Yükselen Bulaşıcı Patojenlerin Giderilmesi İçin El Yıkama Etkinliğini Test Etmenin Bir Metodu

Özet

Bulaşıcı hastalık bulaşmasını önlemek için el yıkama yaygın olarak önerilir. Bununla birlikte, bulaşıcı hastalık patojenlerinin çıkarılmasında hangi yıkama yöntemlerinin en etkili olduğuna dair çok az kanıt bulunmaktadır. Mikroorganizmaların yok edilmesinde el yıkama yöntemlerinin etkinliğini değerlendiren bir yöntem geliştirdik.

Özet

Bulaşıcı hastalık bulaşmasını önlemek için el yıkama yaygın olarak önerilir. Bununla birlikte, el yıkama yöntemlerinin genel olarak etkililiği hakkında az kıyaslanabilir kanıt bulunmaktadır. Ek olarak bulaşıcı patojenlerden hangisinin daha etkili olduğunu belirlemek için el yıkama yöntemlerini karşılaştıran çok az kanıt bulunmaktadır. Bulaşıcı hastalık salgınlarında istihdam edilebilir el yıkama için farklı yaklaşımlar için kanıt sağlamak için araştırma gerekmektedir. Burada, el yıkama yöntemlerinin ellerdeki mikroorganizmaların yok edilmesinde etkinliğini ve durulama suyundaki ısrarını değerlendirmek için bir laboratuar yöntemi anlatılmıştır. Gönüllülerin elleri ilk olarak test organizması ile çakıştırılır ve sonra her bir el yıkama yöntemiyle yıkanır. Genellikle, vekil mikroorganizmalar, insanları hastalıktan korumak için kullanılır. Yıkadıktan sonra gönüllülerin elinde kalan organizmaların sayısı değiştirilmiş bir "eldiven suyu" yöntemi kullanılarak test edilir: eller elu ile eldivenlere yerleştirilirMikroorganizmaları süspansiyon haline getirmek ve zar filtreleme (bakteri) veya plak tahlili (virüs / bakteriyofaj) ile analiz için kullanılabilir hale getirmek üzere yıkanır. Elde yıkamadan üretilen durulama suyu analiz için doğrudan toplanır. El yıkama etkinliği, elle yıkamadan sonra alınan numuneler arasındaki günlük azaltma değerinin, el yıkama yapılmayan numuneler ile karşılaştırılması ile nicelleştirilir. Durulama suyu persistansı, çeşitli elle yıkama yöntemlerinden elde edilen durulama suyu örneklerini, sadece su ile el yıkama işleminden sonra toplanan örneklerle karşılaştırarak nicelleştirilir. Bu yöntem insan gönüllülerinin güvenliğini korumak için yedek organizmaları kullanma ihtiyacı ile sınırlı olmakla birlikte, bir in vitro çalışmada çoğaltılması zor olan el yıkama yönlerini yakalar ve yıkama etkinliğinde araştırma boşluklarını ve bulaşık organizmalarının yıkamadaki ısrarını doldurur. Su.

Giriş

El yıkama, hastalığın yayılmasını önlemek için yaygın olarak önerilir, özellikle diyare ve solunum yolu hastalıkları da dahil olmak üzere dışkı-oral veya hava yolundan bulaşan hastalıklar ¹ . Şaşırtıcı bir şekilde, sabun ve suyla (HWWS) el yıkama ve alkollü el temizleyicisi (ABHS) gibi el yıkama yöntemlerinin etkinlikleri hakkında, organizmaların ellerden uzaklaştırılmasına ilişkin çok az kanıt bulunmaktadır. İlk araştırmalar, el yıkama yönteminin aksine, el yıkamasının mekanik etkisinin çoğu organizmanın giderilmesini ^{2 , 3} hesaba kattığını bulmuştur. Buna ek olarak, el yıkama yönteminin en etkili olduğuna dair çok az kanıt bulunmaktadır. Gayrı resmi bir literatür taramasında, sabun ve el dezenfektörünün organizmaların çıkarılması üzerindeki etkinliğini karşılaştıran 14 çalışma tespit edilmiştir. Bu çalışmaların beşinde ABHS'nin daha etkili olduğu bulunmuştur4 ^, 9 ^{, 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15} ve daha fazla olmak üzere HWWS'nin ^{, 16 , 17} numaralı yöntemler arasında anlamlı bir fark bulamadığını bulmuşlardır. Bu bulgular tutarsızdır ve el yıkama sonrasında durulama suyunda organizmaların sürdüğü sürecin hastalık riskini ele almamaktadır. Genel olarak, bulaşıcı hastalıklara neden olan patojenlerden arındırma için el yıkama yöntemlerinin karşılaştırmalı etkinliği hakkında kanıt sınırlıdır.

Bu kısıtlı kanıt salgın ayarlarında hangi yöntemlerin en uygun olduğuna ilişkin belirsizliğe neden olmuştur. Örneğin, Batı Afrika'daki 2013'ten 2016'ya kadar olan Ebola Virüs Hastalığı (EVD) salgını sırasında, birkaç büyük uluslararası müdahale uzmanı, HWWS, ABHS veya% 0.05 klorlu solüsyonlar için çelişkili tavsiyeler verdi. Dünya Sağlık Örgütü (WHO), HWWS veya ABHS (eğer eller görünür şekilde kirli değilse) tavsiye ederken, Médecins Sans Frontieres (MSF), el yıkama için% 0.05 klor solüsyonu kullanılmasını önerir. DSÖ, başka seçenek mevcut olmadığı sürece klorun kullanılmaması gerektiğini ileri sürmektedir; zira cildin uyguladığı klor talebi nedeniyle diğer yöntemlerden daha az etkili ^{18 , 19 , 20 , 21 , 22} . Buna ek olarak, klor çözeltileri, yaygın olarak, yüksek test hipoklorit (HTH), yerel olarak üretilen ve stabilize edilmiş sodyum hipoklorit (NaOCl) ve çimDikloroizosiyanürat (NaDCC). Dünya Sağlık Örgütü'nün Batı Afrika'daki EVD salgınına tepki olarak sistemli bir inceleme yapan elle yıkamanın klor ile karşılaştırma etkinliğini araştıran sadece dört çalışma ^{23 bulundu} . Bu çalışmalar aynı zamanda çelişkili sonuçlar vermiştir ve bu çalışmaların hiçbirinde el yıkama veya% ^{10 , 24 , 25 , 26 , 27} Ebola virüsüne benzer mikroorganizmalar için önerilen% 0.05 klor konsantrasyonu kullanılmamıştır. Bu nedenle, tavsiyeler kanıta dayalı olarak bulunmadı ve hangi önerilerin en etkili olduğu belirsizdi.

Bulaşıcı patojenlerin yayılmasını önlemek için el yıkama yaklaşımlarını karşılaştırmak için ek araştırmalara ihtiyaç vardır çünkü el yıkama müdahaleleri salgın hastalık bulaşmasını önlemede önemli bir araçtır. Bu hVe yıkama tavsiyeleri kanıtlara dayanmalıdır. Böylece, ^{2 , 28 , 29 ,} vekil veya bulaşıcı olmayan patojenlerle yapılan el yıkama etkinliğini ve durulama suyu devamlılığını test etmek için bir yöntem geliştirildi. Phi6'yı Ebola virüsü için vekil olarak kullanan ve Escherichia coli'yi ortak bir indikatör organizma olarak kullanan örnek sonuçlar burada sunulmuştur. Bu protokolde el yıkama etkinliği ve durulama suyu devamlılık testleri sunulmaktadır.

Protokol

Etik Beyanı: Burada açıklanan çalışma (Phi6 ve E. coli , Ebola'nın vekilleri olarak), Tufts Tıp Merkezi ve Tufts Üniversitesi Sağlık Bilimleri Kampüsü'ndeki Kurumsal İnceleme Kurulu (# 12018) tarafından onaylandı; Harvard Üniversitesi Tufts Kurumsal İnceleme Kurulu'na inceleme yaptı.

NOT: Bu protokolü başlatmadan önce iki adımın tamamlanması gerekir. İlk olarak, insan deneklerinde güvenle kullanılabilecek, araştırılacak patojenin bir başka Biyogüvenlik Seviyesi 1 (BSL-1) vekili veya enfeksiyoz olmayan versiyonu tanımlanmalı ve seçilmelidir. Organizma insan gönüllülerinin çıplak ellerini inoküle etmek için kullanılacağı için bu protokol için bir BSL-1 vasirtatı veya bulaşıcı olmayan patojen gereklidir. İkincisi, gönüllüleri işe almadan veya deneye başlamadan önce, insan Kaynakları ile araştırma yapmak için Yerel Kurumsal Değerlendirme Kurulu'ndan onay alınmalıdır. Bu protokolün pek çok yönü,İlgi konusu araştırma sorularının özel ihtiyaçları.

1. Hak Kazanan İnsan Konularını İşe Alın

1. Halka açık duyuru panolarına kağıt el ilanları göndererek ve katılımcılarla ilgilenebilecek üyelerle birlikte gruplara e-posta göndermek suretiyle gönüllüleri toplama. Bu duyurular, çalışma amacını, iletişim bilgilerini ve uygunluk kriterlerini içermelidir.
2. Uygunluğu değerlendirmek için gönüllülerle görüşün. Gönüllülerin, 18-65 yaşları arasında sağlıklı olduklarını ve halen hamile kalmamakta veya antibiyotik kullanmadığını ve cilt hasarları / bozuklukları, el yıkama maddeleriyle ilgili alerjenler veya hijyene ilişkin akıl sağlığı sorunları hikayesi olmadığını onaylayın.
3. Uygun gönüllülere onay formlarını okutun. Sundukları her soruyu yanıtlayın ve gönüllü ile araştırmacı formun iki kopyasını imzalamalarını sağlayın. Bir formu muhafaza edip gönüllülere sağlayın.
4. Demografik bilgiler, kişi hakkındaki sorular da dahil olmak üzere temel bir anket uygulayın.Cilt koşullarının geçmişi ve son el yıkama davranışı hakkında bilgi. Dermatit, cilt yaralanmaları veya temel cilt anormallikleri belirtileri için elleri inceleyin ³¹ .
5. Gönüllüleri, ilgilenilen her organizma için iki test oturumu için zamanlayınız (bir tanesi toprak yükü ile ve diğeri ise test edilmek üzere test edilmiştir). Gönüllülere, kişisel ürün kullanımından kaynaklanan karışıklığı önlemek için, testten önce yedi günlük bir boşaltma süresi için antimikrobiyal ürünlerden kaçınmalarını söyleyin.
   1. Her zamanki ürünlerinizin yerine kullanmak üzere gönüllülere antimikrobik ürünler (şampuan, saç kremi ve sabun) sağlayın. Ağır vazgeçilmez vinil eldivenler sağlayın ve ev temizleme ürünleri gibi ürünleri kullanırken nesnelere onları giymelerini söyleyin.

2. Acil Müdahalede Sıkça Kullanılan El Yıkama Çözümleri Hazırlayın (Sabun, ABHS,% 0.05 HTH, NaDCC ve NaOCl Çözümleri)

NOT: Klor çözeltileri hazırlanabilir Denemeden önce 12 saate kadar artı, ancak> 12 saat depolandığında bozunur.

1. Testin yapıldığı bağlamla ilgili bir sabun seçin ve satın alın.
   NOT: Çoğu durumda, gelişmekte olan ülkelerdeki bulaşıcı hastalık acil durumlarında bu sabun için bir bar olacaktır.
2. Testin yapıldığı bağlama ilişkin bir ABHS çözümü seçin ve satın alın.
   NOT: Etkinliği sağlamak için seçilen ABHS'nin etil alkol içeriği% 70 veya daha fazla olmalıdır.
3. Granül Ca (C10) ₂ tozu ultra saf suya ilave ederek% 0.05 kalsiyum hipoklorit (Ca (C10) ₂ ) solüsyonu hazırlayın. Test edilecek konuların sayısına bağlı olarak gereken çözelti miktarını belirleyin.
   1. Aşağıdaki denklemi kullanarak, belirli bir miktarda suda istenen miktarda çözeltiyi hazırlamak için gerekli olan toz miktarını, verilen klor yüzdesini kullanarak belirleyin:
      /files/ftp_upload/55604/55604eq1.jpg "/>
      NOT: Ca (C10) ₂ tozu tipik olarak% 60-80 kullanılabilir klor içerir.
4. Ultra saf suya granüler NaDCC tozu ilave ederek% 0.05 lik sodyum dikloroizosiyanürat (NaDCC) solüsyonu hazırlayın.
   1. Aşağıdaki denklemi kullanarak, belirli bir miktarda suda istenen miktarda çözeltiyi hazırlamak için gerekli olan toz miktarını, verilen klor yüzdesini kullanarak belirleyin:
      
      NOT: NaDCC tozu tipik olarak yaklaşık% 50 kullanılabilir klor içerir.
5. Ultra saf suya stok sodyum hipoklorit solüsyonu ilave ederek stabilize edilmiş% 0.05 NaOCl solüsyonu hazırlayın.
   1. Üreticinin talimatlarına ( ör. Iyodometrik titrasyona göre titrasyon testi yöntemi kullanarak NaOCl stok solüsyonunun konsantrasyonunu (muhtemelen% 5-8 olacak şekilde) teyit edin, su için Malzeme Listesine bakınGgested kit).
   2. Test yönteminin sonuçlarını kullanarak, aşağıdaki denklemi kullanarak suya ilave edilecek çözelti miktarını hesaplayın:
      
6. Bir elektroklorinatör, ultra saf su ve laboratuar dereceli sodyum klorür (NaCl) kullanılarak üretilen sodyum hipoklorit çözeltisini ultra saf suya ilave ederek stabilize edilmiş% 0.05 NaOCl solüsyonu hazırlayın.
   1. Üreticinin talimatlarına uygun olarak bir elektroklorinatör kullanarak% 1'lik klorlu ultrafure su ve NaCl çözeltisi hazırlayın.
   2. NaOCl stok solüsyonunun konsantrasyonunu teyit etmek için bir titrasyon testi yöntemi ( örn. Iyodometrik titrasyon) kullanın ³² .
   3. Testin sonuçlarını kullanarak, aşağıdaki denklemi kullanarak suya ilave edilecek çözelti miktarını hesaplayın:
      
7. C'yi teyit etKlor el yıkama solüsyonlarının her birinin bir titrasyon yöntemi ( örn. Iyodometrik titrasyon) kullanarak konsantre hale getirilmesi ve çözeltilerin, hedef konsantrasyonun% 10'u oranında bir hata (% 0.045-0.055) içinde bulunana kadar su veya klor kaynağı toz / solüsyonu eklenerek ayarlanması.

3. Organizmaları Hazırlayın ve Toprak Yükleyin ve İnoküle Üretmek için Birleştirin

NOT: Aşağıdaki alt bölümlerde, yöntemlerin açıklaması için örnek bakteri ve viral organizmalar olarak E. coli ve Phi6 kullanılır.

1. Test için kullanılacak organizmayı bakteriler için 10 x ₁₀₈ CFU / mL'den büyük ve virüsler için 10 x ¹⁰⁷ PFU / mL'den yüksek konsantrasyonda hazırlayın.
   1. E. coli'yi hazırlamak için, patojen olmayan bir E. coli suşunu Luria-Bertani (LB) agar plakalarına çizin ve tek koloniler elde etmek için 37 ° C'de 24 saat inkübe edin. 4 ° C'de saklayın.
      NOT: Bu, kesme işlemiyle yapılabilirDeneyden önceki günler.
      1. Deneyin başlangıcından bir gün önce plakadan tek bir koloni alın ve steril bir halka kullanarak 10 mL LB sosunu inoküle edin. Gece boyunca 37 ° C'de çalkalayarak inkübe edin.
      2. Deney sabahında, 20 mL taze LB suyu için gece kültürü 1 mL ekleyerek taze bir kültür başlatın. 10 ⁸ CFU / mL'den daha yüksek bir hücre yoğunluğunu elde etmek için yaklaşık 2.5 saat inkübe edin.
      3. Kültür konsantrasyonunu hesaplamak için bir spektrofotometre kullanın.
         NOT: Kullanılan E. coli suşu için bir standart eğrisinden önceden oluşturulmuş bir dönüştürme faktörü kullanın, bu da konsantrasyonun 10 ⁸ CFU / mL 33'den yüksek olmasını sağlayın. Hücre yoğunluğu yeterince yüksek değilse, kültürü inkübatöre döndürün ve hazır oluncaya kadar tekrar test edin.
   2. Zar filtreleme kullanarak konsantrasyonu teyit edin ³⁴ .
      NOT: Seri seyreltmeler yapın oF kültürü fosfat tamponlu salin (PBS) içinde filtre edilen solüsyon plaka üzerinde sayılabilir bir sayıda koloni üretecek şekilde (kesin sayı kullanılan ortamına bağlıdır).
      1. Steril filtrasyon hunileriyle ve vakum bağlantısı ile alev ve filtrasyon manifoldu oluşturun. Forsepsi etanol ile alevlendirerek sterilize edin. Bunları, ızgara yukarı bakacak şekilde filtrasyon manifolduna 0.45-μm'lik bir filtre yerleştirmek için kullanın. Filtreyi steril PBS ile az miktarda ıslatın.
      2. Huniyi tabanın üzerine yerleştirin ve pipetleme veya doğrudan filtre üzerine dökerek işlenecek numune solüsyonu ilave edin. Numunenin tamamı zarı geçene kadar vakumu çalıştırın. Huninin yanlarını steril PBS ile durulayın ve vakumla tekrar takın.
         NOT: Numuneler en az 100 μL ve 100 mL'ye kadar olmalıdır. Bir numune 10 mL'den düşükse, sampanın düzgün filtrasyonunu sağlamak için filtrelemeden önce filtrasyon hunisine yaklaşık 20 mL PBS ekleyinle.
      3. Huniyi çıkarın, forsepsleri alevsizce sterilize edin ve filtreyi tabandan kaldırın. Filtreyi bir Petri kabındaki LB agarına, ızgara yukarı bakacak şekilde nazikçe yerleştirin, böylece filtrenin yüzeye hizalandığından emin olun. Plakaları ters çevirin ve 24 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edin.
      4. 24 saat sonra plakaları inkübatörden çıkarın ve E. coli kolonilerini sayın. CFU / mL'de filtrelenmiş çözeltinin konsantrasyonunu hesaplamak için bu verileri ve bilinen seyreltme faktörünü ve çözeltinin hacmini kullanın.
   3. Çift agar kaplama yöntemi ³⁵ kullanarak Pseudomonas syringae konakçı Phi6 yaymak.
      1. Phi6 stok süspansiyon 100 mcL ve 100 ml p. syringae geceleme kültürü doğrudan 6 ml Nutrient Broth Yeast (NBY) yumuşak agar (% 0.3) ekleyin. NBY sert agar (% 1.5) ile tabaklar üzerine dökün ve gece boyunca 26 ° C'de inkübe edin. Tecrübe için yeterli inokül oluşturmak için yeterli plakayı hazırlayınTabaka başına yaklaşık 4 mL virüs süspansiyonu verimi tahmini.
      2. Ertesi gün, yumuşak agar tabaka üzerine 5 mL PBS ekleyin. Oda sıcaklığında 4 saat bırakın, bir pipetle alın ve 0.45 μm filtre kullanarak filtreleyin. 4 ° C'de saklayın.
         NOT: Bu çözüm viral inokülasyon görevi görecektir.
   4. Konsantrasyonun 10 ⁷ PFU / mL ^35'ten daha büyük olduğunu teyit etmek için plak analizi kullanın. PBS'de viral süspansiyonun seri seyreltmelerini uygulayın, böylece 100 μL plakada sayılabilir plak sayısı üretir.
      1. Uygun bir seyreltilmiş numune ve 100 mL gece konakçı kültürü için 100 μL pipetle doğrudan 6 mL NBY yumuşak agarı içeren bir tüp içine pipetleyin. Yumuşak agarı NBY sert agar üzerine dökün ve 24 saat boyunca 26 ° C'de inkübe edin.
      2. Ertesi gün inkübatörlerden plakaları çıkarın ve plaka başına plak sayısını hesaplayın. Bu verileri ve bilinen seyreltme faFiltrenin konsantrasyonunu PFU / mL cinsinden hesaplamak için çözeltinin hacmi ve hacmi.
2. İnsan serumu taklit etmeyi amaçlayan üçlü toprak yükünü hazırlayın.
   1. 7.80 mg / mL sığır serum albümini, 10.92 mg / mL tripton ve 2.52 mg / mL sığır musini, istenen hacimdeki toprağın yükünü üretmek için birleştirin. Toprak yükünü karıştırdıktan sonra, sterilize etmek için 0.22 μm'lik bir filtreye süzün. Kullanana kadar 4 ° C'de saklayın. Isı ile sterilize etmeyin, proteinler denatürecektir.
3. İnokülasyonu toprak yükü olmaksızın koşullar için karıştırmak için% 0.9 NaCl solüsyonu hazırlayın.
4. Testten hemen önce,% 68 bakteri veya viral süspansiyon ve% 32 toprak yükünden oluşan bir inokül hazırlayın. Örneğin, adımlar 3.1.1.2 veya 3.1.3.2'den 1.02 mL bakteri veya virüs süspansiyonu veya toprak yükünden (adım 3.2.1) veya% 0.9 NaCl solüsyonundan (adım 3.3) 0.48 mL kullanın. Karıştırmak için yavaşça girdap veya vorteks uygulayın.
   NOT: bunun 1.5 mL'ıHer koşulda her bir gönüllü için aşılama yapılacaktır, bu nedenle hazırlanan toplam inokulum hacminin, istenilen sayıda test için yeterli olduğundan emin olun.

4. Deney için Gönüllülerin Hazırlanması

NOT: O günde test edilecek organizma ve zemin yük koşulunu belirleyin. Aynı gönüllüler birden fazla koşulları test etmek için kullanılabilir, ancak her gönüllü 48 saatlik bir süre içinde yalnızca bir tur test yapılmalıdır.

1. Teste başlamadan önce gönüllülerin sözlü olarak 7 günlük antimikrobik yıkama periyoduna bağlı olduklarını doğruladıklarını ve cildinde herhangi bir bozulma veya anormallik gelişmediğini görsel olarak onaylayarak uygun olduklarını doğrulayın.
2. Rasgele sayı üreteci kullanarak, her gönüllüyü, testin bu gününde örnek alınması için sağ veya sol elini kullanacak şekilde atayın. El yıkama koşullarının yerine getirileceği bir emir atayın.
   NOT:Örneğin, ABHS # 3 atanabilir ve üçüncü olarak uygulanır.
3. Kir ve yağ derisini soymak için testin başlangıcında bir kez "temizleme yıkama" yapın, böylece sonraki her test eşdeğer koşullar altında yürütülür.
   1. Temizleme yıkaması yapmak için, deneyin her adımında (aşağıdaki bölüm 5) boş bir inokülasyon (yalnızca LB suyu veya PBS) kullanarak ve el yıkama yapmadan bir numune alın.

5. Deneysel İşlem

1. Her bir gönüllü cildinin pH'sını test etmek için (varyasyon kontrolü için) palmar yüzey cildi üzerine düz uçlu bir cilt pH probu ve işaretçi ile orta parmaklar arasındaki ağ boşluğu yerleştirin. Elektrotun cilde karşı düz olduğundan emin olun. PH okumasını kaydedin.
2. Ellerini kaldır.
   1. Gönüllülere iki elini de birlikte elden geçirin. 1.5 mL'lik inokül ile elleri her hurma içine yavaş yavaş 750 mcL'lik bir pipetle hafifçe pipetle sıkın.
   2. Gönüllüler, ellerini mümkün olduğunca az sürtünmeye maruz bırakırken elin tüm yüzeyleri aşı ile kaplanana kadar hafifçe ellerini ovun.
   3. Gönüllülerin inokülasyonun kurumasına izin vermek için ellerini elinde tutup 30 saniye daha vücudundan uzak tutun. İnokülasyon tamamen kurumamış olabilir.
3. Ellerinizi yıkayın.
   1. Aşağıdaki yıkama adımlarının hepsinde, durulama suyunu büyük bir numune toplama torbasında ellerden alın. 2 saat içinde temas ve işleme sırasında kloru nötralize etmek için torbaya 4.5 mL% 12 sodyum tiyosülfat solüsyonu ekleyin.
      NOT: Organizmada oluşabilecek herhangi bir etkiyi kontrol etmek için tüm örneklere (klor içermese bile) sodyum tiyosülfat eklenmelidir.
   2. İnokülasyondan sonra (bölüm 5.2), elleri bir sonraki yöntemle belirtilen sırada yıkayın.
      1. Kontrol A için, el yıkama adımını gerçekleştirmeyin ve doğrudan adım5.5.
      2. Kontrol B için, eldeki suyu, oda sıcaklığında (yaklaşık 21 ° C) yalnızca yüksek saf suyla yıkayın ve bilinen hızda bir huni ile yıkayın.
         NOT: Burada, 1,5 L / m'lik bir akış hızı ve 500 mL su kullanılmıştır.
      3. Sabunla el yıkama için elleri 10 mL ultra saf suyla ıslatın. Gönüllülerin ellerini sabunla püskürtmelerine ve daha sonra 20 sn daha birlikte ellerini ovmasına izin verin. 1,5 L / m'lik bir akış oranında bir huniden oda sıcaklığında 500 mL ultra saf su dökerek ellerini yıkayın.
      4. Tüm klor çözeltileri ( örn., ABHS, HTH, NaDCC ve NaOCl) için 200 mL klor solüsyonunu 1.5 L / m'lik bir akış oranında bir huniden boşaltın ve gönüllü ellerini iyice ovın.
4. Elle değiştirilmiş bir eldiven suyu işlemi kullanarak durulayın.
   1. El yıkama işleminden sonra hemen her gönüllü kişinin elini ( yani, testi için seçilen eli (sağa veya sola) yerleştirinAdım 4.2'de) 75 mL'lik eluent ( örn., PBS) içeren bil그ene kadar bir numune çantasına yerleştirin. Çantanın üst kısmını bilek etrafında sıkıca tutun.
      NOT: El yıkama için kullanılan klorları nötralize etmek için yeterli sodyum tiyosülfat içeren örnekleme için bir eluent kullanın. PBS, birçok organizma için uygun olan yaygın olarak kullanılan bir eluenttir.
   2. Gönüllüler parmakların arasına ve tırnakların altına dikkat etmeye özen göstererek 30 saniye süreyle elleriyle çözeltiyi ovun. Eli, eluentte tamamen bilek kısmına kadar çalkalandığından emin olmak için, eli torbanın dışından 30 saniye hafifçe masaj yapın.
   3. Çantayı sızdırmaz hale getirin ve 6 numaralı bölümde tarif edilen uygun tahlile göre 2 saat içinde işleyin.
5. Dezenfekte.
   1. İşlemi her elle yıkama yöntemiyle tekrarlamadan önce, gönüllülerin ellerini sabun ve ılık su ile bir lavaboda iyice yıkamalarını sağlayın. Kanalizasyona püskürterekRs 'ellerini her iki yüzü kaplayana kadar% 70 etanolle elle tutun. Kurumalarını bekleyin.
   2. Her el yıkama koşulu için 5. adımdaki tüm adımları, sadece 4.2 adımında rasgele seçilen eli kullanarak tekrarlayın ( Şekil 1 ).

6. Nicelleştirme

1. Seçilen organizma için uygun tahliller yapın ( örn. Bakteriler için zar filtrasyonu veya virüsler için plak analizi, sırasıyla bölüm 3.1.2 ve 3.1.4'te açıklanmıştır).
2. Plakaları saydıktan sonra, analizler için her test için tahmini CFU / mL veya PFU / mL'yi kaydedin (bölüm 3.1.2 ve 3.1.4).

7. Analiz

1. Adım 6.2'deki sonuçları kullanarak, organizmalarda, her bir organizma ve zemin yük durumu için ve her bir denek ve el yıkama yöntemi için günlük azaltma değerini hesaplayın.
   1. El yıkama etkinliği için her birinde bakteri / virüs konsantrasyonunu karşılaştırın El yıkama örneği A'ya kontrol (el yıkama yok). Durulama suyu kalıcılığı için, durulama suyu numunesini kontrol B'ye kıyasla (sadece su ile yıkayın). Aşağıdaki standart formülü kullanın:
      Kütük Giderme (el yıkama ) =
      Kütük Azaltma (durulama suyu ) =
      NOT: Kütük azaltma log ₁₀ (el yıkama olmadan) olarak da ifade edilebilir - log ₁₀ (el yıkama ile)
2. Elde yıkama yöntemleri arasındaki hesaplanan günlük azaltma değerlerinde önemli farklılıkları değerlendirmek için tek yönlü tekrarlanan ölçüm varyans analizi (ANOVA) ve anlamlı farklılıkları belirlemek için önemli modeller için post-hoc Tukey's HSD testi (p <0.05)Ef "> 36.
   1. ANOVA'yı çalıştırmadan önce, küresellik için her veri kümesini değerlendirin ( örneğin, Bartlett'in testini kullanarak). Test sferiklığın ihlal edildiğini gösterdiğinde bir düzeltme uygulayın ( örn . Sera-Geisser düzeltmesi) ³⁷ .

Sonuçlar

Burada, protokol ( Şekil 1 ) hem E. coli hem de Phi6 kullanılarak test edilen 18 gönüllü ile tamamlandı. Elde yıkama sonuçları arasında hem toprak yüklü hem de topraksız E. coli ile Phi6 toprak yükü arasında anlamlı fark bulundu ( Şekil 2 ve Şekil 3 ). Toprak yükü olmayan E. coli için, HTH, NaDCC ve stabilize NaOCl ile yapılan el yıkama işlemi, sadece elle yıkamaya göre (F...

Tartışma

Burada açıklanan yöntem, kontrollü bir laboratuvar ortamında el yıkama etkinliğini test etmek için bir yaklaşım sağlar. Bu yöntem, insan gönüllülerin ve vekil, bulaşıcı olmayan organizmaların kullanımını vurgulamaktadır. Yöntemi kullanarak, 1) el yıkama yöntemlerinin etkinliği ve 2) durulama suyunda organizma kalıcılığı gibi farklılıkları göstermek mümkün oldu. Bu protokolün sunulmasının amacı, bulaşıcı hastalıklarla ilgili çok çeşitli vekil organizmaları ve el yıkama yöntemlerini test etmek için uyarlanabilecek genel bi...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Sabun kalıbı	Dove	White Beauty Bar sabun
Alkol bazlı el dezenfektanı	Purell	Advanced %70 Etil Alkol
HTH Tozu	Acros Organics	300340010
NaDCC Tozu	Medentech	Klorsept granülleri
NaOCl Çözeltisi	Acros Organics	419550010
Elektroklorinatör	AquaChlor
İyodometrik titratör	Hach	1690001
Sığır serum albümini	MP Biyomedikal NC0117242
Tripton	Fisher	BP1421-100
Sığır Müsini	EMD Milipore	49-964-3500MG
0.22 ve mikro; m Filtre	EMD Milipore	GVWP04700
NaCl	Fisher	BP358-1
Cilt pH probu	Hanna Aletleri	H199181
Büyük Whirlpak Numune Çantası	Nasco	B01447WA
Huni şişesi	Thermo Scientific	3120850001	Suyu uygun akış hızında dağıtacak bir huni oluşturmak için bir şişenin kapağına uygun boyutta bir delik açabilirsiniz
Etanol	ThermoScientific	615090010	%70 etanol üretmek için suyla karıştırın
Sprey şişesi	Qorpak	PLC06934
E. coli	ATCC	25922
LB Et Suyu	Fisher BiyoReaktifleri	BP1426-2
LB Agar	Fisher BioReagents	BP1425-500
Steril döngü	Globe Scientific	22-170-204
Phi6	HER	102
Besin suyu	BD Difco	BD 247110
GeneQuant 100 Spektrofotometre	General Electric	28-9182-04
Sodyum tiyosülfat	Fisher Chemical	S445-3
Membran filtre (47 mm, 0,45 & mikro; m)	EMD Millipore	HAWP04700
m-ColiBlue24 et suyu ortamı	EMD Millipore	M00PMCB24
Pedli Petri kabı (47 mm)	Fisherbrand	09-720-500
Vakum Manifoldu	Thermo Scientific/Nalgene	09-752-5
Filtre hunileri	Thermo Scientific/Nalgene	09-747
Pseudomonas şırınga	HER	1102
Fosfat Tamponlu Tuzlu	Termo Bilimsel	10010031	Çözeltisi, herhangi bir temel tarife göre kaynak bileşiklerden de karıştırılabilir