Yöntem makalesi

Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak

12.7K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/55359

⸱

27 Ağustos 2017

 ,  ,  , 
1Department of Anatomy and Cell Biology, Martin Luther University Halle-Wittenberg, 2Department of Anatomy, University of Otago

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Organotypic Hipokampal dilim kültürler (OHSC) vivo durumu çok iyi taklit bir vitro modeli temsil. Burada biz vibratome tabanlı açıklar yüksek kaliteli dilimleri tümör hücreleri biyolojik davranışını veya yeni maddeler nöroprotektif potansiyelini değerlendirmek amacıyla elde etmek için iletişim kuralı Dilimleme geliştirilmiş.

Özet

Organotypic Hipokampal dilim kültürler (OHSC), sinir hücreleri ve gliyal hücreler morfolojik ve fonksiyonel özellikleri iyi korunmuş. Bu model dahil çalışmaları nöronlar, nöronal ağlar veya tümör işgali üzerinde Elektrofizyolojik deneyler neuroprotection üzerinde farklı araştırma soruları ele almak için uygundur. Hipokampal mimarisi ve multisynaptic devrelerde nöronal aktivite iyi OHSC, düz-se bile Dilimleme yordam başlangıçta lezyonlar ve gliyal yara oluşumuna yol açar korunmuş. Yara oluşumu muhtemelen mekanik özellikleri ve küçük moleküller, vbdiffusive davranışını değiştirir. Dilimleri Saat bağımlı süreçlerinin beyin hasarı hayvan cerrahi ve çeşitli beyin türetilmiş hücre tipleri, yani astrocytes, microglia ve fizyolojik ve patolojik altında nöronlar arasındaki etkileşimler çalışmaları olmadan sonra izleme izin koşullar. Bu model kararsız bir yönünü kan akımı ve bağışıklık kan hücreleri olmaması. Nöronal yaralanma ilerleme sırasında bağışıklık hücreleri kan oynamak önemli bir rol geçirme. Bu hücreleri dilimler halinde eksik olduğundan, içsel süreçleri kültür dış müdahale gözlenen. Ayrıca, OHSC orta-dış ortam bileşimi tam olarak kontrol edilir. Bu yöntem bir başka kurban hayvanların standart hazırlıkları için karşılaştırıldığında daha düşük sayıda avantajdır. Birkaç OHSC birden çok tedavileri ile eşzamanlı çalışmalar bir hayvan edinerek bir hayvandan elde edilebilir. Bu nedenlerden dolayı OHSC sonra doku hasarı veya tümör işgali sırasında yeni koruyucu tedavi etkilerini çözümlemek için uygundur.

Sunulan Protokolü burada üreten son derece tekrarlanabilir sağlar OHSC hazırlama yöntemi açıklar, iyi korunmuş deneysel araştırma, neuroprotection veya tümör işgali çalışmalar gibi çeşitli için kullanılan dilimler.

Giriş

OHSC nöronlar, astrocytes ve microglia1fizyolojik ve patolojik özelliklerini incelemek için iyi karakterize vitro modeli vardır. Hücre dışı ortam kontrol etmek ve hücresel ve morfolojik değişiklikler sonra çeşitli uyaranlara izlemek kolaydır. Hipokampal nöronlar organizasyonu ve bağlantıları sonra hazırlık2,3iyi korunmuş. Çeşitli yararları dışarı OHSC izin hayvan ameliyat olmadan beyin hasarı ve tümör işgalinin izleme. Altı ya da sekiz OHSC tek bir kemirgen beyinden elde edilebilir. OHSC bu nedenle önemli ölçüde hayvan sayısını azaltmak ve birden fazla ilaç konsantrasyonları, genetik manipülasyon veya farklı lezyon modelleri aynı hayvan test izin vermek için yardımcı olur. Dilim tabanlı deneyleri içinde deneysel koşullar tam olarak kontrol edilebilir. Ayrıca, ikincil hasar gibi patolojik durumlardan zaman bağımlı geliştirme kolayca zaman hata görüntüleme tarafından izlenebilir.

Başlangıçta Stoppini ve ark. tarafından kurulan belirli iletişim kuralı 4, hazırlık adımları açıklanmıştır ve uygun dilimleri seçimi için önemli morfolojik yerler vurgulanır. Doğum sonrası gün 7-9 fareler veya doğum sonrası 4-5 gün fareler hazırlanması tavsiye ediyoruz. Bu dönemlerde OHSC mekanik travmalar ve nöronal devreler yeniden yapılanma yüksek bir potansiyel güçlü bir direnç gösteriyor. Buna ek olarak, ürünleri embriyonik veya yetişkin fareler üzerinden hızla yapılarını değiştirmek ve onların organotypic Morfoloji ekimi sırasında kaybetmek ve bu nedenle temel araştırma5,6 ' uzun vadeli işlemler çalışmak için daha az uygun , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. Difüzyon ve böylece besin kaynağı sınırlı12,13,14OHSC hayatta kalma oranı için başka bir kritik nokta dilim kalınlığı 's.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

hayvan deneyleri gerçekleştirilen etik ilke ve nörolojik araştırma hayvanlara kullanım ilkesi doğrultusunda Avrupa Toplulukları Konseyi yönergesi 2010/63/AB tarafından Avrupa Parlamentosu onaylanmış ve bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması üzerinde Avrupa Birliği Konseyi.

1. Kültür ortam ve aygıtlar hazırlık

  1. OHSC hazırlanması için aşağıdaki araç kümesi, kullanın: iki küçük makas, iki eğri cımbız, iyi bir ipucu ile bir cımbız üç Bıçaklar (iki boyutu 11, mevcudu 15 biri), Üç neşter sahipleri, yuvarlak filtre kağıtları (çapı: 35 mm), agar, bir tıraş bıçağı, biri Pasteur pipet değiştirilmemiş ve biri Pasteur pipet bir ipucu olmadan değiştirilebilir. Kullanım ( şekil 1) önce bir otoklav içinde tüm malzemeleri sterilize.
  2. 5 g agar tartmak ve 100 mL distile suda çözülür. Bir otoklav içinde 210.8 kPa, 121.7 ° C'de 20 dk için çözüm sterilize. 3 mL sıvı agar çözüm 60 mm Petri yemeklerinde steril cam pipet kullanarak dağıtmak, 5 h için kuvvetlendirmek, kirlenmesini önlemek ve 4 ° C'de daha fazla kullanmak kadar saklamak için plastik parafin film ile karşılamak izin. Agar blok Dilimleme işlemi sırasında beyin stabilize etmek için gereklidir.
    3. 198 mL en az gerekli orta (MEM) ve 2 mL L-glutamin çözüm
  3. medya
    1. yapmak 200 mL hazırlık orta (pH 7,35) oluşan (son konsantrasyonu 2 mM). Çözüm medyası hazırlama gününde hazırlamak ve 4'te saklayın ° C.
    2. 100 mL 49 mL MEM, 25 mL Hanks oluşan kültür ortamının hazırlamak ' dengeli tuz Çözümleri (HBSS), 25 mL (v/v) normal at serum (NHS), 1 mL L-glutamin çözüm (son konsantrasyonu 2 mM), 100 µg insülin, 120 mg glikoz, 10 mg streptomisin , 10.000 U penisilin ve 800 µg daha önce bildirildiği gibi C vitamini. Orta (37 ° C) sıcak, pH 7.4 ve steril filtre (0.2 µm gözenek boyutu) pH değerine ayarlayın. Orta değiştirmeden önce her iki günde (ısınma pH ayarlama, vb,) yordamı yineleyin. Orta en bir hafta boyunca kullanmak saat 4'te saklandığında ° C.
  4. Bir 35 mm Petri kabına beyin depolamak için hazırlık orta ile doldurun. Doku üzerinde bir soğutma paketi çalışma alanı içinde toplamak için iki boş Petri tabağı yere.

2. Hazırlık ve dilimleme bir Vibratome ile

  1. Kullanım beyin 7-9 gün eski fareler veya 4-5 gün Stoppini ve ark göre OHSC hazırlık için eski fareler. 4 sonra işten çıkarma hayvanların, deri kafatasından makasla kaldırmak.
  2. İyi makas bıçak deliği magnum tanıtmak ve kafatası Kaudal (geri) rostral (açık) ekseni boyunca keserek açın. Yapmak iki makas sırasıyla sol ve sağ kulak doğru işaret böylece ilki için dik keser (" T-kesi ").
  3. Kafatası beyin zarar değil dikkat iyi Forseps ile dikkatlice açın. Bir neşter (bıçak büyüklüğüne 11) ön direğe ve beyincik en rostral parçası kesmek için kullanın.
  4. Tarafından bir spatula ile beyin kaldırmak ve hazırlık orta ( Şekil 2) ile dolu Petri kabına dikkatle yer anlamına gelir. Beyin numune tutucu üzerinde konumlandırın ve tıbbi siyanoakrilat yapıştırıcı ile düzeltebilirim. Mekanik stabilizasyon temin için agar parçaları kullanın.
  5. Yatay olarak 350 µm doku teşrih sürgülü vibratome kullanarak kalın OHSC.
  6. Optik Binoküler mikroskop kullanma dilim değerlendirin. OHSC düşük kalite hemen atın. Hipokampüs orta kısmından izole olduğu gibi cytoarchitecture ile yalnızca bu dilimleri almak önemlidir (bkz. Şekil 3 ve 4) arasında dorsal ve ventral Hipokampus.
    7. Hipokampal bölgeyi ve neşter (yuvarlak bıçak büyüklüğüne 15; kullanarak entorhinal korteks
  7. ayrı şekil 3). Perforant yolu ve entorhinal korteks korunmalıdır.
  8. 6-8 OHSC her beyin elde edilir. 2-3 dilim içine bir hücre kültür ekleme (gözenek boyutu 0.4 µm) aktarmak ve 1 mL kültür orta iyi ücret içeren bir 6-şey kültür yemeğin bir şey yerleştirebilirsiniz.
  9. 6-iyi yemekler %5 (v/v) CO 2 ile tam olarak oksijen bir ortamda 35 ° C'de kuluçkaya ve hücre kültür orta iki günde değiştirin.
    Not: 6 gün vitro (div), senin deney. İnflamatuar reaksiyonları Dilimleme yordamı ile ilişkili gün 6 tarafından yok olur. Bu aşamada, mikroglial hücre ramified Morfoloji yeniden göstermek ve sinaptik bağlantıları olgunlaştı.

3. Doku niteliğinin

  1. fiksasyon, etiketleme ve görsel olarak yozlaşıyor nöronların OHSC
    1. deneyler gerçekleştirdikten sonra fiksasyon önce 2 h 5 µg/mL propidium iyodür (PI) ile OHSC içinde kuluçkaya nöronların oluşan bozucu çekirdekleri leke için sipariş.
      Dikkat: PI şüpheli bir kanserojen, her zaman kişisel koruyucu ekipman (PPE) gibi eldiven giymek.
    2. 0.1 M fosfat tampon (pH 7,4) ile OHSC yıkama ve paraformaldehyde (PFA) 24 h için %4 (v/v) çözeltisi ile tamir
      Dikkat: PFA şüpheli ve zehirli kanserojen olduğu. İş duman başlık altında ve KKE giymek.
    3. OHSC ekler 1 mL PBS ile yıkayın ve membran dilimleri ayırmak için bir de fırça kullanın.
    4. Etiket OHSC IB 4 boya 24-şey plaka ( şekil 5).
  2. Tek hücreleri iletim tümör işgali deneyler fluorescently kullanarak etiketli
    1. bir deney başlamadan önce 24 h etiket tümör hücreleri floresan boya Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl kullanarak Ester (CFDA SE).
    2. Ayır ve Neubauer odası kullanarak tümör hücreleri saymak.
    3. Süspansiyon 10 µL istenen cep numarasını (normalde 50.000 veya 100.000 hücreleri) içerir öyle ki Orta, hücrelerde resuspend.
    4. Hücre süspansiyon dilim kültür üzerine 10 µL uygulayın ve 3 gün boyunca işgal hücrelere izin.
    5. Deneme sonunda %4 (v/v) İngiltere'de yılın 24 h için kullanma dilim kültürler düzeltmek ve PI başka bir 24 h için cytoarchitecture görselleştirmek için yardımcı kültürlerle etiket.
      Dikkat: PFA şüpheli ve zehirli kanserojen olduğu. İş duman başlık altında ve KKE giymek.
    6. Üzerine bir kapak notu montaj medya kullanarak daha ayrıntılı bir çözümleme için ortak kültürler mount.

4. OHSC deneyler değerlendirilmesi

OHSC confocal lazer mikroskop (CLSM) tarama bir analiz. 543 PI tespiti etiketli, nöronların oluşan bozucu veya cytoarchitecture etiketli PI kullanın monokromatik ışık dalga boyu λ = nm ve emisyon grubu pass filtre dalga boyu λ için 585-615 nm =. Tümör hücreleri veya IB 4 microglia CFDA etiketli, bir uyarma dalga boyu λ kullanmak 488 = nm. Deneysel her iki türü için bir z-yığın 2 µm kalınlığında optik dilim ile kayıt ve değerlendirme için kullanılan.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Neuroprotection çalışmaları: Nöronal hasar, PI olumlu çekirdek ve IB4 microglia dentat gyrus (DG) granül hücre Katmanı (un) her üçüncü optik bölümünde sayılan olumlu sayısını belirlemek için. Tümör işgali deneyler için maksimum yoğunluk z-projeksiyon yığının tümör hücreleri tarafından işgali ve farklı işgali desenleri (şekil 6) görselleştirmek için bir tedbir olarak bölgeyi hesaplamak için kullanıldı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Mevcut protokolünü OHSC hazırlanması açıklar. Bu model iç yetenekleri ve beyin dokusu reaksiyonları fizyolojik ve patolojik bir çekim gücü uygulamadan sonra test sağlar. Elektrofizyolojik parametrelerinin analizler, yanı sıra OHSC lesioned olabilir ve hasar etkisi tüm hücre türleri belirlenebilir. Farklı maddeler ve lesioning işlemler veya makrofajlar ve lenfositler yokluğunda şifa ayrıntılı açıklaması ile tedavi mümkündür.

The Most kritik adımlar için bir başarılı Hazırlık ve kodlamayla için:...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa yoktur

Teşekkürler

Yazarlar Christine Auste onun desteğiyle video kayıt ve stadyum Ghadban onun mükemmel teknik destek için teşekkür etmek istiyorum. Urszula Grabiec, Roux Programm FKZ 29/18 tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
6 KuyuluFalcon35-3046
AgarFluka5040
OtoklavSystecDX-45
CFDA  Thermo FisherV12883
Konfokal lazer tarama mikroskobu (CLSM) LSM700Carl Zeiss
Eagle&akut; s Minimal Esansiyel Ortam Invitrogen32360-034
Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin IVector LabsFL-1101
GlukozMerk1083371000
GlutaminInvitrogen25030-024
Hank ve akut; s Dengeli Tuz Çözeltisi (Ca2 + < / sup> ve Mg < sup> ile 2 + < / sup>)İnvitrojen24020-133
Hank ve akut; s Dengeli Tuz Çözeltisi (Ca < sup> 2 + < / sup> ve Mg < sup>2 + < / sup> olmadan)İnvitrojen14170-138
İnsülinSigma AldrichI5500
L-askorbik asitSigma AldrichA5960
L-GlutaminInvitrogen25030-024
LN229Hücre Hatları Servis300363
Tıbbi siyanoakrilat yapıştırıcı (Histoakril yapıştırıcı)B.Braun1050052
Milicell Kültür EkleriMiliporePICMORG50
NMDA N-metil-D-aspartik asitSigma AldrichM3262
Normal At SeumInvitrogen26050-088
Penisilin StreptomisinInvitrogen15140-122
Petri kapları (tüm boyutlarda)Greiner627160/664160/628160
PFARoth0335.1toksik
Propidium iyodid (PI)Sigma Aldrich81845-25MGtoksik
U138ATCCHTB-14
VibratomLeica LeicaVT 1200

Kaynaklar

  1. Gähwiler, B. Organotypic slice cultures: a technique has come of age. Trends Neurosci. 20 (10), 471-477 (1997).
  2. Bahr, B. A. Long-Term Hippocampal Slices: A Model System for Investigating Synaptic Mechanisms and Pathologic Processes. J Neurosci Res. 42 (3), 294-305 (1995).
  3. Dailey, M. E., Eyo, U., Fuller, L., Hass, J., Kurpius, D. Imaging microglia in brain slices and slice cultures. Cold Spring Harbor Protoc. 2013 (12), 1142-1148 (2013).
  4. Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. Journal of Neurosci Methods. 37 (2), 173-182 (1991).
  5. Kleinberger-Doron, N., Schramm, M. Culture of mature hippocampus slices for 4 days in a newly developed medium: preservation of transmitter release and leucine incorporation into protein. Brain Res. 533 (2), 239-247 (1990).
  6. Legradi, A., Varszegi, S., Szigeti, C., Gulya, K. Adult rat hippocampal slices as in vitro models for neurodegeneration Studies on cell viability and apoptotic processes. Brain Res Bull. 84 (1), 39-44 (2011).
  7. Gähwiler, B. H. Organotypic Monolayer Cultures of Nervous Tissue. J Neurosci Methods. 4, 329-342 (1981).
  8. Gähwiler, B. H. Organotypic cultures of neural tissue. Trends Neurosci. 11 (11), 484-489 (1988).
  9. Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats. J Neurosci Methods. 130 (1), 19-32 (2003).
  10. Kim, H., Kim, E., Park, M., Lee, E., Namkoong, K. Organotypic hippocamal slice culture from the adult mouse brain: A versatile tool for translational neuropsychopharmacology. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 41, 36-43 (2013).
  11. Xiang, Z., Hrabetova, S., et al. Long-term maintenance of mature hippocampal slices in vitro. J Neurosci Methods. 98, 145-154 (2000).
  12. Adamchik, Y., Frantseva, M. V., Weisspapir, M., Carlen, P. L., Perez Velazquez, J. L. Methods to induce primary and secondary traumatic damage in organotypic hippocampal slice cultures. Brain rRes Brain Res Protoc. 5, 153-158 (2000).
  13. Cho, S., Wood, A., Bowlby, M. R. Brain slices as models for neurodegenerative disease and screening platforms to identify novel therapeutics. Curr Neuropharmacol. 5 (1), 19-33 (2007).
  14. Noraberg, J., Poulsen, F. R., et al. Organotypic hippocampal slice cultures for studies of brain damage, neuroprotection and neurorepair. Curr Drug Targets CNS Neurol Disord. 4 (4), 435-452 (2005).
  15. De Simoni, A., Griesinger, C. B., Edwards, F. a Development of rat CA1 neurones in acute versus organotypic slices: role of experience in synaptic morphology and activity. J Physiol. 550 (Pt 1), 135-147 (2003).
  16. Poindrom, P., Piguet, P., Förster, E. New Methods for Culturing Cells from Nervous Tissues. , BioValley Karger. Basel, Switzerland. (2005).
  17. Berger, T., Frotscher, M. Distribution and morphological characteristics of oligodendrocytes in the rat hippocampus in situ and in vitro: An immunocytochemical study with the monoclonal Rip antibody. J Neurocytol. 23 (1), 61-74 (1994).
  18. Haber, M., Vautrin, S., Fry, E. J., Murai, K. K. Subtype-specific oligodendrocyte dynamics in organotypic culture. Glia. 57 (9), 1000-1013 (2009).
  19. Bonde, C., Sarup, A., Schousboe, A., Gegelashvili, G., Zimmer, J., Noraberg, J. Neurotoxic and neuroprotective effects of the glutamate transporter inhibitor DL-threo-beta-benzyloxyaspartate (DL-TBOA) during physiological and ischemia-like conditions. Neurochem Int. 43 (4-5), 371-380 (2003).
  20. Derouiche, A., Heimrich, B., Frotscher, M. Loss of layer-specific astrocytic glutamine synthetase immunoreactivity in slice cultures of hippocampus. Eur J Neurosci. 5 (2), 122-127 (1993).
  21. Hailer, N. P., Jarhult, J. D., Nitsch, R. Resting microglial cells in vitro: analysis of morphology and adhesion molecule expression in organotypic hippocampal slice cultures. Glia. 18 (4), 319-331 (1996).
  22. Hailer, N. P., Wirjatijasa, F., Roser, N., Hischebeth, G. T. R., Korf, H. W., Dehghani, F. Astrocytic factors protect neuronal integrity and reduce microglial activation in an in vitro model of N-methyl-D-aspartate-induced excitotoxic injury in organotypic hippocampal slice cultures. Eur J Neurosci. 14 (2), 315-326 (2001).
  23. Bahr, B. A., Kessler, M., et al. Stable maintenance of glutamate receptors and other synaptic components in long-term hippocampal slices. Hippocampus. 5 (5), 425-439 (1995).
  24. Holopainen, I. E. Organotypic hippocampal slice cultures: A model system to study basic cellular and molecular mechanisms of neuronal cell death, neuroprotection, and synaptic plasticity. Neurochem Res. 30 (12), 1521-1528 (2005).
  25. Guy, Y., Rupert, A. E., Sandberg, M., Weber, S. G. A simple method for measuring organotypic tissue slice culture thickness. J Neurosci Methods. 199 (1), 78-81 (2011).
  26. Grabiec, U., Koch, M., et al. The endocannabinoid N-arachidonoyldopamine (NADA) exerts neuroprotective effects after excitotoxic neuronal damage via cannabinoid receptor 1 (CB 1). Neuropharmacology. 64 (4), 1797-1807 (2012).
  27. Daviaud, N., Garbayo, E., Schiller, P. C., Perez-Pinzon, M., Montero-Menei, C. N. Organotypic cultures as tools for optimizing central nervous system cell therapies. Exp Neurol. 248, 429-440 (2013).
  28. Ebrahimi, F., Hezel, M., Koch, M., Ghadban, C., Korf, H. W., Dehghani, F. Analyses of neuronal damage in excitotoxically lesioned organotypic hippocampal slice cultures. Ann Anat. 192 (4), 199-204 (2010).
  29. He, S., Shao, L. R., Wang, Y., Bausch, S. B. Synaptic and extrasynaptic plasticity in glutamatergic circuits involving dentate granule cells following chronic N-methyl-D-aspartate receptor inhibition. J Neurophysiol. 109 (6), 1535-1547 (2013).
  30. Kann, O., Taubenberger, N., et al. Muscarinic receptor activation determines the effects of store-operated Ca2+-entry on excitability and energy metabolism in pyramidal neurons. Cell Calcium. 51 (1), 40-50 (2012).
  31. Pérez-Gómez, A., Tasker, R. A. Enhanced neurogenesis in organotypic cultures of rat hippocampus after transient subfield-selective excitotoxic insult induced by domoic acid. Neuroscience. 208, 97-108 (2012).
  32. Raineteau, O., Rietschin, L., Gradwohl, G., Guillemot, F., Gähwiler, B. H. Neurogenesis in hippocampal slice cultures. Mol Cell Neurosc. 26 (2), 241-250 (2004).
  33. Pozzo Miller, L. D., Mahanty, N. K., Connor, J. A., Landist, D. M. D. Pyramidal Cell Death in Slice Cultures From Rat Hippocampus Is Prevented By Glutamate Receptor Antagonists. Neuroscience. 63 (2), (1994).
  34. Koch, M., Kreutz, S., et al. The cannabinoid WIN 55,212-2-mediated protection of dentate gyrus granule cells is driven by CB 1 receptors and modulated by TRPA1 and Ca v2.2 channels. Hippocampus. 21 (5), 554-564 (2011).
  35. Pukrop, T., Dehghani, F., et al. Microglia promote colonization of brain tissue by breast cancer cells in a Wnt-dependent way. Glia. 58 (12), 1477-1489 (2010).
  36. Kohl, A., Dehghani, F., Korf, H. W., Hailer, N. P. The bisphosphonate clodronate depletes microglial cells in excitotoxically injured organotypic hippocampal slice cultures. Exp Neurol. 181 (1), 1-11 (2003).
  37. Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model. Biochem Biophys Res Commun. 269 (2), 513-520 (2000).
  38. Aaberg-Jessen, C., Nørregaard, A., Christensen, K., Pedersen, C. B., Andersen, C., Kristensen, B. W. Invasion of primary glioma- and cell line-derived spheroids implanted into corticostriatal slice cultures. Int J Clin Exp Pathol. 6 (4), 546-560 (2013).
  39. Vinci, M., Box, C., Eccles, S. A. Three-dimensional (3D) tumor spheroid invasion assay. J Vis Exp. (99), e52686(2015).
  40. Hagemann, C., Fuchs, S., et al. Impact of MACC1 on human malignant glioma progression and patients ' unfavorable prognosis. Neuro Oncol. 15 (12), 1696-1709 (2013).
  41. Hohmann, T., Grabiec, U., Ghadban, C., Feese, K., Dehghani, F. The Influence of Biomechanical Properties and Cannabinoids on Tumor Invasion. Cell Adh Migr. 11 (1), 54-67 (2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

N roproteksiyon al malarT m r nvazyon ModeliVibratom Kesit Alma Prosed rKonfokal Lazer Taramal MikroskopiIzolektin B4 Pozitif Mikroglial H crelerPropidyum yod r Pozitif ekirdeklerH cre K lt r nsert Haz rlamaGlioblastoma H cre nvazyonuHipokampal Arkitekt r n Korunmas

İlgili makaleler