gerçekleştirin. Her iki tel, EMG kayıt elektrotlarının pozitif ve negatif uçları olarak hizmet edecektir.
    3. Tüm tellerin pinlere güvenli bir şekilde sabitlendiğinden emin olmak için çekme testleri yapın. Telleri bükmemeye veyale zarar vermemeye dikkat edin.
    4. Bir soket izolatör şeridinden, bir kablo soyucunun kesme bıçağıyla 3,5 deliğe kadar bir segment kesin (dördüncü deliğin ortasını kesin). Bu segmenti tam 3 deliğe indirecek şekilde küçültün ve gerekirse her iki tarafı zımparalayın. Bu işlem, 3 tam deliğin mevcut olmasını sağlamaya yardımcı olur. Pin-tel ünitelerini, kenetlenen uçlar izolatör segmentinin alt kenarıyla aynı hizaya gelene kadar mikro şeridin üç deliğine yerleştirin. 10T düzeneği, mikro şeridin orta deliğinde değil, dıştaki deliklerden birinde olmalıdır.
  2. Bipolar stimülasyon elektrotlarını modifiye edin (Şekil 2).
    1. Her sıçana bir bipolar stimülasyon elektrodu verin. Bu elektrot, ECC sırasında şok US olarak, bir stimulus izolatörü aracılığıyla (bkz. göz kırpma sistemi) küçük miktarda elektrik akımı uygular. Elektrotlar, üreticiden bükülmüş formda ve zırhlanmış olarak temin edilir.
    2. İki metal ucu bir V-şekli oluşturacak şekilde (5 mm genişlikte) 2-3 kez çözün ve ardından pürüzsüz yüksek hassasiyetli cımbızı kullanarak her bir "dişi" mümkün olduğunca düzeltin. Bir jiletle her bir dişin ucundaki zırhlamanın 1 mm'sini (her yönden) kazıyın. Her bir dişi düzensizlikler ve bükülmeler açısından inceleyin ve ek zırhlamayı kazımadan gerekirse düzeltin.
  3. EMG kafa ünitelerini ve bipolar elektrotları %95 etil alkol ile yıkayarak üretim yağlarını ve yabancı kalıntıları temizleyin. Kurumalarını bekleyin ve ardından otoklavlayın.

figure-protocol-1
Şekil 2: Elektromiyografik (EMG) kayıt elektrotları ve bipolar elektrot. Tamamlanmış EMG baş ünitesi (sağda, turuncu); üç erkek kontak pin, iki adet 3T boyutunda PTFE kaplı tel, bir adet 10T boyutunda PTFE kaplı tel ve modifiye edilmiş bir mikro şeritten oluşturulmuştur. Üç telin her biri yaklaşık 5 cm uzunluğundadır ve kontak pinlere sıkıştırılmıştır. Tamamlanmış bipolar elektrot (sağda, beyaz); burkmaları çözülmüş, yeniden düzeltilmiş ve V-şeklinde (5 mm açıklık) kalıplanmıştır. İki uç kısmındaki ekranlama kaldırılmıştır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayınız.

4. Göz Kapağı Cerrahi İşlemi (Postnatal 90. Gün)

  1. Materyallerin (ayrıntılı tedarik bilgileri için Materyaller bölümüne bakınız), hayvanların, cerrahi ve cerrahi dışı alanların hazırlanması:
    1. Cerrahi aletleri ve malzemeleri otoklavlayın - parantez içindeki ( ) sayı, yetişkin bir sıçan veya ölçüm başına yaklaşık olarak ne kadar gerektiğini belirtir: cerrahi aletler (ECU IACUC tarafından onaylandığı üzere, 4 sıçan başına 1 set), gazlı bezler (3-4), pamuk uçlu sürücüler (5-6), 20 x 20 sargı bezi (cerrahi oturum başına 4 adet), porselen pota (1), paslanmaz çelik mikrospatula (1), %0,9 salin (1 yıkama şişesi), Petri kabı (1) ve 0-80 paslanmaz çelik vidalar (sıçan başına 3 adet).
    2. İhtiyaç duyulan diğer steril malzemeler: 10 numara cerrahi bistüri ucu (4 sıçan başına 1 adet), cerrahi örtü (sıçan başına 1 adet), veteriner oftalmik pomad, povidon-iyot (1 yıkama şişesi), 26G x 3/8" hipodermik iğne (2), #55 matkap ucuyla nikel kaplı pin mengenesi, nikel kaplı düz uçlu kuyumcu tornavidası (1,8-2 mm uç).
    3. Onaylanmış araştırma/tıbbi sınıf bir dezenfektan kullanarak tüm cerrahi aletler ve malzemeler için steril bir bekleme alanı hazırlayın. Alan hazır olduğunda malzemeleri bu alana yerleştirin.
    4. Onaylanmış araştırma/tıbbi sınıf bir dezenfektan kullanarak steril bir cerrahi alan hazırlayın. Bu alanda, sıçan anestezi maskesi takılı termoregüle su ısıtma pedi, cam boncuk sterilizatörü ve izofluran gaz evaporatörü (anestezi için) bulunur. Evaporatörün, anestezi maskesine ve steril olmayan hayvan hazırlama prosedürleri için ayrı bir alanda bulunan indüksiyon odasına giden tüpleri vardır; her tüp kendi valfi ile kontrol edilir.
    5. Ellerinizi ve kollarınızı antimikrobiyal sabunla iyice yıkayın . Sterilizasyon poşetlerinde veya sargılarında paketlenmiş olan ürünlerin iç kısmına dokunmadan önceden açın. Aseptik prosedür uygulayarak steril eldivenler giyin ve ilgili tüm ürünleri cerrahi alana aktarın. Matkap ucunu pin mengenesinde uygun derinliğe (~ 2 mm) ayarlayın ve tornavidayı hazırlayın. Cerrahi işlem başlayana kadar steril malzemeleri steril bir sargı beziyle örtün.
    6. Tartı, elektrikli tüy kısaltıcı, 26G x 3/8 inç iğneli steril 1 mL şırıngalar (sıçan başına 1 adet), cerrahi kayıt defteri ve 0,1 mL/100 gram şeklinde uygulanan buprenorfin (0,03 mg/mL konsantrasyon) bulunan steril olmayan bir alan hazırlayın.
      UYARI: Buprenorfin, DEA çizelge III yarı sentetik bir opioiddir; uygun şekilde kilit altında tutulmalı ve kayıt altına alınmalıdır.
    7. İzofluran evaporatörünün uygun gaz seviyesinde olduğunu kontrol edin; seviye düşükse gaz ekleyin. Gaz akış ve karışım düğmelerini şimdilik kapalı tutun. O2 tüpünü açın ve tüm cerrahiler için yeterli gaz olduğundan emin olun.
    8. Her sıçanı tartın ve vücut ağırlığını cerrahi kayıt defterine kaydedin. Uygun enjeksiyon hacmini belirlemek için bir buprenorfin enjeksiyon tablosu kullanın.
    9. Evaporatörün indüksiyon odasına giden valfini açın ve cerrahi maske valfini kapalı tutun. Karışımı 3'e ve akış hızını 3'e ayarlayın (taşıyıcı gaz olarak %100 O2 ile 3 L/dk hacminde %3 izofluran).
    10. Bir sıçanı indüksiyon odasına yerleştirin ve uygun anestezi seviyesine (yavaş nefes alma, pedal refleksinin kaybı, göz kırpma refleksinin kaybı) ulaşmasını sağlayın. Anestezi seviyesine ulaştığında sıçanı odadan çıkarın.
    11. Tüy kısaltıcıyı kullanarak başını tıraş edin; insizyon bölgesi ve sol göz kapağı için yeterli miktarda cildi açığa çıkarın. Gerekiyorsa, tıraşa devam etmeden önce tekrar anestezi seviyesine ulaşması için hayvanı indüksiyon odasına geri yerleştirin.
    12. İzopropil alkol ve povidon-iyot ile ardışık olarak üç kez silerek açığa çıkan cildi dezenfekte edin. Gerekiyorsa, cerrahi masaya aktarmadan önce tekrar anestezi seviyesine ulaşması için indüksiyon odasına geri yerleştirin.
  2. Cerrahi İşlem
    1. Evaporatörün anestezi maskesine giden valfini açın ve indüksiyon odası valfini kapatın. Karışımı 2,5'e ve akış hızını 2'ye ayarlayın (%100 O2 taşıyıcı gaz ile 2 L/dk hacminde %2,5 izofluran). Sıçanı stereotaksik aparata aktarın ve başını kesici diş barına ve kulak barlarına sabitlemek için standart prosedürleri uygulayın (örnek için bkz. Geiger et al., 200849).
    2. Sıçana cerrahi öncesi buprenorfin (SC) enjeksiyonu yapın ve iğneyi (kapağı açık şekilde) dikkatlice kesici/delici alet kutusuna atın. Sıçanın üzerine, sadece cerrahi bölgeyi açığa çıkaran ve burayı vücudun geri kalanından izole eden steril bir cerrahi örtü serin.
    3. Cerrahi maske, cerrahi bone, cerrahi önlük, koruyucu gözlük ve IACUC tarafından zorunlu tutulan diğer tüm kişisel koruyucu donanımları giyin. Ellerinizi ve kollarınızı antimikrobiyal sabunla iyice yıkayıp ovalayın. Steril prosedür uygulayarak steril eldivenler giyin.
    4. Gözlerin kurumasını önlemek için pamuk uçlu bir sürücü yardımıyla her iki göze az miktarda oftalmik pomad uygulayın.
    5. Sıçan uygun anestezi seviyesini sergilediğinde cerrahi işleme başlayın. Cerrahi boyunca sıçanı sürekli izleyin ve izofluran seviyesini periyodik olarak kontrol edin. Cerrahi sırasında, sıçanın anesteziye verdiği yanıta göre akış ve karışım düğmelerini uygun şekilde ayarlayın.
    6. Bir bistüri ucuyla kraniyumun orta hattında anterior-posterior bir insizyon yapın. Bu insizyon, gözlerin önünde (yani frontal kemiği açığa çıkaracak şekilde) ve lambdoid suturun biraz arkasında yeterli alanı açığa çıkarmalıdır.
    7. Aşırı kanamaya neden olmamaya dikkat ederek kraniyumun üzerindeki periosteumu kazıyın. Fazla bağ dokusunu ve kanı pamuk uçlu bir sürücü ile silin.
    8. Bir parietal kemikte coronal suturun hemen arkasından başlayarak, bir pin mengenesi yardımıyla matkap ucuyla bir delik açın. Kan ve kemik kalıntılarını pamuk uçlu bir sürücü ile temizleyin. Bir 0-80 vidayı splinter pensetiyle dişli kısmından tutun ve kuyumcu tornavidasıyla deliğe sabitleyin; vidayı, kortikal beyin dokusuna zarar vermeyecek kadar (genellikle 3-4 tam tur) sıkın.
    9. Kafatasına iki adet daha 0-80 vida sabitlemek için 4.2.8'de açıklanan prosedürleri izleyin; birini karşı parietal kemiğin coronal suturunun hemen arkasına, diğerini sağ lambdoid suturun hemen anterioruna yerleştirin. Dental simanın (bkz. 4.2.18) kraniyuma sabitlenmesi için 3 vidanın yeterli olduğu görülmüştür; zira dördüncü bir vida (sol lambdoid suturun anteriorunda) bipolar elektrodun yerleştirilmesini engelleyecektir.
    10. Petri kabından bir EMG kafa ünitesi (headstage) alın. Kafa ünitesini, 10T teli sıçanın sağ tarafında kalacak şekilde konumlandırın. 10T telini, mikro şeridin alt kenarına paralel olacak şekilde yukarı doğru bükün. Telin anterior ve posterior 0-80 vidalarının etrafından dolanabilmesi için sağ tarafa doğru hafifçe bükün. Ulaşabileceğiniz yakın bir yere kenara ayırın.
    11. [Sağ elini kullananlar için] Sol ele 3 inçlik pansuman penseti, sağ ele 4 inçlik pansuman penseti alın. 4 inçlik pansuman pensetiyle sol gözün insizyon bölgesindeki üst deriyi tutun ve 3 inçlik pansuman pensetini bu gözün köşesine yöneltip deriyi buradan tutun. 4 inçlik pansuman pensetini bırakırken 3 inçlik pansuman pensetiyle tutuşu sürdürün.
    12. Bir adet 26G x 3/8 inç iğne alın ve göz kapağının köşesinden geçirin; iğneyi eğimli tarafı yukarı bakacak şekilde döndürün. Orta 3T telini iğne deliğinden geçirmek için platformlu mikro diseksiyon pensetini kullanın. Teli tamamen aşağı indirmeden birkaç santimetre boyunca delikten itin; bu tel negatif uçtur.
    13. Dış 3T telini göz kapağının orta kısmına yerleştirmek için 4.2.11 ve 4.2.12'de açıklanan prosedürleri uygulayın; bu tel pozitif uçtur.
    14. Bir elinizle her iki iğneyi, diğer elinizle (veya pensetle) kafa ünitesini tutun. Tek bir sürekli hareketle kafa ünitesini aynı yöne yönlendirirken iğneleri göz kapağından çekin. Gerekiyorsa, 10T teli hayvanın sağ gözüne doğru gelecek şekilde kafa ünitesini döndürün; 3T tellerinin çapraz geçmesine izin vermeyin. Pozitif ucun göz kapağının ortasında olduğunu doğrulamak için ince uçlu penset kullanın.
    15. Kafa ünitesini, gözlerin ortasına gelecek ve bilateral yerleştirilen vidaların anteriorunda, frontal kemiğin üzerinde optimal bir pozisyonda olacak şekilde ayarlayın. Kafa ünitesini bir elinizle, 3 inçlik pansuman pensetini diğer elinizle tutun. 10T telini 10T tarafındaki bir veya her iki vidanın etrafına sarın.
    16. Bir ele 3 inçlik pansuman pensetini, diğer ele 4 inçlik pansuman pensetini alın. 3 inçlik pansuman pensetiyle sol şakağa doğru olan insizyon bölgesindeki deriyi tutun. 4 inçlik pansuman pensetiyle deriyi (yani yüzeysel fasyayı) temporalis kasından ayırarak küçük bir "cep" oluşturun. Bu cebin boyutunu artırmak için iris makasıyla sol gözün köşesine doğru ilerleyerek daha fazla bağ dokusunu kesin. Çok derine inmemeye veya kan damarlarını kesmemeye dikkat edin.
    17. Bir bipolar elektrot alın ve tel uçlarını temporalis kasının eğimine uygun hale getirin; iki uç (dorsal ve ventral) sol gözün posteriorunda (videoya bakınız) yer almalı ve bipolar elektrodun alt ucu doğrudan kraniyumun üzerine konumlanmalıdır. Komütatör kablo fişlerinin (Şekil 3) engelsiz bir şekilde takılabilmesi için kafa ünitesi ile bu elektrot arasında yeterli mesafe bırakın.
    18. Dental siman tozunu potaya dökün - potanın yaklaşık 1/3'ü ile başlayın ve ardından miktarı gerekirse ayarlayın. Kıvamı sulu olana kadar sıvı bileşeni ekleyin ve bu bileşenleri spatula ile karıştırın. Simanın kıvamı daha viskoz hale geldiğinde, deri kenarlarını en az 1/8 inç sınırlarla kapatacak şekilde insizyon bölgesine uygulayın.
      1. Sıçanın her iki gözünü kapatmasını engellemeden, kafa ünitesini ve bipolar elektrodu sabitleyecek kadar siman uygulayın. Sıçanın tüyünün istenmeyen bölgelerine damlayan simanı hızlıca silin.
    19. Bipolar fişin vidalanabilmesi için bipolar elektrodun en az 4-5 dişinin simanla kapatılmadığından emin olun (Şekil 3). Kafa ünitesindeki fazla simanı temizleyin - mikro şeridin üstü ve üç kontak pini temiz olmalıdır. Siman hızla sertleşir ve bu elektrotlardan herhangi birinin komütatör kablo fişlerine tam olarak bağlanmasını kolayca engelleyebilir. Kısmen kurumuş fazla simanı temizlemek için splinter penseti kullanın.
    20. Simanın sertleşmesini bekleyin; sertleştiğinde şeffaf hale gelir. Çalışma alanı için birkaç santimetre bırakacak şekilde, iki 3T telinin fazla uzunluklarını mikro diseksiyon makasıyla kesin.
    21. Sol elde platformlu mikro diseksiyon pensetini, sağ elde ince uçlu mikro diseksiyon pensetini tutun. Sol pensetle bir 3T telini göz kapağının hemen önünden tutun. Sağ pensetle, daha fazla 3T telini açığa çıkarmak için göz kapağını yukarı itin ve orada tutun. Sol penseti bırakın ve sol elinizle kafa ünitesini tutun (bu aşamada sabitlendiğinden emin olun). Telin orbicularis oculi kası ile temas etmesini sağlayan PTFE kaplamanın bir kısmını soyup çıkarmak için sağ penseti kullanın.
      NOT: 3T telini çok sert çekmemeye dikkat edin, aksi takdirde kontak pininden ayrılabilir. Eğer bir tel ayrılırsa, sertleşmiş siman kemik kırılmasına neden olmadan kraniyumdan kolayca ayrılmayacağı için kontak pinini değiştirmek mümkün olmayacaktır.
    22. İkinci 3T telindeki fazla PTFE'yi soyup çıkarmak için 4.2.21'deki adımları uygulayın.
    23. İki mikro diseksiyon pensetini 4.2.21'de belirtildiği gibi tutun (solla platformlu, sağla ince uçlu). Sol penseti bir 3T telinin hemen önüne, sağ pensetin göz kapağının hemen önüne yerleştirilebileceği bir boşluk bırakacak şekilde konumlandırın. Teli her iki pensetle tutun.
      1. Sağ penseti sabit tutup sol penseti yukarı ve göz kapağına doğru döndürerek tek bir hareketle bir "kanca" oluşturun. Önce sağ penseti, ardından sol penseti dikkatlice bırakın.
        NOT: Elektrotları göz kapaklarına kancalamak, korneaya sürtünme olasılığını en aza indirir. Bu aynı zamanda davranışsal test aşamasının herhangi bir noktasında tel kırılması olasılığını da azaltır. Kancalama, tüm hayvanlarda telin korneaya sürtünmesini tamamen önlemese de, yüksek göz kırpma genlikleri (5.1.7'de dijital osiloskopla ölçülen) ve günlük ameliyat sonrası sağlık gözlemleriyle (aşırı gözyaşı, kısmi göz kapağı kapanması, göz hasarına bağlı hareket kaybı) yansıtıldığı üzere, genellikle herhangi bir göz hasarı belirtisi göstermezler. Eğer bir sıçan başlangıçta rahatsızlık belirtileri gösterirse, izofluran ile anesteziye alınır (bkz. 4.1.10) ve elektrotları yeniden incelenir ve/veya yeniden konumlandırılır. Korneanın kurumasını önlemek için oftalmik pomad uygulanır. Sıçan, prosedür sonrası herhangi bir göz komplikasyonu açısından günlük olarak gözlemlenir ve komplikasyonlar devam ederse veteriner yardımı alınır. Elektrot yeniden konumlandırılması veya veteriner tedavisi ile düzeltilemeyen şiddetli göz komplikasyonları sergileyen sıçanlar, ECU IACUC'nin standart çalışma prosedürlerine göre insani şekilde ötanize edilir.
    24. İkinci 3T teli için 4.2.23'teki adımları uygulayın. Fazla teli mikro diseksiyon makasıyla kesin.
    25. Bir elinizle vücudunu desteklerken diğer elinizle sıçanı kulak barlarından kurtarın. Başını kan veya kalıntı açısından kontrol edin, gerekirse temizleyin ve ameliyat sonrası buprenorfin enjeksiyonu yapın.
    26. Sıçanı, iyileşmeye yardımcı olması için bir ısı kaynağı (termoregüle su ısıtma pedi gibi) bulunan bir iyileşme kutusuna yerleştirin. Cerrahi kayıt defterine operasyonun bitiş saatini ve cerrahi sırasında sıçanla ilgili pertinent tüm notları kaydedin. Sıçanın solunumunu izleyin; sternal rekumbans sergilediğinde veya hareket etmeye başladığında ana kafesine döndürülebilir.
    27. Aletleri (hasar görebileceği için mikro diseksiyon pensetleri hariç) boncuk sterilizatörü ile yeniden sterilize edin, cerrahi alanın aseptik kaldığından emin olun ve birden fazla göz kapağı cerrahisi yapılacaksa aseptik prosedürleri tekrarlayın.

5. İzlemek İçin Göz Kırpma Klasik Koşullanma Prosedürü

figure-protocol-2
Şekil 3: Göz kırpma koşullanması için modifiye edilmiş operant koşullanma kutusu. Sıçanlar serbestçe hareket eden memelilerdir; bu nedenle, başa takılan EMG ve bipolar fişlerden gelen elektriksel sinyal temasını sürdürmek için döner bir komütatör kullanılır. Komütatör, sıçan üzerindeki baskıyı azaltmak için karşı ağırlıklı hale getirilmiş olan destek koluna sabitlenmiştir. Bir piezo tweeter (hoparlör), 85 dB düzeyinde 2.8 kHz'lik bir ton yayar ve bu değerler düzenli olarak kalibre edilir. Akustik köpük, çevresel gürültünün azaltılmasına yardımcı olur. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-protocol-3
Şekil 4: Göz kırpma koşullanma sistemi.Bu özel yapım sistem; sıçanlardan gelen sinyalleri filtreleyen ve yükselten bir EMG İntegratör ünitesi, tonların ve şokların yanı sıra çeşitli uyaranlar sunan bir Uyaran Kontrol ünitesi, EMG sinyal kazancını artırmak için her bir operant kutusu için bir ön amplifikatör ve her bir operant kutusu için bir uyaran izolatöründen oluşmaktadır; sistem farklı şok seviyeleri (mA cinsinden) sağlamaktadır. Alışma ve kazanım süreçleri sırasında tanı koyma amaçlı olarak bir dijital osiloskop (standart göz kırpma sisteminin bir parçası değildir) kullanılır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

  1. Alıştırma ve edinme eğitimine ameliyattan 5 gün sonra başlayın. Her sıçana, daha büyük bir ses yalıtımlı oda içinde bulunan modifiye edilmiş bir operant koşullanma kutusundan oluşan eğitim düzeneğine alışmaları ve tutulmaları için bir gün süre tanıyın.Şekil 3) - ve ardından 6 günlük edinim eğitimini takip edin. Alıştırma ve edinim seanslarını, özel olarak tasarlanmış bir göz kırpma sistemi kullanarak gerçekleştirin (Şekil 4).
    1. Günlük kayıt tutmak için bir eğitim günlüğü dosyası oluşturun ve bunu yazdırın. Bu günlükte, sıçan grubunun eğitim kutularına psödo-rastgele (veya başka bir randomizasyon yöntemiyle) önceden atanmış olması gerekir.
    2. Eyeblink sistemini ve bilgisayarı açın, eyeblink yazılımını çalıştırın. Yazılımın bu sürümü, bağımsız olarak çalışan farklı modüllere (veya uygulamalara) sahiptir. Denek bilgilerini (oturum numarası, hayvan kimliği, cinsiyet, ağırlık ve kutu numarası) içeren bir *.RAT dosyası oluşturmak için Animal modülünü çalıştırın. Tek bir RAT dosyası, bir denek grubunu oluşturan dört sıçanla kadar yönetebilir. Değerleri uygun şekilde girin ve dosyayı kaydedin. Eğitilecek her sıçan grubu için ayrı bir RAT dosyası oluşturun.
    3. Sıçanları vivaryumlarından test odasına taşıyın ve kapıyı kapatın. Her bir sıçanı 5 dakika boyunca tutun.
    4. Sıçanı belirlenmiş kutusuna aktarın ve komütatör kablosundaki EMG ve bipolar fişleri, başındaki ilgili EMG kafa katına ve bipolar elektroda bağlayın.
      NOT: Komütatör kablosuyla ilk kez karşılaşıldığında, sıçan çabalayabilir ve stres belirtileri gösterebilir. Sıçana dikkatli davranın ve stresi azaltmak için başarısız bağlantı denemeleri arasında dinlenme süreleri verin.
    5. Dönen bir komütatör kullanın 360° bir sıçan bir kutu içerisinde serbestçe hareket ederken elektriksel sinyal iletimi/alımı sürdürülürken. Ham sinyali filtreleyen ve yükselten EMG İntegratör ünitesine giden 5 kanala (3'ü EMG elektrotları, 2'si bipolar elektrotlar için) sahiptir.
    6. Sıçanın serbestçe hareket ettiğinden, komütatör kablo düzeneğinin veya destek kolunun ağırlığıyla engellenmediğinden emin olun. Gerekiyorsa destek kolunun arkasındaki karşı ağırlığı ayarlayın. Tüm fişlerin güvenli bir şekilde takılı olduğunu kontrol edin ve ardından kutu kapağını kapatın. Aynı bağlantı/kontrol prosedürünü tüm sıçanlar için uygulayın.
    7. Anormal sinyalleri (örneğin, yüksek frekanslı ve/veya yüksek genlikli elektriksel aktivite) gözlemlemek için bir osiloskop ve varsa durumlarını (örneğin, motor aktivite, çevreye duyarlılık, ağrı belirtileri) kontrol etmek için bir video gözetleme sistemi kullanın. Gözlemlenen tüm sorunları eğitim günlüğüne kaydedin.
    8. Sıçanların 10 dakika boyunca bölmelerine alışmalarına izin verin ve ardından onları ana kafeslerine geri koyun.
    9. Operant kutularını temizleyin ve dezenfekte edin, yerleri süpürün ve masa(ları) temizleyin. Bu prosedürleri her oturumdan sonra gerçekleştirin.
  2. Edinim eğitimi 6 ardışık gün (oturum) boyunca gerçekleştirilir.
    1. 1. Gün: Bir sıçanı belirlenmiş kutusuna aktarın ve komütatör kablosundaki EMG ve bipolar fişleri, hayvanın başındaki ilgili EMG kafa katına ve bipolar elektroda bağlayın. 5.1.6 ve 5.1.7'de belirtilen işlemlerin aynısını gerçekleştirin.
    2. Stimülasyon izolatörlerini açın ve verilecek akımı 0,4 mA'ya (videoda gösterildiği gibi 10 mA'nın %4'ü) ayarlayın. İzolatörler, bipolar elektrodun dorsal ve ventral uçları arasında elektrik akımını sırayla (yani denemeden denemeye) iletir. Bu, tekrarlanan stimülasyon uygulamaları sırasında (her bir kas bölgesindeki) kas lifi yorgunluğunun azaltılmasına yardımcı olur.
    3. Tüm sıçanlar için her denemede ortaya çıkan tüm göz kırpma yanıtlarını ve sergilenen toleransları gözlemleyin. Her iki denemede bir, 1,6 mA'e ulaşana kadar (7. ve 8. denemelerde) her sıçan için şok US yoğunluğunu 0,4 mA artırın. Tüm sıçanların kutularında normal şekilde tepki verdiğini, tüm amplifikasyon ve kazanç ayarlarının sabit olduğunu ve onlardan gelen elektrik sinyallerinin (yani düşük/az EMG gürültüsü) uygun olduğunu iki kez kontrol edin. Edinim eğitiminin tüm günlerinde 1,6 mA şok US yoğunluğu kullanın.
      NOT: Eğer bir sıçan belirli bir şok düzeyine karşı ağrı belirtisi gösterirse (örneğin, yerden yükseğe zıplama, duvarlara tırmanma, etrafta koşturma), deneme durdurulur ve hayvan iki deneme boyunca bir önceki mA ayarına (0,4 mA altı) geri döndürülür. Sonrasında, sıçana tolere edemediği daha yüksek şok değeri tekrar uygulanır ve eğer tolerans gösterilirse, 1,6 mA değerine ulaşana kadar artan değerler verilir. Eğer hiçbir değeri tolere edemezse, eğitim boyunca tolere edebildiği bir alt değer (0,4'lük artışlarla) kullanılır.
    4. EMG aktivitelerinde anormal sinyalleri gözlemlemek için bir osiloskop kullanın (örn., yüksek frekanslı ve/veya yüksek genlikli elektriksel aktivite) ve durumlarını kontrol etmek için bir video gözetim sistemi (örneğin, motor aktivite, çevreye duyarlılık, ağrı belirtileri).
      NOT: İz ECC'nin Açıklaması: Kaydedilen EMG dalga formlarını içeren temsili bir deneme epoku şurada gösterilmiştir: Şekil 1 ve izleme ECC prosedürü videoda ayrıntılı olarak açıklanmıştır. İzleme koşullandırma eğitim dosyası, her 10 denemede bir 100 deneme (90 eşleştirilmiş CS-US denemesi ve 10 sadece CS denemesi) sunacak şekilde ayarlanmıştırth deneme) ve denemeler arası ortalama aralık 30 sn'dir. Tüm eğitim oturumu (herhangi bir duraklama olmadığı varsayıldığında) yaklaşık 52 dk sürer. Tüm sıçanlar 1. Oturumda tecrübesizdir ve birkaç günlük eğitim boyunca ilerledikçe (CR'lerin ekspresyonu ile belirlendiği üzere) farklılaşan öğrenme eğrileri geliştireceklerdir.
    5. Eğitimi başlatın: Blink yazılım modülünü çalıştırın. İstendiğinde, doğru RAT dosyasını ve şunun için eğitim dosyasını seçin: "izlemek" göz kırpma koşullanması.
    6. Eğitim günlüğüne başlangıç saatini ve deney yapan kişinin adını yazın. Bu noktada tüm etkinlikleri izleyin: uygun EMG sinyalleri, şok US'ye verilen iyi göz kırpma yanıtları (yani yüksek/sık UR'ler), hayvanların sağlık durumu ve donanımın düzgün çalışması. Dikkat çekici tüm notları eğitim günlüğüne kaydedin.
    7. Veri toplama işlemi, yazılım tarafından otomatik olarak RAW dosyaları şeklinde (her bir sıçan için günde bir dosya) kaydedilir. RAW dosyaları; irkilme tepkileri (SR'ler), koşulmamış tepkiler (UR'ler) ve koşullu tepkiler (CR'ler - toplam ve adaptif) için EMG genliğini (volt cinsinden), frekans sayılarını, latansı ve alan verilerini içerir. Şok artefaktı, UR döneminin ilk 100 ms'lik kısmını maskelediğinden, UR verileri yalnızca UR döneminin son 140 ms'lik kısmında yer alır.
    8. Eğitim sonunda, yazılım otomatik olarak kapanacaktır. Tüm sıçanları eğitim kutularından çıkarın ve şuralara geri döndürün: vivaryum.
    9. Tüm sonraki eğitim günleri için 5.2.5 - 5.2.6 adımlarını tekrarlayın. Belirli bir günde Blink modülünü başlatmadan önce, RAT dosyası içindeki oturum numarasını güncelleyin. Bu işlem, o günkü tüm sıçanlar için yeni RAW dosyalarının oluşturulmasını sağlar. Eğitimden hiçbir sıçanın çıkarılmadığı varsayıldığında, her sıçanın 6 RAW dosyası olmalıdır.
  3. RAW dosyalarını işleyin ve istatistiksel analiz için filtrelenmiş bir dosya oluşturun.
    1. Analiz modülünü çalıştırın. Her bir sıçan için her oturumu, problemli denemeler açısından deneme bazında inceleyin. Bu işlem, çeşitli nedenlerle bozulmuş olabilecek denemeleri ayıklamak için gerçekleştirilir (örneğin, aşırı CS öncesi temel hat aktivitesi, aşırı hareket, elektrot ayrılması, kablolama/tel sorunları). Yazılım, deneyciye tespit etme ve temizleme konusunda yardımcı olan algoritmalara sahiptir "hatalı deneyler" filtrelenmiş veri setinin bir parçası olmaktan.
    2. Filtrelenmiş verileri bir hesap çizelgesi programına aktarın ve ilgili istatistiksel analizleri gerçekleştirin.

Sonuçlar

Eyeblink yazılım ölçümleri birçok türleri için büyük ve kapsamlı bir veri kümesi sağlama yeteneğine sahiptir. Kısalık için biz bu çalışmada, raporu temsilcisi öğrenme hem de performans adaptif CR yüzde, adaptif CR genlik, UR yüzde ve UR genlik önlemler olur. Hippocampus izleme ECC50,51,52sırasında gelişmiş sinaptik plastisite bir sonucu olarak tekrarlanan eğitim üzerinde iyi zamanlanmış eyeblink yanıt edinimi temsil ettiği gibi uyarlamalı CR dönem seçildi. UR önlemler yenidoğan alkol kaynaklı öğrenme açıkları ECC ilişkisel öğrenme aksamalar veya şok yanıt aksamalar nedeniyle bize - hangi öğrenme farklılıkları tedavi grupları arasında yerine motivasyon veya motor farklılıklar gösterebilir edildi iz olup olmadığını aydınlatmak için seçilmiştir. Her ölçü birimi için veri ANOVAs, tekrarlanan ölçüler faktör olarak oturum ile karışık 2 (Sex) x 3 (yenidoğan grubu) x 6 (oturum) kullanarak analiz edildi. Neonatal tedavi için önemli ana etkileri Tukey'nın öğleden hoc testleri kullanarak analiz edildi ve önemli etkileşimler basit efektler testleri kullanarak analiz edildi. En az bir alpha düzeyi 0,05 kullanarak tüm istatistiksel analizleri yapılmıştır ve grafiklerde sonuçları ortalama ± SEM.

Adaptif CR yüzde ölçü ile başlayan, ANOVA yenidoğan grubu, F(2,21) önemli bir temel etkisi belirtilen 11,69, p = < 0,001 ama seks önemli ana etkisi (p = 0,71) veya bu faktörlerin arasında önemli bir etkileşim (p 0,20 =). Beklendiği gibi adaptif CR yüzde arttı eğitim, F(5, 105) altı seans 81.15, p = < 0,001 ve neonatal gruplar arasındaki farkları oturum, F(10, 105) bazı düzeyde bağımlı 4,58, p = < 0,001. Oturum faktör içeren hiçbir önemli diğer etkileşimler vardı. Aynı şekilde uyarlanabilir CR genlik için tekrar bir önemli ana etkisi vardı yenidoğan grubu, F(2,21) 22.32, p = < 0,001 ama önemli ana etkisi cinsiyet (p 0.21 =) veya bu faktörlerin arasında önemli bir etkileşim (p 0.48 =). CR genlik aynı zamanda eğitim, F(5, 105) altı seans içinde önemli ölçüde arttı 59.27, p = < 0,001 ve neonatal gruplar arasındaki farkları oturum, F(10, 105) bazı düzeyde bağımlı 4,31, p = < 0,001. Genel olarak, her iki CR önlemler grup anlamına gelir ve önemli ölçüde farklı eğitim oturumları sırasında ayrılmış bu yollar arasında önemli farklılıklar gösterdi. Hangi grupları önemli ölçüde farklılık onaylamak için alkol entübe (AI) fareler önemli ölçüde hem CR önlemler unintubated-control (UC) ve sham entübe (SI) fareler daha kötü yapılan Tukey'nın öğleden hoc testler gösterdi (p < 0,01 CR yüzdesi; p < 0,001 CR genlik için), hangi farklı değildir birbirinden (p> 0,05). Basit efektler testleri gerçekleştirilen önemli yenidoğan grubunda oturum etkileşimleri için AI fareler daha da önemlisi oturum 2'de başlayan ve oturum 6'dan taşıyan karşılaştırıldığında UC ve sı fareler için CRs edinme Engelli doğruladı hem CR önlemler x (tüm p< 0,05), hangi değil farklı--dan her diğer altı seans. SI fareler önemli ölçüde farklı AI sıçanlarından emir oturum 3 kadar başlamadı için tek özel durum adaptif CR genlik oldu. Bu sonuçlar şekil 5A, 5Bgösterilir.

UR önlemler seks, Yenidoğan grubu ya da bu faktörlerin oturum faktörle etkileşimler nedeniyle hiçbir önemli farklılıklar vardı. Bu negatif bulgular her grup şok eyeblink yanıt bize eşit yayarlar başardı ve AI fareler gözlenen öğrenme açıkları değildi (6A rakam, 6B) yanıp sönen motivasyon veya motor farklılıklar etkilediği göstermiştir.

figure-results-1
Şekil 5 : İzleme edinimi şartına yanıt veren (ortalama ± SEM). Erken alkol pozlama (grup AI) adaptif şartına yanıt (CR) yüzde (A) ve (B) genlik edinimi önemli ölçüde etkiledi. İzleme ECC doğal olarak elde etmek zordur, bu nedenle önlemler - gecikme ECC olan tüm gruplar için nispeten düşüktür, yüzde 80-%85 FASD21,53kemirgen modellerinde ulaşabilirsiniz. Yine de, ECC yordamı izleme erken beyin gelişimi sırasında alkol etkileri duyarlı olduğu Hipokampus üzerinde vergi değil. * p = < 0,05, ** p = < 0,01, *** = p < 0,001 arasında UC ve AI fareler; örneklerin boyutu parantez içinde verilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

figure-results-2
Şekil 6 : Unconditioned (ortalama ± SEM) yanıt edinimi. Eyeblink performans (UR yüzde ve UR genlik) gruplar arasında önemli ölçüde farklı değildi. Farklar olmaması edinme eğitim sırasında kullanılan şok yoğunluk motivasyon AI Sıçanlarda differentially alter değil veya yeteneklerini savunma üretmek için yanıp sönme (UC ve sı) her iki kontrol gruplarına göre şok, yanıtlarını gösterir. Örneklerin boyutu parantez içinde verilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Tartışma

Etil alkol alınan doğum sonrası gün boyunca 4-9 yenidoğan fare pups bozuklukları yetişkinlikte Klima izleme eyeblink sergiledi. Bu bulgular alkol ile Hipokampal işlevi üzerinde zararlı etkileri kalıcı bir teratogen olduğu fikri destekler. Genel olarak, klimalı izleme yordamda yanıt için fareler hem de kontrol grubu ile karşılaştırıldığında alkol maruz rats düşüktü. Alkol maruz Sıçanlarda ilişkisel öğrenme bozuklukları motivasyon veya motor farklılıkları akıttıkları (i.e., şok u.s. yoğunluğu için yanıp sönen bir farkı yok).

İzleme ECC elucidating meydan kaynaklı Hipokampal nevropatoloji için yararlı bir tanı aracı olmakla birlikte, bu yöntem sonuçları doğru bağlam yerleştirilmelidir. İlk olarak, temel yordam unsuru içinde bu gösteri sırasında gelişmekte olan beyin, electromyographic aktivite kayıt sağlayan ve şok, söz konusu donanım ve sonraki hayvan ilgi bir bilişsel işlev değerlendiriyor bir öğrenme paradigması kullanarak sınama cerrahi implantasyon elektrot donanım imalatı için güvenlik açığının bilinen bir pencere alkol hedeflenen teslimat dahil. İşleminin her aşamasında, kemirgen konular gereksiz/istenmeyen bir zarar değil ve onların sağlık işaretleri düzenli olarak izlemek için özen göstermelidir. Ne zaman alkol dozaj, donanım hataları veya cerrahi implantasyon kapsayan deneysel hataları tarafından sağlıklarını tehlikeye değil sadece doğru olduğunu bir psikolojik yapısı açıklanan, davranışsal sonuçları "pencere" biliş için sağlar. Böylece, araştırma süreci yordam her öğesinde ECC sonuçlarından bulgular insanlarda yaygınlaştırılması sağlamak için ses bir şekilde uygulanmalıdır. İkinci olarak, ECC paradigma Insight ilişkisel öğrenme niteliğine sağlar, ancak bir deneysel tasarım gereği bu etki alanları bir ECC çalışma içinde bazı faset dahil olan sürece değil bulgular bu yaklaşımı kullanarak genişletmek ve geniş onları çalışma belleğinde, kısa/uzun vadeli anılar ve bilinç - gibi - diğer bilişsel etki alanlarına atfetmek için özen göstermelidir. Örneğin, bu gösteri izleme ECC öğrenme Alım Aşaması incelendiğinde, ancak bellek saklama Sıçanlarda eğitim tamamlandıktan sonra incelemek değil. Bellek böylece öğrenme ek olarak değerlendirilen bir bağımsız psikolojik süreçtir. Tasarım gereği, bir ya da kısa vadeli veya uzun vadeli bellek yeteneği değerlendirmek için bir bellek tutma aralığı dahil olabilir. Üçüncü olarak, aynı anda davranış için katkıda motivasyon, deneysel ve hormonal faktörler birlikte çalışabilir paralel bellek sistemleri54 vardır tanıma birleşim (ECC sırasında) olduğunu anlama ama "iyi" veya "kötü" öğrenme hakkında ne ortaya birçok işlemlerden biri için gerekli olan. Diğer beyin bölgeleri CR bazı bileşeni aracılık gibi son olarak, izleme ECC tamamen Hipokampal bağımlı görev değildir. Böylece, bir anlayış farklı sinir devreleri ve/veya bir çalışmada kullanılmaktadır, ayrık sonuçlarına göre etkileri yaparken dikkate alınması gereken uyarıcı parametreleri türünü arasındaki etkileşimler. Beyincik, örneğin, Ayrıca izleme ECC, nerede CR ve zamanlama, özellikle ısı kısa süre içinde ne zaman CR topografik özelliklerini etkiler katkıda bulunmaktadır. İzleme ECC serebellar hasar ile bir uzun izleme aralığı (1000 ms) ile test insanlarda etkilenmez ancak olanlar daha kısa bir izleme aralığı (400 ms)34almak içinde değişir. Ayrıca, fare, anterior singulat ve medial agranular bölgelerde hedef iki taraflı lezyonlar dorsal medial prefrontal korteks (mPFC) önlemek izleme CRs55, edinimi süre benzer sonuçlar46tavşanların Kaudal mPFC imha üretmek. Bu bulgular da beyin serebellar prefrontal katkıları türler farklılıklar izleme ECC gibi tahrik ilişkisel öğrenme kök göz önünde bulundurarak önemini vurgulayın. Yenidoğan alkol pozlama sırasında PD 4-9 olumsuz etkilenen edinimi 500-ms izleme CRs yetişkin için bu çalışma ve diğerleri47,56fareler olsa da, bu ne zaman bile alkol (5 g/kg)57izleme bozukluğu alkol maruz Sıçanlarda izleme aralığı süresi üzerinde bağımlı olduğunu düşündüren, nispeten yüksek bir doz, meydan bir 300-ms izleme aralığı deneyim yenidoğan alkol maruz fareler için aynı durum böyle değil.

Hayati önem taşıyan izleme ECC arabuluculuk için ve ne zaman yenidoğan alkol poz tarafından meydan olmak ile ilgili sinirsel hasar izleme CRs edinimi bozuklukları yansıtır sergiler bu çalışmada, Hipokampus vurguladı. Bu gerekir uyardı, ancak, beyincik beyin kök devreleri, özellikle interpositus çekirdeği, ECC, satın alma, ifade ve izleme ECC36,40,55,58,59dahil olmak üzere ECC görev türüne bağlı olarak CR topografik özellikleri de dahil olmak üzere çok yönlü için esastır. Nitekim, bu sinir devre CRs ifade ECC, üst düzey formları izleme ECC60gibi sırasında sürüş için Hipokampus ile etkileşim kurar. Alkol pozlama erken beyin gelişimi sırasında özellikle Hipokampal işlev izleme ECC etkileyip tamamen açık değil. Birçok farklı beyin bölgelerini mPFC, beyincik ve Hipokampus18,19,23,47,61,62, gibi erken alkol hakaret savunmasız ve alkol bu yapıları değişen derecelerde ve değişen ama işlevsel olarak önemli farklılıklar işleyişi birçok ECC yordam bozan çok yüksektir. İle ilgili izleme ECC çalışmalar sonuçlarından yorum tuzaklar rağmen başarılı izleme CRs edinimi sağlam bir Hipokampus üzerinde en az güvenmeye hayvan lezyon çalışmalar42,44,63tarafından,64,65desteklenen olarak gösterilmiştir. Bu yordam, böylece gelişimsel alkol maruz kalma, altta yatan nöro çevrim daha iyi olduğundan yanıt şartına izleme arasındaki bağlantıları roman nesne tanıma, Morris su labirentteki yer öğrenme gibi diğer Hipokampal bağımlı görevleri daha anlaşılır gösteren için son derece değerli bir yaklaşım kalır ve bağlamsal ve klima korku izleme.

ECC davranış yöntemi olarak "biliş, tahlil için" yaygın uygulanabilirliği gelişimsel neuroteratology alanına sahiptir. Nitekim, son bizim laboratuvar bulgular gelişmekte olan Hipokampus farklı Girişimsel stratejileri18,47tarafından hafifletilmiş alkol etkileri son derece hassas kavramı destekler. Önemli yararı burada alkol kaynaklı izleme ECC öğrenme açıkları daha iyi bir anlayış ile bunların özellikle de aynı Hipokampal neurocircuitry tarafından aracılı bilinen akıllı Hipokampal tabanlı işlevleri dışında ilişkisel öğrenme - diğer sorunları olabilir olduğunu.

Uygulama izleme ECC ve diğer türevleri (örneğin, gecikme, ters, ayrımcılık, bileşik) nörobiyolojik mekanizmaları ve sinir sistemleri ilişkisel öğrenme, yer aydınlatmak için fetal alkol araştırma alanı uzatılabilir. Örneğin, bu paradigma insan durumlarda ve şizofreni66,67gibi psikiyatrik durumlar, nörodejeneratif hastalıklar Alzheimer hastalığı68,69gibi hayvan modelleri ve uyuşturucu bağımlılığı70,71,72çok ilgi aldı. Faydaları nörobilişsel işlevi ve fonksiyon bozukluğu değerlendirmek için bir araştırma yöntemi olarak böylece nörolojik bilimler de dahil olmak üzere birçok psikolojik ve Biyomedikal disiplinler arasında görülmektedir.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Bu eser alkol içecek tıbbi araştırma Vakfı (ABMRF üzerinden) TDT için bir hibe tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Yenidoğan Alkolüne Maruz Kalma
190 Kanıt Etil Alkol (USP)Pharmco-AAPER225-36000 [ECU Tıbbi Depo]İkame edilebilir; USP olmalıdır; kullanmaktan kaçının Yavrular için 200 geçirmez etil alkol
Konteyner / SepetHerhangi Bir
Mısır YağıbirGıda sınıfı
Isıtmalı Su Terapi Pompası w / PedlerGaymarTP-500Yavruları sıcak tutmak için; ikame edilebilir
Hipodermik İğneler 22G x 1 inç, SterilHerhangi Bir
Hipodermik İğne 30G x 1/2 inç, SterilHerhangi Bir
İzopropil Alkol %70EMD MilliporePX1840-4 [Fisher Scientific]İkame edilebilir; reaktif derecesi
www.fishersci.com
Long-Evans Sıçanları (Dişi ve Erkek Yetiştiriciler)Charles River LaboratoriesN/A [ECU Karşılaştırmalı Tıp Bölümü]Yaş ve kilonun belirtilmesi gerekir; fiyatlandırma şu faktörlere göre değişir
www.criver.com
Mikro Diseksiyon Makası, 3,5 inç, 23 mm BıçaklarBiyomedikal Araştırma Aletleri11-2200PE boruları kesmek için
brisurgical.com
Polietilen 10 Boru (0,011 inç. Kimlik; 0.024 inç Öğr.BD Teşhis Sistemleri22-204008 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
Polietilen 50 Boru (0,023 inç. Kimlik; 0.038 inç Öğr.BD Tanı Sistemleri22270835 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
ayarlı su ısıtıcısı veya biberon ısıtıcısıHerhangi biristeğe bağlı; soğuk süt çözeltilerinin ısınmasına yardımcı olur
Tüberkülin Şırıngaları, Steril, 1.0 mlHerhangi Bir
Tüberkülin Şırıngaları, Steril, 10 mlHerhangiEtil alkol çıkarmak veya uygun boyutta mikropipet kullanmak için kullanılabilir
Tartı ÖlçeğiHerhangi biriİyi çözünürlüğe sahip olmalı (gram birimi cinsinden)
İsim< / güçlü >< güçlü > Şirket< / güçlü >< güçlü > Katalog Numarası< / güçlü >< güçlü > Yorumlar< / güçlü >
< güçlü >EMG Sahne İmalatı ve Bipolar Elektrot Modifikasyon< / güçlü >
Bipolar Elektrot, 2 Kanal SS BükülmüşPlastikler One, Inc.MS303/2-B/SPC  ELECT SS  2C TW .008"Kaidenin altında 20 mm'lik özel uzunluk belirtilmelidir
www.plastics1.com
Centi-Loc Şerit Soket İzolatörü (diğer adıyla Mikro Şerit)ITT Cannon / ITT Ara Bağlantı ÇözümleriCTA4-IS-60* veya CTA4-1S-60**Satıcıya bağlıdır; bakınız www.onlinecomponents.com veya www.avnetexpress.avnet.com
Diş Pensesi, TırtıklıCMF Medicon390.20.05İkame edilebilir; kabloları erkek kontak pimlerine kıvırmak için kullanın
www.medicon.de
Mikro Diseksiyon Makası, 3,5 inç, 23 mm BıçaklarBiyomedikal Araştırma Aletleri11-2200Yalnızca 3T kabloları kesmek için kullanın; 10T telleri kesmek bıçağa zarar verir - bunun yerine tel sıyırıcının bıçağını kullanın
brisurgical.com
PTFE Kaplı Paslanmaz Çelik Tel, 10T (Çıplak Çap .010 inç)Sigmund Cohn-Medwire316SS10T
www.sigmundcohn.com
PTFE Kaplı Paslanmaz Çelik Tel, 3T (Çıplak Çap 0,003 inç)Sigmund Cohn-Medwire316SS3T
www.sigmundcohn.com
Tıraş BıçağıHerhangi Bipolarelektrotun uçlarından 1 mm sıyırmak için
Relia-Tac Soket Kontak Pimi, ErkekCooper Ara Bağlantısı220-P02-100Bkz. Müttefik Elektronik Kedi # 70144761
www.alliedelec.com
Cımbız, Yüksek Hassasiyetli, Tırtıklı,Elektron Mikroskobu Bilimlerinde78314-00DPTFE'yi düz cımbızla sıyırırken 10T teli sıkıca kavramak için
www.emsdiasum.com
Cımbız, Yüksek Hassasiyetli, Pürüzsüz, Elektron Mikroskobu Bilimlerinde 4 3/478313-00B
www.emsdiasum.com
Cımbız, Ultra İnce Uçlar, Elektron Mikroskobu Bilimlerinde 4 3/478510-03T telin bir ucundan 1 mm PTFE çıkarmak için; korumalı kısmı pürüzsüz cımbızla kavrayın
www.emsdiasum.com
Tel Sıyırıcı, 16-26 AWGHerhangi Mikroşeritleri kesmek için bıçak ucunu kullanın
AdıŞirketKatalog NumarasıYorumlar<>
güçlüGöz Kapağı Cerrahisi
Cerrahi Aletler (Yüksek Kaliteli Paslanmaz Çelik)
2 x Pansuman Forseps, 4 TırtıklıBiyomedikal Araştırma Aletleri30-1205İkame edilebilir; Ameliyat tepsisinin dışındaki elektrotları/vidaları kavramak için ekstra forseps
brisurgical.com
Pansuman Forsepsleri, 3 adet TırtıklıBiyomedikal Araştırma Aletleri30-1200Değiştirilebilir
brisurgical.com
Alet TepsisiBiyomedikal Araştırma Aletleri24-1355Değiştirilebilir
brisurgical.com
Biyomedikal Araştırma CihazlarındaBıçak Sapı No. 3, 526-1000Değiştirilebilir
brisurgical.com
Mikro Diseksiyon Forsepsleri, 3,5 inç, İnce NoktalarBiyomedikal Araştırma Aletleri10-1630Değiştirilebilir
brisurgical.com
Mikro Diseksiyon Forsepsleri, 3,5 inç, Pürüzsüz Platform (0,3 x 5 mm)Biyomedikal Araştırma Aletleri10-1720
brisurgical.com
Mikro Diseksiyon Makası, 3,5 inç, Son Derece Hassas, 15 mm BıçaklarBiyomedikal Araştırma Aletleri11-2000Değiştirilebilir
brisurgical.com
Düz Kıymık Forseps, 3,5 inç Biyomedikal Araştırma Cihazları30-1600< br / > < href = http://brisurgical.com/ "
ikame edilebilir, SterilHerhangi Paslanmaz
Çelik Vidalarda 0-80 x 0.125Plastics One, Inc.0-80 x 0.125İkame edilebilir
www.plastics1.com
Alkol Hazırlama Pedleri, SterilFisher Scientific22-363-750 [Fisher ScientificKullanılabilir
www.fishersci.com
Betadine Povidon-İyotPurdue Frederick Co.6761815101 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
Betadine Povidon-İyot Hazırlama PedleriMoore Medical19-898-946 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
Pamuk Uçlu Swablar, OtoklavlanabilirHerhangiTipik olarak 7,6 cm veya 15,2 cm uzunlukta
Pim Mengenesi için Matkap Ucu, # 55 (0,052 inç)Herhangi BirMetal paslanmaya ve korozyona karşı dayanıklı olmalıdır
Gazlı Bez Pedleri, 2 inç x 2 inçFisher Scientific22-362-178 [Fisher Scientific]ikame edilebilir
www.fishersci.com
Genel Amaçlı Lateks/Nitril/Vinil EldivenHerhangi
Cam Boncuk SterilizatörüAmeliyatlar arasında herhangi birSterilize aleti
Isıtmalı Su Terapi Pompası w / Pedler x 2GaymarTP-500İkame edilebilir; Ayrı pompalar önerilir - 1'i ameliyat için, 1'i iyileşme için
Hipodermik İğneler 26G x 3/8 inç, SterilHerhangi Bir
İzofluranVedcoNDC 50989-150-12Manfacturer ikame edilebilir; Veteriner onayı gerekebilir
İzofluran Buharlaştırıcı Sistemi, Masa Üstü, SolunmayanPark Alanı BilimselV3000PKDeğiştirilebilir
www.parklandscientific.com
1,8-2 mm Bıçaklı Kuyumcular TornavidaHerhangi birMetal paslanmaya ve korozyona karşı dayanıklı olmalıdır
Ortho-Jet BCA Paketi (Diş Çimentosu)Lang DentalB1334toz (1 lb) ve sıvı
www.langdental.com
Basınç Regülatörlü Oksijen Tankı, BüyükYerel tedarikçi
Porselen Pota, Yüksek Formlu, Sırlı, 10 mlCoorsTek, Inc. içerir.07-965C [Fisher Scientific]Fisher FB-965-I Geniş Formlu Pota
www.fishersci.com
Puralube Veteriner Oftalmik Merhem, SterilHenry Schein CompanyNC0144682 [Fisher Scientific]ile ikame edilebilir
www.fishersci.com
Quatricide PV-15PharmacalPV-15Antimikrobiyal dezenfektan; ikame edilebilir
www.pharmacal.com
Stereotaksik Cerrahi için Sıçan Gazlı Anestezi Maskeleri Stoelting Company51610
www.stoeltingco.com
Kulak Çubuklu Sıçan Stereotaksik Aparatı (45 Derece)Kulak zarlarına zarar vermemek içinherhangi bir
Roboz Cerrahi Alet SütüRoboz CerrahiNC9358575 [Fisher Scientific]İkame edilebilir; otoklavlama sırasında aletleri yağlamak için
www.fishersci.com
Kemirgen Saç DüzelticiHerhangi Bir
Sodyum KlorürFisher ScientificS641-500 [Fisher Scientific]% 0.9 tuzlu su yapmak için; reaktif sınıfı; USP
www.fishersci.com
Paslanmaz Çelik Mikro Spatula (Bıçak: 0,75 L x 0,18 inç. W)Fisher Scientific21-401-15 [Fisher Scientific]Değiştirilebilir
www.fishersci.com
Starrett Pin Mengene, 0,000 inç - 0,055 inçPaslanmaya ve korozyona direnmesi için önerilenherhangi bir
Steril Cerrahi EldivenlerHerhangi Bir
Sterilizasyon Sargısı, 20 inç x 20 inç, OtoklavlanabilirPropper Manufacturing11-890-8C [Fisher Scientific]Otoklavlanabilir malzemeleri sarmak ve ameliyat sırasında steril sahada kullanışlıdır
www.fishersci.com
Cerrahi Örtü, Steril/OtoklavlanabilirHerhangi biriSıçanlar için boyuta göre kesilmesi gerekebilir
Cerrahi Önlük*Herhangi*IACUC tarafından gerekiyorsa
Cerrahi MaskeHerhangi bir
Tüberkülin Şırıngası, Steril, 1.0 mlHerhangi Bir
Tartıİyi çözünürlüğe sahip olmalı (gram birim olarak)
İsim< / güçlü > <güçlü > Şirket < / güçlü >< güçlü > Katalog Numarası < / güçlü >< güçlü > Yorumlar< / güçlü >
Eyeblink Sistemi ve Bileşenleri (4 kemirgen sistemi varsayarak)
5 Kanal Komütatörü x 4Plastics One, Inc.SL2 + 3C
www.plastics1.com
>Bipolar Elektrot Kablosu, Çift 305 x 4Plastics One, Inc.305-305 80CM TT2 (C)Sıçan üzerindeki bipolar elektroda ve komütatöre fiş ucu sağlar; değiştirilmelidir
www.plastics1.com
Kablo, 5 Kanallı, Ekranlı, 26 AWG x 4Tümü Komütatörkablosu imal etmek için; bu sıfırdan yapılmalıdır
Edimsel Test Kutusu Odası (İçinde: 24 Y x 23 G x 14 D inç) x 4Med-AssociatesDeğiştirilebilir; iç boyutlar, akustik köpük için yer olacak şekilde, edimsel test kutusuna rahatça sığmalıdır; fan ile uyumlu - 55-60 dB
www.med-associates.com
Göz Kırpma Sistemi ve YazılımıJSA TasarımlarıN/AAraştırma laboratuvarı
için tescilli ve özelleştirilmişIsıyla Daralan Makaron (3/16 inç, 1/4 inç, 3/8 inç, 1/2 inç Çaplar)Herhangi Modifiyekomütatör kablosunu korumak için lehimli uçları ve ekleri
Siyah Hypalon ile Melamin Üçlü Tepe Akustik Köpük (24 x 48 inç)McMaster-Carr9162T5İkame edilebilir; 4 muhafaza odasına uyacak şekilde kesin
www.mcmaster.com
Edimsel Test Kutusu (Dış 12,5 L x 10 G x 13,5 inç Y), Komple x 4Med-AssociatesENV-007 Özel PaketPaslanmaz çelik ızgara zeminli ve özel üst kısımlı (komütatör kablosu için merkezde 3 inç delik)
www.med-associates.com
Osiloskop (Opsiyonel)HerhangiÖnerilen minimum özellikler: 200 MHz analog bant genişliği, 1 GS/s gerçek zamanlı örnekleme, 4 kanal; bkz. www.picotech.com
/td>
Piezo Tweeter'lar (Hoparlörler) x 4 (7 x 3 inç)MCM Electronics53-805Göz kırpma sistemi (2500 Hz - 25 KHz) için frekans aralığı özelliklerine uygun olmalıdır
www.mcmelectronics.com
Lehimleme İstasyonu, Lehim, Akı,Kalay Herhangi26 AWG kabloları dişi soketlere (erkek relia-tac kontak pimlerine uyan) ve bipolar fişlere lehimlemek için
Uyarıcı İzolatörler x 4WPI UluslararasıA365Bu üniteler 16-9V alkalin pillerle çalışır; uygun bir şarj edilebilir versiyon (A365R) mevcuttur
www.wpiinc.com
SL3C Komütatör x 4 için TripolarElektrot Kablosu, Inc.335-335 80cm TT3 CSıçan üzerindeki EMG başlığına ve komütatöre fiş ucu sağlar; değiştirilmelidir
www.plastics1.com
USB LED Işıkları x 4birUSB tabanlı ışık, sıçanlardan gelen EMG sinyalleriyle elektriksel "gürültüye" neden olmaz
www.plastics1.com
Web Kameraları x 4, Gözetim YazılımıÇalıştıran Herhangi Bir
PC BilgisayarıHerhangi Bir
Herhangi 4 3/4 güçlü # 3 Sap için >brisurgical.com< / a> # 10 Paslanmaz Çelik Cerrahi Bıçak ikame edilebilir , 45 derecelik çubuk önerilir Nikel kaplama veya eşdeğeri Herhangi Bir Tartı Herhangi MS Windows İşletim Sistemi

Kaynaklar

  1. Jones, K. L., Smith, D. W. Recognition of the fetal alcohol syndrome in early infancy. Lancet. 2, 999-1001 (1973).
  2. Stratton, K. R., Howe, C. J., Battaglia, F. C. Fetal alcohol syndrome: Diagnosis, epidemiology, prevention, and treatment. , National Academy Press. (1996).
  3. Streissguth, A. P., Barr, H. M., Martin, D. C., Herman, C. S. Effects of maternal alcohol, nicotine, and caffeine use during pregnancy on infant mental and motor development at eight months. Alcohol Clin Exp Res. 4 (2), 152-164 (1980).
  4. Streissguth, A. P., O'Malley, K. Neuropsychiatric implications and long-term consequences of fetal alcohol spectrum disorders. Semin Clin Neuropsychiatry. 5 (3), 177-190 (2000).
  5. May, P. A., et al. Prevalence and epidemiologic characteristics of FASD from various research methods with an emphasis on recent in-school studies. Dev Disabil Res Rev. 15 (3), 176-192 (2009).
  6. Sowell, E. R., et al. Mapping callosal morphology and cognitive correlates: Effects of heavy prenatal alcohol exposure. Neurology. 57 (2), 235-244 (2001).
  7. Sowell, E. R., et al. Abnormal development of the cerebellar vermis in children prenatally exposed to alcohol: Size reduction in lobules I-V. Alcohol Clin Exp Res. 20 (1), 31-34 (1996).
  8. Autti-Ramo, I., et al. MRI findings in children with school problems who had been exposed prenatally to alcohol. Dev Med Child Neurol. 44 (2), 98-106 (2002).
  9. Hamilton, D. A., Kodituwakku, P., Sutherland, R. J., Savage, D. D. Children with Fetal Alcohol Syndrome are impaired at place learning but not cued-navigation in a virtual Morris water task. Behav Brain Res. 143 (1), 85-94 (2003).
  10. Uecker, A., Nadel, L. Spatial but not object memory impairments in children with fetal alcohol syndrome. Am J Ment Retard. 103 (1), 12-18 (1998).
  11. Uecker, A., Nadel, L. Spatial locations gone awry: object and spatial memory deficits in children with fetal alcohol syndrome. Neuropsychologia. 34 (3), 209-223 (1996).
  12. Goodlett, C. R., Lundahl, K. R. Temporal determinants of neonatal alcohol-induced cerebellar damage and motor performance deficits. Pharmacol Biochem Behav. 55 (4), 531-540 (1996).
  13. Goodlett, C. R., Kelly, S. J., West, J. R. Early postnatal alcohol exposure that produces high blood alcohol levels impairs development of spatial navigation learning. Psychobiol. 15, 64-74 (1987).
  14. Bayer, S. A., Altman, J., Russo, R. J., Zhang, X. Timetables of neurogenesis in the human brain based on experimentally determined patterns in the rat. Neurotoxicol. 14 (1), 83-144 (1993).
  15. Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch Dis Child. 48 (10), 757-767 (1973).
  16. West, J. R. Fetal alcohol-induced brain damage and the problem of determining temporal vulnerability: A review. Alcohol Drug Res. 7 (5-6), 423-441 (1987).
  17. Zecevic, N., Rakic, P. Differentiation of Purkinje cells and their relationship to other components of developing cerebellar cortex in man. J Comp Neurol. 167, 27-48 (1976).
  18. Rufer, E. S., et al. Adequacy of maternal iron status protects against behavioral, neuroanatomical, and growth deficits in fetal alcohol spectrum disorders. PLoS One. 7 (10), e47499(2012).
  19. Tran, T. D., Kelly, S. J. Critical periods for ethanol-induced cell loss in the hippocampal formation. Neurotoxicol Teratol. 25 (5), 519-528 (2003).
  20. Pierce, D. R., Goodlett, C. R., West, J. R. Differential neuronal loss following early postnatal alcohol exposure. Teratology. 40 (2), 113-126 (1989).
  21. Tran, T. D., Jackson, H. J., Horn, K. H., Goodlett, C. R. Vitamin E does not protect against neonatal ethanol-induced cerebellar damage or deficits in eyeblink classical conditioning in rats. Alcohol Clin Exp Res. 29 (1), 117-129 (2005).
  22. Goodlett, C. R., Peterson, S. D., Lundahl, K. R., Pearlman, A. D. Binge-like alcohol exposure of neonatal rats via intragastric intubation induces both Purkinje cell loss and cortical astrogliosis. Alcohol Clin Exp Res. 21 (6), 1010-1017 (1997).
  23. Green, J. T., Tran, T. D., Steinmetz, J. E., Goodlett, C. R. Neonatal ethanol produces cerebellar deep nuclear cell loss and correlated disruption of eyeblink conditioning in adult rats. Brain Res. 956, 302-311 (2002).
  24. Cronise, K., Marino, M. D., Tran, T. D., Kelly, S. J. Critical periods for the effects of alcohol exposure on learning in rats. Behav Neurosci. 115 (1), 138-145 (2001).
  25. Tran, T. D., Cronise, K., Marino, M. D., Jenkins, W. J., Kelly, S. J. Critical periods for the effects of alcohol exposure on brain weight, body weight, activity and investigation. Behav Brain Res. 116 (1), 99-110 (2000).
  26. Steinmetz, J. E. Brain substrates of classical eyeblink conditioning: A highly localized but also distributed system. Behav Brain Res. 110 (1-2), 13-24 (2000).
  27. Thompson, R. F. The neurobiology of learning and memory. Science. 233 (4767), 941-947 (1986).
  28. Ivkovich, D., Eckerman, C. O., Krasnegor, N. A., Stanton, M. E. Eyeblink classical conditioning: Vol. 1 Applications in humans. Woodruff-Pak, D. S., Steinmetz, J. E. , Kluwer Academic Publishers. 119-142 (2000).
  29. Woodruff-Pak, D. S., Steinmetz, J. E. Eyeblink classical conditioning: Volume I - Applications in humans. , Kluwer Academic Publishers. (2000).
  30. Woodruff-Pak, D. S., Steinmetz, J. E. Eyeblink classical conditioning: Volume II - Animal models. , Kluwer Academic Publishers. (2000).
  31. Kishimoto, Y., et al. Implicit Memory in Monkeys: Development of a Delay Eyeblink Conditioning System with Parallel Electromyographic and High-Speed Video Measurements. PLoS One. 10 (6), e0129828(2015).
  32. Chen, L., Bao, S., Lockard, J. M., Kim, J. K., Thompson, R. F. Impaired classical eyeblink conditioning in cerebellar-lesioned and Purkinje cell degeneration (pcd) mutant mice. J Neurosci. 16 (8), 2829-2838 (1996).
  33. Freeman, J. H. Jr, Carter, C. S., Stanton, M. E. Early cerebellar lesions impair eyeblink conditioning in developing rats: Differential effects of unilateral lesions on postnatal day 10 or 20. Behav Neurosci. 109 (5), 893-902 (1995).
  34. Gerwig, M., et al. Trace eyeblink conditioning in patients with cerebellar degeneration: Comparison of short and long trace intervals. Exp Brain Res. 187 (1), 85-96 (2008).
  35. LaBar, K. S., Disterhoft, J. F. Conditioning, awareness, and the hippocampus. Hippocampus. 8 (6), 620-626 (1998).
  36. McCormick, D. A., Steinmetz, J. E., Thompson, R. F. Lesions of the inferior olivary complex cause extinction of the classically conditioned eyeblink response. Brain Res. 359 (1-2), 120-130 (1985).
  37. Clark, R. E., Zola, S. Trace eyeblink classical conditioning in the monkey: a nonsurgical method and behavioral analysis. Behav Neurosci. 112 (5), 1062-1068 (1998).
  38. Anderson, B. J., Steinmetz, J. E. Cerebellar and brainstem circuits involved in classical eyeblink conditioning. Rev Neurosci. 5 (3), 251-273 (1994).
  39. Thompson, R. F., Krupa, D. J. Organization of memory traces in the mammalian brain. Annu Rev Neurosci. 17, 519-549 (1994).
  40. Miller, M. J., et al. fMRI of the conscious rabbit during unilateral classical eyeblink conditioning reveals bilateral cerebellar activation. J Neurosci. 23 (37), 11753-11758 (2003).
  41. Geinisman, Y., et al. Remodeling of hippocampal synapses after hippocampus-dependent associative learning. J Comp Neurol. 417 (1), 49-59 (2000).
  42. Ivkovich, D., Stanton, M. E. Effects of early hippocampal lesions on trace, delay, and long-delay eyeblink conditioning in developing rats. Neurobiol Learn Mem. 76 (3), 426-446 (2001).
  43. Moyer, J. R. Jr, Deyo, R. A., Disterhoft, J. F. Hippocampectomy disrupts trace eye-blink conditioning in rabbits. Behav Neurosci. 104 (2), 243-252 (1990).
  44. Solomon, P. R., Vander Schaaf, E. R., Thompson, R. F., Weisz, D. J. Hippocampus and trace conditioning of the rabbit's classically conditioned nictitating membrane response. Behav Neurosci. 100 (5), 729-744 (1986).
  45. Kronforst-Collins, M. A., Disterhoft, J. F. Lesions of the caudal area of rabbit medial prefrontal cortex impair trace eyeblink conditioning. Neurobiol Learn Mem. 69 (2), 147-162 (1998).
  46. Weible, A. P., McEchron, M. D., Disterhoft, J. F. Cortical involvement in acquisition and extinction of trace eyeblink conditioning. Behav Neurosci. 114 (6), 1058-1067 (2000).
  47. Thomas, J. D., Tran, T. D. Choline supplementation mitigates trace, but not delay, eyeblink conditioning deficits in rats exposed to alcohol during development. Hippocampus. 22 (3), 619-630 (2012).
  48. West, J. R., Hamre, K. M., Pierce, D. R. Delay in brain growth induced by alcohol in artificially reared rat pups. Alcohol. 1 (3), 213-222 (1984).
  49. Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. Survivable stereotaxic surgery in rodents. J Vis Exp. (20), e880(2008).
  50. Christian, K. M., Thompson, R. F. Neural substrates of eyeblink conditioning: acquisition and retention. Learn Mem. 10 (6), 427-455 (2003).
  51. Kishimoto, Y., Nakazawa, K., Tonegawa, S., Kirino, Y., Kano, M. Hippocampal CA3 NMDA receptors are crucial for adaptive timing of trace eyeblink conditioned response. J Neurosci. 26 (5), 1562-1570 (2006).
  52. Shors, T. J., et al. Neurogenesis in the adult is involved in the formation of trace memories. Nature. 410 (6826), 372-376 (2001).
  53. Tran, T. D., Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Binge-like ethanol exposure during the early postnatal period impairs eyeblink conditioning of short and long CS-US intervals in rats. Dev Psychobiol. 49 (6), 589-605 (2007).
  54. Mizumori, S. J., Yeshenko, O., Gill, K. M., Davis, D. M. Parallel processing across neural systems: Implications for a multiple memory system hypothesis. Neurobiol Learn Mem. 82 (3), 278-298 (2004).
  55. Siegel, J. J., et al. Trace Eyeblink Conditioning in Mice Is Dependent upon the Dorsal Medial Prefrontal Cortex, Cerebellum, and Amygdala: Behavioral Characterization and Functional Circuitry(1,2,3). eNeuro. 2 (4), (2015).
  56. Murawski, N. J., Jablonski, S. A., Brown, K. L., Stanton, M. E. Effects of neonatal alcohol dose and exposure window on long delay and trace eyeblink conditioning in juvenile rats. Behav Brain Res. 236 (1), 307-318 (2013).
  57. Lindquist, D. H. Hippocampal-dependent Pavlovian conditioning in adult rats exposed to binge-like doses of ethanol as neonates. Behav Brain Res. 242, 191-199 (2013).
  58. Ivarsson, M., Svensson, P. Conditioned eyeblink response consists of two distinct components. J Neurophysiol. 83 (2), 796-807 (2000).
  59. Woodruff-Pak, D. S., Lavond, D. G., Thompson, R. F. Trace conditioning: abolished by cerebellar nuclear lesions but not lateral cerebellar cortex aspirations. Brain Res. 348 (2), 249-260 (1985).
  60. Takehara-Nishiuchi, K. The Anatomy and Physiology of Eyeblink Classical Conditioning. Curr Top Behav Neurosci. , (2016).
  61. Mattson, S. N., Schoenfeld, A. M., Riley, E. P. Teratogenic effects of alcohol on brain and behavior. Alcohol Res Health. 25 (3), 185-191 (2001).
  62. Goodfellow, M. J., Abdulla, K. A., Lindquist, D. H. Neonatal Ethanol Exposure Impairs Trace Fear Conditioning and Alters NMDA Receptor Subunit Expression in Adult Male and Female Rats. Alcohol Clin Exp Res. 40 (2), 309-318 (2016).
  63. Beylin, A. V., et al. The role of the hippocampus in trace conditioning: Temporal discontinuity or task difficulty? Neurobiol Learn Mem. 76 (3), 447-461 (2001).
  64. Port, R. L., Romano, A. G., Steinmetz, J. E., Mikhail, A. A., Patterson, M. M. Retention and acquisition of classical trace conditioned responses by rabbits with hippocampal lesions. Behav Neurosci. 100 (5), 745-752 (1986).
  65. Weiss, C., Bouwmeester, H., Power, J. M., Disterhoft, J. F. Hippocampal lesions prevent trace eyeblink conditioning in the freely moving rat. Behav Brain Res. 99 (2), 123-132 (1999).
  66. Brown, S. M., et al. Eyeblink conditioning deficits indicate timing and cerebellar abnormalities in schizophrenia. Brain Cogn. 58 (1), 94-108 (2005).
  67. Sears, L. L., Steinmetz, J. E. Effects of haloperidol on sensory processing in the hippocampus during classical eyeblink conditioning. Psychopharmacology. 130 (3), 254-260 (1997).
  68. Kronforst-Collins, M. A., Moriearty, P. L., Schmidt, B., Disterhoft, J. F. Metrifonate improves associative learning and retention in aging rabbits. Behav Neurosci. 111 (5), 1031-1040 (1997).
  69. Woodruff-Pak, D. S., Finkbiner, R. G., Sasse, D. K. Eyeblink conditioning discriminates Alzheimer's patients from non-demented aged. Neuroreport. 1 (1), 45-48 (1990).
  70. Oristaglio, J., Romano, A. G., Harvey, J. A. Amphetamine influences conditioned response timing and laterality of anterior cingulate cortex activity during rabbit delay eyeblink conditioning. Neurobiol Learn Mem. 92 (1), 1-18 (2009).
  71. Scavio, M. J., Clift, P. S., Wills, J. C. Posttraining effects of amphetamine, chlorpromazine, ketamine, and scopolamine on the acquisition and extinction of the rabbit's conditioned nictitating membrane response. Behav Neurosci. 106 (6), 900-908 (1992).
  72. Fortier, C. B., et al. Delay discrimination and reversal eyeblink classical conditioning in abstinent chronic alcoholics. Neuropsychology. 22 (2), 196-208 (2008).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

li kisel renmeElektromiyografik G z K rpma Aktivitesiz S rme D nemiKo ullu Yan tKo ulsuz Yan tAdaptif Ko ullu Yan tlar

İlgili makaleler