Yöntem makalesi

Enzim bazlı biyosensörlerin kullanılması Alzheimer Fare Modellerinde Tonik ve Fazik glutamat Ölçmek için

DOI:

10.3791/55418

⸱

3 Mayıs 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Psychology, West Virginia University, 2Department of Drug Discovery & Development, Auburn University, 3Department of Neuroscience, University of Kentucky Medical Center

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, tonik ve enzim-bağlı mikroelektrot dizileri (MEA) kullanılarak in vivo olarak fazik hücre dışı glutamat değişiklikleri ölçmek için bir uzamsal ve zamansal hassas bir yöntem için kurulum, yazılım navigasyon ve veri analizi tarif eder.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nörotransmitter aksama Alzheimer hastalığı, Parkinson hastalığı, depresyon ve anksiyete altında yatan patolojide rol oynayan, genellikle merkezi sinir sisteminde (MSS) hastalıklarının önemli bir bileşenidir. Geleneksel olarak, mikrodiyaliz bu hastalıklarda meydana nörotransmitter değişiklikleri incelemek için en yaygın (övülen) tekniği olmuştur. Mikrodiyaliz doku büyük alanlar boyunca yavaş 1-20 dakika değişiklikleri ölçmek yeteneğine sahiptir çünkü, bu potansiyel olarak beyin ve yavaş numune alma kabiliyeti olan içsel bağlantıları yok, invaziflik dezavantajına sahiptir. Nispeten yeni bir teknik, mikroelektrot dizi (MEA) meydana olarak bir uzamsal ve zamansal hassas bir yaklaşım için yapım ayrık beyin bölgelerinde spesifik nörotransmitter değişimleri ölçmek için birçok avantajı vardır. Buna ek olarak, ÇÇA kullanılarak in vivo nörotransmiter değişiklikleri ölçme imkanı veren, minimal invaziv. Laboratuvarımızda, biz haAlzheimer hastalığı patolojisi ile ilişkili nörotransmiter, glutamat, değişimlere özel olarak ilgi geçtim. Bu nedenle, burada tarif edilen yöntem, Alzheimer hastalığının bir transgenik fare modelinde glutamat potansiyel hipokampal aksaklıkları değerlendirmek için kullanılmıştır. Kısaca, yöntem, ilgilenilen ve arka plan gürültüsünü ve girişimcileri dışarı çıkarmak için kendinden referanslı siteleri kullanma nörotransmiter için çok seçici bir enzim ile bir çok site mikroelektrot kaplanır; kullanılır. kaplama ve kalibrasyon sonra MEA mikropipet ile tasarlanmış olabilir ve bir stereotaksik aracı kullanılarak ilgili beyin bölgesi içine indirilir. Burada yöntem, RTG (TauP301L) 4510 fareler anestezi ve hassas hipokampusun alt bölgeler (DG, CA1, ve CA3) hedef bir stereotaksik cihaz kullanılarak içerir tarif.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

beyinde nörotransmitter değişiklikleri ölçme genellikle nörotransmitter düzensizliği ile karakterize edilen merkezi sinir sistemi (CNS) hastalıklarının araştırılmasında sinirbilimciler için önemli bir araçtır. Yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC / EC) ile kombinasyon halinde hücre dışı mikrodiyaliz nörotransmitter seviyeleri 1, 2, değişiklikleri ölçmek için en yaygın olarak kullanılan yöntem olmuştur rağmen, 3, 4, mikrodiyaliz probları uzamsal ve zamansal çözünürlüğü nörotransmiter için ideal olmayabilir , bu şekilde sıkıca hücre dışı alan 5, 6 düzenlenmiştir glutamat gibi. Çünkü genetik ve görüntülemede son gelişmeler, in vivo olarak glutamat eşleştirmek için kullanılabilecek ek yöntem vardır. genetik olarak kodlanmış glutamat floresan haberci kullanılarak (iGluSnFR) bird, çift foton görüntüleme, araştırmacılar, in vitro ve in vivo 7, 8, 9 hem de nöron ve astrositler tarafından glutamat salınmasını görselleştirmek mümkün bulunmaktadır. Özellikle, bu daha geniş bir görüş alanına kayıt için izin verir ve beynin içsel bağlantılarını kesintiye uğratmaz. Bu yeni optik teknikler glutamat kinetik ve duyusal uyarılmış cevaplar ve nöronal aktivitenin ölçümü görselleştirilmesi için imkan vermesine rağmen, farklı beyin bölgelerinde hücre dışı boşlukta glutamat miktarını belirlemek için kabiliyetinden yoksundur.

Alternatif bir yöntem, selektif olarak kendinden başvurulan kayıt düzeni kullanmak suretiyle, glutamat gibi hücre dışı taşıyıcıların seviyelerini ölçebilir, enzime bağlı mikroelektrot dizi (MEA) 'dir. MEA tekniği travmatik beynin aşağıdaki hücre dışı glutamat değişiklikleri incelemek için kullanılmıştıryaşlanma yaralanma 10, 11, 12, 13, 14, stres 15, 16, epilepsi 17, 18, Alzheimer hastalığı 19, 20, ve bir viral mimik 21 enjeksiyonu mikrodiyaliz doğasında uzamsal ve zamansal sınırların üzerinde bir gelişmeyi temsil etmektedir. Mikrodiyaliz sinaps 22, 23 yakınında ölçmek için sınırlayan ise, taraflı çevre hücre dışı glutamat yayılma seçici önlemler yakınındaki 24, 25 sinapsların izin veren yüksek uzamsal çözünürlüğü vardır. İkinci olarak, mikrodiyaliz düşük zamansal çözünürlüğü (1-20 dakika) araştırmak için sınırlarİkinci aralıkta 26 milisaniye meydana gelen glutamat salınımı ve açıklık hızlı dinamikleri. glutamat veya arıtılması farklılıklar glutamat düzeylerini dinlenme tonik ölçümünde de, belirgin olmayabilir, çünkü glutamat salma ve temizlik doğrudan ölçülen edilmesi gerekli olabilir. Taraflı çevre nedeniyle yüksek zamansal çözünürlüğü (2Hz) ve algılama düşük olan bu sınırların (<1 uM) bu tür önlemler için izin verir. Üçüncü olarak, taraflı çevre örneğin sıçan veya fare hipokampta gibi belirli bir beyin bölgesi içinde nörotransmitterlerin alt-varyasyonlar, incelemesine olanak sağlar. Örneğin hücre dışı glutamat alt-farklılıklarını incelemek için, ayrı ayrı dentat girus (DG), bir trisynaptic devresi 27 ile bağlanır, hipokampus, ve cornu ammonis 3 (CA3) ve cornu ammonis 1 (CA1) hedefleyebilir ÇÇA kullanılmıştır. Implantasyon 28 olduğu - (4 mm uzunluğu 1) ve hasar nedeniyle mikrodiyaliz probları büyüklüğü/ sup>, 29 alt-farklar ele almak zordur. Ayrıca, optik sistemler sadece bu alt-stimülasyon 7 izin vermeyen bir bıyık uyarılması veya hafif titreme gibi dış uyarıcılara yoluyla ulaşmayı sağlamaktadır. Diğer yöntemlere göre ÇÇA son bir yararı onların dışsal ve içsel bağlantıları aksatmadan in vivo bu alt bölgeleri incelemek için yeteneğidir.

Burada, bir seramik bazlı çoklu mikroelektrot içeren ÇÇA ile kombinasyon halinde bir kayıt sistemi (örneğin, FAST16mkIII), diferansiyel tayinle ve analit sinyali kaldırılacak maddeleri müdahale sağlamak için kayıt sitelerinde kaplanabilir açıklar. Ayrıca bu diziler amperometri tabanlı DG, CA3 içindeki in vivo glutamat düzenleme çalışmaları ve anestezi uygulanmış RTG CA1 hipokampal alt bölgelerde kullanılabilir göstermektedir (TauP301L) 4510 fareler, yaygın olarak kullanılan bir m,Alzheimer hastalığının ouse modeli. Buna ek olarak, riluzol farelere işlenmesiyle glutamat salınması ve klirens hızlı dinamiklerine MEA duyarlılığın onayı verir, in vitro olarak gösterilen bir ilaç glutamat salınmasını azaltmak ve glutamat alımını 30, 31, 32, 33 arttırılması için ve TauP301L fare modelinde in vivo bu ilgili değişiklikleri gösteren.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Enzimlerin veya Matris Katmanı Mikroelektrod Array kaplanması

  1. Protein matriks çözeltisi hazırlanması
    1. büyükbaş hayvan serum albümin (BSA), 10 mg tartılır ve bir 1.5 mL mikrosantrifüj tüpüne aktarılır.
    2. BSA içeren bir mikro santrifüj tüpüne Dİ suyu 985 uL ekleyin. (BSA çözünene kadar, 1000 uL pipet ~ 3 kez kullanılarak yeniden pipetleme) el ile karıştırma ile çözelti karıştırın.
      NOT: çözeltisine hava taşıyabilirler Bunu yaparken olarak çözüm karıştırmak için girdap kullanmayın. Ayrıca, hava kabarcıkları önlemek için bir hacme <1,000 L (örn 700 ul) için pipet ayarlayın. Gerekirse çözelti bir mikrosantrifüj içinde yerleştirilebilir.
    3. BSA çözeltisi ile çözüldükten sonra,% 25 glutaraldehid çözeltisi 5 uL ekleyin. 5 kez - kapalı bir tüp 3 ters çevirerek çözüm karıştırın. Elde edilen çözelti,% 0.125 glutaraldehid ile% 1 BSA.
    4. Protein matriks Solu kenara5 dakika boyunca tion. Çözelti rengi açık sarı görünür.
  2. Istenen enzim çözeltisinin hazırlanması (örneğin, glutamat oksidaz)
    1. Liyofilize süzüldü distile su ilave edilerek glutamat oksidaz çözeltisi hazırlayın, saflaştırılmış enzim (örneğin, 50 uL DI suyun 0.5 U / uL vermek üzere glutamat oksidaz 25 adet ilave edildi).
      Not: Kısım stok çözeltisi (örneğin 1 uL) ve -20 ° C'de uygun büyüklükte kapların (örneğin, 500 uL mikrosantrifüj tüpleri) alikotları saklayın. Alikotlar bu koşullar altında en fazla 6 ay süreyle saklanabilir.
    2. glutamat oksidaz ihtiva eden mikro santrifüj bölünmüştür tüp BSA / glutaraldehid çözeltisi 4 uL ekleyin. kılavuzu çalkalama ile bir solüsyon (10 uL pipetle yeniden pipetleme. pipet hacmi <5 uL ayarlanmış olmalıdır). Elde edilen çözelti,% 1 BSA,% 0.125 glutaraldehit ve 0.1 U / ml glutamat oksidazdır.Hemen kaplanması için solüsyonu kullanın.
      Not: Glutamat oksidaz kaplama çözeltisi, sadece 15 dakika içinde kullanılabilmektedir. Birkaç ÇÇA'lar bir hazırlanan çözelti ile kaplanabilir birlikte, glutamat oksidaz için kullanılabilen bir zaman aralığı aşmayacak şekilde önerilir. 15 dakika içinde kaplanabilir Elektrotların sayısı değişir. Genel olarak, 4 ila 6 elektrotlar her seferinde kaplanabilir.
  3. MEA kaplanması
    1. Tipik olarak kaplama kayıt istenen enzim (glutamat oksidaz) ile bir MEA yer (ler) ve kayıt bölgesi (ler) i ( 'sentinel' bölgesi (ler)), farklı bir çift bir çift aktif protein matrisi ile kaplanır.
    2. L-glutamat oksidaz veya inaktif protein matrisi çözeltisi (BSA + glutaraldehit) ile kat ÇÇA için kör uçlu Hamilton microsyringes (örneğin 10 uL) kullanın. Enzim ya da inaktif protein matrisi kaplamalarda kullanılan prosedürleri aynıdır.
    3. kullanımdan önce ve sonra şırınga temizleyin (3 durulama ileIyonu giderilmiş su, metanol ile 3 durulama DI su ile 5 durulama).
      Not: Dedicated şırıngalar enzim (glutamat oksidaz) ya da protein matrisinin tabakalarının uygulanması için kullanılır. Farklı bir çözüm için aynı şırıngayı kullanmayın. Enzim kaplamalar daha önce protein matrisi kaplamaların yapılması tavsiye edilir.
    4. Bir 10 uL Hamilton şırıngası kullanılarak glutamat oksidaz ya da bir protein matrisi hazırlayın. Yavaşça (bir mikroskop kullanılarak görüntülendi) şırınga ucunun çözeltinin küçük bir boncuk dağıtmak için pistonu.
    5. disseksiyon mikroskobu kullanılarak, MEA kayıt hedef bölgelere kısa bir süre bir katman temsil çözeltisi damla / boncuk ile kayıt siteleri temas ettirilmesi ile uygun kayıt sitelerine çözelti uygulamak. Üç kat protein matrisi ve enzim kat hem de yeterlidir. Kalın tabakalar MEA hassasiyetini azaltabilir.
    6. Dik çözüm damlacık kaldırın ve kayıtları sitelerde olmasını (yani enjektörler ige ucu) MEA yüzeyi boyunca kazımak olmamalıdır.
    7. 1 dakika için bir zamanlayıcı ayarlayın. Bu kayıt yer (ler) için kaplama uygulamaları arasında en az bir zaman gerekliliktir. enzim kaplı ÇÇA'lar 5-7 gün süreyle 4 ° C'de bekletilmelidir.
    8. Bir laboratuvar defterine kaplamalar, elektrot numarasını ve bir isim ve tarihini uygulamak ne kadar sürdü, uygulanan kat sayısını kaydedin.

Geliştirilmiş Seçicilik m-fenilendiamin ile 2. Elektrokaplama

  1. Hazırlama m-fenilendiamin dihidroklorür (MPD) çözeltisi
    Not: bu şekilde, diğer potansiyel olarak bir karışan moleküllerin fazla glutamat / H2O 2 için sensör seçiciliğinin geliştirilmesi ile, dopamin ve diğer büyük, müdahaleci moleküller (örneğin, askorbik asit) oksidasyonunu önlemek için ihraç tabakasının, MPD, Plate.
    1. Bir hacimli şişe içinde 0.05 M fosfat tamponlu tuz çözeltisi, 50 mL (PBS) ölçün ve 0.05 50 mL aktarmakdaha büyük bir (150 mL) bir Erlenmeyer şişesine M PBS ile yıkandı.
    2. Bir azot tankı (örneğin, boru kullanarak bir basınçlı ejektör bağlı) bağlı borular kullanarak, Hortumun açık ucuna bir pipet (örneğin P200 ucu) ekleyin. PBS çözeltisi içinde eklenmiş pipet ucu ile boru yerleştirin ve parafilm ile gevşek bir çözüm kapsamaktadır. 20 dakika boyunca azot ile hafifçe kabarcık çözeltisi açın.
    3. MPD 0.045 g tartılır.
      Dikkat: MPD potansiyel kanserojen bir maddedir. MPD Tartı davlumbaz içinde bulunan bir ölçek kullanılarak yapılmalıdır. MPD kullanırken eldiven ve maske kullanılmalıdır. Kaput işlevsel olduğundan emin olun ve kanat uygun çalışma seviyesine çekilir söyledi. MPD ile kirlenmiş olabilir hemen temiz yüzeyler kalıcı lekelenmesinin önüne geçmek için.
    4. fokurdayan sonra gazı alınmış PBS çözeltisine MPD tüm aktarın. parafilm ve çözelti içinde MPD çözünmesi için yavaşça girdap çözeltisi ile bir şişe açıklığı örtün. aggressiv kaçınıne karıştırılması veya çözelti halinde gazları doğurabilir da bu şekilde bir girdap kullanımı.
    5. 50 mL'lik bir behere çözelti aktarın. Bir karıştırma çubuğu gerekli değildir.
  2. elektrot elektrokaplama
    1. bir referans elektrodu elde edin. MPD sadece kaplama adanmış referans elektrotlar kullanın. Kalibrasyon prosedürleri için farklı bir referans elektrodu kullanarak.
    2. beher içinde, referans elektrot tutucunun plastik kol pozisyonuna. Cam referans elektrotu içinde hava kabarcıklarının kontrol (görmek mümkün olmayabilir). Yavaşça ucundaki bir hava kabarcıklarını çıkarmak için bir referans elektrotun uzak ucunu hafifçe vurun.
    3. PBS içeren beher içine plastik kol açma ve altta bulunan bir referans elektrotu yerleştirildi. Referans elektrot, deney şişesinin zeminine temas etmez emin olun.
    4. MEA MPD plaka olması (örneğin DIP konektör) headstage (örneğin 2 pA / mV) referans elektrot bağlayın ve bağlantıheadstage d.
    5. Sadece MEA ucu çözeltide batık şekilde beher çözelti içine MEA indirin. siyah 'balonunun' (MEA ucu üzerinde bulunan siyah yalıtım) ötesinde sıvı içinde MEA ipuçlarını batırmayın. Aksi takdirde MEA zarar verebilir.
    6. Elektrot kanalları ve headstage bağlantının işlevselliğini doğrulamak için bir 'test' kalibrasyon çalıştırın.
      NOT: Donanım ayarları, kullanılan ekipman yansıtmalıdır rağmen analit / bir karışan tipi ve konsantrasyonu ile ilgili ayrıntılar 'test' Kalibrasyon için girilmesi gerekmez. yeniden şifreleme modu 'Amperometri' olmalı ve 'V uygulanan' -0.7 V tüm kanallar için tipik kayıt doğrulama olmalıdır.
    7. tüm kayıt sitelerinin bağlantısı doğrulandığında 'İptal' seçerek iptal edin. Kalibrasyon verileri kaydetmek gerekli değildir.
    8. Masaüstünde "Elektro" simgesini seçin. Elektrolitik içinol Menüsü görünecektir. Doğru ayarlar girildikten doğrulayın:
      PP genlik: 0.25
      Offset: -0.5
      Frekans: 0.05
      Süre (dak): 20
    9. kaplamayı başlamak için 'pause' düğmesine basın. Geçen süre alanı saymaya başlamalıdır.
    10. tamamlanma (bütün zaman geçtikten) sonra, seçme açıldı menüde 'başka MEA' MPD ek MEA kaplama başlayacak. Bir MEA ile kaplı MEA MPD kaplanması için yerine ve elektro aracını kullanarak elektro prosedürü tekrarlayın.
      NOT: en fazla 2 kez veya 1 saatlik bir süre içinde hazırlanan MPD çözümü kullanılması önerilir. 2'den fazla ÇÇA hazırlamak için taze bir çözüm hazırlayın.
    11. elektroliz bitirmek için 'çıkış yazılımını seçin. kalibre önce Dİ suyu (bir tuz kalıntısı önlemek için) ve depo (24 saat) ile MPD kaplama elektrot uçları durulayın.
    12. çözeltiden referans elektrot kaldırma ve uygun s yerleştirmeden önce Dİ suyu ile durulayınUZUN SÜRELİ MUHAFAZA solüsyonu (örneğin, 3 M NaCI). Referans elektrot ucu çözelti içinde kalmasını sağlayın. çözelti içine yavaşça alt cam referans elektrot cam hasar görmesini önlemek için.
    13. Uygun bir şekilde etiketlenmiş, tehlikeli bir atık konteynerine MPD solüsyonu atın.

3. Glutamat Algılama ve seçicilik için MEA kalibre edin (Şekil 1) 21

  1. kalibrasyon için gerekli çözümler hazırlanması.
    NOT: Tablo 1'e bakınız.
  2. sabit karıştırma altında kalibrasyonu gerçekleştirmek, 37 ° C 'de (manyetik batarya karıştırıcı çalıştırılır). Isıtma yastığı açın veya su dolaşımlı ve küçük bir karıştırma çubuğu elde edin. yavaş ama bir ekleme (aşağıda) yapıldığı zaman, yeni plato çabuk ulaşılır olduğunu yeterince hızlı karıştırınız.
  3. kayıt kontrol sistemine headstage (2 pA / mV) geç ve karıştırılmıştır 0.05 M PBS, 40 ml (50 ml beher kullanın) içine MEA sokun.
  4. r bağlayıneference elektrot. hiç hava kabarcığı olmadığından emin olmak için son Flick.
  5. kayıt programını açın ve "Kalibrasyon" a tıklayın. ayarları (kontrol etmenizi nöbetçi siteler farklı elektrotlarla değişebilir bu şekilde seçilir), MEA numarası ve basın "Başlat" seçeneğini doğru olduğundan emin olun.
  6. , Dengeleme için 10 dakika - 5 Veren taban (<0.004 nA / dakika değişimi) stabilize olduktan sonra başlar.
  7. "Taban çizgisi" seçip 500 uL 20 mM askorbik asit (Parazit, nihai [250 uM]) ekleyin mevcut yeni, sabit bir plato değerine ulaşmış bir kez ve "Parazit" seçilirse, (AA beyin çapında bir karışan olarak düşünülür) herhangi. ilaveler arasında 1 dakika - 0.5 izin verin. MEA düzgün elektroliz yoluyla edilirse, hemen hemen hiçbir değişiklik gözlenmelidir.
  8. 20 mM L-glutamat (nihai [20 iLM]) 40 uL ekleyin ve güncel kez yeni, istikrarlı platoya, mark 1. ek "analit" ulaşmıştır. 3 glutamat olmak üzere toplam üç kez tekrarlayıne ilave.
  9. 40 mcL DA ekleyin. "Analit" seçmeyin; "Test Madde" seç - DA yalnızca DA içeren alanlarda bir karışan olabilir.
  10. 40 uL Peroksit ekleyin. "Analit" seçmeyin; "Test Madde" i seçin.
  11. Kalibrasyon bittiğinde "Dur" butonuna tıklayın.
  12. MEA işlevselliğini belirlemek için hesaplama sekmesini tıklayın ve bir laboratuar defterine aşağıdaki parametreleri kaydedin.
    1. Bu kalibrasyon kullanılan MEA tasarımı (3000 um 2) için, ≥ 0.004 nA / uM'lik bir eğimi olan bir MEA kullanımı, daha düşük eğimler bazı deneyler için kullanılabilir. Enzim kaplanmış ve kaplanmamış siteleri arasında eğim% 10 daha az fark ise, o zaman sadece ya da temiz / MEA atmak uyarılmış serbest bırakılması için bu ÇÇA kullanın.
    2. 1.5 uM ≤ tespiti (LOD) bir sınır kullanın. LOD 1.5 uM'den büyük ise, o uyarılmış Releas bu ÇÇA kullanmakE ve tek alıma izin verir. tonik seviyelerinin kaydedilmesi için bu elektrotlar kullanmayın.
    3. > 20 keyfi birimler Enterferan üzerinde arzu edilen analite (örneğin, glutamat) için bir seçiciliğe kullanın. seçicilik sonra temiz, 20'den az ise / MEA atın.
    4. ≥ 0.90 kalibrasyon eğrisinin bir doğrusallık (R2) kullanın. doğrusallık az 0.90, daha sonra temiz veya MEA atmak ise.
  13. MEA, tarih # ile dosyayı kaydedin ve kişi kalibrasyon baş harfleri.

4. mikropipet monte

Not: Mikropipetler (kapiler cam), 10 bir iç çapı olan bir uca sahip olmalıdır - 15 um.

  1. dört platinyum kayıt siteleri arasında merkezi olarak mikropipet yerleştirin ve yapışkan balmumu kullanılarak yapıldı ve kil modelleme MEA üzerinde 50-100 um monte edin.
  2. Mikropipet yüklemek için, glutamat ya da KCI çözeltisi, 0.22 um'lik steril bir şırınga filte ile doldurulmuş bir 1 ml şırınga kullanınr ve 97 mm long, 28-gauge bir pipet dolgu maddesi, mikropipet dolgu. Yani hava kabarcığı vardır emin olarak, mikropipet üstündeki iğneyi ve mikropipet (MEA doğru uç) altındaki doldurun.
  3. yaklaşık 1 s için 20 psi - 2 basınç püskürtme sistemine mikropipet takın.

5. Plaka, in vivo kullanım için minyatür Referans Elektrot

  1. Banyo elektrodu () 100 mL'lik bir beher (kaplama banyosu içinde 50 g NaCI / 90 ml 1 M HCI) kaplama çözeltisi hazırlandı ve kesme (~ platin 10 cm uzunluğunda (Pt) tel (~ 0.02" çapında)).
  2. (0.008" çıplak) Teflon kaplı gümüş tel 15 cm uzunluğunda bir parça ve gümüş tel ucunun her bir ucundan Teflon kaplama yaklaşık 1 cm kazımak için bir tıraş bıçağı kullanma - 10 kesilir.
  3. bir ucunda bir altın pimini lehimleyiniz ve kaplama banyoya maruz gümüş telin bir ucunu yerleştirin.
  4. (~ 9 bir çıkışı olan tek bir DC adaptör. - 15 VDC max) bir DC adaptörü kullanılarak,altın pim tarafında hazırlanan bir gümüş tel (referans elektrodu) için "kırmızı" (+) kablolarımn. (-) Pt banyo katoda tel "siyah" kelepçe.
  5. DC adaptörü takın. Doğru kaplama işlemi için bakın - kabarcıklar banyo elektrotta görünmelidir; Referans elektrot, bir gümüş / gri bir renk alır.
    DİKKAT: Olası açmayın [Siyah (-) Kırmızı (+) vs] - Bu durumda ve taze kaplama çözümü yapılması gerekir eğer kaplama banyosundan harap olacak. Kötü bir çözüm renkte sarı dönecek: KULLANMAYIN!
    Not: Kaplama Reaksiyon 2-5 dakika genellikle alır: Ag 0 + CI - → AgCİ + e -
  6. Referans elektrodu test edin.
    1. 200 mV DC ayarı - 100 multimetre ayarlayın.
    2. Yeni kaplama referans elektroduna karşı referansı 3 M NaCI elektrot ve test (yani, çalışma bilinen önceden test edilmiş elektrottur) bir gösterge yerleştirin.
      NOT: Bizim iseyeni bir referans elektrot, ing (12 saat önerilir) kullanılmadan önce 3 M NaCl ile ıslatın.
    3. Referans elektrodunun altın pim üzerine "kırmızı" (+) öne yerleştirin test edilecek. (-) karşılaştırma elektrot kanattan "siyah" koyun. Kabul edilebilir bir okuma aralığı ± 10 mV olur. 0 mV 2 referans elektrotlar boyunca idealdir.

MEA Recordings için 6. Genel Hayvan Cerrahi

  1. Ameliyat için hazırlık
    1. Önceki gece dezenfektan içinde cerrahi aletler yerleştirin.
    2. dezenfektan aletleri çıkarın ve iyice durulayın ve steril cerrahi pad üzerinde araçları yerleştirin. bir ısıtma yastığı elde edin.
    3. iki elektrot kalibre ve prosedürler 3 ve 4 de tarif edildiği gibi mikropipet ekleyin.
    4. Bölüm 5'te tarif edildiği gibi, referans elektrotu olun.
    5. 200 uM glutamat ve 70 mM KCI olun. Tablo 1'e bakınız.
    6. hayvan Edinme ve cerrahi yaprak üzerindeki ağırlığını kaydedin.
    7. anestezi hazırlayın ve ısıtma yastığı açın.
  2. MEA ameliyatı gerçekleştirin
    1. solunum hızı önemli ölçüde azalmıştır ve hayvan ayak veya kuyruk tutam yanıt vermez kadar izofluran (oksijen içinde% 4 akımı) kullanılarak, bir indüksiyon odasında hayvan anestetize. Telaffuz solunum hızı ve vücut sıcaklığı, her 15 dk.
    2. kafa stabilize etmek için kulak çubukları kullanılarak steryotaksik bir cihazla hayvan yerleştirin. Hayvan güvenlidir ve kafa hareket etmez emin olun. oksijen içinde% 3 - 1.5 izofluran akış aşağı indirin. ısıtma yastığı doğru hayvan altına yerleştirilmiş ve ek ısı temin etmek üzere 37 ° C'ye ayarlanmış olduğundan emin olun. Tamamlayıcı ısı sağlanamaması derin hipotermi ve hayvanın erken ölüm ile sonuçlanabilir.
    3. steril pamuklu bir aplikatör kullanılarak göz merhemi sürün ve solunum hızı kayıt vevücut ısısı. Bir pilli düzeltici kullanarak, başın üst tıraş. kulaklara yakın kürk çıkarmak için küçük bir cerrahi makas kullanın.
    4. Bu noktada, steril cerrahi eldiven taktı. kafa derisi alkol ardından iyot ve (üç kez) uygulayın.
    5. Bir neşter kullanılarak, düz kafa derisi ortasında aşağı bir kesi yapmak ve boğa köpek kelepçeler kullanarak cilt yayıldı. herhangi bir kan emmek için steril bir pamuk ucu al. bregma ve lambda görünümünü sağlamak için, hidrojen peroksit kullanarak.
    6. başlığı düzgün D / V ve bregma ve lambda M / L koordinat ölçümü ile yerleştirilmiş olduğunu kontrol edin. kafa düz bir düzlem üzerinde ise koordinat değişiklikler sıfır olmalıdır. bir düzleme sağlamak için gerekli kafa ve kulak çubukları ayarlayın.
    7. bregma bulun ve koordinatları sıfır. İstenilen koordinatları kullanarak, sol ve sağ taşımak ve kalıcı bir kalem kullanarak bir işareti yapmak. Bir cauterizer / işaretleyici kullanarak ulaşmak için yeterli oda işareti etrafında büyük bir kare yapmakistenen bölgesi.
    8. Steril bir döner aracını kullanarak, kare işareti etrafında delin. steril pamuklu bir aplikatör kullanılarak bir kan ıslatın. Her kullanımdan için matkap ucu önce dezenfekte.
    9. headstage MEA takın ve burada arzu edilen birinci çözelti ile pipet dolgu. atılmanın çözüm incelenebilir böylece çözüm olmadan pipet boşluk bırakmayacak emin olun. cam mikropipet için boru takın.
    10. nitrojen tankı ve basınçlı ejektör (psi = 5, zaman = 0.6 ler) açın. pipet sağlamak için Test (basın manuel kırmızı düğme) başlangıcından önce tıkanmış değildir.
    11. Mikropipet kalibre edin. retikül üzerinde 0'dan başlamalı ve başlangıç ​​noktasını belirtmek için headstage mavi bir parça bant yerleştirin. Dijital okuyucu açın ve sıfıra sıfırlayın. aşağı 1 mm (DV) git ve çözelti retikülün üzerinde taşınmıştır kenelerin sayısı. 10 kene 1 mm (1 mm = 250 nL), yani 1 kene = 25 nL eşit olmalıdır.
    12. bir referans elektrotu yerleştirildiBu devrenin tamamlanması için beyin sıvı hala temas içinde olduğu şekilde MEA uzak konum.
    13. bağlı MEA ile bregma Bul ve dijital okuyucu sıfır. İstenen koordinatlara MEA getirin. ucu beyin dokunana kadar yavaşça MEA indirin. Sıfır DV koordinat yavaşça beyin içine MEA indirin.
    14. kayıt programında, istenen kalibre elektrot üzerine tıklayın ve ardından "Experiment gerçekleştirin." Hayvan anestezi edilirken Sistem daha sonra ilgilenilen analit için tonik seviyelerinin kaydetmeye başlayacaktır.
    15. 45 dakika - bir temel gözlem yardımcı ve 20 taban elektrodu sağlayacak bir eksene büyüt.
    16. bazal istikrarlı sonra, 0,6 s ve 5 psi basınç ejektör ayarlamak ve çıkarma basınçlı ejektör kırmızı düğmeye basın. Enjeksiyon tabakanın (Şekil 2) üzerinde hareket süresi ve yüksek basıncın oluşmasını hem de hacim / keneler kaydedin. Yani (gerekli herhangi bir not MakeDaha büyük zirveler, seyreltme etkisi, tıkanmış pipet, gürültülü bazal / o-kapsam).
    17. enjeksiyonlar arasında 5 dakika - glutamat enjeksiyonlar için, 3 bekleyin. enjeksiyonlar arasında 2 dakika - KCI için enjeksiyonlar 1 bekleyin. Aynı basınç ve zaman en az 3 kez kullanılarak enjekte edilir. zamanını değiştirin ve tekrarlayın. Mikropipet tıkanmış sürece basıncını değiştirmeye çalışın.
    18. Mikropipet tıkanmış ise, 30 psi basınç kadar artar.
    19. İstenen beyin bölgelerinde Kayıt, farklı yöntemler kullanarak beynin her iki tarafta tekrar etmek. 20 dakika boyunca her yeni bölgesinde bir temel kaydedin.
    20. Ekli mikropipet ile MEA al DI suyla yıkayın ve tüm kan bitene kadar gece boyunca PBS ile ıslatın.
    21. hayvan euthanize ve -80 ° C dondurucu içinde bir önceden etiketlenmiş tüp ve deposunda beyinlerine veya sabitleme için bir tarafı tutun. izofluran (inhalasyon) ile hayvan, doz aşımı euthanize için. cerrahi makas kullanılarak başının kesilmesini gerçekleştirin ve istenilen bölgeleri teşrih.

7. Temizleme Kaplı ÇÇA'lar sonra kullanın

  1. değil temiz ÇÇA kullanılmayan eğer yapın. tiftik veya toz yüzeyi üzerinde, metanol ile temiz ve kaplamadan önce, 24 saat boyunca kurumaya bırakın ise.
  2. Su banyosuna (80 ° C) açın ve 30 dakika boyunca MEA ucu bekletin. Dikkatli bir şekilde pamuk ile elektrot ucu elektrot ucu üzerinde bırakılabilir herhangi bir kirin çıkarılması için aplikatör uçlu silin. Islak MEA siyah "yalıtım kısmı" gelmesin.
  3. Üç farklı sonikatörler kullanarak, 5 dakika boyunca (1) Citrisolv, ticari bir çözücü madde ve temizleme maddesi (2) izopropil olarak MEA ucu, ve (3) distile su ıslatın. Dikkatli bir şekilde pamuk ile elektrot ucu elektrot ucu üzerinde bırakılabilir herhangi bir kirin çıkarılması için aplikatör uçlu silin.
  4. Katmanlar başarıyla kaldırıldı sağlamak için bir mikroskop altında ipuçlarını inceleyin.

8. Analiz

  1. Verileri analiz etmek için,İlk bitmiş deney çift tıklayarak ve dosya açılır menüden "ihracat verilerini" seçerek istediğiniz denemeyi ihracat.
  2. İstenen dosya konumu için bu verileri kaydetmek ve analiz programı açın. Analiz programında "açmak" ı tıklayın ve son kaydedilen dosyayı seçin.
  3. programı dosya yüklemek ve daha sonra olay işaretleri sekmesi altında deneyi kontrol etmek için birkaç dakikanızı verin. çıkış altında, istenen parametreler kutularını işaretleyin. Örneğin, bazal, amplitüd (eğri altındaki alan) pik alanı, T yükselişi ve T 80 için.
  4. yenile seçeneğini tıklayın ve sonra (bu işlem birkaç dakika sürebilir) bir elektronik tabloya veri vermek için analiz edin. Program istediğiniz konuma dosyayı kaydetmek için bir istem verecektir. kaydettikten sonra, dosyanın bir elektronik tabloda düzenlenebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu teknoloji böyle travmatik beyin hasarı, yaşlanma, stres ve epilepsi gibi hayvan modellerinde, birçok çeşit sinyal glutamaterjik değişiklikleri ölçmek için kullanılabilecek olsa da, burada MEA teknolojisi transgenik fare modelinde glutamaterjik değişiklikleri incelemek için nasıl kullanılabileceğini göstermek insan tauopati 19, 20. RTG (TauP301L) 4510 fare kromozom 17 ile bağlantılı fronto-temporal demans ve parkinsonizm ile ba...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MEA tekniği, in vitro ve in vivo olarak nörotransmitter salımının ve alımının hızlı kinetik ölçümü sağlar. Bu nedenle, teknik tonik nörotransmitter düzeyleri de dahil olmak üzere veri çıkışı, uyarılmış nörotransmiter salımı ve sinir ileticisi temizlenmesinin bir çok çeşitli üretir. ÇÇA kullanımı nispeten karmaşık bir işlemdir Ancak, başarılı kullanım için optimize edilmesi gerekebilir sayısız faktörler vardır. Örneğin, kalibrasyon sırasında, tek bir sinyal dalga formu (osiloskop ekranı) veya s...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

GG bu çalışmada glutamat ölçümler için kullanılan FAST-16 kayıt sistemi yapar Quanteon, LLC'nin tek sahibi olduğunu. JEQ Quanteon için ödenen sürdürmektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

(; U54GM104942 mnr), NIA (mnr; R15AG045812), Alzheimer Derneği (MNR'nin; NIRG-12-242187), SUV Fakültesi Araştırma Senato Grant (mnr) ve SUV PSCOR Grant Bu çalışma, Ulusal Genel Tıp Bilimleri Enstitüsü tarafından desteklendi (MNR).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
FAST-16mkIII-8 kanalQuanteon16mkIII
Mikroelektrot dizileriCenMetW4 veya 8-TRK
Sığır Serum Albümini (BSA)Sigma-AldrichA-305910 g (1 ay sonra sona erer)
GluteraldehitSigma-AldrichG-6257100 mL (6 ay sonra sona erer)
Glutamat OksidazUS Biyolojik veya Sigma AldrichG4001-01 veya 10064650 UI (6 ay sonra sona erer)
Hamilton ŞırıngalarHamilton#803832 şırınga
MetanolBDHUN12304 L
m-Fenilendiamin dihidroklorür (mPD)ACROS Organics133056025025 g
Referans Elektrotları (RE-5B)BASMF-20793 elektrotlu
Pille çalışan Manyetik karıştırma plakasıCole-parmerEW-04804-01Farklı tedarikçiden satın alınabilir
GlutamatSigma-AldrichG-1626100 g
Askorbik AsitTCI50-81-7500 g
Dopamin HidroklorürAlfa Aesar62-31-75 g
Perklorik asitVWRUN2920500 mL
Postassium klorürVWR7447-40-71 kg
Sodyum klorürVWR7647-40-71 kg
Kalsiyum KlorürMP153502100 g
Sodyum HidroksitBDH1310732500 g
Cam basınçlı fırlatma pipetleriCenMet
Yapışkan balmumuKerrlab625Farklı tedarikçiden
satın alabilir miyimMikroşırıngaDünyası Hassas AletlerMF28G-5
Modelleme kiliWalMartFarklı tedarikçiden satın alabilir
Picospritzer IIIParker
Gümüş telsistemleri# 786500
Hidroklorik asitBDH76470102.5 L
Platin telSistemleri778000
Lehim tabancasıLowes veya Home DepotFarklı tedarikçiden satın alabilir
MultimetreWalMartFarklı tedarikçiden satın alabilir
PhysioSuiteKent ScientificFarklı tedarikçiden satın alabilir
SomnoSuiteKent ScientificFarklı tedarikçiden satın alabilir
Stereotaksik cihazÇalıntıFarklı tedarikçiden satın alabilir mi
Dijital Laboratuvar StandartÇalmaFarklı tedarikçiden satın alabilir
mi Meiji EMZ mikroskobuMeijiEMZ-5
MatkapDremelMikro
MetrikMetrex102800
NeşterVWRFarklı tedarikçiden satın alabilir mi
Ameliyat makasıVWRFarklı tedarikçiden satın alabilir
Steril pamuklu çubuklarPuritan25806Farklı tedarikçiden satın alabilir
Göz merhemiPuralube Veteriner MerhemiVeterinerden alın
İyot çubuklarıVWRS48050Farklı tedarikçiden satın alabilir
Alkollü bezlerYerel eczaneFarklı tedarikçiden satın alabilir
Steril cerrahi örtüDynarex4410Farklı tedarikçiden satın alabilir
Steril tuzlu suTeknovaS5815Filtreleri kullanarak kendi soltuion'unu yapabilir
Hidrojen Peroksit (%3)Yerel eczaneFarklı tedarikçiden satın alabilir
Isıtma YastığıWalMartFarklı ülkelerden satın alabilirsiniz tedarikçi

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bito, L., Davson, H., Levin, E., Murray, M., Snider, N. The concentrations of free amino acids and other electrolytes in cerebrospinal fluid, in vivo dialysate of brain, and blood plasma of the dog. J Neurochem. 13 (11), 1057-1067 (1966).
  2. Cavus, I., et al. Extracellular metabolites in the cortex and hippocampus of epileptic patients. Ann Neurol. 57 (2), 226-235 (2005).
  3. Montgomery, A. J., Lingford-Hughes, A. R., Egerton, A., Nutt, D. J., Grasby, P. M. The effect of nicotine on striatal dopamine release in man: A [11C]raclopride PET study. Synapse. 61 (8), 637-645 (2007).
  4. Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S. Overview of brain microdialysis. Curr Protoc Neurosci. , Chapter 7 Unit 7.1 (2009).
  5. Hu, S., Sheng, W. S., Ehrlich, L. C., Peterson, P. K., Chao, C. C. Cytokine effects on glutamate uptake by human astrocytes. Neuroimmunomodulation. 7 (3), 153-159 (2000).
  6. He, X., et al. The association between CCL2 polymorphisms and drug-resistant epilepsy in Chinese children. Epileptic Disord. 15 (3), 272-277 (2013).
  7. Xie, Y., et al. Resolution of High-Frequency Mesoscale Intracortical Maps Using the Genetically Encoded Glutamate Sensor iGluSnFR. J Neurosci. 36 (4), 1261-1272 (2016).
  8. Marvin, J. S., et al. An optimized fluorescent probe for visualizing glutamate neurotransmission. Nat Methods. 10 (2), 162-170 (2013).
  9. Hefendehl, J. K., et al. Mapping synaptic glutamate transporter dysfunction in vivo to regions surrounding Abeta plaques by iGluSnFR two-photon imaging. Nat Commun. 7, 13441(2016).
  10. Hinzman, J. M., Thomas, T. C., Quintero, J. E., Gerhardt, G. A., Lifshitz, J. Disruptions in the regulation of extracellular glutamate by neurons and glia in the rat striatum two days after diffuse brain injury. J Neurotrauma. 29 (6), 1197-1208 (2012).
  11. Thomas, T. C., Hinzman, J. M., Gerhardt, G. A., Lifshitz, J. Hypersensitive glutamate signaling correlates with the development of late-onset behavioral morbidity in diffuse brain-injured circuitry. J Neurotrauma. 29 (2), Epub 2011 Dec 2011 187-200 (2011).
  12. Hinzman, J. M., et al. Diffuse brain injury elevates tonic glutamate levels and potassium-evoked glutamate release in discrete brain regions at two days post-injury: an enzyme-based microelectrode array study. J Neurotrauma. 27 (5), 889-899 (2010).
  13. Stephens, M. L., Quintero, J. E., Pomerleau, F., Huettl, P., Gerhardt, G. A. Age-related changes in glutamate release in the CA3 and dentate gyrus of the rat hippocampus. Neurobiol Aging. 32 (5), Epub 2009 Jun 2017 811-820 (2009).
  14. Nickell, J., Salvatore, M. F., Pomerleau, F., Apparsundaram, S., Gerhardt, G. A. Reduced plasma membrane surface expression of GLAST mediates decreased glutamate regulation in the aged striatum. Neurobiol Aging. 28 (11), 1737-1748 (2006).
  15. Hascup, E. R., et al. An allosteric modulator of metabotropic glutamate receptors (mGluR(2) ) (+)-TFMPIP, inhibits restraint stress-induced phasic glutamate release in rat prefrontal cortex. J Neurochem. 122 (2), Epub 02012 Jun 07713 619-627 (2012).
  16. Rutherford, E. C., Pomerleau, F., Huettl, P., Stromberg, I., Gerhardt, G. A. Chronic second-by-second measures of L-glutamate in the central nervous system of freely moving rats. J Neurochem. 102 (3), 712-722 (2007).
  17. Matveeva, E. A., et al. Reduction of vesicle-associated membrane protein 2 expression leads to a kindling-resistant phenotype in a murine model of epilepsy. Neuroscience. 202, Epub 2011 Dec 2013 77-86 (2011).
  18. Matveeva, E. A., et al. Kindling-induced asymmetric accumulation of hippocampal 7S SNARE complexes correlates with enhanced glutamate release. Epilepsia. 53 (1), Epub 02011 Dec 0334 157-167 (2012).
  19. Hunsberger, H. C., Rudy, C. C., Batten, S. R., Gerhardt, G. A., Reed, M. N. P301L tau expression affects glutamate release and clearance in the hippocampal trisynaptic pathway. J Neurochem. 132 (2), 169-182 (2015).
  20. Hunsberger, H. C., et al. Riluzole rescues glutamate alterations, cognitive deficits, and tau pathology associated with P301L tau expression. J Neurochem. 135 (2), 381-394 (2015).
  21. Hunsberger, H. C., et al. Peripherally restricted viral challenge elevates extracellular glutamate and enhances synaptic transmission in the hippocampus. J Neurochem. , (2016).
  22. Obrenovitch, T. P., Urenjak, J., Zilkha, E., Jay, T. M. Excitotoxicity in neurological disorders--the glutamate paradox. Int J Dev Neurosci. 18 (2-3), 281-287 (2000).
  23. Hillered, L., Vespa, P. M., Hovda, D. A. Translational neurochemical research in acute human brain injury: the current status and potential future for cerebral microdialysis. J Neurotrauma. 22 (1), 3-41 (2005).
  24. Burmeister, J. J., Gerhardt, G. A. Self-referencing ceramic-based multisite microelectrodes for the detection and elimination of interferences from the measurement of L-glutamate and other analytes. Anal Chem. 73 (5), 1037-1042 (2001).
  25. Burmeister, J. J., et al. Improved ceramic-based multisite microelectrode for rapid measurements of L-glutamate in the CNS. J Neurosci Methods. 119 (2), 163-171 (2002).
  26. Diamond, J. S. Deriving the glutamate clearance time course from transporter currents in CA1 hippocampal astrocytes: transmitter uptake gets faster during development. J Neurosci. 25 (11), 2906-2916 (2005).
  27. Greene, J. G., Borges, K., Dingledine, R. Quantitative transcriptional neuroanatomy of the rat hippocampus: evidence for wide-ranging, pathway-specific heterogeneity among three principal cell layers. Hippocampus. 19 (3), 253-264 (2009).
  28. Borland, L. M., Shi, G., Yang, H., Michael, A. C. Voltammetric study of extracellular dopamine near microdialysis probes acutely implanted in the striatum of the anesthetized rat. J Neurosci Methods. 146 (2), Epub 2005 Mar 2005 149-158 (2005).
  29. Jaquins-Gerstl, A., Michael, A. C. Comparison of the brain penetration injury associated with microdialysis and voltammetry. J Neurosci Methods. 183 (2), Epub 2009 Jun 2025 127-135 (2009).
  30. Azbill, R. D., Mu, X., Springer, J. E. Riluzole increases high-affinity glutamate uptake in rat spinal cord synaptosomes. Brain Res. 871 (2), 175-180 (2000).
  31. Gourley, S. L., Espitia, J. W., Sanacora, G., Taylor, J. R. Antidepressant-like properties of oral riluzole and utility of incentive disengagement models of depression in mice. Psychopharmacology (Berl). 219 (3), Epub 2011 Jul 2021 805-814 (2011).
  32. Frizzo, M. E., Dall'Onder, L. P., Dalcin, K. B., Souza, D. O. Riluzole enhances glutamate uptake in rat astrocyte cultures). Cell Mol Neurobiol. 24 (1), 123-128 (2004).
  33. Fumagalli, E., Funicello, M., Rauen, T., Gobbi, M., Mennini, T. Riluzole enhances the activity of glutamate transporters GLAST, GLT1 and EAAC1. Eur J Pharmacol. 578 (2-3), Epub 2007 Oct 2025 171-176 (2008).
  34. Day, B. K., Pomerleau, F., Burmeister, J. J., Huettl, P., Gerhardt, G. A. Microelectrode array studies of basal and potassium-evoked release of L-glutamate in the anesthetized rat brain. J Neurochem. 96 (6), Epub 2006 Jan 1625 1626-1635 (2006).
  35. Kane, R. L., Martinez-Lopez, I., DeJoseph, M. R., Vina, J. R., Hawkins, R. A. Na(+)-dependent glutamate transporters EAAT1, EAAT2, and EAAT3) of the blood-brain barrier. J Biol Chem. 274 (45), 31891-31895 (1999).
  36. Ramsden, M., et al. Age-dependent neurofibrillary tangle formation, neuron loss, and memory impairment in a mouse model of human tauopathy (P301L). J Neurosci. 25 (46), 10637-10647 (2005).
  37. Oddo, S., et al. Triple-transgenic model of Alzheimer's disease with plaques and tangles: intracellular Abeta and synaptic dysfunction. Neuron. 39 (3), 409-421 (2003).
  38. Zang, D. W., et al. Magnetic resonance imaging reveals neuronal degeneration in the brainstem of the superoxide dismutase 1 transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis. Eur J Neurosci. 20 (7), 1745-1751 (2004).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Glutamat l mMikroelektrot DizileriTonik GlutamatHipokampal GlutamatStereotaksik CerrahiN rotransmitter Sal n mRiluzol Tedavisi

İlgili makaleler